Bemonsteringsstrategie en verwerking van Biobank weefselmonsters van varkens biomedische modellen

Deze video toont twee belangrijke technieken voor het bemonsteren en verwerken van varkensweefselspecimens uit biobanken. De onderdompeling-techniek schat betrouwbaar het totale orgaan- en weefselvolume en de oriëntatie-techniek genereert willekeurige isotrope weefselsecties voor een onbevooroordeelde schatting van kwantitatieve morfologische parameters. Het grote voordeel van de onderdompeling-techniek voor weefseldichtheidsbepaling is dat deze op elk type weefsel kan worden toegepast en dat deze betrouwbare resultaten oplevert voor zowel kleine als grote monsters.

De voordelen van de oriëntatie-techniek zijn dat deze zeer efficiënt is en ook werkt met grote weefselmonsters. Om de volumetrie voor een groot orgaan te beginnen, snijdt u een passend gedimensioneerd stuk weefsel uit het orgaan. Veeg het monster voorzichtig schoon met een papieren handdoek om overtollig bloed en weefselvocht te verwijderen.

Weeg vervolgens het monster op een nauwkeurige schaal en noteer het gewicht van het monster. Voeg 0,9%zoutoplossing toe aan een beker van geschikte grootte. Vul de beker niet helemaal om overstroming tijdens het weefselonderdompelen te voorkomen.

Plaats de beker op de weegschaal en dompel vervolgens een pincet of een zelfgebouwde monsterstandaard in de zoutoplossing tot de markering op het pincet of de monsterstandaard de vloeistof bereikt. Stel vervolgens de weergave van de weegschaal opnieuw in op nul. Bevestig het weefselmonster voorzichtig aan het pincet of de monsterstandaard en dompel het monster volledig onder in de zoutoplossing tot de gemarkeerde positie is bereikt.

Om betrouwbare dichtheidsmetingen te registreren is het belangrijk om ervoor te zorgen dat het monster volledig ondergedompeld is en om te voorkomen dat het ondergedompelde monster in contact komt met de binnenwanden of de bodem van de beker. Terwijl u het monster in positie houdt, noteert u het gewicht dat op de weegschaal wordt weergegeven. Gebruik deze meting en de dichtheid van zoutoplossing bij kamertemperatuur om het volume van het monster te berekenen.

Bereken vervolgens de dichtheid van het weefselmonster op basis van het gewicht van het monster en het volume. Voor grote organen en weefsels, zoals deze nier, voert u herhaalde metingen uit met meerdere monsters en berekent u de gemiddelde dichtheid uit de enkele metingen. Voor kleine monsters en kleine organen die in totaal worden gemeten, zoals de hypofyse, herhaalt u de meting drie keer voordat u de gemiddelde orgaandichtheid berekent uit de enkele meetwaarden.

Bereken tenslotte het totale volume van het orgaan, weefsel of orgaancompartiment op basis van het gewicht en de dichtheid. Plaats een vast weefselspecimen op een afdruk van een gelijkhoekige cirkel met één rand evenwijdig aan de nul tot 180 graden richting. Gebruik vervolgens een tabel met willekeurige getallen om een willekeurige hoek te bepalen.

Zoek de bijbehorende markeringen op de schaal van de gelijkhoekige cirkel. Gebruik deze markeringen om een doorsnede door het monster te snijden met de doorsnedevlak gericht parallel aan de richting van de willekeurige hoek die op de schaal van de gelijkhoekige cirkel is aangegeven en verticaal ten opzichte van het rustoppervlak van het monster. Plaats het weefselblok met het doorsneden oppervlak naar beneden op een cosinus gewogen cirkel.

Met de rand van het rustoppervlak evenwijdig aan de één-op-één richting. Snijd nu een nieuwe doorsnede door het monster op een willekeurige hoek die is bepaald met behulp van de tabel met willekeurige getallen. Het resulterende doorsnedevlak is een isotrope uniforme willekeurige doorsnede.

Deze tabel toont de representatieve dichtheden van verschillende varkensweefsels en organen die zijn bepaald met behulp van de onderdompeling-techniek. De meeste varkensweefsels vertonen dichtheidswaarden iets hoger dan één, wat verwijst naar de dichtheid van water. Terwijl weefsels die in zoutoplossing zwemmen, zoals bijvoorbeeld vetweefsel, dichtheden vertonen die lager zijn dan één.

Deze figuur toont vier representatieve IUR-secties van varkenslinkerventrikelmyocardium bereid met de oriëntatie-techniek. Let op de veranderde snijhoeken in de verschillende IUR-secties. Eenmaal onder de knie, kan de onderdompeling-techniek voor weefseldichtheidsbepaling in een paar minuten worden uitgevoerd.

Als het goed wordt uitgevoerd. Isotrope uniforme willekeurige weefselsecties gegenereerd met de oriëntatie-techniek zijn geschikt voor schatting van alle kwantitatieve morfologische parameters met behulp van geschikte stereologische analysemethoden. digitale muziek.