23 februari 2018
Presenteren we een efficiënte methode van het bestuderen van lens accommodatie met behulp van een manuele lens brancard. Het protocol nabootsers fysiologische accommodatie door te trekken van de zonules rond de capsule van de lens, waardoor aangesloten, zich uitstrekt van de lens.
Het algemene doel van deze techniek is om een meer haalbare en goedkopere methode te bieden voor het nauwkeurig bestuderen van lensbiomechanica. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van oculaire biomechanica over hoe de lens verandert met het verlies van accommodatie en het begin van presbyopie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het nauwkeurig de mogelijkheid van de lens om te accommoderen monitort tegen een lage materiaalkost en een hoge procedurele robuustheid.
Na het verkrijgen van het oogmonster, grijpt u stevig de zijkant van het oog en gebruikt u een scheermes om een kleine insnijding te maken langs de zijkant drie millimeter van de hoornvlijms af, diep genoeg om het glasvocht te bereiken. Gebruik gesteriliseerd schaar om de insnijding voort te zetten rond de omtrek van het oog en gebruik de pincetten om het achterste oogweefsel te verwijderen zodra het is uitgesneden. Isoleer de lens, zonulae en het aangehechte glasvocht met behulp van pincetten indien nodig om de zonulae en het ciliair lichaam los te koppelen van de ciliaire spieren terwijl de verbinding met de lens wordt gehandhaafd.
Verwijder vervolgens het overtollige glasvocht zodat de lens plat kan liggen op de handmatige lensrek. Zorg ervoor dat de lens, zonulae en een minimale hoeveelheid glasvocht intact blijven tijdens het verwijderen van het overtollige glasvocht. Om de rek te assembleren, plaatst u 10 millimeter schoenzolen en hun bijbehorende schoenbovenkanten in de bodemplaat van de rek zodat er een vijf milliliter gat blijft tussen de achterwand van de schoenholte en de schoen zelf.
Gebruik gebogen pincetten om de geëxtraheerde lens met de voorkant naar boven in het midden van de bodemplaat te plaatsen, zodat de schoenen de lens ondersteunen over het centrale gat. Draai de overeenkomstige bovenkant van de schoenen op zijn plaats en klik alleen de zonulae en het glasvocht vast. Plaats vervolgens de platen in de platenhouder en de stopschroef in het gat aan de zijkant van de bodemplaat en plaats de platenhouder in de basis.
Om de lens te meten, plaatst u een beeldvormingssysteem direct boven het apparaat op de juiste afstand voor het verkrijgen van beelden en plaatst u een liniaal in het beeldveld voor nauwkeurige groottebepaling en schaling van de beelden in nabewerking. Draai vervolgens stevig maar soepel de sleutel in de klokrichting om de lens te rekken en beelden van de lens te verkrijgen. Om consistentie tussen monsters te garanderen, is het essentieel om de sleutel soepel te draaien tijdens het rekken van de lens.
Wanneer alle beelden zijn verkregen, draait u de sleutel in de tegengestelde richting van de klok om het monster in rusttoestand te herstellen en verkrijgt u de beelden van de uiteindelijke rusttoestand van de lens. Om de gegevens te analyseren, uploadt u de beelden naar de juiste beeldanalysesoftware en gebruikt u het punt om ten minste 40 punten rond de omtrek van de lens te selecteren. Selecteer onder het analysemenu meten om de locatie van elk geselecteerd punt te verkrijgen en past u de locatiepunten aan met MathLab om een straal en chi-kwadraat van de pasvorm te verkrijgen.
Gebruik vervolgens de gefotografeerde liniaal om de pixelstraal en fout in metrische waarden om te zetten en voer gepaarde tweezijdige t-testanalyse uit om een individuele lens vóór en na het rekken te vergelijken. In deze representatieve analyse van 10 varkensoogmonsters vertoonden de lenzen een stijging van meer dan 4% vanaf hun oorspronkelijke stralen, wat het lensrekprotocol valideert met zowel consistentie als nauwkeurigheid uit de literatuur. Toen menselijke lenzen werden getest, werd een dramatische afname van de elasticiteit van de lens waargenomen in correlatie met de leeftijd van de donor, zoals verwacht uit eerdere lenselasticiteitsstudies.
Eenmaal beheerst, kan deze lensrektechniek in minder dan 10 minuten worden voltooid als deze correct wordt uitgevoerd. Tijdens het rekken van de lens is het belangrijk om te onthouden om een continue rekkrachten toe te passen totdat de stopschroef is bereikt om de variabiliteit tussen monsters te minimaliseren. Met behulp van deze handmatige lensrektechniek kunnen we de lensstijfheid van patiënten met verschillende ziektepathologieën monitoren, inclusief patiënten met diabetes, cataracten of presbyopie.
Na de ontwikkeling ervan, heeft deze techniek de weg geëffend voor onderzoekers op het gebied van oculaire biomechanica om de eigenschappen van de lens te verkennen tijdens het verlies van accommodatie en/of de beginfasen van presbyopie. Na het bekijken van deze video, zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u een handmatige lensrek kunt gebruiken om waardevolle biomechanische inzichten over de lens te verkrijgen. Vergeet niet dat werken met biologisch weefsel extreem gevaarlijk kan zijn en dat voorzorgsmaatregelen zoals het dragen van de juiste laboratoriumkleding en het steriliseren van alle instrumenten voor gebruik altijd moeten worden genomen tijdens het uitvoeren van deze procedure.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Dit artikel presenteert een methode voor het bestuderen van lensaccommodatie met behulp van een handmatige lensrekker. De techniek simuleert fysiologische accommodatie door de lens uit te rekken via de zonulae die met het lenskapsel verbonden zijn.
Het simuleren van lensaccommodatie met een handmatige lensrekker maakt kosteneffectief en reproduceerbaar onderzoek mogelijk naar biomechanische veranderingen die relevant zijn voor presbyopie en andere oculaire pathologieën. Deze benadering ondersteunt de validatie van targets in een vroeg stadium en het mechanistisch verminderen van risico's voor therapieën die gericht zijn op leeftijdsgerelateerde lensstijfheid. De vereenvoudigde monstervereisten van de methode en de robuuste kwantitatieve resultaten faciliteren een evaluatie van de lensbiomechanica over het gehele portfolio in translationeel onderzoek.
Dit protocol voor handmatige lensrekking is geïntegreerd in het continuüm van ontdekking naar preklinisch onderzoek voor oculaire biomechanica en ondersteunt zowel hypothesegestuurd onderzoek als translationele validatie.