Name: Micro-dissectie van glazuur orgel van snijtand van ratten blootgesteld aan toxische stoffen in het milieu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-29T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Leer micro-dissectie van glazuurorganen bij ratten om ameloblastactiviteit te bestuderen tijdens glazuurvorming. Deze techniek maakt nauwkeurige analyse van tandpathologieën mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de Universiteit Parijs-Diderot, het Frans National Institute of Health en medische onderzoek (INSERM) en het Franse Instituut voor Odontological onderzoek (IFRO).

Alle dieren die worden gebruikt in de huidige studie werden onderhouden overeenkomstig de richtsnoeren voor de verzorging en het gebruik van proefdieren van het Franse Ministerie van landbouw (A-75-06-12).
1. dierlijke blootstelling aan toxische stoffen
<ol><li>Voordat u dit protocol uitvoert, noodzakelijke institutionele goedkeuring verkrijgen en zorg ervoor dat alle dierenverzorgers richtsnoeren voldoen.</li>
	<li>Het ontwerp van het onderzoeksprotocol waardoor de Grondwet van verschillende experimentele groepen om te testen van het effect van de molecule(s) onderzocht op ameloblast secretie en de fase van de rijping ameloblast toepassen. Hier, waren vier groepen van mannelijke Wistar ratten opgericht, afhankelijk van hun blootstelling aan fluoride (NaF) in combinatie of niet met BPA (figuur 1A)2. Alle dieren waren waargenomen en ontleed op dag 65 (figuur 1B).</li>
</ol>2. dissectie van Hemi-kaken van volwassen ratten
<ol><li>Euthanaseren ratten door CO2 verstikking, eventueel gevolgd door onthoofding aan het aparte hoofd van de rest van het lichaam. Ratten op CO2 voor 5 min in een speciaal vak16bloot.</li>
	<li>Verwijder alle de huid van de onderste lippen met behulp van een scalpel #11 om gemakkelijke toegang tot de onderste snijtanden.</li>
	<li>Met de dezelfde scalpel, maken van een sneetje tussen de twee onderste snijtanden met een lichte druk en de onderkaak zal worden gesplitst in twee helften.</li>
	<li>Knip het temporele mandibulaire gewricht met een scalpel wilt loskoppelen van de kaak, en houden de hemi-onderkaak met een fijne pincet.</li>
	<li>Snij de omliggende weke met een scalpel en verwijder alle spieren, pezen en ligamenten met behulp van een schraper totdat het bot helemaal schoon is.</li>
</ol>3. isolatie van de snijtand17,18
<ol><li>Zorgvuldig afscheren het bot door het plaatsen van het mes parallel aan de grote lengteas van de snijtand. Begin bij de benige bergkam in de buurt van de toppen van de snijtand (proximale eind) tot het einde van de schapen in de buurt van de cervicale lus. De insnijding motie opbrengst van de proximale, distale richting.</li>
	<li>Maken een eerste snede distally de cervicale lus met de scalpel te verwijderen van de gonion van de hemi-onderkaak en geeft toestemming opstijgen de snijtand gemakkelijk zonder beschadiging van de cervicale lus of de secretoire fase van ameloblasts (rode lijn in de Figuur 2).</li>
	<li>Breng een tweede snede onder de tweede molaire en voeg de scalpel tussen het bot en het mediale oppervlak van de snijtand. Wanneer alle de basale bone wordt opgeheven, naar buiten draaien van de schapen en het opstijgen zorgvuldig om te voorkomen dat glazuur orgel weefsel aangetast met fijne pincet.</li>
</ol>4. micro-dissectie van glazuur orgel onder verrekijker Lens
<ol><li>200 µL van zoute fosfaatbuffer (PBS 1 X) op de snijtand met behulp van een precisiepipet neerzetten. Neem de snijtand met een fijne pincet met het labial oppervlak naar boven. Maak een scalpel markeren tussen de kleurloze en oranje delen van het weefsel. Dit merk komt overeen met de onderliggende witte vlek die waarneembare daarna (Figuur 2).</li>
	<li>Schraap, met een graafmachine of een gelijkwaardig instrument, het celoppervlak van de scalpel mark aan de apicale einde corresponderende secretie fase (kleurloos) ameloblasts, en naar de scalpel mark naar het uiteinde van de snijtand voor de ameloblasts maturatie fase (oranje).</li>
	<li>Verwijder het weefsel van de 2-mm overeenkomt met de overgangsfase, als eerder beschreven19. Open de snijtand geen tijdens glazuur orgel dissectie om verontreiniging te voorkomen door het mesenchym.</li>
	<li>Snijd de cervicale lus gelegen direct aan het apicaal deel van de snijtand beschreven (Figuur 2) zoals eerder20.</li>
	<li>Verzamel het in 10% formaline of lysis oplossing voor verder onderzoek (Zie Tabel van materialen).</li>
</ol>5. verzameling van gescheiden glazuur orgel weefsels voor verdere onderzoeken
<ol><li>200 µL PBS 1 X buffer op de snijtand neerzet.</li>
	<li>Met een scalpel #11 mes, zorgvuldig loskoppelen de tandheelkundige epitheliale cellen geleidelijk in de buffer, afzonderlijk voor elk stadium met de hulp van het merk van de scalpel eerder gemaakt.</li>
	<li>Voor cel RNA en eiwit extracties, plaatsen het weefsel in een lysis-oplossing waarmee de winning van zowel eiwitten als RNAs (Zie Tabel van materialen) Opmerking: Bereiden hoogwaardige RNAs door te draaien de weefsel-graafmachine in de buis, en vervolgens het slijpen van de cellen tot een homogeen mengsel te verkrijgen. Het mengsel is klaar voor RNA en eiwit extracties uit te voeren volgens de fabrikant de procedure die eerder beschreven2,8,17was. Meestal, ongeveer 5-10 µg totaal RNAs en 150 µg totale eiwitten werden verkregen voor elk preparaat.</li>
	<li>Voor histologisch analyses zet immunohistochemistry (IHC), en in situ hybridisatie (ISH), de cellaag in 10% formaline voor 2 h, dan bewaren bij 4 ° C in PBS 1 X. Het weefsel kan vervolgens OCT voor bevroren secties worden ingebed in de wax/paraffine of weefsel.</li>
	<li>Neem de snijtand met fijne pincet voor EMP extracties. Na een korte blootstelling aan lucht (lichte uitdroging) zullen een witte vlek zichtbaar rond het middelste deel van het labial oppervlak van de schapen, die de inleiding van het glazuur mineralisatie vertegenwoordigt. Deze witte vlek overeenkomt met de overgang- / vroege rijping-fase van de ameloblasts, dus gebruik het als een indicator voor extractie van EMPs21.</li>
</ol>

<ol><li>Jedeon, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enamel+defects+reflect+perinatal+exposure+to+bisphenol+A%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Enamel defects reflect perinatal exposure to bisphenol A.</a> Am J Pathol. 183, 108-118 (2013).</li>
<li>Jedeon, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Exposure+to+Bisphenol+a+Exacerbates+Dental+Fluorosis+in+Growing+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Chronic Exposure to Bisphenol a Exacerbates Dental Fluorosis in Growing Rats.</a> J Bone Miner Res. 31, 1955-1966 (2016).</li>
<li>Alaluusua, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+dental+aberrations+after+the+dioxin+accident+in+Seveso%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Developmental dental aberrations after the dioxin accident in Seveso.</a> Environ Health Perspect. 112, 1313-1318 (2004).</li>
<li>Chapple, I. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+lifestyle%2C+behaviour+or+systemic+diseases+with+dental+caries+and+periodontal+diseases%3A+consensus+report+of+group+2+of+the+joint+EFP%2FORCA+workshop+on+the+boundaries+between+caries+and+periodontal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Interaction of lifestyle, behaviour or systemic diseases with dental caries and periodontal diseases: consensus report of group 2 of the joint EFP/ORCA workshop on the boundaries between caries and periodontal diseases.</a> J Clin Periodontol. 44, S39-S51 (2017).</li>
<li>Nanci, A. Enamel: Composition, Formation, and Structure. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNanci%2C+A+%22Ten+Cate%27s+Oral+Histology+Development%2C+Structure%2C+and+Function%22">Ten Cate's Oral Histology Development, Structure, and Function</a>. , 8th ed, Elsevier mosby. 122-164 (2012).</li>
<li>Leite, G. A., Sawan, R. M., Teofilo, J. M., Porto, I. M., Sousa, F. B., Gerlach, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+lead+exacerbates+dental+fluorosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Exposure to lead exacerbates dental fluorosis.</a> Arch Oral Biol. 56, 695-702 (2011).</li>
<li>Jedeon, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enamel+hypomineralization+due+to+endocrine+disruptors%5BTitle%5D)+AND+%22Connect+Tiss+Res%22%5BJournal%5D)">Enamel hypomineralization due to endocrine disruptors.</a> Connect Tiss Res. 55, 1-5 (2014).</li>
<li>Jedeon, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgen+receptor+involvement+in+rat+amelogenesis%3A+an+additional+way+for+endocrine+disrupting+chemicals+to+affect+enamel+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Androgen receptor involvement in rat amelogenesis: an additional way for endocrine disrupting chemicals to affect enamel synthesis.</a> Endocrinology. 157, 4287-4296 (2016).</li>
<li>Weerheijm, K. L., Jalevik, B., Alaluusua, S. <a target="_blank" href="https://www.karger.com/Article/Abstract/47479">Molar-incisor hypomineralisation.</a> Caries Res. 35, 390-391 (2001).</li>
<li>Jälevik, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+Diagnosis+of+Molar-Incisor-+Hypomineralisation+%28MIH%29%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Arch+Paediatr+Dent%22%5BJournal%5D)">Prevalence and Diagnosis of Molar-Incisor- Hypomineralisation (MIH): A systematic review.</a> Eur Arch Paediatr Dent. 11, 59-64 (2010).</li>
<li>Alaluusua, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aetiology+of+Molar-Incisor+Hypomineralisation%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Arch+Paediatr+Dent%22%5BJournal%5D)">Aetiology of Molar-Incisor Hypomineralisation: A systematic review.</a> Eur Arch Paediatr Dent. 11, 53-58 (2010).</li>
<li>Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. The tooth, target organ of Bisphenol A, could be used as a biomarker of exposure to this agent. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJedeon%2C+K+%22Bisphenol+A%3A+Sources%2C+Risks+of+Environmental+Exposure+and+Human+Health+Effects%22">Bisphenol A: Sources, Risks of Environmental Exposure and Human Health Effects</a>. Gibert, Y. , Nova Science Publishers. 205-225 (2015).</li>
<li>Fejerskov, O., Larsen, M. J., Richards, A., Baelum, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+tissue+effects+of+fluoride%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Dental tissue effects of fluoride.</a> Adv Dent Res. 8, 15-31 (1994).</li>
<li>Robinson, C., Connell, S., Kirkham, J., Brookes, S. J., Shore, R. C., Smith, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+fluoride+on+the+developing+tooth%5BTitle%5D)+AND+%22Caries+Res%22%5BJournal%5D)">The effect of fluoride on the developing tooth.</a> Caries Res. 38, 268-276 (2004).</li>
<li>Sahlberg, C., Pavlic, A., Ess, A., Lukinmaa, P. L., Salmela, E., Alaluusua, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+effect+of+amoxicillin+and+sodium+fluoride+on+the+structure+of+developing+mouse+enamel+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Combined effect of amoxicillin and sodium fluoride on the structure of developing mouse enamel in vitro.</a> Arch Oral Biol. 58, 1155-1164 (2013).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Euthanasia+of+neonatal+rats+with+carbon+dioxide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Euthanasia of neonatal rats with carbon dioxide.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 23-27 (2009).</li>
<li>Hiller, C. R., Robinson, C., Weatherell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+the+composition+of+developing+rat+incisor+enamel%5BTitle%5D)+AND+%22Calcif+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Variations in the composition of developing rat incisor enamel.</a> Calcif Tissue Res. 18, 1-12 (1975).</li>
<li>Robinson, C., Kirkham, J., Nutman, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+enamel+formation+and+eruption+rate+in+rat+mandibular+incisors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Relationship between enamel formation and eruption rate in rat mandibular incisors.</a> Cell Tissue Res. 254, 655-658 (1988).</li>
<li>Smith, C. E., Nanci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+sampling+the+stages+of+amelogenesis+on+mandibular+rat+incisors+using+the+molars+as+a+reference+for+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">A method for sampling the stages of amelogenesis on mandibular rat incisors using the molars as a reference for dissection.</a> Anat Rec. 225, 257-266 (1989).</li>
<li>Chavez, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+dental+epithelial+stem+cells+from+the+adult+mouse+incisor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of dental epithelial stem cells from the adult mouse incisor.</a> J Vis Exp. (87), (2014).</li>
<li>Brookes, S. J., Kingswell, N. J., Barron, M. J., Dixon, M. J., Kirkham, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+the+32-kDa+fragment+the+functional+enamelin+unit+in+all+species%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Oral+Sci%22%5BJournal%5D)">Is the 32-kDa fragment the functional enamelin unit in all species?</a> Eur J Oral Sci. 119, 345-350 (2011).</li>
<li>Babajko, S., Jedeon, K., Houari, S., Loiodice, S., Berdal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+Steroid+Axis%2C+a+New+Paradigm+for+Molar+Incisor+Hypomineralization+%28MIH%29%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Disruption of Steroid Axis, a New Paradigm for Molar Incisor Hypomineralization (MIH).</a> Front Physiol. 8, 343(2017).</li>
<li>Houari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asporin+and+the+mineralization+process+in+fluoride-treated+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Min+Res%22%5BJournal%5D)">Asporin and the mineralization process in fluoride-treated rats.</a> J Bone Min Res. 29, 1446-1455 (2014).</li>
<li>Denbesten, P., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+fluoride+toxicity%3A+dental+fluorosis%5BTitle%5D)+AND+%22Monographs+in+oral+science%22%5BJournal%5D)">Chronic fluoride toxicity: dental fluorosis.</a> Monographs in oral science. 22, 81-96 (2011).</li>
<li>Kirkham, J., Robinson, C., Phull, J. K., Shore, R. C., Moxham, B. J., Berkovitz, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+rate+of+eruption+on+periodontal+ligament+glycosylaminoglycan+content+and+enamel+formation+in+the+rat+incisor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">The effect of rate of eruption on periodontal ligament glycosylaminoglycan content and enamel formation in the rat incisor.</a> Cell Tissue Res. 274, 413-419 (1993).</li>
<li>Lacruz, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+candidate+genes+involved+in+mineralization+of+dental+enamel+by+genome-wide+transcript+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Identification of novel candidate genes involved in mineralization of dental enamel by genome-wide transcript profiling.</a> J Cell Physiol. 227, 2264-2275 (2012).</li>
<li>Wen, X., Paine, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+deposition+and+ferritin+heavy+chain+%28Fth%29+localization+in+rodent+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+research+notes%22%5BJournal%5D)">Iron deposition and ferritin heavy chain (Fth) localization in rodent teeth.</a> BMC research notes. 6, 1(2013).</li>
<li>Houari, S., Loiodice, S., Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+Steroid+Receptors+in+Ameloblasts+during+Amelogenesis+in+Rat+Incisors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Expression of Steroid Receptors in Ameloblasts during Amelogenesis in Rat Incisors.</a> Front Physiol. 7, 503(2016).</li>
<li>Kawano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+dental+epithelial+cell+line+%28HAT-7%29+and+the+cell+differentiation+dependent+on+Notch+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Connect+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Establishment of dental epithelial cell line (HAT-7) and the cell differentiation dependent on Notch signaling pathway.</a> Connect Tissue Res. 43, 409-412 (2002).</li>
<li>Zhou, Y. L., Snead, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+CCAAT%2Fenhancer-binding+protein+alpha+as+a+transactivator+of+the+mouse+amelogenin+gene%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Identification of CCAAT/enhancer-binding protein alpha as a transactivator of the mouse amelogenin gene.</a> J Biol Chem. 275, 12273-12280 (2000).</li>
<li>Nakata, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+spontaneously+immortalized+mouse+ameloblast-lineage+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a spontaneously immortalized mouse ameloblast-lineage cell line.</a> Biochem Biophys Res Commun. 308, 834-839 (2003).</li>
<li>Harada, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+ameloblastoma+cell+line%2C+AM-1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+oral+pathology+%26+medicine%3A+official+publication+of+the+International+Association+of+Oral+Pathologists+and+the+American+Academy+of+Oral+Pathology%22%5BJournal%5D)">Establishment of ameloblastoma cell line, AM-1.</a> Journal of oral pathology & medicine: official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology. 27, 207-212 (1998).</li>
<li>Jussila, M., Thesleff, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+networks+regulating+tooth+organogenesis+and+regeneration%2C+and+the+specification+of+dental+mesenchymal+and+epithelial+cell+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Signaling networks regulating tooth organogenesis and regeneration, and the specification of dental mesenchymal and epithelial cell lineages.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 4, a008425(2012).</li>
<li>Tucker, A., Sharpe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cutting-edge+of+mammalian+development%3B+how+the+embryo+makes+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">The cutting-edge of mammalian development; how the embryo makes teeth.</a> Nat Rev Genet. 5, 499-508 (2004).</li>
<li>Vos, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Years+lived+with+disability+%28YLDs%29+for+1160+sequelae+of+289+diseases+and+injuries+1990-2010%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Years lived with disability (YLDs) for 1160 sequelae of 289 diseases and injuries 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> Lancet. 380, 2163-2196 (2012).</li>
<li>Marcenes, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+oral+conditions+in+1990-2010%3A+a+systematic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Global burden of oral conditions in 1990-2010: a systematic analysis.</a> J Dent Res. 92, 592-597 (2013).</li>
<li>National Institute of Dental and Craniofacial Research. Dental Caries (Tooth Decay) in Adults (Age 20 to 64). , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.nidcr.nih.gov/DataStatistics/FindDataByTopic/DentalCaries/DentalCariesAdults20to64.htm">https://www.nidcr.nih.gov/DataStatistics/FindDataByTopic/DentalCaries/DentalCariesAdults20to64.htm</a> (2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen conflicten van belang om te vermelden.

Gewijzigde ameloblast activiteit en/of verstoord ameloblast proliferatie, differentiatie en rijping processen leiden tot onomkeerbare glazuur gebreken en beurtelings, de karakterisering van de defecten van het glazuur kan helpen ontwikkelen van begrip van de gewijzigde Ameloblast activiteit tijdens amelogenesis. Zo zijn de studies over geïsoleerde glazuur orgel determinant ophelderen van de pathologische gebeurtenissen die leiden tot de geëmailleerde gebreken, ongeacht hun oorsprong, milieu- of genetische.
<p class="...

Vele developmental glazuur gebreken kunnen voortvloeien uit blootstelling aan toxische stoffen in het milieu en/of ongepaste levensstijl1,,2,,3,4. Karakterisatie van het verstoren van de gebeurtenissen en moleculen van amelogenesis met behulp van de momenteel beschreven procedure zal het promoten van het gebruik van resulterende glazuur gebreken als vroege markers van blootstelling aan toxische stoffen in verschillende, en kan helpen om te reconstrueren van de geschiedenis van de gezondheid van elke patiënt tijdens de perinatale periode wanneer email synthetized1,2 is. Emaille synthese kan worden onderverdeeld in vier belangrijkste fasen afhankelijk van ameloblast activiteit5. De eerste stap hergroepeert voorloper cel en pre-ameloblast proliferatie. Tijdens de tweede stap afscheiden gedifferentieerde ameloblasts glazuur matrix eiwitten (EMPs), voornamelijk amelogenin, enamelin en ameloblastin, die de dikte van het definitieve glazuur bepalen. Dus, verstoring van het EMP synthese leidt tot kwantitatieve gebreken van glazuur. Na de afzetting van de dikte van de volledige glazuur begint de rijping fase. Tijdens dit stadium kunt apatiet crystallite groei in de breedte en dikte van het glazuur te bereiken van de hoogste mineralisatie verhouding gevonden in een biologisch weefsel, met korting tot 96% van het gewicht. Ontwrichtende gebeurtenissen die zich tijdens de rijping fase tot kwalitatieve voordoen geëmailleerde gebreken. Tot slot ameloblasts Voer een fase van na rijping, een afkorting voor pigmentatie bij knaagdieren en apoptosis ondergaan tijdens tand uitbarsting glazuur gebreken te maken (indien aanwezig) onherstelbare en onherstelbare, dus gebreken bieden potentiële retrospectieve opname van Ameloblast benadrukt. Bij knaagdieren volgt amelogenesis een gelijkaardige opeenvolging van gebeurtenissen met de bijzonderheid dat hun snijtanden voortdurend groeien, waardoor ze een geschikt model voor het bestuderen van het algemene proces van amelogenesis. Dus, verstoring van het amelogenesis resulteert in veranderingen van glazuur kwaliteit en/of hoeveelheid, afhankelijk van de tijd-venster van het storende evenement. In die zin, blootstelling aan dioxine, lood en hormoonontregelende chemische stoffen (EDCs) zoals Bisfenol A (BPA), genistein en vinclozolin, is gebleken dat voor het genereren van emaille hypomineralizations1,2,3 ,6,7,8. Asymmetrische witte dekkende vlekken werden geïdentificeerd op de snijtanden van ratten blootgesteld aan een lage dosis BPA dosis tijdens de foetale periode en de eerste maand na de geboorte1. Deze glazuur gebreken bij ratten, en die van menselijke molaire snijtand hypomineralization (MIH), delen vergelijkbare klinische, structurele en biochemische kenmerken. MIH is een recent beschreven tandheelkundige glazuur pathologie, voor die de etiologie is nog steeds onduidelijk9,,10 , ondanks vele oorzakelijke factoren heb hypothetische9,10,11 ,12.
Een ander belangrijk emaille hypomineralization pathologie te wijten aan milieufactoren is tandheelkundige fluorose (DF), die het gevolg van overmatige fluoride absorptie is (> 0,1 mg/kg/dag)13,14. De hoofdbron van fluoride is drinkwater, dat is aangevuld of natuurlijk verrijkt met fluoride. Fluoride wordt ook vaak voorgeschreven ter voorkoming van cariës, maar de profylactische dosis is slechts 50% lager dan de toxische één (≤0.05 mg/kg/dag). MIH en DF, twee frequente aandoeningen als gevolg van blootstelling aan milieufactoren, kan gemeenschappelijke kenmerken die moeten worden gekenmerkt door de potentiëring van hypomineralizing effecten van fluoride in combinatie met andere toxische stoffen zoals EDCs2 presenteren of amoxicilline15.
Micro-dissectie van rat glazuur orgel met ameloblasts in verschillende differentiatie stadia zal helpen om te begrijpen van het werkingsmechanisme van moleculen kunnen verstoren ameloblast activiteit en veroorzaken glazuur gebreken na uitbarsting van de tand worden gediagnosticeerd. Met andere woorden, de karakterisatie van veranderingen in de glazuur gen expressie en glazuur matrix samenstelling als gevolg van toxische stoffen in het milieu stelt de reconstructie van de geschiedenis van blootstelling aan toxische stoffen, en vergemakkelijkt voor publiek toezicht op milieuveiligheid gezondheid.

<table><tbody><tr><td>Bisfenol A</td><td>Sigma Aldrich, Saint Louis MO</td><td>239658</td><td></td></tr><tr><td>formaldehyde 10%</td><td>Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO</td><td>HT5012</td><td></td></tr><tr><td>Tri-Reagent</td><td>Euromedex, Frankrijk</td><td>TR118</td><td></td></tr><tr><td>RLT buffer</td><td>Qiagen, Les Ulis, Frankrijk</td><td>74126</td><td>RNeasy Protect Mini Kit</td></tr><tr><td>Androgen receptor antibody</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)</td><td>sc-816</td><td>rabbit polyclonal antibody</td></tr><tr><td>PBS 10x</td><td>EUOMEDEX</td><td>ET330.A</td><td></td></tr><tr><td>Natriumfluoride (NaF)</td><td>Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO</td><td>S-1504</td><td></td></tr><tr><td>paraplast regular</td><td>Leica microsystems, Nanterre cedex, Frankrijk</td><td>39601006</td><td>werd aangeduid als/parafin in de tekst</td></tr><tr><td>OCT-weefsel</td><td>VWR, Fontenay-sous-Bois, Frankrijk</td><td>411243</td><td></td></tr><tr><td>Extra Fine Bonn-schaar - recht/8,5 cm</td><td>PHYMEP, Parijs, Frankrijk</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>Handvat voor scalpelbladen - 12,5 cm</td><td>PHYMEP, Parijs, Frankrijk</td><td>10035-12</td><td></td></tr><tr><td>Gebogen scalpelblad</td><td>PHYMEP, Parijs, Frankrijk</td><td>10035-20</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiemes - fijn/rechte punt</td><td>PHYMEP, Parijs, Frankrijk</td><td>10055-12</td><td></td></tr><tr><td>Circulaire mes</td><td>PHYMEP, Parijs, Frankrijk</td><td>10059-15</td><td></td></tr><tr><td>scalpel bladen n°11 Swann-Morton</td><td>VWR, Fontenay-sous-Bois, Frankrijk</td><td>233-0024</td><td></td></tr><tr><td>binoculaire lens</td><td>Leica biosystems, Nanterre cedex, Frankrijk</td><td>MZFLIII</td><td></td></tr></tbody></table>

micro-dissectie van glazuur orgel van snijtand van ratten blootgesteld aan toxische stoffen in het milieu

Micro-dissection of Enamel Organ from Mandibular Incisor of Rats Exposed to Environmental Toxicants

Emaille gebreken als gevolg van omgevingscondities en manieren van leven zijn de volksgezondheid zorgen vanwege hun hoge prevalentie. Deze gebreken het gevolg zijn van de gewijzigde activiteit van cellen verantwoordelijk voor emaille synthese met de naam ameloblasts, die in emaille orgel. Ameloblasts Volg tijdens amelogenesis, een specifieke en nauwkeurige opeenvolging van gebeurtenissen van proliferatie, differentiatie en dood. Een voortdurend groeiende snijtanden rat is een geschikt experimenteel model om te studeren ameloblast activiteit en differentiatie stadia in fysiologische en pathologische omstandigheden. Hier beschrijven we een betrouwbare en consistente methode voor micro-ontleden glazuur orgel van ratten blootgesteld aan toxische stoffen in het milieu. De micro-ontleed tandheelkundige epithelen bevatten secretie - en rijping-fase-ameloblasts die kunnen worden gebruikt voor de kwalitatieve experimenten, zoals het testen van immunohistochemistry en in situ hybridisatie, evenals voor kwantitatieve analyses zoals RT-qPCR, RNA-seq en westelijke bevlekken.

Veel geëmailleerde gebreken, zoals tandheelkundige fluorose12,13, kan het gevolg zijn van milieu-omstandigheden als gevolg van buitensporige fluoride absorptie of hypomineralization vergelijkbaar MIH als gevolg van blootstelling aan sommige EDCs1, geëmailleerde 7,22. Deze ontwikkelingsstoornissen glazuur gebreken mag experimenteel worden ...

Begrip glazuur vorming en mogelijk wijzigingen vereist de studie van ameloblast activiteit. Hier beschrijven we een betrouwbare en consistente methode voor micro-ontleden glazuur organen met secretie - en rijping-fase-ameloblasts die kunnen worden gebruikt voor verdere kwantitatieve en kwalitatieve experimentele procedures.

Micro-dissectie van glazuur orgel van snijtand van ratten blootgesteld aan toxische stoffen in het milieu

Enamel defects resulting from environmental conditions and ways of life are public health concerns because of their high prevalence. These defects result ...

Het algemene doel van deze procedure is om rattendentin organ te micro-dissecteren en het tandepitheel te scheiden volgens de belangrijkste stadia van celdifferentiatie tijdens glazuursynthese. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van glazuurpathologieën zoals tandfluorose, molare snijtander hyperglazurering en erfelijke glazuurgenese imperfectum. Het grote voordeel van deze techniek is de mogelijkheid om de tandcellen verder te analyseren met behulp van kwantitatieve experimenten zoals immunohistochemie zonder enige voorafgaande behandelingen, evenals daaropvolgende onderzoeken, zoals Hoewel deze methode inzicht kan geven in moleculaire mechanisofaction van endogene en exogene moleculen die hemogeneze kunnen verstoren.Nadat een experimentele rat is geëuthanaseerd, verwijdert u alle huid van de onderste lippen met behulp van een mesje nummer 11 om gemakkelijk toegang te krijgen tot de onderste snijtanden. Maak vervolgens met hetzelfde mesje een insnijding tussen de twee onderste snijtanden. Door lichte druk uit te oefenen, zal de onderkaak dan in twee helften splitsen.Snij vervolgens het temporo-mandibulaire gewricht door met het mesje het kaakgewricht los te maken terwijl u de half-onderkaak met fijne pincetten vasthoudt. Snijd vervolgens de omliggende zachte weefsels door met een mesje en verwijder alle spieren, pezen en ligamenten met behulp van een schraper totdat het bot volledig schoon is. Om de snijtand te isoleren, scheer voorzichtig het bot af door de kling parallel aan de belangrijkste lengteas van de snijtand te plaatsen.Begin met scheren bij de botrug, dicht bij de uiteinden van de snijtand, en werk naar het andere uiteinde van de snijtand, dicht bij de cervicale lus. Maak vervolgens een insnijding met het mesje, distaal van de cervicale lus om het gonion van de half-onderkaak te verwijderen, waardoor de snijtand gemakkelijk te verwijderen is zonder de cervicale lus of het secretoire stadium van ameloblasten te beschadigen. Maak vervolgens een tweede snede onder de tweede kies en steek het mesje tussen het bot en het mediale oppervlak van de snijtand.Wanneer al het basale bot is opgeheven, draai de snijtand naar buiten en verwijder deze voorzichtig met fijne pincetten om schade aan het glazuurorgaanweefsel te voorkomen. Nu is de hele snijtand geïsoleerd. Voor de dissectie, bedek de snijtand met 200 microliter PBS in een 60 millimeter schaal of plaat.Begin met het snijden van de cervicale lus, die zich direct aan het apicale deel van de snijtand bevindt, zoals eerder beschreven. Neem vervolgens de snijtand met fijne pincetten vast, met de labiale oppervlakte naar boven, en maak een scalpelmerkteken aan het einde van het kleurloze deel van het weefsel. Dit merkteken komt overeen met een onderliggende witte vlek die later waarneembaar zal zijn.Gebruik nu een schep of gelijkwaardig gereedschap om het celoppervlak van het merkteken tot het apicale uiteinde te schrapen, wat overeenkomt met kleurloze, secretoire fase ameloblasten. Maak vervolgens een scalpelmerkteken aan het begin van het oranje gedeelte, dat overeenkomt met ameloblasten in de rijpingsfase, en schrap vanaf het scalpelmerkteken tot aan de punt van de snijtand. Verwijder nu de twee millimeter weefsel dat overeenkomt met ameloblasten in de overgangsfase.Open de snijtand niet tijdens de dissectie van het glazuurorgaan, omdat dit de gedissecteerde weefsels zal besmetten met mesenchym. Bewaar tenslotte de weefsels in 10% formaline of lysisoplossing voor verder onderzoek. Voor een extractie van glazuurmatrixproteïnen, verwijder de snijtand kortstondig uit de oplossing totdat een witte vlek zichtbaar wordt rond het middelste deel van het labiale oppervlak.Deze vlek vertegenwoordigt het begin van de glazuurmineralisatie en komt overeen met de overgang naar vroege fase ameloblasten. Snijd dit weefselgebied weg en behandel het naar behoefte. Als het verwijderde weefsel voor extracties van cellulair RNA en eiwitten wordt gebruikt, gebruik dan een commercieel kit om de extractie uit te voeren.Breng het verwijderde weefsel over naar de lysisoplossing en vermaal het tot een homogene mix. Voor histologische analyses, immunohistochemie en NC2-hybridisatie plaatst u het verzamelde weefsel gedurende twee uur bij kamertemperatuur in 10% formaline. Breng het weefsel vervolgens over naar PBS en bewaar het bij vier graden Celsius.Later kan het weefsel worden ingebed in wasparaffine of weefsel OCT. Vier groepen mannelijke witte staartratten werden samengesteld, afhankelijk van hun blootstelling aan fluoride in combinatie met of zonder BPA. Alle dieren werden op dag 65 waargenomen en gedissecteerd zoals beschreven.De kwaliteit van de micro-gedissecteerde glazuurweefsels werd gecontroleerd met behulp van trichrome Masson-kleuring. Microscopisch onderzoek toont typische glazuur epitheelcellen en ameloblast palocide. Het ontbreken van mesenchymale besmetting werd bevestigd door het ontbreken van groen kleuring van collageen.Ameloblasten in de secretiefase drukken enameline uit. Ameloblasten in de rijpingsfase drukken kalikien vier uit en bevatten ook hoge niveaus van pheratin, waardoor ze in staat zijn om grote hoeveelheden ijzer op te slaan die verantwoordelijk zijn voor de oranje kleur van glazuur. Deze RNA's worden bij voorkeur door ameloblasten uitgedrukt in plaats van mesenchymel cellen.Collageen een, aan de andere kant, wordt tot expressie gebracht door mesenchymel cellen en niet door ameloblasten. Immunohistochemie werd vervolgens gebruikt om vier specifieke eiwitten in de secretie- of rijpingsfase ameloblasten te scoren. Bijvoorbeeld, een androgeenreceptor, zichtbaar in groen, is specifiek gelokaliseerd in de rijpingsfase ameloblasten.Na het bekijken van deze video, zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u de glazuurorganen van knaagdieren kunt

micro-dissection-enamel-organ-from-mandibular-incisor-rats-exposed-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De voortdurend groeiende muis snijtand is een model voor het bestuderen van de vernieuwing van tandweefsel van tandheelkundige epitheliale stamcellen (DESCs). Een robuust systeem voor consistente en betrouwbare wijze verkrijgen van deze cellen van de snijtanden en de uitbreiding van deze in vitro wordt hier gemeld.

Isolatie en Cultuur van Dental epitheliale stamcellen van de volwassen muis Incisor

Hier presenteren we een protocol voor het lokaal opwekken van apicale parodontitis bij muizen. We laten zien hoe we een gat in de tand van de muis boren en de pulp ervan blootstellen, om lokale ontstekingen te veroorzaken. Analysemethoden om de aard van deze ontsteking te onderzoeken, zoals micro-CT en histologie, worden ook aangetoond.

Het inducerende apicale periodontitis bij muizen

De Trowell-type orgaankweekmethode is gebruikt om complexe signaleringsnetwerken te ontrafelen die de tandontwikkeling regelen en, meer recent, voor het bestuderen van regulatie die betrokken is bij stamcellen van de continu groeiende muizensnijder. Fluorescerende reporter diermodellen en live-imaging methoden vergemakkelijken diepgaande analyses van tandheelkundige stamcellen en hun specifieke niche micro-omgeving.

Gebruik van trowell-type orgaancultuur om de regulatie van tandheelkundige stamcellen te bestuderen

Het huidige protocol presenteert een snelle, efficiënte en zachte methode voor het isoleren van enkele cellen die geschikt zijn voor eencellige RNA-seq-analyse van een continu groeiende muizensnijtand, muizenkies en menselijke tanden.

Snelle isolatie van afzonderlijke cellen van muizen en menselijke tanden

De muizensnijtand bevat waardevolle labelhoudende cellen in zijn stamcelniche. We hebben een nieuwe manier om de labelvasthoudende cellen onbevooroordeeld te detecteren en te kwantificeren; onze studie gebruikte EdU-etikettering en een 3D-reconstructiebenadering na PEGASOS-weefselverwijdering van de onderkaak.

Detectie en kwantificering van labelvasthoudende cellen in muizensnijtanden met behulp van een 3D-reconstructiebenadering na weefselverwijdering

Ex vivo live beeldvorming is een krachtige techniek voor het bestuderen van de dynamische processen van cellulaire bewegingen en interacties in levende weefsels. Hier presenteren we een protocol dat twee-fotonmicroscopie implementeert om tandepitheelcellen live te volgen in gekweekte snijtanden van hele volwassen muizen.

Ex vivo live beeldvorming gebruiken om celdelingen en bewegingen tijdens tandvernieuwing bij muizen te onderzoeken

Microhardheid is een mechanische eigenschap en een informatieve parameter voor het evalueren van de pathofysiologie van hard weefsel. Hier demonstreren we een gestandaardiseerd protocol (monstervoorbereiding, polijsten, plat oppervlak en indrukplaatsen) voor microhardheidsanalyse in tand- en alveolair bot in mondziektemodellen van knaagdieren, namelijk tandfluorose en ligatuur-geïnduceerde parodontale botresorptie.

Microhardheidsmetingen op tand en alveolair bot in modellen voor mondziekten bij knaagdieren

Het doel van dit protocol is een gestandaardiseerde benadering te bieden voor het kwantitatief beoordelen van de integriteit van de muisachtige gingivale epitheliale barrière door topisch fluorescentie-gelabelde dextrans van verschillende molecuulgroottes op het gingivale oppervlak in vivo toe te passen, gevolgd door ex vivo beeldvorming met een enkelfotonmicroscopiesysteem.

Functionele beoordeling van de muis-gingivale epitheliale barrière met behulp van fluorescerende tracers

Experimenteel dieronderzoek speelt een cruciale rol in de ontwikkeling van klinische transplantatiepraktijk. Het orthotopische varkenslevertransplantatiemodel (OLTx) lijkt sterk op menselijke omstandigheden en wordt vaak gebruikt in klinisch georiënteerd onderzoek. Het volgende protocol bevat alle informatie voor een betrouwbaar varkens-OLTx-model met behulp van een actieve porto-cavale-jugulaire shunt.

Techniek van varkenslever Procurement en Orthotope transplantatie met behulp van een actieve Porto-Caval Shunt

Dit artikel beschrijft de meting van de functionele capaciteit van de linker ventrikel bij muizen door middel van druk/volume analyse bij verschillende hartslagfrequenties.

Hartkatheterisatie in Muizen bij de Pressure Volume Relationship Meet: Onderzoek naar de Bowditch Effect

Leer micro-dissectie van glazuurorganen bij ratten om ameloblastactiviteit te bestuderen tijdens glazuurvorming. Deze techniek maakt nauwkeurige analyse van tandpathologieën mogelijk.

Micro-dissectie van glazuur orgel van snijtand van ratten blootgesteld aan toxische stoffen in het milieu

Meer video's verkennen