Name: Een muismodel van Syngeneic Pancreatic kanker te bestuderen van de gevolgen van onomkeerbaar Electroporation (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Leer hoe onomkeerbare elektroporatie (IRE) alvleesklierkanker behandelt in een syngene muismodel. Deze methode onderzoekt het effect op de lokale tumor-micro-omgeving en het immuunsysteem.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

RRW heeft steun gekregen voor dit werk een collaboratieve translationeel onderzoek verlenen, gefinancierd door de San Diego C3 Padres pedaal de oorzaak (#PTC2017).

Alle dierproeven uitgevoerd na die dit protocol moet worden goedgekeurd door het respectieve institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC). Alle procedures die hier worden beschreven zijn goedgekeurd door IACUC UCSD.
1. aanschaffen van geadresseerden dieren
Opmerking: De KPC-Luc 4580 cellijn werd opgericht uit een tumor die zich voordoen in een LSL-KrasG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSL-ROSA26 Luc / + muis (KPC), die een genetisch gemanipuleerde model van PC op een achtergrond van C57BL/6 is. Het voordeel van deze cel regel is dat het constitutively spreekt luciferase-enabling tumor toezicht op orthotopic modellen. Andere cellijnen kunnen echter ook worden gebruikt, zolang zij verenigbaar met de genetische achtergrond van de ontvangende muizen zijn.
<ol><li>Vooraf bepalen van de experimentele groepen en het aantal dieren per groep.</li>
	<li>Kies de leeftijd (6 - 10 - weken oude muizen aanbevolen) en geslacht van de dieren wordt gebruikt volgens de hypothese en de cellijn gebruikt.</li>
</ol>2. cultuur cellen
<ol><li>Gebruik Dulbecco gewijzigd van eagle medium (DMEM): nutriënten mengsel F12 (50:50) media dat 10% foetale runderserum (FBS) en 1% penicilline-streptomycine antibioticum (volledige groei media) om te groeien van KPC-Luc 4580 cellen bevat.</li>
	<li>Indien bevroren, Ontdooi de cellen 4 dagen voorafgaand aan de implantatie van de tumor.</li>
	<li>Groeien de cellen bij 37 ° C met 5% CO2 en 95% vochtigheid onder aseptische condities.</li>
	<li>Trypsinize van de cellen met 0,25% trypsine gedurende 5 minuten bij 37 ° C voordat ze bereiken > 80% confluentie en neutraliseren van de trypsine door tweemaal de omvang van de volledige groei media toe te voegen. Opmerking: Deze cellen niet stel tumoren efficiënt in muizen als ze worden gebruikt bij 100% confluentie of als ze zijn gepasseerd voor meer dan 12 keer. Daarom is het aan te raden om de cellen bij eerdere passages onder optimale confluentie bevriezen.</li>
	<li>Met behulp van een hemocytometer cellen tellen en ga verder met tumor-inductie als adequate nummers aanwezig zijn (0.5 - 1 x 106 cellen/muis). Als dat niet het geval is, vouwt u de cellen voor één meer passage uit totdat voldoende cel nummers worden verkregen.</li>
</ol>3. de inductie van SQ tumoren
<ol><li>Voorbereiding van de benodigde materialen: P1000 en P100 pipetten en tips, 1 mL spuit, 25G naalden, kelder membraan matrix (BMM), DMEM basale media, 1.5-mL Centrifugeer buizen. Houd alle materialen, steriele en koud (4 ° C) tot het einde van de procedure. Ook houden Tondeuses en alcohol swabs dierlijke gebruiksklaar.</li>
	<li>Trypsinize (per stap 2.4) en de cellen tellen en resuspendeer hen bij een concentratie van 2-4 x 107 cellen/mL koude DMEM.</li>
	<li>Voeg een gelijk volume van 100% BMM te maken van een definitieve celsuspensie in 50% BMM. Het eindvolume moet bedragen 50 µL celsuspensie voor elke muis nodig. Bereiden van 10% in overmaat aan de dode ruimte in de spuit en voor eventuele pipetting fouten.</li>
	<li>Aliquot de schorsing in 550 µL volumes in 1,5 mL centrifuge buizen geplaatst in ijs.</li>
	<li>Beperken van de dieren (6 - weken oude mannelijke C57BL/6 muizen) met behulp van een afdekking of handmatig. Opmerking: U kunt ook muizen kunnen worden verdoofd met 2,5% Isofluraan in zuurstof gas bij een debiet van 2 L/min met behulp van een vaporizer precisie.</li>
	<li>Scheren van de plaats van injectie, die bij voorkeur op een flank boven een been, met behulp van een klipper. Met behulp van een alcohol doekje, reinig de plaats van injectie tweemaal.</li>
	<li>250 µL celsuspensie tekenen op een eindconcentratie van 1-2 x 107 cellen/mL in een koude spuit van 1 mL en eventuele luchtbellen te verwijderen door de zuiger op en neer te bewegen. Hechten van een 25G naald op de spuit en zorg ervoor dat de ruimte binnen de naald te vullen.</li>
	<li>Steek voorzichtig de naald onder de huid in een hoek van 30° naar het lichaam in de buurt van de flanken, ervoor te zorgen dat de naald niet de peritoneale holte of de spieren van de ledematen doorboren doet.</li>
	<li>De naald evenwijdig aan het lichaam plat en afvlakken van rimpels op de huid. Langzaam injecteren 50 µL celsuspensie. Houd de naald op de plaats van injectie voor 10 s tot het toestaan van de BMM te stollen ter voorkoming van lekkages.</li>
	<li>Langzaam trekt de naald parallel zonder een zijwaartse beweging te houden. Zachtjes de plaats van injectie met een alcohol doekje schoon en laat de muisknop los om de behuizing. Opmerking: Als de muis was verdoofd tijdens de procedure, volgen het dier totdat het herwint zijn restarmen reflexen.</li>
	<li>Toezicht op de groei van de tumor die regelmatig met remklauwen totdat zij 5 mm in diameter tot.</li>
</ol>4. de inductie van Orthotopic tumoren
<ol><li>Voorbereiding van de benodigde materialen. Autoclaaf de chirurgische hulpmiddelen zoals scharen, scalpels, naald chauffeurs, en wees en flat-tipped pincet. Houd handig steriele hechtingen (absorbeerbare 6-0 en niet-absorbeerbare 4-0), alcohol swabs, tondeuses, ontharende room, oog smeermiddel, katoenen gaas, 10% Povidon jodiumoplossing, afdeklakens, verwarmingskussens, buprenorfine, en verdoving agenten.</li>
	<li>Euthanaseren van een donor-muis (bij voorkeur van de zelfde achtergrond nodig voor het orthotopic-model) dragen een tumor van de SQ KPC met behulp van een langzame vulling CO2 -kamer. Accijnzen de SQ tumor zorgvuldig onder steriele omstandigheden in een BSL-2 kap met steriel pincet en microscissors kort voor orthotopic implantatie. Tijdens de tumor excisie oppassen niet doorprikken de peritoneale Holte en wassen van de tumor onmiddellijk met 2 uitwisseling van steriele PBS.</li>
	<li>Met behulp van steriele scalpels, mince de verwijderde tumor in 1 mm3 stukjes, leg ze op een petrischaal met koude steriele DMEM basale media en bewaren in de ijskast tot implantatie.</li>
	<li>Beheren van de ontvangende muis 0,05 - 1 mg/kg buprenorfine pijnstiller SQ, 30 min. vóór de ingreep.</li>
	<li>Anesthetize de geadresseerden muizen met 2-3% Isofluraan in zuurstof (2 L/min) met behulp van een vaporizer precisie (of andere verdoving agenten). Muizen op een 37 ° C houden en verwarming pad voor het geheel van de procedure. Toepassing smeermiddel op de ogen ter voorkoming van uitdroging. Testen van de diepte van de verdoving door gebrek aan verrassende reflex in eerste instantie, en bevestig chirurgische vliegtuig verdoving door het ontbreken van pedaal reflex naar een snuifje zachte teen. De narcose handhaven gedurende de gehele chirurgische procedure.</li>
	<li>Plaatst u de muisaanwijzer op zijn rug en zet hem voorzichtig aan de rechterkant zodat de linkerkant van de buik is blootgesteld. Verwijder het buikhaar van de muis met behulp van ontharende room en reinig met gaas om ervoor te zorgen dat geen gratis haar treedt de buik post incisie. De linker buik voorbereiden op operatie met behulp van 3 cycli van 10% Povidon jodium gevolgd door alcohol doekjes desinfecteren van de huid.</li>
	<li>Met een steriel scalpel, maken een 1,5 cm dwars- of schuine snede in de huid, 1 cm aan de linkerkant van de middellijn, onder de ribbenkast, iets mediaal aan de milt. Vervolgens de incisie door de abdominale spieren, spiegeling van de bovenliggende oppervlakkige incisie uitbreiden</li>
	<li>Zoek de milt met platte getipt pincet en voorzichtig het belichamen van de buikholte. Intrekken van de milt met behulp van een steriele katoen-applicator, en vinden de staart van de pancreas gekoppeld aan de onderkant van de milt.</li>
	<li>Met behulp van flat-tipped pincet, trekken de staart van de pancreas lateraal.</li>
	<li>Een fijn gehakt tumor stuk Pick-up van de muis van de donor met het puntje van een boete (6-0) steriele hechten naald en plaats met behulp van steriele pincet.</li>
	<li>Terwijl zachtjes keuzemenu de staart/body van de alvleesklier lateraal, plaatst u de naald van de hechtdraad met tumor fragment in de staart van de pancreas. Het doorgeven van de hechtdraad langzaam door het weefsel, houden van de tumor in contact met de alvleesklier staart. Toepassing van één of twee extra hechtingen afhankelijk van het fragment van oriëntatie ten opzichte van het weefsel.</li>
	<li>Verwijder de naald volledig uit het weefsel en houd de alvleesklier/milt externalized voor een extra 60 s terwijl het inspecteren op eventuele tekenen van bloeding of lekkage. Vervolgens internaliseren hen zachtjes in de buikholte met behulp van botte pincet.</li>
	<li>Sluit de abdominale spieren met behulp van een 6-0 absorbeerbare hechtdraad met ofwel een doorlopend of onderbroken steek, en sluit de bovenliggende huid met behulp van een 3-0 en 6-0 niet-absorbeerbare onderbroken hechtdraad. Op dit punt te stoppen met de narcose.</li>
	<li>Laat de muis om te herstellen in zijn kooi met gratis toegang tot voedsel en water. Plaats de kooi op een verwarming pad om terugwinning te vergemakkelijken. Het bewaken van vitale functies zoals ademhaling, perfusie, etc., tijdens het herstelproces.</li>
	<li>Bevestig de tekenen van de wetswijziging van reflex, zodra de muis herstelt, en vervolgens terug de kooi kan tot reguliere huisvesting.</li>
	<li>Beheren van buprenorfine 0.05 - 0.1 mg/kg 8-12 h na de operatie, en elke 8-12 h na de procedure zo nodig voor tekenen van pijn.</li>
	<li>Controleren van de tumorgroei met behulp van een in vivo bioluminescentie imaging systeem (Zie de Tabel van de materialen).<ol>
<li>Volg tumorgroei door imaging beginnen op dag 4 na orthotopic implantatie en imaging tweemaal per week uit te voeren.</li>
		<li>Op de dag voor imaging, beheren (intraperitoneale injectie) 30 mg/kg D-luciferine tot een narcose (2-3% Isofluraan in zuurstof (2 L/min)) ontvangende muis 10 min voorafgaand aan de beeldvorming.</li>
		<li>Afbeelding voor luciferase activiteit met de luminescentie instelling zonder geen emissie filters voor een minimum van 5 s blootstelling in een luminescentie imager met auto-fluorescentie gratis verwarmd fase en terwijl nog het handhaven van de verdoving voor de muizen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. IRE van SQ tumoren
<ol><li>Voorbereiding van de benodigde materialen: vierkant Golf electroporator, veiligheid voetschakelaar, elektroden (naald array versus pincetten-trode) en adapters. Steriele hechtingen (niet-absorbeerbare 4-0), alcohol swabs tondeuses, ontharende room, oog smeermiddel, katoenen gaas, buprenorfine en verdoving houden ook in de buurt.</li>
	<li>Steriliseer de pincet of naald matrix elektroden met behulp van gas sterilisatie. Autoclaaf wordt niet aanbevolen. Met een glazen kraal sterilisator kunt steriliseren van de elektroden tussen dieren.</li>
	<li>Beheren van buprenorfine 0.05 - 0.1 mg/Kg tot de tumor-dragende muizen 30 min. vóór de ingreep.</li>
	<li>Volg stappen 4.4-4.5 voor met succes het induceren van verdoving in muizen zodra het implantaat SQ tumor 5 mm doorsnede tot.</li>
	<li>Plaats de narcose muis op zijn kant tot de SQ tumor op de flank. Verwijder de haren met behulp van de tondeuse en schone huid met behulp van een alcohol doekje.</li>
	<li>Gebruik 2-naald matrix elektroden voor SQ tumoren. De huid direct onder de tumor-site met behulp van de verlostang verheffen en voeg de elektroden via de huid die evenwijdig aan het lichaam ervoor te zorgen dat ze doen niet doordringen tot de peritoneale holte. Eenmaal via de huid, positie van de elektroden op zodanige wijze dat ze de tumor beugel.</li>
	<li>Het programma van de electroporator te leveren 100 µs pulsen met een frequentie van 1 Hz bij 1.500 V/cm voor een totaal van 150 pulsen. Leveren de pulsen met behulp van het voetpedaal. Elke set van 10 pulsen scheiden door 10 s, om te zorgen voor warmteafvoer en bevestigen van de juiste positie van de elektroden. Opmerking: Zonder het gebruik van PARALYTISCHE (kinderverlamming) agenten, de muizen beleeft spiercontracties met IRE die leiden tot verplaatsing van de elektroden, kunnen tenzij handmatig beveiligd zijn.</li>
	<li>Verwijder de elektroden na volledige dosering, die mag niet groter zijn dan 200 s. Record de werkelijke spanning geleverd, die wordt weergegeven op de electroporator. Laat de muizen te herstellen na IRE per stappen 4.14-4.16.</li>
</ol>6. IRE van Orthotopic tumoren
Opmerking: IRE van orthotopic tumoren impliceert een tweede operatie van het overleven op de dezelfde muis dus het vereisen van speciale goedkeuring van lokale IACUC vóór begin.
<ol><li>Voorbereiden van benodigde materialen: autoclaaf de chirurgische hulpmiddelen zoals schaar, scalpels, chauffeurs van de naald, pincet wees, en plat getipt pincet. Houd het volgende in de buurt zo goed: steriele hechtingen (absorbeerbare 6-0 en niet-absorbeerbare 4-0) alcohol swabs, tondeuses, ontharende room, oog smeermiddel, katoenen gaas, 10% Povidon jodiumoplossing, afdeklakens, verwarmingskussens, blokgolf electroporator, veiligheid voetschakelaar, elektroden en hun adapters buprenorfine en anesthetica.</li>
	<li>Beoordelen van de muizen voor orthotopic tumorgroei door in vivo imaging (zie stap 4.17) door het injecteren van 30 mg/kg D-luciferine intraperitoneally. Opmerking: De orthotopic tumoren zijn ideaal voor IRE behandeling 8 tot 10 dagen post implantatie wanneer de tumoren zijn duidelijk zichtbaar en nog steeds beperkt tot de alvleesklier zoals kan worden gezien op de Luciferase luminescentie beelden (Zie de Vertegenwoordiger resultaten).</li>
	<li>Volg stappen 4.4-4.9, voor het zoeken van de geïmplanteerde tumor. Als de tumor niet gemakkelijk is te vinden, gebruikt u blunt-nosed tang te verplaatsen van de maag en de milt zachtjes te identificeren van de tumor.</li>
	<li>Belichamen van de tumor met een botte nosed tang en vastleggen van de tumor strak met de platina-elektroden voor de pincetten-trode. Leveren de electroporation pulsen zoals geprogrammeerd in stap 5.7 met behulp van de blokgolf-electroporator in sets van 10 pulsen gecontroleerd door de voetschakelaar.</li>
	<li>Houd de tumor externalized voor ten minste 60 s post IRE om te controleren op tekenen van bloeding. Plaats van de tumor terug in de buikholte en sluit de insnijding als beschreven eerdere (stappen 4.13-4.16) en volgen van de muis totdat het herstelt.</li>
	<li>Monitoren van de effecten van IRE op tumorgroei met behulp van in vivo imaging-luciferase per stap 4.17.</li>
</ol>

<ol><li>Rahib, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Projecting+cancer+incidence+and+deaths+to+2030%3A+the+unexpected+burden+of+thyroid%2C+liver%2C+and+pancreas+cancers+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Projecting cancer incidence and deaths to 2030: the unexpected burden of thyroid, liver, and pancreas cancers in the United States.</a> Cancer Res. 74 (11), 2913-2921 (2014).</li>
<li>Howlader, N., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHowlader%2C+N+%22SEER+Cancer+Statistic+Review%2C+1975-2013%22">SEER Cancer Statistic Review, 1975-2013</a>. , 
 <a target="_blank" href="http://seer.cancer.gov/csr/1975_2013/">http://seer.cancer.gov/csr/1975_2013/</a> (1975).</li>
<li>Clark, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+the+immune+reaction+to+pancreatic+cancer+from+inception+to+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Dynamics of the immune reaction to pancreatic cancer from inception to invasion.</a> Cancer Res. 67 (19), 9518-9527 (2007).</li>
<li>Lee, E. W., Loh, C. T., Kee, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+guided+percutaneous+irreversible+electroporation%3A+ultrasound+and+immunohistological+correlation%5BTitle%5D)+AND+%22Technol+Cancer+Res+Treat%22%5BJournal%5D)">Imaging guided percutaneous irreversible electroporation: ultrasound and immunohistological correlation.</a> Technol Cancer Res Treat. 6 (4), 287-294 (2007).</li>
<li>Charpentier, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Irreversible+electroporation+for+the+ablation+of+liver+tumors%3A+are+we+there+yet%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Irreversible electroporation for the ablation of liver tumors: are we there yet?</a> Arch Surg. 147 (11), 1053-1061 (2012).</li>
<li>Narayanan, G. <a target="_blank" href="https://www.thieme-connect.com/products/ejournals/abstract/10.1055/s-0035-1564706">Irreversible Electroporation.</a> Seminars in Interventional Radiology. 32 (4), 349-355 (2015).</li>
<li>Martin, R. C. 2nd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+200+locally+advanced+%28stage+III%29+pancreatic+adenocarcinoma+patients+with+irreversible+electroporation%3A+safety+and+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Treatment of 200 locally advanced (stage III) pancreatic adenocarcinoma patients with irreversible electroporation: safety and efficacy.</a> Ann Surg. 262 (3), 486-494 (2015).</li>
<li>Belfiore, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Percutaneous+CT-guided+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+as+a+novel+neoadjuvant+protocol+in+locally+advanced+pancreatic+cancer%3A+Our+preliminary+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Percutaneous CT-guided irreversible electroporation followed by chemotherapy as a novel neoadjuvant protocol in locally advanced pancreatic cancer: Our preliminary experience.</a> Int J Surg. 21 Suppl 1, S34-S39 (2015).</li>
<li>Belfiore, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concurrent+chemotherapy+alone+versus+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+on+survival+in+patients+with+locally+advanced+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Oncol%22%5BJournal%5D)">Concurrent chemotherapy alone versus irreversible electroporation followed by chemotherapy on survival in patients with locally advanced pancreatic cancer.</a> Med Oncol. 34 (3), 38(2017).</li>
<li>Chu, K. F., Dupuy, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+ablation+of+tumours%3A+biological+mechanisms+and+advances+in+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Thermal ablation of tumours: biological mechanisms and advances in therapy.</a> Nat Rev Cancer. 14 (3), 199-208 (2014).</li>
<li>Wissniowski, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+tumor-specific+T+lymphocytes+by+radio-frequency+ablation+of+the+VX2+hepatoma+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Activation of tumor-specific T lymphocytes by radio-frequency ablation of the VX2 hepatoma in rabbits.</a> Cancer Res. 63 (19), 6496-6500 (2003).</li>
<li>Eros de Bethlenfalva-Hora, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiofrequency+ablation+suppresses+distant+tumour+growth+in+a+novel+rat+model+of+multifocal+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sci+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Radiofrequency ablation suppresses distant tumour growth in a novel rat model of multifocal hepatocellular carcinoma.</a> Clin Sci (Lond). 126 (3), 243-252 (2014).</li>
<li>Zerbini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiofrequency+thermal+ablation+for+hepatocellular+carcinoma+stimulates+autologous+NK-cell+response%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Radiofrequency thermal ablation for hepatocellular carcinoma stimulates autologous NK-cell response.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1931-1942 (2010).</li>
<li>Ali, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+dendritic+cells+by+local+ablation+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Activation of dendritic cells by local ablation of hepatocellular carcinoma.</a> J Hepatol. 43 (5), 817-822 (2005).</li>
<li>Fietta, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+inflammatory+response+and+downmodulation+of+peripheral+CD25%2BFoxp3%2B+T-regulatory+cells+in+patients+undergoing+radiofrequency+thermal+ablation+for+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Immunol%22%5BJournal%5D)">Systemic inflammatory response and downmodulation of peripheral CD25+Foxp3+ T-regulatory cells in patients undergoing radiofrequency thermal ablation for lung cancer.</a> Hum Immunol. 70 (7), 477-486 (2009).</li>
<li>Jiang, C., Davalos, R. V., Bischof, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+basic+to+clinical+studies+of+irreversible+electroporation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">A review of basic to clinical studies of irreversible electroporation therapy.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 62 (1), 4-20 (2015).</li>
<li>Neal, R. E. 2nd, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+local+and+systemic+anti-tumor+efficacy+for+irreversible+electroporation+in+immunocompetent+versus+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Improved local and systemic anti-tumor efficacy for irreversible electroporation in immunocompetent versus immunodeficient mice.</a> PLoS One. 8 (5), e64559(2013).</li>
<li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li>
<li>Safran, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+reporter+strain+for+noninvasive+bioluminescent+imaging+of+cells+that+have+undergone+Cre-mediated+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Mouse reporter strain for noninvasive bioluminescent imaging of cells that have undergone Cre-mediated recombination.</a> Mol Imaging. 2 (4), 297-302 (2003).</li>
<li>Martin, R. C. 2nd, McFarland, K., Ellis, S., Velanovich, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Irreversible+electroporation+in+locally+advanced+pancreatic+cancer%3A+potential+improved+overall+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Irreversible electroporation in locally advanced pancreatic cancer: potential improved overall survival.</a> Ann Surg Oncol. 20 Suppl 3, S443-S449 (2013).</li>
<li>Neal, R. E., Garcia, P. A., Robertson, J. L., Davalos, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+Characterization+and+Numerical+Modeling+of+Tissue+Electrical+Conductivity+during+Pulsed+Electric+Fields+for+Irreversible+Electroporation+Treatment+Planning%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Transactions+on+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Experimental Characterization and Numerical Modeling of Tissue Electrical Conductivity during Pulsed Electric Fields for Irreversible Electroporation Treatment Planning.</a> IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 59 (4), 1076-1085 (2012).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen relevante financiële informatie.

In deze studie hebben we een immunocompetent muismodel aangetoond voor PC die kan worden gebruikt voor het bestuderen van de effecten van IRE op de tumorgroei. IRE wordt momenteel gebruikt als een niet-thermische ablatie techniek alleen in zeer geselecteerde lokaal gevorderde PC-patiënten die niet over de progressie van de verre ziekte na maanden van preoperatieve therapie beschikken. Het gebruik ervan is derhalve beperkt omdat de meeste patiënten met lokaal gevorderde PC ontwikkelen verre gemetastaseerde ziekte<sup clas...

Alvleesklier ductaal adenocarcinoom (PC) naar verwachting de tweede belangrijke doodsoorzaak kanker in de VS rond 20201geworden. De overgrote meerderheid van de patiënten gediagnosticeerd met PC zal uiteindelijk sterven van verre gemetastaseerde ziekte2. De PC-communicatie is notoir immunosuppressieve en chemoresistant. Haar desmoplastic stroma bevat een schaarste van effector (anti-tumor) T-cellen en een prominentie van immunosuppressieve leukocyten, met inbegrip van tumor-geassocieerde macrofagen (TAMs), myeloïde afgeleide suppressor cellen (MDSCs) en regelgevende T cellen (Tregs)3 . Deze liggen ten grondslag aan de noodzaak te ontwikkelen van multimodale strategieën die deze van de communicatie gevolgen.
IRE is ontwikkeld als een niet-thermische methode van tumor ablatie. In tegenstelling tot thermische ablatie technieken, IRE veroorzaakt geen snelle coagulative necrose, maar in plaats daarvan leidt tot geleidelijke apoptotic cellen dood4. Vooral voor alvleesklier tumoren, IRE is niet kwetsbaar voor "heat sink" effecten en vlakbij bloedvaten5kan worden uitgevoerd. Deze technologie heeft 510(k) clearance van de FDA-6 en klinisch, momenteel voor geselecteerde patiënten met lokaal gevorderde of borderline resectable pancreatic kanker wordt gebruikt. Ongeveer in de grootste gepubliceerde reeks van IRE voor PC7was de mediane overleving van patiënten die een IRE dubbele de overleving van patiënten behandeld met moderne chemotherapie alleen zonder resectie8,9.
Verschillende studies hebben aangetoond dat thermische ablatie induceert een systemische immuunrespons bij andere typen van de tumor (herzien in Chu et al. 10). RadioFrequente ablatie (RFA) in dierlijke tumor modellen leidt tot een verhoogde T cel infiltreert11,12, waaronder een verhoging in geactiveerde natural killer (NK) cellen van hepatocellulaire kanker patiënten13, 14, en een afname van de immunosuppressieve Tregs in long kanker patiënten15. Een veel kleiner aantal studies hebben onderzocht immuun, microenvironmental, en schade reacties op IRE16. IRE is aangetoond dat het stimuleren van een systemische immuunrespons bij immunocompetent Muismodellen waarin de groei van secundaire (contralaterale) renaal cel allografts was verminderd of voorkomen door het IRE van een primaire tumor twee weken eerder17. Zij ook opgemerkt dat immunocompetent muizen minder spanning voor volledige regressie vereist dan deed immuungecompromitteerde muizen. Het heeft zijn veronderstelde dat IRE in betere antigeen presentatie in vergelijking met de coagulative necrose van thermische ablatie resulteren kan, maar dit is niet specifiek bestudeerd.
Hebben we een syngeneic muismodel van PC van de KPC-Luc 4580 cellijn (geschenk van J.J. Yeh aan de Universiteit van North Carolina), die was afgeleid van een tumor die ontwikkeld in een mannelijke LSL-KrasG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSL-ROSA26 Luc / + muis, de lokale en systemische effecten van IRE18,19te bestuderen. Deze cellijn luciferase-uiten is immunogeen en ook tumorigene in immunocompetent C57BL/6 muizen wanneer geïnjecteerd SQ of orthotopically en betrouwbaar lever metastasen produceert wanneer geïnjecteerd in de milt. We hebben gebruikt een programmeerbare blokgolf-puls generator om te leveren 100-µs pulsen van elektriciteit op een spanning/afstand ratio van 1.500 V/cm met behulp van een twee-naald matrix sonde (gescheiden door 5 mm) of platina pincetten-trodes aan SQ of orthotopic tumors, respectievelijk, in muizen voor het model van de gevolgen van IRE in een klein dier.

<table><tbody><tr><td>ECM 830 square wave electroporator</td><td>Harvard Apparatus</td><td>BTX # 45-0002 ( 58018-004 )</td><td></td></tr><tr><td>2 needle array electrode</td><td>Harvard Apparatus</td><td>45-0167</td><td></td></tr><tr><td>Safety foot switch</td><td>Harvard Apparatus</td><td>45-0211</td><td></td></tr><tr><td>Platinum Tweezer-trode</td><td>Harvard Apparatus</td><td>&nbsp;45-0486</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12 media</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11320-033</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning&nbsp;</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>792632</td><td></td></tr><tr><td>Lacrilube</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>19090646</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>NC1292810</td><td></td></tr><tr><td>D-luciferrin</td><td>Perkin Elmer</td><td>122799</td><td></td></tr><tr><td>IVIS&nbsp; Spectrum In Vivo Imaging System</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>Mouse strain C57BL/6J</td><td>The Jackson Laboratory&nbsp;</td><td>000664/Black 6</td><td></td></tr><tr><td>Cell line (KPC-Luc 4580)</td><td>J.J. Yeh Lab at University of North Carolina</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Precisionglide syringe needles</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>Z192406</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol Swab(70% isopropyl alcohol )</td><td>BD</td><td>326895</td><td></td></tr><tr><td>Digital calipers</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-648-17</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Scalpels, Sterile</td><td>VWR</td><td>21909</td><td></td></tr><tr><td>Cotton Tipped Applicators</td><td>VWR</td><td>89198</td><td></td></tr><tr><td>Suture Needle, 45 cm, Size 6-0</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-3308</td><td></td></tr><tr><td>Suture Needle, 45 cm, Size 4-0</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-3314</td><td></td></tr><tr><td>Povidone-iodine 10%</td><td>BD</td><td>29900-404</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Warming Pad&nbsp;</td><td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td><td>TP-3E</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Hair Clipper</td><td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td><td>CL8787</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Drape</td><td>Harvard Apparatus</td><td>59-7421</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-buffered Saline</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr></tbody></table>

een muismodel van syngeneic pancreatic kanker te bestuderen van de gevolgen van onomkeerbaar electroporation

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Alvleesklierkanker (PC), een ziekte die ongeveer 40.000 patiënten elk jaar in de VS doodt, heeft met succes verschillende therapeutische benaderingen, met inbegrip van de veelbelovende immunotherapeutische strategieën vermeden. Onomkeerbare electroporation (IRE) is een niet-thermische ablatie techniek die tumor celdood zonder vernietiging van aangrenzende collagene structuren induceert, waardoor de procedure die moet worden uitgevoerd in tumoren zeer dicht bij de bloedvaten. In tegenstelling tot thermische ablatie technieken, IRE leidt tot geleidelijke apoptotic celdood, samen met onmiddellijke ablatie geïnduceerde necrose, en is momenteel in klinische gebruik voor geselecteerde patiënten met lokaal gevorderde PC. Een ablative, de specifieke procedure van de niet-doelsoorten zoals IRE kan leiden tot een groot aantal reacties in de communicatie van de tumor. Een paar studies de effecten van IRE op tumorgroei in andersoortige tumor hebben aangepakt, maar geen hebben gericht op de PC. Wij hebben een syngeneic muismodel van PC waarin subcutaan (SQ) en orthotopic tumoren kunnen succesvol worden behandeld met IRE in een sterk gecontroleerde omgeving, vergemakkelijken van verschillende longitudinaal onderzoek post procedure ontwikkeld. Deze diermodel fungeert als een robuust systeem te bestuderen van de effecten van IRE en manieren ter verbetering van de klinische werkzaamheid van IRE.

We volgde de procedure hierboven beschreven en SQ tumoren gegenereerd op 5-6 week oude wild type C57BL/6 muizen met 1 x 106 cellen met 50 geënt % BMM. Wanneer de grootte van de tumor bereikt 5-6 mm diameter, een paar van de muizen waren euthanized, hun tumoren waren weggesneden, en orthotopically in een ontvangende C57BL/6 muizen geïmplanteerd. IRE was uitgevoerd 10 dagen post implantatie zoals weergegeven in de tijdlijn op Figuur 1. IRE werd uitge...

Onomkeerbare electroporation (IRE) is een niet-thermische ablatie techniek die wordt gebruikt voor de behandeling van lokaal Geavanceerd alvleesklierkanker. Een relatief nieuwe techniek zijn, de effecten van IRE op de tumorgroei slecht begrepen. We hebben een syngeneic muismodel ontwikkeld dat vergemakkelijkt bestudeert de effecten van IRE op alvleesklierkanker.

Een muismodel van Syngeneic Pancreatic kanker te bestuderen van de gevolgen van onomkeerbaar Electroporation

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

Het algemene doel van dit model is om de effecten van irreversibele elektroporatie of IRE, op alvleesklierkanker bij immuunkompetente muizen te bestuderen. Dit model kan helpen bij het beantwoorden van veel belangrijke vragen over de rol van IRE bij alvleesklierkanker. Zoals, hoe beïnvloedt IRE het lokale tumormicro-omgeving?Het belangrijkste voordeel van dit model is dat het een nauwkeurige beoordeling van tumorgroei mogelijk maakt in een immuunkompetente omgeving, zonder dat er knock-out of mutante muismodellen nodig zijn. Deze methode kan inzicht geven in de effecten van IRE op het immuunsysteem, in een immuunkompetente muismodel van alvleesklierkanker. Voor subcutane tumorinductie, scheer eerst de injectieplaats op een geanestheseerde zes weken oude, mannelijke, C57 zwarte zes muis en gebruik twee keer een alcoholdoek om de plaats te reinigen.Laad vervolgens een koude een-milliliter spuit met een tot twee keer tien tot zeven cellen per milliliter en 250 microliters basement membraan matrix. Bevestig een 25-gauge naald aan de spuit en laad de naald met de tumorcel suspensie. Druk en trek de zuiger een paar keer in om eventuele luchtbellen te verwijderen.Breng de naald voorzichti

a-syngeneic-pancreatic-cancer-mouse-model-to-study-effects

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

The video explains a stepwise surgical method for orthotopic implantation of a tumor fragment from a cancerous donor to the pancreas of a non-cancerous recipient mice for development of pancreatic cancer. Orthotopically implanted PDAC could recapture the tissue microenvironment of human pancreatic cancers than conventional subcutaneous (SC) models more accurately.

Orthotopic Homograft Tumor Transplantation: A Technique to Generate Pancreatic Tumor Mouse Models

This video describes the procedure for performing irreversible electroporation (IRE) for non-thermal ablation of pancreatic tumors in mice. Both subcutaneous (SQ) and orthotopic tumors can be successfully treated with IRE in a highly controlled setting, facilitating various studies post-procedure.

Irreversible Electroporation: A Technique for Ablating Pancreatic Tumor in Mouse

This video demonstrates the protocol for implanting green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells orthotopically into the pancreas of the mouse. The orthotopic mouse model helps in investigating the efficacy of novel therapeutics on primary and metastatic tumors.

Fluorescent Orthotopic Mouse Model: Implanting GFP Expressing Cancer Cells into Mouse for Assessing Tumor Progression In Vivo

This video demonstrates an orthotopic model of pancreatic cancer that utilizes Matrigel for localized cell delivery and in vivo bioluminescence imaging for non-invasive monitoring of tumor progression. The orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and could be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Bioluminescent Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model: A Non-invasive Technique to Monitor Cancer Progression in Mice

Een preklinische, muizenmodel van levermetastasen uitgevoerd via een hemispleen injectietechniek.

Een preklinisch muizenmodel van levermetastasen

Het doel van dit protocol is om dynamisch contrastversterkte magnetische resonantie beeldvorming (DCE-MRI) toe te passen voor ortotopische pancreatische tumor xenografts bij muizen. DCE-MRI is een niet-invasieve methode om de microvaten in een doelweefsel te analyseren en is nuttig om de vasculaire respons in een tumor na een nieuwe therapie te beoordelen.

Dynamisch contrast versterkte MRI van een orthotope pancreaskanker Muis Model

Een procedure om groen fluorescerende eiwit-expresserende pancreaskankercellen (PANC-1 GFP) orthotopisch in de pancreas van Balb-c Ola Hsd-Fox1nu muizen te implanteren om tumorprogressie en metastase te beoordelen, wordt hier gepresenteerd.

Fluorescerende orthotope Muis Model van pancreaskanker

We beschrijven een protocol voor de echografie geleide implantatie van Murine-afgeleide alvleesklier ductaal adenocarcinoom cellijnen rechtstreeks in de inheemse tumor site. Deze aanpak resulteerde in alvleesklier tumoren detecteerbaar door echografie scannen binnen 2-4 weken van injectie, en aanzienlijk verminderd de proportie tumor cel zaaien op de peritoneale muur in vergelijking met chirurgische orthotopic implantatie.

Echografie-geleide Orthotopic implantatie van Murine pancreatic Ductal adenocarcinoom

In de klinische context zullen patiënten met gelokaliseerde alvleesklierkanker pancreatectomie ondergaan, gevolgd door adjuvante behandeling. Dit hier gerapporteerde protocol is bedoeld om een veilige en effectieve methode vast te stellen om dit klinische scenario bij naakte muizen te modelleren, door orthotopische implantatie van alvleesklierkanker gevolgd door distale pancreatectomie en splenectomie.

Een orthotopisch resectiemuismodel van alvleesklierkanker

Syngenetische muis orthotopische allografts van pancreas ductaal adenocarcinoom (PDAC) recapituleren de biologie, fenotypen en therapeutische reacties van ziektesubtypen. Vanwege hun snelle, reproduceerbare tumorprogressie worden ze veel gebruikt in preklinische studies. Hier tonen we gemeenschappelijke praktijken om deze modellen te genereren, waarbij syngenetische murine PDAC-culturen in de alvleesklier worden geïnjecteerd.

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts om alvleesklierkanker te modelleren

Het huidige protocol beschrijft een nieuwe benadering voor het modelleren van chronische obstructieve pancreatitis, waarbij visualisatie van de pancreasbuis en elektrocoagulatie van de pancreasbuis betrokken zijn om obstructie van de pancreasbuis te veroorzaken.

Een obstructief chronisch pancreatitismodel tot stand gebracht door middel van elektrocoagulatie

Leer hoe onomkeerbare elektroporatie (IRE) alvleesklierkanker behandelt in een syngene muismodel. Deze methode onderzoekt het effect op de lokale tumor-micro-omgeving en het immuunsysteem.

Een muismodel van Syngeneic Pancreatic kanker te bestuderen van de gevolgen van onomkeerbaar Electroporation

Meer video's verkennen