Name: Diep-veneuze trombose geïnduceerd door Stasis in muizen gecontroleerd door hoge frequentie Ultrasonografie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Leer diep-veneuze trombose induceren bij muizen via de inferieure vena cava stasis-methode en monitor trombusvorming niet-invasief met hoogfrequente echografie. Dit protocol ondersteunt onderzoek naar therapeutische interventies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door een subsidie van het hart en de Stichting van de lijn in Canada en de Morris en Bella Fainman Family Foundation. De auteurs bedank Veronique Michaud voor haar technische hulp bij de VEVO770 echografie imaging systeem.

Alle procedures werden goedgekeurd door de institutionele Animal Care Comité van McGill University Montreal, QC, Canada. Al het nodige materiaal wordt vermeld in tabel I.
1. RattenUitrustingen (C57BL/6J) IVC Stasis Protocol
<ol><li>Operatie voorbereiding Nota: Dit is een survival chirurgie en dus juiste aseptische techniek moet te allen tijde worden gevolgd. Het gaat hierbij om ervoor te zorgen dat alle materialen zijn bij de hand, reinigen en steriliseren van instrumenten vóór en tussen gebruik en aanwijzing van een steriele ruimte op het plateau voor alle steriel materiaal.<ol>
<li>Alle chirurgische instrumenten en materialen door autoclaaf steriliseren. Een glazen kraal sterilisator volstaat om te steriliseren instrument tips tussen dieren, als meer dan één procedure in één keer gebeurt.</li>
		<li>Anesthetize 8-10 week oud C57Bl/6 mannelijke muizen met een mengsel van 100% zuurstof en 2,5% Isofluraan. Opmerking: Pas de toevoer van zuurstof en Isofluraan zo nodig.</li>
		<li>Bevestig afstomping door knijpen de achterste poot van het dier tussen de tenen met een tang. Geen reactie van de snuifje geeft aan dat het dier wordt verdoofd.</li>
		<li>Beheren langzaamwerkend pijnstiller (buprenorfine) via subcutane injectie. Geven de muizen een dosis van 1 mg van pijnstiller per 1 kg lichaamsgewicht (1 mg/kg).</li>
		<li>Plaats oog zalf op beide ogen van het dier om ervoor te zorgen geen hoornvlies uitdroging voor de duur van de procedure.</li>
		<li>0,2 - 0,5 mL isotone vloeistoffen per 10 g lichaamsgewicht subcutaan beheren.</li>
		<li>Corrigeer het dier in plaats op de operatie tafel met behulp van chirurgische tape. Plaats het dier in een liggende positie om de buik bloot te stellen. Chirurgie uitvoeren op een verwarming pad te voorkomen hypothermie.</li>
		<li>Haar verwijderen uit de buik van de muis door toepassing van een ontharing crème voor 1-2 min. Veeg de buikstreek schoon met gaas en gedestilleerd water, indien nodig.</li>
		<li>Ook het haar uit de buik door scheren met een klein elektrisch scheerapparaat te verwijderen.</li>
		<li>Het steriliseren van de buik met Baxedin (chloorhexidine gluconaat BP oplossing) alvorens elke incisies. Toepassing van ethanol lichtjes met gaas om overmatige hitte verlies veroorzaakt door de verdamping van de alcohol te vermijden.</li>
	</ol></li>
	<li>Blootstelling van de Vena Cava (IVC), Inferior
	<ol>
<li>Met chirurgische scharen, uitvoeren een laparotomie om te openen de buikholte.<ol>
<li>Til de huid met een Tang voor de onderbuik en maak een verticale insnijding parallel aan weerszijden van de linea alba. De eerste snede maken links of rechts van de linea alba, afhankelijk van de handigheid van de exploitant. De incisie wordt gemaakt uit de buurt van de middellijn bij echografie imaging later.</li>
			<li>Maak een tweede, horizontale snede boven in de buik. Opmerking: Na penetratie in de buik, de daaraan gehechte spiermassa moet worden "tented" en vervolgens met een chirurgische schaar ter voorkoming van schade aan de buikorganen doorgedrongen.</li>
			<li>Herhaal de verticale en horizontale incisies op de buikspier laag van het dier. Zorg ervoor dat de spieren tijdens de penetratie in de buik niet te beschadigen de organen onder de tent. Let op: Heffen huid en spier weg van darmen en andere inwendige organen bij het maken van insnijdingen om niet doorprikken hen.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Vouw de huid en de spier uit de buurt van de incisie bloot van de buikholte.</li>
		<li>Toepassing van gaas, bevochtigd met isotone oplossing, op de zijkanten van de wond-opening en belichamen van de darmen. Druk uitoefenen op beide zijden van de buik bij de externalization van de darmen. Gebruik zachte bewegingen met een katoen-tip applicator te verplaatsen van de darmen. Doordrenk gaas in isotone oplossing en plaats deze over de externalized van de darmen.<ol>
<li>Gaas moet vooraf worden bevochtigd vóór plaatsing op weefsel.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Verplaats opzij peritoneale vet en bloot de IVC tussen de nier- en iliacale aderen.</li>
		<li>Maak een initiële identificatie van duidelijk zij takken. Een zijaansluiting zal verschijnen als kleine, maar belangrijke ader die uit de buurt van het IVC, tussen de renale en iliacale takken veins. Therapieën kan sterk variëren tussen muizen. Muizen kunnen zij takken aanwezig hebben aan één of beide zijden van de IVC.</li>
	</ol></li>
	<li>Afbinding van zij takken Opmerking: Als zij takken aanwezig zijn, wordt de volgende procedure gevolgd voor elkaar. Als niet aanwezig is, gaat u verder met stap 4: initiële hechtdraad plaatsing onder het IVC. De site van de afbinding van het IVC zullen onmiddellijk distale aan de linker nier ader, ongeacht de aanwezigheid van kant takken.<ol>
<li>Botte dissectie uitvoeren aan weerskanten van de zijaansluiting. Botte dissectie is het proces van openen herhaaldelijk botte pincet met zachte druk, zodat het doorbreken van de fascia zonder beschadiging van de omliggende vaartuigen. Let op: Vermijd prikken of beschadiging van de ader.</li>
		<li>Til de tak en doorgeven van een deel van de zijde hechtdraad 6-0 onderaan de ader. Altijd wees voorzichtig bij het heffen of verplaatsen van schepen. Het is het beste om te grijpen het vet rond de schepen, anders bestaat het risico van beschadiging van het schip.</li>
		<li>Maak een chirurgische afbinding rond de zijaansluiting met behulp van standaard chirurgische knoop koppelverkoop techniek met hechtdraad pincet. Volledige Afbinding wordt gedaan om ervoor te zorgen 100% occlusie van de ader. Gebruik ten minste drie gelijkmakende gooit om dat de afbinding is veilig.</li>
		<li>Herhaal stap 1.3 voor eventuele resterende zij-takken.</li>
	</ol></li>
	<li>Dissectie van de abdominale aorta vanuit het IVC
	<ol>
<li>Botte dissectie rond het IVC onmiddellijk distale uitvoeren vanaf de linker nier ader. De abdominale aorta is gekoppeld aan het IVC via fascia, daarom voeren eerste botte dissectie rond zowel de IVC en de abdominale aorta. Let op: Vermijd prikken of beschadiging van de ader. Niet scheuren of perforaties of vaartuig. Dit is het meest kritische deel van de procedure, met het hoogste risico voor beschadiging van het schip.</li>
		<li>Blijven van toepassing zachte druk via botte dissectie tot een doorzichtig venster is gemaakt tussen de aorta en de IVC.</li>
	</ol></li>
	<li>Sutuur (geologie) plaatsing en Afbinding van de IVC
	<ol>
<li>Het doorgeven van een deel van de zijde hechtdraad 6-0 onder de IVC en abdominale aorta.</li>
		<li>Zoek de hechtdraad door het raam gemaakt tussen de IVC en de aorta. Gebruik pincet te trekken van de hechtdraad en rijg deze tussen de abdominale aorta en IVC. Rijg de hechtdraad via zorgvuldig, probeert niet te trek/punctie de IVC en abdominale aorta.</li>
		<li>Maak een chirurgische afbinding rond het IVC met hechtdraad pincet, zorgen voor een totale occlusie van de ader. Opnieuw, maken de afbinding onmiddellijk distale uit de linker nier ader.</li>
		<li>Maak drie hechtdraad gooit teneinde de afbinding. Opmerking: Het is ook mogelijk om door te geven van de hechtdraad onder de IVC en aorta vóór het scheiden van de twee als een alternatieve optie. Als alternatief kunnen de 7-0 Prolene hechtingen worden gebruikt voor afbinding van de zij-takken en het IVC.</li>
	</ol></li>
	<li>Sluiting en postoperatieve wondverzorging
	<ol>
<li>Controleer of dat de abdominale aorta ononderbroken heeft gelaten en dat alle zij-takken hebben zijn afgebonden. Het IVC verschijnt verwijde distale van de afbinding-site en geen bloed stroom zichtbaar zal zijn.</li>
		<li>Plaats alle peritoneale vet en de darmen terug in de buikholte.</li>
		<li>Sluit de wond met hechtdraad pincet en 6-0 zijde hechtdraad. Gebruik een lopende hechtdraad (eenvoudige continu) en ervoor zorgen dat de hechtdraad niet te strak. Een strakke hechtdraad zal scheuren wanneer het dier wakker en rond zijn kooi beweegt.<ol>
<li>Als alternatief, PDS, Ethilon, Vicryl, Dexon of edelstaal clips te gebruiken voor de sluiting van de wond.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Sutuur (geologie) de laag van de buikspier eerst met behulp van passende hechtdraad koppelverkoop techniek.</li>
		<li>Herhaal hechtdraad techniek voor de huid en controleer of de sluiting van de wond is voldoende. Opmerking: Als het dezelfde hechtdraad naald en draad gebruikt voor meerdere dieren, steriliseren zowel in 70% ethanol vóór elk gebruik.</li>
		<li>Verwijder het dier uit verdoving gas en plaats hen in een incubator 34 ° C gedurende ten minste 30 minuten.</li>
		<li>Nogmaals, het beheren van 0,2 - 0,5 mL isotone vloeistoffen per 10 g lichaamsgewicht subcutaan. Vloeistoffen kunnen worden gegeven in de volgende dagen te handhaven van pre-operatieve lichaamsgewicht, indien nodig.</li>
		<li>Het controleren van het dier tot herstel beoordelen van de algehele gezondheid van het dier te waarborgen van de succesvolle operatie. Let op: Verwacht een lichte gebogen houding voor een invasieve procedure zoals deze, maar het dier gedraagt zich normaal zo spoedig na operatie van 30 minuten.</li>
		<li>Plaats het dier in zijn eigen kooi en zet het niet met andere dieren tot volledig hersteld.</li>
		<li>Opnieuw beheren pijnstiller dagelijks voor maximaal 48 h postop.</li>
		<li>Voedsel plaats op de vloer van de kooi voor de dierlijke while in herstel. Andere speciale zorg is over het algemeen niet nodig.</li>
		<li>Bekijk de site van de wond voor roodheid, zwelling, of geen kwijting en eventuele andere tekenen van infectie.</li>
		<li>Indien nodig verwijderen hechtingen na 7-10 dagen.</li>
		<li>Uitvoeren van de euthanasie onmiddellijk als de operatie mislukt (bijvoorbeeld een aanzienlijke schip schade en/of bloed verlies) of dier verbetert niet met post-operatieve zorg. Euthanasie wordt over het algemeen uitgevoerd met 48 h postop. Voor langere experimenten, kunt 7-0 Prolene afbinden zij takken en het IVC en 5-0 Vicryl hechtingen te sluiten van de buikholte.<ol>
<li>Euthanasie door afstomping van het dier in een inductie zoals eerder is beschreven, behalve bij 5% Isofluraan uitvoeren Dit wordt gevolgd door verstikking met 100% CO2 terwijl verdoofd.</li>
			<li>Na bevestiging van euthanasie door verstikking (verlies van hartslag en geen ademhaling), cervicale dislocatie om ervoor te zorgen volledige euthanasie uit te voeren.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>2. hoge frequentie echografie Protocol
Opmerking: Dit protocol is aangepast van de Lady Davis Instituut knaagdier fenotypering Core SOP voor hoge frequentie echografie imaging. Dit protocol postoperatieve 24 h wordt uitgevoerd, maar kan eerder worden gedaan zolang het dier goed op de operatie reageert. Het protocol kan worden uitgevoerd op elk gewenst moment op gezonde muizen en vaak is gedaan vóór en na de operatie te vergelijken.
<ol><li>
Voorbereiding van dier
	<ol>
<li>Plaats het dier in een zaal van de inductie en anesthetize van het dier met een mengsel van 100% zuurstof en 2,5% Isofluraan.</li>
		<li>Hartslag en temperatuur monitor inschakelen. Achterlicht warmte boven tafel dier om warm te houden tijdens de procedure.</li>
		<li>Verwijderen van het dier uit de zaal inductie en toepassen van oog smeermiddel om te voorkomen dat hoornvlies uitdroging. Plaats het dier op het platform van de analyse en brengt de verdoving buis aan mond/neus van het dier.</li>
		<li>Warme echografie gel tot 37 ° C en plaats de gel op de buik van het dier. De echografie gel is verwarmd met behulp van een water-Verwarming systeem dat pompen warm water door spoelen die zijn gewikkeld rond de fles van gel.</li>
		<li>Voor de metingen van de hartslag (indien nodig), elektrode gel zetten de 4 elektroden van het platform van de analyse en de poten van het dier aan de platform/elektroden met chirurgische tape vast. Plaats het dier in een liggende positie voor beeldvorming van de IVC. De echografie imaging systeem omvat een analyse-platform dat is opgewarmd en bevat elektroden voor het toezicht op het dier.</li>
		<li>Voor temperatuurmetingen, elektrode gel zetten thermometer en voeg in de rectum van het dier.</li>
		<li>Aanpassen van warmte lamp en Isofluraan als nodig is om ervoor te zorgen dat dier is comfortabel, heeft een ademhaling tussen 30-70 bpm en wordt bewaard bij 37 ° C.</li>
		<li>Indien nodig, scheren van de buik van het dier of het verwijderen van haar met haar verwijdering room. 1-2 minuten solliciteren en veeg schoon met gaas en gedestilleerd water. Opmerking: Teveel haren kan invloed hebben op de kwaliteit van de beelden.</li>
		<li>Plaats gaas onder of aan de zijkant van het dier te vangen eventuele overtollige ultrageluid-gel.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Imaging de IVC en trombose
	<ol>
<li>Zet de denkbaar software en een nieuwe studie beginnen.</li>
		<li>Selecteer een geschikte scanhead voor imaging. De scanhead die hier gebruikt is voor buikorganen (frequentie: 35 MHz, focale lengte: 12,8 mm).</li>
		<li>Het opnemen van alle relevante informatie over het dier. Dit kan inhouden dat dier ID, geslacht, gewicht, geboortedatum, stam, enz.</li>
		<li>Lager de scanhead naar beneden totdat het is ontroerend de ultrageluid-gel op het dier.</li>
		<li>Start de scanhead sonde om te beginnen met 2D-beeldvorming van het dier. In deze modus worden beelden gepresenteerd als tweedimensionaal, in variërende tinten grijs.</li>
		<li>Zoek de IVC en abdominale aorta door het bewegen van de muis platform in de x - en/of y-vlak, terwijl het ook het bewegen van de scanhead via het z-vlak. Opmerking: Bloed schepen zal verschijnen met hun witte muren en het bloed binnen bijna zwart. De abdominale aorta zal intens pulseren en dikkere wanden hebben, terwijl het IVC zal hebben van dunner muren en comprimeren/uitbreiden eenvoudig op het beeld scherm wanneer de scanhead wordt verplaatst omhoog en omlaag. De afbinding site zal blijken, zoals de ader zal worden uitgezet en de wand van de ader tot een punt komen zal. Trombose gevormd binnen zullen solide onder echografie imaging en zal niet gemakkelijk comprimeren als de wand van de ader doet. De ader zal comprimeren alleen boven de afbinding, waar geen trombose ontstaat.</li>
		<li>Op het IVC en de afbinding-site zoeken, centreert u hen op het brandpunt van de echografie, met het oog op het meest nauwkeurige beeld.<ol>
<li>Als de afbeelding te donker is te zien, aanpassen van de gel luchtbellen te verwijderen met een katoen-tip applicator.</li>
			<li>Indien nodig, de scanhead 45° naar links of rechts kantelen en passen de dierlijke platform om te zien de ader duidelijk. Dit wordt gedaan als er interferentie met de scanhead. In dit scenario moet de ader image worden gemaakt op een side-hoek om te voorkomen dat de hechtdraad. Opmerking: Afbeelding interferentie wordt meestal veroorzaakt door donkere vlekken van de huid op het dier, slechte wond hechtdraad plaatsing of bubbels in de ultrageluid-gel.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Gebruik de software, nemen foto's van elke gewenste structuren en metingen met behulp van elke prestatiemetingsprogramma's. Gemeenschappelijke metingen bevatten oppervlakte van de dwarsdoorsnede van de trombose of breedte van de afbinding site.</li>
		<li>De imaging mode veranderen naar Pulse-Golf Doppler om bloed stroom metingen. In deze modus kunt de beeldvorming van vasculaire doorbloeding en het meten van de stroomsnelheid, onder andere variabelen.</li>
		<li>Kantel het analyse-platform te verlagen van het posterieure einde van het dier.</li>
		<li>De hoek/positie van de scanhead wijzigen zodat hij zal contact opnemen met de gel op een hoek van ongeveer 30° vanaf het achterste einde van het dier.</li>
		<li>De dierlijke platform en scanhead verplaatsen. De IVC en Afbinding verplaatsen indien nodig.</li>
		<li>Bloed stroom metingen rond de afbinding site gewenst afbeeldingen te bevestigen stase maken Gemeenschappelijke metingen van de bloedstroom opnemen gemiddelde snelheid, maximale snelheid of gemiddelde snelheid.</li>
		<li>Metingen of opnamen opslaat.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Sanering en dierlijke herstel
	<ol>
<li>Verhogen van de scanhead eerste positie te verplaatsen van dierlijke platform naar haar aanvankelijke standpunt, ook.</li>
		<li>Verwijder overtollige gel uit het dier met gaas. Doe dit voorzichtig zodat de wond hechtdraad zal niet worden gescheurd.</li>
		<li>Verwijder de thermometer uit rectum van het dier en de hond uit het platform te nemen.</li>
		<li>Plaats het dier in zijn kooi en een 34 ° C incubator.</li>
		<li>Het controleren van het dier tot herstel. De procedure is zeer klein en niet-invasief. Het dier zal snel wakker. Blijven volgen dier in de volgende dagen overeenkomstig punt 1.6 van dit protocol.</li>
		<li>Reinig de dierlijke platform met gaas en ontsmettingsmiddel.</li>
		<li>Veeg de scanhead schoon met gaas en gedestilleerd water. Let op: Reinig zeer voorzichtig de scanhead en alleen met gedestilleerd water.</li>
		<li>Herhaal stap 2 voor het volgende dier.<ol>
<li>Als klaar met alle onderwerpen, controleert u of dat alle afbeeldingen en opnamen zijn opgeslagen. Schakel alle apparatuur en software.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+diagnosed+deep+vein+thrombosis+in+the+general+population%3A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Vasc+Endovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review.</a> Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).</li>
<li>McGuinness, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recruitment+of+labelled+monocytes+by+experimental+venous+thrombi%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi.</a> Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).</li>
<li>Singh, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+thrombus+to+resolve+in+urokinase-type+plasminogen+activator+gene-knockout+mice%3A+rescue+by+normal+bone+marrow-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells.</a> Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).</li>
<li>Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+kinetics+of+99mTc+labeled+recombinant+tissue+plasminogen+activator+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits.</a> Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).</li>
<li>Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+pig+models+of+venous+thrombosis+mimicking+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease.</a> Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).</li>
<li>Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+pulmonary+emboli+and+deep+venous+thrombi+with+99mTc-bitistatin%2C+a+platelet-binding+polypeptide+from+viper+venom%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom.</a> J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).</li>
<li>Wakefield, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venous+thrombosis+prophylaxis+by+inflammatory+inhibition+without+anticoagulation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy.</a> J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).</li>
<li>Robins, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+Gas6+contributes+to+thrombogenesis+and+promotes+tissue+factor+up-regulation+after+vessel+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice.</a> Blood. 121 (4), 692-699 (2013).</li>
<li>Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E+synthase+is+upregulated+by+Gas6+during+cancer-induced+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis.</a> Blood. 127 (6), 769-777 (2016).</li>
<li>Laurance, S., et al. <a target="_blank" href="http://atvb.ahajournals.org/content/early/2017/04/27/ATVBAHA.116.308925">Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).</li>
<li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li>
<li>Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+monitoring+of+venous+thrombosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">In vivo monitoring of venous thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).</li>
<li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Hemorheol+Microcirc%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li>
<li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL%2F6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+%28stasis%29+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li>
<li>Luther, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+Effector-Memory+T+Cell+Activation+Regulates+Post-Thrombotic+Vein+Wall+Inflammation+and+Thrombus+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution.</a> Circ Res. , (2016).</li>
<li>Subramaniam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+contributions+of+complement+factors+to+platelet+activation+and+fibrin+formation+in+venous+thrombus+development%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development.</a> Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).</li>
<li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombogenesis+with+continuous+blood+flow+in+the+inferior+vena+cava.+A+novel+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model.</a> Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Er zijn verschillende kritische stappen voor succesvol veneuze trombose vorming met behulp van het stasis-model. Inductie van veneuze trombose is moeilijker in oude muizen als gevolg van de ophoping van vet rond de vena cava inferior en de aorta. Idealiter moet de muizen ondergaan deze procedure 8 - 10-weken oude. Grote zorg moet worden genomen niet ertoe endothelial schade in het IVC tijdens de botte dissectie en ligatuur. Daarnaast is het essentieel om te houden van het dier in een incubator 34 ° C gedurende ten minste...

Veneuze thromboembolism (VTE), die uit diepe veneuze trombose (DVT) en longembolie bestaat, is de derde belangrijkste oorzaak van cardiovasculaire dood na een hartinfarct en beroerte. Het is een veel voorkomende aandoening treft 1-2 procent van de bevolking, met een jaarlijkse incidentie van 1 in 5001. VTE kan leiden tot: 1) dood door longembolie; 2) post-trombotische syndroom, gekenmerkt door chronische beenpijn, zwelling en ulceratie; of 3) chronische pulmonale hypertensie resulteert in aanzienlijke chronische respiratoire compromis. VTE is een multi factoriële ziekte en kan voortvloeien uit stase van de bloedstroom, schade aan wanden en/of hypercoagulable Staten als gevolg van een verstoring van het evenwicht tussen de stolling en de fibrinolytic systemen, zoals het is meer dan honderd jaar geleden beschreven door Virchow en staat bekend als de Virchow van triade.
Omdat in de meeste gevallen het onmogelijk is om menselijke DVT monsters krijgen, hebben de onderzoekers experimentele dierlijke modellen van DVT ontwikkeld. Verschillende dieren waaronder rat2, muis3, konijn4, varken5, hond6en7 van de niet-menselijke primaten hebben ingezet. Muizen genetisch kunnen worden gewijzigd en zijn de meest gebruikte dier te bestuderen van DVT. Echter zoals alle dieren, wordt spontane DVT niet waargenomen bij muizen. Dus, fysische of chemische veranderingen van de wand van de ader worden gebruikt voor het maken van trombose bij muizen. Eerder hebben we de ferrichloride model gebruikt voor het opwekken van trombose in de vena cava inferior (IVC) van muizen8,9,10. Dit model heeft het voordeel dat het betrouwbaar produceren occlusieve stolseltjes binnen minuten en kan worden gebruikt voor het onderzoeken van de rol van anti-coagulans en anti-bloedplaatjes geneesmiddelen tijdens acute DVT. Het is echter een terminal procedure. Dus, om te bestuderen van acute en chronische DVT, de stase-model is meer geschikt. In dit model wordt trombus vorming geïnduceerd door de volledige onderbreking van de bloedstroom in het IVC, een van de factoren in de Virchow triade voor DVT ontwikkeling. Dit model kan worden gebruikt om te studeren van DVT vorming en resolutie, wat een voordeel ten opzichte van de FeCl3 model11.
Wij hebben een niet-invasieve methode te volgen van vorming van trombose en resolutie na verloop van tijd met behulp van een micro-imaging hoge-frequentie echografie systeem12ontwikkeld. Wij hebben eerder aangetoond dat meting van veneuze trombose door echografie gunstig met stolseltjes verkregen pathologisch correleert. Wij hebben in twee latere studies bevestigd dat metingen met echografie correlaat met trombose gewicht en trombose gebied gekwantificeerd door histochemie9,10 verkregen. Nog belangrijker, hebben we aangetoond dat hoge frequentie echografie kan worden gebruikt voor het controleren van de vorming van diepe veneuze trombose in muizen12. Het kan ook worden gebruikt om het kwantificeren van trombose resolutie in een niet-invasieve manier.
Hier beschrijven we het protocol waardoor trombose vorming met behulp van de muismodel stase-geïnduceerde trombose en hoe trombose vorming niet-gebeurt na verloop van tijd met behulp van hoge frequentie echografie kan worden gecontroleerd.

<table><tbody><tr><td>6-0 perma-hand silk suture</td><td>Ethicon</td><td>706G</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>20830-00</td><td></td></tr><tr><td>Suture tying forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>20830-00</td><td></td></tr><tr><td>blunt forceps (straight and curved)</td><td>Fine Science Tools</td><td>20830-00</td><td></td></tr><tr><td>Needle Driver</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Moria Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15396-00</td><td></td></tr><tr><td>1ml syringes</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>26G needles</td><td>Becton Dickinson &amp; Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>VEVO 770 High Resolution Imaging System</td><td>Visualsonics</td><td>Niet langer verkocht</td><td></td></tr><tr><td>SR Buprenorphine</td><td>ZooPharm</td><td></td><td>Gegeven aan LDI door Vet</td></tr><tr><td>Surgery Microscope</td><td>Leica</td><td>Leica M651</td><td></td></tr><tr><td>Systan eye ointment</td><td>Alcon</td><td>288/28062-0</td><td></td></tr><tr><td>2x2 steriele gaas</td><td>CDMV</td><td>#104148</td><td></td></tr><tr><td>Kastje voor wattenstaafjes</td><td></td><td></td><td>van JGH</td></tr><tr><td>Transpore hypoallergene chirurgische tape</td><td>CDMV</td><td>#7411</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound gel (Aquasonic-100)</td><td>Dufort &amp; Lavigne</td><td>#AKEN4061</td><td></td></tr><tr><td>Incubator</td><td></td><td></td><td>Van JGH</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Dispomed</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anesthesiekamer, slangen en toedieningsapparatuur</td><td>Dispomed</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Haarverwijderaar</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Water verwarmde harde pad</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>#HHP-2</td><td></td></tr><tr><td>Gaymar verwarming waterpomp TP500</td><td>MATVET Inc.</td><td>#R-500305</td><td></td></tr><tr><td>Infrarood verwarmingslamp</td><td>electrimat inc.</td><td>#1R175R-PAR</td><td></td></tr><tr><td>Muis rectale temperatuur sonde</td><td>emkaTECHNOLOGIES</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steriele water</td><td></td><td></td><td>Van JGH</td></tr></tbody></table>

diep-veneuze trombose geïnduceerd door stasis in muizen gecontroleerd door hoge frequentie ultrasonografie

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Veneuze trombose is een veel voorkomende aandoening treft 1-2 procent van de bevolking, met een jaarlijkse incidentie van 1 in 500. Veneuze trombose kan leiden tot de dood door middel van longembolie of resultaten in het post-trombotische syndroom, gekenmerkt door chronische beenpijn, zwelling en ulceratie, of in chronische pulmonale hypertensie resulteert in aanzienlijke chronische respiratoire compromis. Dit is de meest voorkomende hart-en vaatziekten na myocardinfarct en ischemische beroerte en een klinische uitdaging voor alle medische disciplines, zoals het het verloop van andere aandoeningen zoals kanker, systemische ziekten, chirurgie en belangrijk trauma kan bemoeilijken.
Experimentele modellen zijn nodig om deze mechanismen te bestuderen. De stase model induceert consistente trombose grootte en een meetbare hoeveelheid trombose. Het is echter moet systematisch afbinden kant takken van de vena cava inferior variabiliteit in maten van de trombose en eventuele foutieve interpretatie te voorkomen. Wij hebben een niet-invasieve techniek voor het meten van trombose grootte met behulp van Ultrasonografie ontwikkeld. Met behulp van deze techniek kunnen we trombose ontwikkeling en resolutie beoordelen na verloop van tijd in hetzelfde dier. Deze benadering beperkt het aantal muizen die nodig zijn voor de kwantificering van veneuze trombose overeenstemming met het beginsel van vervanging, vermindering en verfijning van dieren in het onderzoek. We hebben aangetoond dat trombose gewicht en histologische analyse van trombose grootte correlaat met meting met Ultrasonografie verkregen. Daarom beschrijft de huidige studie hoe voor het opwekken van diep-veneuze trombose in muizen met behulp van de vena cava inferior stase model en hoe om te controleren met behulp van hoge frequentie echografie.

Stase veneuze trombose model
In het model van stase, muizen zijn verdoofd en een snede is gemaakt om de vena cava (IVC), inferior bloot te stellen. De incisie wordt gemaakt aan de linker- of rechterkant van de muis in plaats van een middellijn laparotomie op een manier die niet met de ultrasone sonde interfereren zou. De buikspieren aan te spannen en de huid zijn vouwen terug naar het blootstellen van het IVC (<...

Dit protocol beschrijft de stappen voor het verkrijgen van veneuze trombose met behulp van een stase-model. Daarnaast zijn we met behulp van een niet-invasieve methode voor het meten van de vorming van trombose en resolutie na verloop van tijd.

Diep-veneuze trombose geïnduceerd door Stasis in muizen gecontroleerd door hoge frequentie Ultrasonografie

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

De algemene doelen van deze procedure zijn om diepe veneuze trombose te induceren bij muizen met behulp van het inferieure vena cava-stasismodel, en om de trombi te monitoren met behulp van hoge frequentie echografie. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van veneuze trombose over hoe een farmacologisch middel, gen of celtype van belang de trombusvorming of -resolutie kan beïnvloeden. Het grote voordeel van deze techniek is dat zowel trombusvorming als resolutiekwantificering non-invasief bij muizen kan worden gemeten.We kregen voor het eerst het idee voor deze methode toen we onderzochten hoe we trombusvorming in de inferieure vena cava van muizen konden denatureren en non-invasief konden monitoren. Gebruik om te beginnen een pincet om de onderste buikhuid van een 8 tot 10 weken oude C57 zwarte zes muis op te tillen. En gebruik chirurgische schaar om een verticale incisie te maken parallel aan beide zijden van de linea alba vanaf de middenlijn.Maak een horizontale incisie aan de bovenkant van de buik. Gevolgd door herhaalde incisies door de buikspierlaag. Vouw de huid en spier weg van de incisie om de buikholte bloot te leggen.En plaats bevochtigd gaas op beide zijden van de wond. Oefen zachte druk uit op beide zijden van de buik om de darmen op het gaas te externaliseren. En plaats een tweede laag bevochtigd gaas over het externaliseerde weefsel.Onder een dissectiemicroscoop, verplaats eventueel peritonaal vet om de inferieure vena cava, of IVC, tussen de renale en iliacale aderen bloot te leggen. En lokaliseer de zijtakken van de IVC. Gebruik een pincet om voorzichtig rond elke zijtak te dissecteren om de fascia te doorbreken zonder de omliggende vaten te beschadigen.Grijp vervolgens voorzichtig het vet rond een tak om de ader op te tillen. En haal een stuk zes-nul zijdedraad onder het vat. Gebruik vervolgens hechtklauwen en een standaard chirurgische knooptechniek om een chirurgische ligatie met ten minste drie slagen rond de zijtak te maken om het vat volledig te occluderen.Gebruik alternatief Hemoclips. Om de aorta van de IVC te scheiden, dissecteer voorzichtig rond en tussen beide vaten onmiddellijk distaal van de linker nierslagader zonder enig vat te beschadigen. Wanneer er een duidelijk venster is gecreëerd tussen de vaten, haal een sectie van zes-nul zijdedraad onder de IVC en de abdominale aorta.En gebruik een pincet om de naald door het venster te trekken. Gebruik hechtklauwen om de IVC met drie slagen onmiddellijk distaal van de linker nierslagader te ligateren voor volledige occlusie van het vat. Bevestig dat de abdominale aorta ononderbroken is gelaten.En dat alle zijtakken zijn geligateerd. De IVC zal distaal van de ligatieplaats verwijd lijken. En er zal geen bloedstroom zichtbaar zijn.Breng het peritonaal vet en de darmen terug in de buikholte. En gebruik hechtklauwen en zes-nul zijdedraad om de spier- en huidlagen afzonderlijk te sluiten met doorlopende hechtingen. Plaats het dier vervolgens in een incubator van 34 graden Celsius gedurende minimaal 30 minuten met bewaking tot volledig herstel.Plaats de fles met echografiegel door de spoelen van een waterverwarmingssysteem om de gel op 37 graden Celsius te verwarmen. 24 uur na de ligatie, plaats het dier op het analyseplatform. En breng elektrodengel aan op de vier elektroden van het platform.Met het dier in rugligging, bevestig de poten aan de elektroden. En steek een gesmeerde thermometer in de endeldarm. Plaats gaas aan de zijkant van het dier om eventueel overtollig echografiegel op te vangen.Breng vervolgens de gel aan op de blootgestelde huid. En beeld de IVC af volgens de standaard echografie protocollen. Met behulp van een hoogfrequent microbeeldvormingssysteem kan de IVC in de longitudinale weergave worden geïdentificeerd vóór ligatie.En de stroomsnelheid kan worden bepaald door Pulsed wave Doppler beeldvorming. Onmiddellijk na de ligatie is een afname van de bloedstroom zichtbaar. 24 uur na de ligatie kunnen dichte trombi in de IVC worden gevisualiseerd door middel van echografie.Echografie maakt ook kwantificering van de snelheid van de bloedstroom in de vaten mogelijk. Gebruik gekleurde Doppler vóór, onmiddellijk na en 24 uur na ligatie. Eenmaal beheerst, kan de trombus worden geïnduceerd in 30 tot 45 minuten, afhankelijk van de aanwezigheid en het aantal zijtakken, als de techniek correct wordt uitgevoerd.Wanneer u deze procedure probeert, is het belangrijk om in gedachten te houden dat u de tijd moet nemen en precies maar voorzichtig moet zijn in uw bewegingen, omdat het relatief gemakkelijk is om de vaten te scheuren. Na deze procedure kunnen andere methoden zoals immunofluorescentie, histologische of flowcytometrische analyse worden uitgevoerd om aanvullende vragen over de cellulaire inhoud van trombi te beantwoorden of om specifieke eiwitten van belang te kwantificeren.

deep-vein-thrombosis-induced-stasis-mice-monitored-high-frequency

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

De elektrolytische inductie van endotheel activatie aan het interne oppervlak van de vena cava inferior resulteert in een veneuze soort trombusvorming te wijten aan endotheel activatie en gedeeltelijke bloed stasis, twee componenten van de triade Virchow's.

Elektrolytische Inferior Vena Cava Model (EIM) van veneuze trombose

De muis volledige stase model van de vena cava inferior trombose levert kwantificeerbare hoeveelheden aderwand weefsel en trombus. Het is nuttig gebleken voor het evalueren van interacties tussen de ader muur en de occlusieve trombus en bij de beoordeling van de progressie van acute naar chronische ontsteking.

Muis Compleet Stasis Model van Inferior Vena Cava trombose

This video demonstrates the intravital fluorescence microscopy technique to study thrombus formation in a mouse model. The mouse is injected with a fluorophore-labeled polysaccharide to monitor blood circulation. Upon illumination with a high-intensity light, the phototoxic induction of an injury in the microvasculature of the ear leads to the formation of a thrombus, which is confirmed by visualizing the obstruction in the blood flow.

Intravital Fluorescence Microscopy to Study Microvascular Thrombus Formation

Source: Kim, D., et. al. Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates visualization of cerebral thrombus in mice using micro-computed tomography (micro-CT) imaging. A cerebral thrombus mouse model is injected with fibrin-targeted gold nanoparticles acting as a contrasting agent. The mouse is placed on the bed of a micro-CT machine, and images are acquired from multiple angles.

Visualization of a Cerebral Thrombus in a Mouse Using Micro-Computed Tomography Imaging

We beschrijven hier stenose in de vena cava inferior als lymfkliertest model van diep-veneuze trombose. Dit model recapituleert bloed stroom beperking, een van de grote trekkers van veneuze trombose bij de mens.

Stenose van de Vena Cava Inferior: een lymfkliertest Model van diep-veneuze trombose

Een aortocaval fistel werd gecreëerd door het prikken van de Murine infra-nieraorta door beide muren in de inferieure Vena Cava en werd gevolgd door het creëren van een stenose in zijn uitstroom via gedeeltelijke ligatie van de inferieure vena cava. Dit reproduceerbare model kan worden gebruikt om centraal veneuze stenose te bestuderen.

Murine model van centraal veneuze stenose met behulp van Aortocaval fistel met een uitstroom stenose

Het doel van dit manuscript is om een sonografie-gebaseerde methode te presenteren die in vivo beeldvorming van de bloedstroom in cerebrale slagaders bij muizen mogelijk maakt. We demonstreren de toepassing ervan om veranderingen in de bloedstroomsnelheden te bepalen die verband houden met vasospasme in muriene modellen van subarachnoïdale bloeding (SAH).

Analyse van cerebrale vasospasme in een murien model van subarachnoïdale bloeding met hoogfrequente transcraniële duplex echografie

Het huidige protocol beschrijft een uniek, klinisch relevant model van perifere arteriële ziekte dat femorale slagader en aderelektrocoagulatie combineert met de toediening van een stikstofmonoxidesynthaseremmer om hindlimb gangreen te induceren in FVB-muizen. Intracardiale DiI-perfusie wordt vervolgens gebruikt voor hoge resolutie, driedimensionale beeldvorming van de voetzool vasculatuur.

Driedimensionale beeldvorming met hoge resolutie van de voetzool vasculatuur in een Murine Hindlimb Gangreen model

Dit protocol beschrijft een methode voor het monitoren van de progressie van morfologische veranderingen in de loop van de tijd in de baarmoeder in een induceerbaar muismodel van endometriumkanker met behulp van echografie met correlatie met grove en histologische veranderingen.

Niet-invasieve echografie van endometriumkankerprogressie bij Pax8-gerichte deletie van de tumoronderdrukkers Arid1a en Pten bij muizen

Dit artikel heeft tot doel een geoptimaliseerde methode te presenteren voor het beoordelen van veneuze trombose in een muiskankermodel, met behulp van vasculaire clips om veneuze ligatie te bereiken. Optimalisatie minimaliseert de variabiliteit in trombosegerelateerde metingen en verbetert de relevantie voor bij de mens kankergerelateerde veneuze trombose.

Veneuze trombosetest in een muismodel van kanker

Veranderingen in de bloedstroom van de eierstokken tijdens de pre-ovulatieperiode zijn essentieel voor de eisprong. Doppler-echografie is gebruikt bij mensen en grote dieren om de hemodynamica en perfusie van de eierstokken te beoordelen. Er wordt een protocol gepresenteerd voor het toepassen van Doppler-echografie om de hemodynamica van de eierstokken tijdens de preovulatoire en periovulatoire fasen bij muizen te evalueren.

Doppler-echografie voor live beeldvorming en kwantificering van de ovariële vasculaire functie bij muizen

Leer diep-veneuze trombose induceren bij muizen via de inferieure vena cava stasis-methode en monitor trombusvorming niet-invasief met hoogfrequente echografie. Dit protocol ondersteunt onderzoek naar therapeutische interventies.

Diep-veneuze trombose geïnduceerd door Stasis in muizen gecontroleerd door hoge frequentie Ultrasonografie

Meer video's verkennen