Gedeeltelijke lobulair Hepatectomy: Een chirurgische Model voor morfologische lever regeneratie

Het algemene doel van deze chirurgische procedure is het induceren van morfologische leverregeneratie via partiële lobulaire hepatectomie. Deze methode kan sleutelvragen beantwoorden op het gebied van stamcelbiologie en regeneratieve geneeskunde over morfologische leverregeneratie en leverspecifieke stamcellen. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het minimaal invasief is en geen chemische irritatie of cauterisatie vereist.

Voordat je de dieren aanraakt, wrijf de strooisel uit de kooi van de moeder op de handschoenen. Breng vervolgens alle pups en wat strooisel uit de moederkooi over in een lege kooi bovenop een verwarmingskussen. Plaats vervolgens een pup onder een dissectiemicroscoop.

Nadat je de juiste sedatieniveau hebt bevestigd door gebrek aan reactie op een teenprik, gebruik een klein gaasje om de achterste buikwand van het dier te desinfecteren met betadine. Gebruik micro-dissectie schaar en pincetten om een incisie van een halve centimeter in het midden van de linker clavicula te maken direct onder de ribbenkast. Gebruik de pincetten om de huid voorzichtig te scheiden.

Maak vervolgens een tweede diepere incisie in de buikholte en gebruik de achterkant van de stompe rand van de micro-dissectie schaar en pincetten om lichte laterale druk uit te oefenen op beide zijden van de buik, waardoor de top van de linker lob uit de buikholte wordt geduwd. Wanneer de linker top van de linker lob zichtbaar is, amputeer de geschikte experimentele hoeveelheid weefsel van de lob en plaats het weefsel in een buis van 1,5 milliliter PBS op ijs. Gebruik een opgerold stuk gaas om de linker lob voorzichtig terug te brengen in de buikholte.

Verwijder het gaas wanneer het bloeden stopt en bevochtig de chirurgische plaats en de omliggende gebied met gaas gedrenkt in PBS. Sluit de chirurgische plaats met hechtingen en een doorlopende steek. Rol vervolgens voorzichtig maar grondig een met PBS doordrenkt gaas over de pup en de wondplaats om ervoor te zorgen dat er geen bloed of betadine achterblijft.

Laat de pup herstellen in de buurt van gaasjes die zijn blootgesteld aan de uitwerpselen en urine van de moeder. Wanneer alle pups zijn gehepatectomeerd, breng alle dieren en strooisel terug naar de kooi van de moeder. Na het wegen van de lobben, fixeer weefselmonsters in 2% paraformaldehyde gedurende één uur op kamertemperatuur.

Aan het einde van de fixatie, breng de weefsels over in individuele vriesvormpjes die optimaal snijtemperatuur medium bevatten voor het invriezen over droog ijs. En verwerf 7-10 micrometer secties van elke lob met behulp van een standaard cryostaat. Controleer de pups dagelijks gedurende minimaal 56 dagen om te bevestigen dat hun wonden gesloten blijven en injecteer pijnstilling 24 en 48 uur na de operatie.

Op het juiste experimentele eindpunt, oogst en weeg de lever van elke pup op het blok. Scheid vervolgens zorgvuldig elke afzonderlijke lob bij zijn proximale aanhechting en vergelijk de massa van de geamputeerde linker lob met de massa van de hele lever om de mate van regeneratie in elke lob te bepalen. Subtiele regeneratie van de linker lob kan worden waargenomen 7-14 dagen na de operatie en volledige regeneratie wordt vaak waargenomen na 56 dagen.

Zonder significant verschil in hepatocytengebieden in de geregenereerde lever zoals geopenbaard door histologische analyse. Verder geeft injectie van EdU bij neonatale muizen aan een significante toename van het aantal proliferatieve cellen in de gewonde regenererende linker lob in vergelijking met ongedwongen controles, wat suggereert dat celproliferatie bijdraagt aan regeneratie van de linker lob bij neonaten. Hepatectomie bij post natale dag 14 juveniele muizen resulteert echter in een verminderde regeneratie in de linker lob met een verhoogde compensatie van de ongedwongen lobben.

Dit geeft aan dat de reactie op letsel na acute resectie na 14 dagen overschakelt van lobspecifieke regeneratie naar globale compensatie. Eenmaal beheerst, kan deze techniek binnen 15 minuten worden voltooid als deze correct wordt uitgevoerd. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om zo voorzichtig mogelijk te zijn om geen extra stress voor de moeder of de pups te veroorzaken.

Na dit proces kunnen andere methoden, zoals seriële hepatecomieën of chronische leververwondingen, worden uitgevoerd om het regeneratieve potentieel van de lever verder te beoordelen. Na de ontwikkeling heeft deze techniek de weg gebaand voor onderzoekers op het gebied van stamcelbiologie om leverregeneratie bij de neonatale muis te verkennen. Na het bekijken van deze video, zou je een goed begrip moeten hebben van hoe je een lobspecifieke gecontroleerde amputatie van de neonatale muizenlever kunt voltooien.

Vergeet niet dat het werken met isofluraangevaarlijk is en dat voorzorgsmaatregelen zoals een mondmasker en handschoenen altijd moeten worden genomen bij het uitvoeren van deze procedure.