Name: Een methode voor het meten van speekselklier functie in muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Leer een eenvoudige methode om speekselproductie bij muizen te meten na Pilocarpine-stimulatie. Deze techniek vermindert variabiliteit en maakt herhaalde metingen bij hetzelfde dier mogelijk voor onderzoek naar speekselklierfunctie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De studie werd gesteund door een subsidie van de National Institutes of Health, National Institute van tand- en craniofaciale onderzoek (DE025030).

Het protocol hieronder beschreven werd goedgekeurd door het institutionele Animal Care en gebruik Comité en volgt de ethische richtsnoeren die zijn vastgelegd door de National Institutes of Health. Alle gegevens die in dit verslag werden gegenereerd met behulp van vrouwelijke muizen die 10-12 weken oud waren. De volgende muizenstammen werden gebruikt: C57BL/6, BALB/c, DBA1, 129S en (B6XA/J) F1. Alle muizen waren gehuisvest in barrière kooien (5 dieren per kooi) in de voorwaarden van specifieke pathogenen vrije en voeder en water ad libitum verstrekt.
1. voorbereiding
<ol><li>Ter voorbereiding van een stamoplossing van pilocarpine hydrochloride, Weeg 10 mg van de stof en het ontbinden in 1.776 mL steriele isotonische zoutoplossing door vortexing, om een stamoplossing van 5.63 mg/mL. Er is geen behoefte om deze oplossing te steriliseren. Maar indien gewenst, filtreer het door een 0,2 µM filter. Bewaar deze voorraadoplossing in meerdere porties in een vriezer-80 oC voor maximaal 3 maanden. Elke bevroren voorraad is voor eenmalig gebruik. Eenmaal ontdooid, niet de oplossing pilocarpine refreeze.</li>
	<li>Neem 0,6 mL microfuge buizen en zorgvuldig punch een klein gaatje in de onderkant van elke buis met een verwarmde naald 18-gauge. Zet deze buizen in 2 mL tubes. De buizen moeten niet steriel.</li>
	<li>Met behulp van een scherpe, steriele scheermesje, cilindrische absorberend swabs snij in stukken ongeveer 2 cm in lengte. Knip elke stukje van 2 cm diagonaal om 2 conisch gevormde swabs. Plaats een doekje in elk van de 0,6 mL microfuge buizen.</li>
	<li>Weeg de 0,6 mL microfuge buis met het droge staafje.</li>
	<li>Overdracht van de muizen worden bestudeerd in een nieuwe schone kooi met flessen water. Houd de muizen zonder voedsel voor ten minste 2 uur voor de aanvang van speeksel collectie om te voorkomen dat voedseldeeltjes verontreiniging van het speeksel verzameld. Opmerking: Het is niet nodig om te houden van 1 muis per kooi voor deze procedure. Echter, het aantal muizen in elke kooi geplaatst is afhankelijk van de instelling van de specifieke regels en voorschriften voor dierlijk gebruik.</li>
	<li>Vlak voor het einde van 2 h, bereiden de werkoplossing pilocarpine (0.0563 mg/mL) door verdunning van de stockoplossing 100 x in een steriele zoutoplossing. Het is niet nodig om verdere filter steriliseren van deze oplossing. Houd altijd de werkoplossing pilocarpine op ijs. Opmerking: Tabel 1 geeft de hoeveelheid pilocarpine ingespoten brandstof voor een scala van muis lichaam gewichten te geven een laatste dosis van 0.375 mg/kg lichaamsgewicht.</li>
</ol>2. de procedure
<ol><li>Weeg elke muis en bepalen van de dosering van de verdoving mix voor elke muis met behulp van tabel 1. Injecteer de eerste muis met het juiste volume van de verdoving mix door de intraperitoneaal route. Instellen van de timer voor 2 min (meeste muis stammen getest in dit protocol gaan slapen door 2 min). Zorg ervoor dat de muis is goed verdoofd door gebrek lopen wanneer geplaatst op een plat oppervlak. Als de muis nog steeds loopt, wachten op extra 2 min voordat u verdergaat met de volgende stap. Een daling van smeermiddel ophthalmic zalf toepassen op beide ogen om te voorkomen dat het drogen. Opmerking: In tabel 1is de dosis van de verdoving mix 0.007 mL/g lichaamsgewicht. De optimaal bereik voor deze procedure is 0.006 tot 0,008 mL/g lichaamsgewicht. Echter na 4 min., als de muis is nog steeds lopen of schokkerige bewegingen, exposeren consult met de institutionele dierenarts voor het op de juiste manier het verhogen van de dosis van de verdoving.</li>
	<li>Bepalen van de dosering van pilocarpine voor de muis met behulp van tabel 1 en injecteren van het passende bedrag door intraperitoneaal route. Instellen van de timer voor 2 min en plaats van de muis in de afdekking tube van 50 mL tot het hoofd en de oren stok uit de gesneden geraken. Plaats de buis in een hoek van 45 graden, met het hoofd naar beneden, en de ventrale oppervlak naar boven gericht. Tape de buis aan het bestuur van de procedure te houden bewegen. Nota: Tabel 1 verstrekt dosering voor muizen meer dan 17 g, aangezien deze procedure heeft niet geprobeerd bij muizen met een gewicht van minder dan 17 g.</li>
	<li>Aan het einde van de 2 min, zachtjes invoegen een gesloten paar micro ontrafeling van pincet in de mond en til de onderkaak naar boven om te openen van de mond. Duw de verlostang 1-2 mm verder in de mond, om ervoor te zorgen dat de tong wordt gezien rusten op de bovenste arm van de verlostang. Met een ander paar van fijne pincet, houden de vooraf gewogen droog doekje dicht bij zijn conisch uiteinde.</li>
	<li>Schuif de conische punt van het staafje voorzichtig in de mond. Trekken de verlostang terwijl het verlaten van het puntje van het staafje in de mondholte.</li>
	<li>Pak het bredere einde van het staafje uit te breiden buiten de mond en draaien zodat de maximale oppervlakte van contact met de mond. Houd het staafje in deze positie gedurende 15 minuten. Opmerking: Dit zorgt ervoor dat het staafje in de mond voor de duur van de collectie blijft. Merk op dat de conische punt van het staafje als een wick en het bredere gedeelte van het staafje fungeert buiten de mond blijft.</li>
	<li>Aan het einde van 15 min, zachtjes draaien van het staafje te verzamelen speeksel dat is niet geabsorbeerd en plaats het natte staafje in de 0,6 mL microfuge buis. Sluit de tube en zet deze in de 2 mL-buis geplaatst op ijs. Opmerking: Op dit moment, de mondelinge mucosa verschijnt helemaal droog. De muis kan nu worden keerde terug naar zijn kooi voor het herstel van de verdoving.</li>
	<li>Overdracht van de muis in de kooi. Plaats bevochtigd voedsel pellets in de kooi na speeksel collectie om te helpen sneller rehydratie. Opmerking: De muizen wakker binnen 10 minuten na het einde van de collectie. Subcutane injectie van 0,2 mL voorverwarmde isotonische zoutoplossing kan ook worden gegeven aan het versnellen van herstel.</li>
	<li>Ga verder met de volgende muis. Alle de muizen moeten worden gecontroleerd, totdat zij volledig zijn hersteld en zijn ambulante.</li>
</ol>3. metingen
<ol><li>Aan het einde van alle collecties, wegen de 0,6 mL buisjes met het natte staafje. Bereken het verschil tussen de versgewicht en het droge gewicht te krijgen van het gewicht van speeksel geproduceerd. Plaats de buis 0,6 mL met speeksel terug in de 2-mL-buis.</li>
	<li>De doppen van de 2 ml tubes afgesneden. Centrifugeer dan de 2 mL tubes voor 2 min bij 7500 x g, op 4oC in een micro-centrifuge om te herstellen van het speeksel. Het meten van de hoeveelheid speeksel verkregen met behulp van een micropipet.</li>
	<li>Geef de resultaten als speeksel gewicht (mg)10 meer dan 15 min of als een verhouding van speeksel gewicht (mg) / mouse lichaamsgewicht (g). Opmerking: Als de hoeveelheid speeksel geëxtraheerd uit het staafje is gemeten, Geefderesultaten de hoeveelheid speeksel hersteld (mL) of de verhouding van speeksel volume (mL) / mouse lichaamsgewicht (g).</li>
</ol>

<ol><li>Proctor, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiology+of+salivary+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontol+2000%22%5BJournal%5D)">The physiology of salivary secretion.</a> Periodontol 2000. 70 (1), 11-25 (2016).</li>
<li>Fox, R. I. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16039337">Sjögren's syndrome.</a> Lancet. 366 (9482), 321-331 (2005).</li>
<li>Eisbruch, A., Kim, H. M., Terrell, J. E., Marsh, L. H., Dawson, L. A., Ship, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xerostomia+and+its+predictors+following+parotid-sparing+irradiation+of+head-and-neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">Xerostomia and its predictors following parotid-sparing irradiation of head-and-neck cancer.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 50 (3), 695-704 (2001).</li>
<li>Marmary, Y., Fox, P. C., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+secretion+rates+from+mouse+and+rat+parotid+glands+are+markedly+different+following+pilocarpine+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Fluid secretion rates from mouse and rat parotid glands are markedly different following pilocarpine stimulation.</a> Comp Biochem Physiol A Comp Physiol. 88 (2), 307-310 (1987).</li>
<li>Lin, A. L., Johnson, D. A., Wu, Y., Wong, G., Ebersole, J. L., Yeh, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+short-term+gamma-irradiation+effects+on+mouse+salivary+gland+function+using+a+new+saliva+collection+device%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Measuring short-term gamma-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device.</a> Arch Oral Biol. 46 (11), 1085-1089 (2001).</li>
<li>Scofield, R. H., Asfa, S., Obeso, D., Jonsson, R., Kurien, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+short+peptides+from+the+60-kDa+Ro+antigen+recapitulates+the+serological+and+pathological+findings+as+well+as+the+salivary+gland+dysfunction+of+Sjogren%27s+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunization with short peptides from the 60-kDa Ro antigen recapitulates the serological and pathological findings as well as the salivary gland dysfunction of Sjogren's syndrome.</a> J Immunol. 175 (12), 8409-8414 (2005).</li>
<li>Deshmukh, U. S., Nandula, S. R., Thimmalapura, P. R., Scindia, Y. M., Bagavant, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+innate+immune+responses+through+Toll-like+receptor+3+causes+a+rapid+loss+of+salivary+gland+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Pathol+Med%22%5BJournal%5D)">Activation of innate immune responses through Toll-like receptor 3 causes a rapid loss of salivary gland function.</a> J Oral Pathol Med. 38 (1), 42-47 (2009).</li>
<li>Deshmukh, U. S., Ohyama, Y., Bagavant, H., Guo, X., Gaskin, F., Fu, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+stimuli+accelerate+Sj%C3%B6gren%27s+syndrome-like+disease+in+%28NZB+x+NZW%29F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Inflammatory stimuli accelerate Sjögren's syndrome-like disease in (NZB x NZW)F1 mice.</a> Arthritis Rheum. 58 (5), 1318-1323 (2008).</li>
<li>Szczerba, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+innate+immunity+and+Ro52-induced+antibody+causes+Sj%C3%B6gren%27s+syndrome-like+disorder+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rheum+Dis%22%5BJournal%5D)">Interaction between innate immunity and Ro52-induced antibody causes Sjögren's syndrome-like disorder in mice.</a> Ann Rheum Dis. 75 (3), 617-622 (2016).</li>
<li>Takakura, A., Moreira, T., Laitano, S., De Luca Júnior, L., Renzi, A., Menani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+muscarinic+receptors+signal+pilocarpine-induced+salivation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Central muscarinic receptors signal pilocarpine-induced salivation.</a> J Dent Res. 82 (12), 993-997 (2003).</li>
<li>Yao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide-induced+elevation+and+secretion+of+interleukin-1beta+in+the+submandibular+gland+of+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide-induced elevation and secretion of interleukin-1beta in the submandibular gland of male mice.</a> Immunology. 116 (2), 213-222 (2005).</li>
<li>Knudsen, J., Nauntofte, B., Josipovic, M., Engelholm, S. A., Hyldegaard, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+isoflurane+anesthesia+and+pilocarpine+on+rat+parotid+saliva+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Radiat+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of isoflurane anesthesia and pilocarpine on rat parotid saliva flow.</a> Radiat Res. 176 (1), 84-88 (2011).</li>
<li>Kohrs, R., Durieux, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine%3A+teaching+an+old+drug+new+tricks%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Ketamine: teaching an old drug new tricks.</a> Anesth Analg. 87 (5), 1186-1193 (1998).</li>
<li>Cold Spring Harbor Protocols. Cold Spring Harb Protoc. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://cshprotocols.cshlp.org/">http://cshprotocols.cshlp.org/</a> (2006).</li>
<li>Kozaki, T., Hashiguchi, N., Kaji, Y., Yasukouchi, A., Tochihara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+saliva+collection+using+cotton+swab+on+cortisol+enzyme+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of saliva collection using cotton swab on cortisol enzyme immunoassay.</a> Eur J Appl Physiol. 107 (6), 743-746 (2009).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen conflicten van belang om te vermelden.

Speeksel productie is een complex proces en wordt beïnvloed door vele factoren. Meten van speekselklier functie in laboratoriumdieren kan dus een uitdaging. Een extra uitdaging is dat herhaalde metingen van speekselklier functie in hetzelfde dier nodig om de eerste verschijnselen van ziekte of om aan te tonen van herstel na de behandeling zijn.
De in dit verslag beschreven methode van doekje is technisch eenvoudig uit te voeren met meerdere opties zodat de gegevens vertegenwoordigen. De result...

De speekselklieren produceren speeksel in reactie op een verscheidenheid van neurologische en mechanische stimuli1. De prikkels zijn uitgevoerd door het sympathische en parasympathische zenuwstelsel aan de adrenergic en cholinerge receptoren in de klier. Pilocarpine is een cholinerge, para-sympathomimetic agent die voornamelijk op muscarinerge receptoren fungeert. In de speekselklier induceert het de productie van speeksel door te handelen op de muscarinerge acetylcholine receptor M31. Productie van speeksel na toediening van de pilocarpine is een indicator van het vermogen van de speekselklieren te reageren op de stimulatie en wordt vaak gebruikt als een maatregel van speekselklier functie.
Nauwkeurige meting van het speeksel productie is van cruciaal belang in de studie van speekselklier ziekten met inbegrip van Sjögren syndroom2 en straling schade na van hoofd en nek kanker behandeling3. Verschillende methoden zijn ontwikkeld voor het meten van de productie van speeksel in knaagdieren. Deze omvatten directe cannulation van het uitscheidingsmechanisme speeksel buis4, de collectie van speeksel uit de mondholte onder vacuüm5en collectie glazen capillairen6 of een micropipet7,-8, 9. directe cannulation van het speeksel kanaal biedt de meest nauwkeurige en zuiver speeksel. Echter, dit is een technisch uitdagende procedure, en het potentieel voor het veroorzaken van letsel ductaal uitsluit repetitieve speeksel collecties van hetzelfde dier. Het verzamelen van speeksel onder vacuüm kan leiden tot variabele resultaten te wijten aan het drogen van het speeksel uit de buis. Dit verlies is verder overdreven in muizen met verminderde speekselvloed. Glazen capillairen toe de collectie van speeksel voor latere analyses, veranderingen in de viscositeit van het speeksel uitgescheiden in de zieke staat voorkomt echter dat efficiënte vulling van het capillair. Verder kunnen probeert te vegen de mondholte voor het verzamelen van de resterende speeksel leiden tot letsel. De pipet-methode zorgt voor de complete collectie, en voor dezelfde exploitant, het is opmerkelijk consistente tussen experimenten. Om onbekende redenen blijkt deze methode echter aanzienlijke variatie tussen de verschillende exploitanten. Zodat passende vergelijkingen, wordt het daarom noodzakelijk dat dezelfde exploitant alle experimenten gerelateerd aan een specifiek project voert. Duidelijk, vertegenwoordigt dit een groot nadeel voor een laboratorium.
Om te overwinnen van deze problemen, werd een procedure uitgewerkt dat combineert speeksel vergaringsmethoden voor mens en knaagdieren gebruikt. De swab-methode, beschreven hieronder voor het meten van speeksel pilocarpine-geïnduceerde volume is eenvoudig, reproduceerbaar is, niet beïnvloed door de exploitant, en herhaaldelijk kan worden uitgevoerd in hetzelfde dier. Verder staat het verzamelen van het speeksel voor latere analyses van eiwitten, immunoglobulinen, of andere biomoleculen.

 - The generated text has been blocked by our content filters.

een methode voor het meten van speekselklier functie in muizen

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Patiënten met het syndroom van Sjögren, een auto-immune ziekte die de exocrine klieren, ontsteking van de speekselklier ontwikkelen en speeksel productie is gedaald. Ook is speeksel productie ernstig aangetast in patiënten die radiotherapie voor kanker van het hoofd en de nek. Knaagdier modellen, ontwikkeld om deze klinische omstandigheden, nabootsen vergemakkelijken van een goed begrip van de pathogenese van de ziekte en toestaan voor de ontwikkeling van nieuwe therapeutische strategieën. Daarom is de mogelijkheid om nauwkeurig, reproducibly en herhaaldelijk meten speekselklier functie in diermodellen is kritisch. Voortbouwend op de procedures die zijn beschreven in de literatuur, een methode ontwikkeld die aan deze criteria voldoet en werd gebruikt om de functie van de speekselklier bij muizen wordt geëvalueerd. Een bijkomend voordeel van deze nieuwe methode is dat het is gemakkelijk onder de knie, en weinig variatie tussen exploitant heeft. Speekselklier functie wordt geëvalueerd als de hoeveelheid (gewicht of volume) of een percentage (mL/min) speeksel in reactie op pilocarpine stimulatie geproduceerd. De verzamelde speeksel is een goede bron voor de analyses van het gehalte aan andere melkeiwitten, immunoglobulin concentraties en andere biomoleculen.

In de experimentele muis modelsystemen, wordt het vermogen te produceren speeksel in reactie op pilocarpine stimulatie gebruikt als een indicator van speekselklier functie. Speeksel productie werd gemeten in 11-week-oude C57BL/6 vrouwelijke muizen door de swab-methode. In figuur 1A, worden de resultaten uitgedrukt als de hoeveelheid speeksel (mg) verzamelde toenemende doses van pilocarpine na. Bij de dosis van 1 mg/kg lichaamsgewicht begonnen enkele van de mu...

Speekselklier hypofunction is een frequente gevolg van auto-immune ziekte en straling therapie. Reproduceerbaar evaluatie van speekselklier functie in muismodellen van deze ziekten is een technische uitdaging. Hier wordt een eenvoudige methode voor nauwkeurige en reproduceerbare meting van speeksel productie in muizen beschreven.

Een methode voor het meten van speekselklier functie in muizen

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Het algemene doel van deze procedure is om nauwkeurig en reproduceerbaar muisspeeksel te verzamelen en meten na stimulatie met Pilocarpine. Het meten van speekselproductie bij knaagdieren is een uitdagende procedure en is vatbaar voor grote variabiliteit. Deze methode is eenvoudig en kan worden herhaald op hetzelfde dier op meerdere tijdstippen gedurende het hele onderzoek.Deze methode kan niet alleen het volume van het geproduceerde speeksel meten, maar kan ook worden gebruikt om het speeksel te verzamelen voor verdere analyse van bioactieve moleculen die mogelijk in het speeksel worden uitgescheiden. Uiteindelijk zal dit van groot nut zijn bij het onderzoeken van het syndroom van Sjögren, fibrose van de speekselklieren of regeneratie van de speekselklieren in knaagdiermodelsystemen. Voor deze procedure moeten aliquoten van Pilocarpine hydrochloride worden bereid en bevroren, niet ouder dan drie maanden.Vries geen opgedopte aliquoten opnieuw in. Begin met het bereiden van 0,6 mL microcentrifugebuisjes. Maak voorzichtig een klein gaatje in de bodem van de buisjes met een verwarmde 18 gauge naald.Maak één buisje per muis. Plaats deze buisjes vervolgens in 2 mL buisjes. Steriliteit i

a-method-for-the-measurement-of-salivary-gland-function-in-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Een geoptimaliseerde protocol voor de isolatie van stamcellen van de muis speekselklier wordt beschreven. De methode maakt gebruik van enzymatische en mechanische spijsvertering, en laat de isolatie van salispheres met cellen met kenmerken van stamcellen.

Isolatie van Mouse speekselklier Stem Cells

Deze methode beschrijft hoe te ontleden en te evalueren ontwikkeling van de borstklier en de functie van muizen. Weggesneden borstklieren zijn beoordeeld op de mate van ontwikkeling met behulp van ganse berg, terwijl melk ejectie is geëvalueerd met behulp van een oxytocine-based myo cel contractie assay.

Evaluatie van de ontwikkeling van de borstklier en functie in muismodellen

Een protocol voor de canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via kanaal van de Wharton is beschreven. Voor dit experiment wordt het trypaan blauw-oplossing gebruikt als een verver om aan te tonen hoe deze techniek effectief infusies levert in de gerichte klier, en om de betrouwbaarheid van deze nieuwe aanpak voorstellen als een potentieel klinisch drug / celtherapie voor het herstel van de speekselklieren.

Canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via Duct de Wharton&#39;s

Opklaren is een krachtige tool waarmee beeldvorming verschillende biologische processen in levende dieren. In dit artikel presenteren we een gedetailleerde werkwijze voor het afbeelden van de dynamiek van subcellulaire structuren, zoals de secretoire granules in de speekselklieren van levende muizen.

Intravitale Microscopy for Imaging Subcellulaire Structuren in Levende muizen die fluorescerende eiwitten

We beschrijven een protocol om operatief bloot en stabiliseren de lymfkliertest submandibulaire speekselklier voor intravital geschikt zijn met behulp van rechtop intravital microscopie. Dit protocol is gemakkelijk aan te passen aan andere exocrine klieren van het hoofd en nek regio van muizen en andere kleine knaagdieren.

Voorbereiding van lymfkliertest submandibulaire speekselklier rechtop Intravital microscopie

We presenteren een gedetailleerde aanpak voor het uitvoeren van speeksel inzameling, met inbegrip van lymfkliertest tracheostomy en het isolement van de drie grote speekselklieren.

Gefractioneerde lymfkliertest speeksel functioneel-diagnostiek via Pilocarpine stimulatie volgende straling

We presenteren een methode voor het isoleren en cultiveren van primaire menselijke speekselklier-afgeleide epitheliale cellen. Deze cellen vertonen genexpressie patronen consistent met hen van speeksel epitheel oorsprong en kunnen worden gekweekt als salispheres op kelder membraan matrices afgeleid van engelbreth-Holm-Swarm tumorcellen of als monolagen op behandelde cultuur gerechten.

Isolatie van speeksel epitheelcellen van menselijke speekselklieren voor in vitro groei als Salispheres of monolagen

In dit protocol werd de endotheelbarrièrefunctie van de submandibulaire klier (SMG) geëvalueerd door verschillende moleculair gewogen fluorescerende tracers in vivo in de hoekaders van proefdiermodellen te injecteren onder een laserscanmicroscoop met twee fotonen.

In vivo Vasculaire permeabiliteitsdetectie bij submandibulaire klier van muizen

Immunofluorescerende beeldvorming wordt beperkt door het vermogen om complexe, tijdsafhankelijke biologische processen in slechts één momentopname in de tijd waar te nemen. Deze studie schetst een live-imaging-benadering die wordt uitgevoerd op nauwkeurig gesneden plakjes submandibulaire klier van muizen. Deze aanpak maakt de real-time observatie mogelijk van cel-cel interacties tijdens homeostase en de processen van regeneratie en herstel.

Ondervraging van cel-celinteracties in de speekselklier via ex vivo beeldvorming van levende cellen

Hier beschrijven we micropipetgeleide medicijntoediening (MDA) als een alternatieve methode voor orale maagsonde die het onderzoeksdier stimuleert om behandelingen gemakkelijk in te nemen met minimale stress en ongemak.

Gebruik van micropipet-geleide medicijntoediening als alternatieve methode voor orale sonde in knaagdiermodellen

Hier beschrijven we de meting van hoest met behulp van een niet-invasief en real-time plethysmografie van het hele lichaam (WBP) -systeem en de normatieve procedures voor het oogsten van weefselmonsters van muizen en introduceren we enkele methoden om luchtwegontsteking te beoordelen.

Methoden voor het detecteren van hoest en luchtwegontsteking bij muizen

Leer een eenvoudige methode om speekselproductie bij muizen te meten na Pilocarpine-stimulatie. Deze techniek vermindert variabiliteit en maakt herhaalde metingen bij hetzelfde dier mogelijk voor onderzoek naar speekselklierfunctie.

Een methode voor het meten van speekselklier functie in muizen

Meer video's verkennen