10 september 2018
Deze methode beschrijft de plaatsing van de spreekbeurt ader enten bij konijnen, de transductie van de transplantaties en de verwezenlijking van duurzaam transgenic expressie. Hierdoor kan het onderzoek van fysiologische en pathologische rollen van transgenen en hun eiwitproducten in geënte aderen, en het testen van gentherapieën voor ader graft ziekte.
Deze methode kan cruciale vragen beantwoorden over de pathogenese van adergraftfalen. Het zou bijvoorbeeld mediatoren van graftfalen kunnen identificeren en strategieën testen die gericht zijn op het voorkomen van graftfalen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is de mogelijkheid om duurzame, stabiele transgenexpressie in het adergraftendotheel te bereiken.
Na het anestheseren van een konijn volgens het tekstprotocol, scheer het dier van de sternale inkeping tot aan de rand van de onderkaak. Na voltooiing van de chirurgische opstelling gebruikt u elektrocauterisatie om de huid langs de middenlijn tussen de sternale inkeping en de onderkaak te snijden, ongeveer zeven tot negen centimeter lang. Bevestig vervolgens handdoekklemmen om de incisie open te houden.
Dissect botweg onder het fascia langs de hele middenlijn. Gebruik vervolgens elektrocauterisatie om door het gedissecteerde fascialaag langs de middenlijn te snijden. Begin dan aan de rechterkant met dissectie tussen de sterno-hyoïde spier boven de luchtpijp en de sternocephalische spier om de gewone halsslagader bloot te leggen.
Dissect vervolgens voorzichtig een segment van vier tot vijf centimeter van de gewone halsslagader en zijn grotere takken vrij van omliggend weefsel. Gebruik 5-0 zijdedraad om de grotere takken van de gewone halsslagader te binden voordat u elke tak distaal van de naald doorknipt. Na herhaling van de dissectie aan de linkergewone halsslagader, gebruik weefselhoudende klemmen om de onderhuidse weefselslaag tijdelijk te sluiten.
Vervolgens dissecteert u de oppervlakkige fascia van de huid aan de rechterkant totdat de buitenste halsslagader wordt blootgelegd. Dissect een segment van vier tot vijf centimeter van de buitenste halsslagader en maak de takken los van het omliggende weefsel. Gebruik 5-0 zijdedraad om de takken te binden en snij de takken vervolgens door.
Bind vervolgens de geïsoleerde ader aan beide uiteinden, snijd het cranale uiteinde door en spoel het lumen met heparine-zoutoplossing. Om een adergraft uit te voeren, gebruikt u een vasculaire klem om de rechtergewone halsslagader te klemmen aan het cranale uiteinde van het geïsoleerde segment. Plaats vervolgens een vasculaire klem op het caudale uiteinde.
Voer nu een caudale arteriotomie uit net cranaaal aan de caudale klem, gelijk aan de diameter van het cranale uiteinde van het adersegment. Voer vervolgens een intraveneuze katheter aan een spuit met heparine-zoutoplossing in door de caudale arteriotomie en spoel het lumen van de halsslagader. Het vocht zal via de arteriotomie uitstromen.
Ga terug naar de halsslagader, snij de ader door en leg hem naast de halsslagader. Met enkele steken van 7-0 polypropyleen naald bindt u het caudale uiteinde van de caudale arteriotomie aan het cranale uiteinde van het adersegment. Plaats vervolgens een tweede stek 180 graden vanaf de eerste stek om de cranale rand van de caudale arteriotomie aan het cranale uiteinde van het adersegment te binden.
Plaats een derde stek op een punt dat even ver is van de eerste twee steken op de laterale zijde van de anastomose. Plaats vervolgens een vierde stek op de mediale zijde van de anastomose op gelijke afstand van de eerste twee steken en tegenover de derde stek. Plaats vier extra steken tussen elk van de steken een tot en met vier.
Voer de cranale arteriotomie uit op de caudale zijde van de distale klem. De afstand tussen het cranale uiteinde van de cranale arteriotomie en het caudale uiteinde van de caudale arteriotomie moet gelijk zijn aan de lengte van het adersegment. De lengte van de cranale arteriotomie is gelijk aan de diameter van het caudale uiteinde van het adersegment.
Zorg ervoor dat de ader niet gedraaid is wanneer deze cranaaal van de anastomose langs de halsslagader wordt uitgebreid. Gebruik heparine-zoutoplossing om de halsslagader en ader via de cranale arteriotomie te spoelen. Plaats vervolgens een eerste stek om het caudale uiteinde van de cranale arteriotomie aan het caudale uiteinde van het adersegment te binden.
Plaats vervolgens een tweede stek 180 graden vanaf de eerste stek om de cranale rand van de cranale arteriotomie aan het caudale uiteinde van het adersegment te binden. Voltooi de anastomose zoals eerder in de video werd aangetoond. Laat de cranale klem tijdelijk los om de adergraft te laten vullen met bloed en oefen zachte druk uit met droge gaasjes om elk bloeden te stoppen.
Herhaal deze stap totdat de anastomose niet meer bloedt. Verwijder vervolgens zowel de cranale als caudale klemmen. Gebruik gaas om eventueel aanvullend bloeden bij de anastomosen te stoppen.
Gebruik een 3-0 zijdedraad om beide uiteinden van het segment van de gewone halsslagader tussen de anastomosen te binden. Verdeel vervolgens de halsslagader halverwege tussen de ligaturen. Er moeten krachtige pulsaties te zien zijn in de adergraft.
Herhaal de plaatsing van de adergraft aan de linkerzijde. Met een 5-0 PGA naald sluit u het onderhuidse weefsel met een continu patroon. Gebruik vervolgens een 3-0 PGA naald om de huid met een intradermale naald te sluiten en begraaf de knopen aan beide uiteinden.
Voer de postoperatieve zorg en transcutane echografie uit volgens het tekstprotocol. Om een genoverdrachtsoperatie uit te voeren, isoleert u voorzichtig de rechter adergraft inclusief 1,5 tot twee centimeter van de halsslagader naast de graft aan zowel de cranale als caudale zijde. Herhaal de dissectie aan de linkerkant op dezelfde manier.
Gebruik zoutoplossing om de chirurgische wondholte aan de rechterkant te vullen om de overdracht van geluidsgolven mogelijk te maken. Verbind een perivasculare stroommeter van twee millimeter met een volumestroommeter en dompel de sonde in de zoutoplossing in de wondholte. Stel de stroomsnelheid op nul.
Plaats de stroomsonde rond de halsslagader caudaal of cranaaal van de adergraft. Ge
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Deze methode beschrijft het plaatsen van interpositie-adertransplantaten bij konijnen, waardoor onderzoek naar transgene expressie en de fysiologische rollen daarvan mogelijk wordt. Het biedt een platform voor het testen van gentherapieën gericht op adertransplantatieziekten.
Duurzame transgene expressie in interpositiegrafts van de rabbit jugular vein naar de carotid artery maakt een grondige investigate van genfunctie en therapeutische strategieën voor het falen van veneuze grafts mogelijk. Dit model ondersteunt het voorspellende vertrouwen bij targetvalidatie en mechanische risicoreductie voor kandidaten voor vasculaire gentherapie. De reproduceerbaarheid en schaalbaarheid maken het tot een waardevol middel voor vroege ontdekking en translationeel onderzoek binnen portefeuilles voor de ontwikkeling van cardiovasculaire geneesmiddelen.
Dit konijnenmodel slaat de brug tussen vroege ontdekking en preklinische validatie voor vasculaire gentherapie, ter ondersteuning van hypothesetoetsing, targetvalidatie en mechanistische studies voorafgaand aan de identificatie van lead-kandidaten.