Name: Punctie-geïnduceerde Iris Neovascularization als een muismodel van Rubeosis Iridis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Leer irisneovascularisatie induceren in albino muizen voor in-vivo visualisatie van angiogenese. Deze methode helpt onderzoekers bij het bestuderen van oculaire neovasculaire ziekten en het testen van nieuwe therapieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs bedanken Linnea Tankred en Diana Rydholm voor de veehouderij.

BALB/c muis pups van beide geslachten werden gebruikt overeenkomstig de verklaring voor het gebruik van dieren in Oftalmo en visie onderzoek, en de protocollen werden goedgekeurd door Stockholmse Comité voor ethisch verantwoord onderzoek van het dier. Muizen werden gehuisvest in nesten, samen met de zogende moeder, met een 12u dag/nacht cyclus, vrije toegang tot voedsel en water, en dagelijks gecontroleerd.
Opmerking: Voor de chirurgische ingreep, muizen hielden onder verdoving met vluchtige Isofluraan. Oogbeschadigingen en/of zalven zijn afgeraden tijdens oogbeschadigingen en/of procedures, als zij met de behandelingen en stoffen worden gebruikt interfereren kunnen. Indien nodig, om te voorkomen dat droge-eye, kan een daling van steriele normale zoutoplossing worden toegepast. Hoewel uveal puncties zelfherstellende zijn, was gezorgd tijdens uveal puncties steriliteit met chirurgische instrumenten. Na chirurgische behandeling opgenomen hydratatie met normale zoutoplossing subcutaan, en analgesie met oogbeschadigingen en/of actuele administratie van tetracaïne hydrochloride. De pups mochten sternale lighouding op een verwarming pad herstellen voordat het wordt teruggestuurd naar de zogende moeder, in een schone kooi. Nesten werden gehouden met dezelfde zogende moeder om stress te vermijden.
1. anesthesie
<ol><li>Bereiden de verdoving inductie zaal, Isofluraan verdoving beheren en ervoor zorgen dat er ook een kleine muis masker is gekoppeld. Opmerking: Voer alle dierproeven in overeenstemming met alle toepasselijke ethische vergunningen.</li>
	<li>Prefill de inductie kamer met 3-4% vluchtige Isofluraan in atmosferische lucht. Opmerking: Verschillende verdoving stoffen, andere dan Isofluraan kunnen worden gebruikt, overeenkomstig ethische vergunningen. Vluchtige verdoving procedures dient op een geventileerde bankje of fume hood.</li>
	<li>Plaats een postnatale (P) 12,5-dag oude BALB/c muis pup in de zaal van inductie. Bevestigen dat de apparaten van het narcose is klaar om te leveren Isofluraan aan de inductie-kamer. Opmerking: Muis pups zijn kwetsbaar en beste behandeld door de scruff. De pups bij elkaar houden als een nestje of met de zogende moeder om stress te vermijden.</li>
	<li>Laat de pup te worden volledig verdoofd.</li>
	<li>Zacht, halen de muis pup door de scruff. Opmerking: Houd de kamer van de inductie gesloten op elk moment voor veilige en stabiele inductie.</li>
	<li>De muis naar de knaagdier masker overbrengen. Zorg ervoor dat de verdoving stroom overschakelen van de inductie kamer aan het masker, wanneer de muis te bewegen.</li>
	<li>Uitvoeren van een teen snuifje ter bevestiging van de verdoving.</li>
</ol>2. het doorprikken van Procedure onder chirurgische stereoscoop
<ol><li>Plaats de muis in de positie van de laterale lighouding. Bevestig dat het masker is goed gepositioneerd zodat het oog van de muis in het gezichtsveld van de stereoscoop is.</li>
	<li>Zachtjes draaien de muis hoofd zodat het oog naar de stereoscoop boven ligt. Opmerking: Duidelijke focus van het oog moet gebeuren onder de stereoscoop. Voor positionering, wordt een vergroting van 16 X aanbevolen, terwijl 40 X moet worden gebruikt voor het uitvoeren van de chirurgische ingreep. Als ethische vergunningen mogelijk is, kan het puntje van de snorharen trimmen vergemakkelijken de visualisatie van het oog.</li>
	<li>Met behulp van kleine gelijkmakende pincet, zorgvuldig uitsteken van de pup oog door toepassing van de neerwaartse druk op de oogleden dorsale en ventrale voor het oog.</li>
	<li>Houden een zachte maar stevige ooglid van de pup, met een kleine Tang. Opmerking: Het is aanbevolen om het uitvoeren van de oog-uitsteeksel en deksel te houden met de niet-dominante hand, zoals de punctie procedure moet worden uitgevoerd door de dominante hand.</li>
	<li>U kunt de stereoscoop de cornea limbus opzoeken. Albino BALB/c limbus kan gemakkelijk worden geïdentificeerd door de circulaire vasculaire plexus posterieure naar het hoornvlies.</li>
	<li>Uitvoeren met een 0,25 mm diameter (30 G) schuine naald, een kleine uveal lekke band, in de buurt van de achterste limbal limiet van de uvea. Gebruik slechts het topje van de naald, en niet meer dan de helft de schuine kant (equivalent aan 0,5 mm), doorprikken de uvea. Indien goed uitgevoerd, de uveal puncties zijn zelfsluitende, maar intraoculaire injectie van studie stoffen kan worden beheerd door de dezelfde punctie wond. Opmerking: Als ervaren met muis oogbeschadigingen en/of anatomie, wordt de uveal punctie uitgevoerd tussen het straalvormig lichaam en de ora serrata. Wees voorzichtig tijdens het uitvoeren van de uveal van de lekke band te voorkomen bezwijken van de lens.</li>
	<li>De tweede uveal punctie in de tegenovergestelde site van het oog van de eerste lekke band site uitvoeren. Optimaliseren van de afstand en de positie van de lekke banden; Overweeg 12 en 6 uur lekke banden, met 12 uur wordt als dorsale mogelijk.</li>
	<li>Herhaal de procedure uveal lekke banden elke vier dagen tot P24.5. Vóór elke opeenvolgende uveal punctie, dierlijke status met bijzondere aandacht voor de aanwezigheid van traumatische cataract als gevolg van lens schade tijdens de uveal lekke band, of duidelijk verminderde oogbeschadigingen en/of druk te controleren. Streven naar het uitvoeren van herhalen lekke banden op dezelfde positie als de vorige lekke banden voor optimale effecten.</li>
</ol>3. noninvasive in Vivo toezicht
<ol><li>Voorafgaand aan de punctie of injecties op experimentele dagelijks, anesthetize de muis zoals presteerden boven.</li>
	<li>Met de muis in de positie van de laterale lighouding, moet u voorzichtig het oog uitsteken.</li>
	<li>Focus op iris therapieën met de chirurgische stereoscoop.</li>
	<li>Maak een foto van de iris therapieën met een camera gemonteerd op de chirurgische stereoscoop. Opmerking: Hoewel niet noodzakelijk, inducerende meiose kan handig zijn om te normaliseren iris oppervlakte per dier. Overwegen ethische vergunningen bij het selecteren van een meiose-inducerende agent. Zorgvuldige focus van de iris therapieën vergemakkelijkt verdere kwantitatieve analyse. Een magnitude van 40 X wordt aanbevolen.</li>
</ol>4. post-operatieve zorg
<ol><li>Verwijder de BALB/c pup uit het knaagdier masker en zachtjes over te brengen naar een verwarming pad gelaagd met een chirurgische mat.</li>
	<li>Een daling van 1% tetracaïne oplossing toepassen geperforeerde ogen. Opmerking: Andere pijnstillende oplossingen kunnen worden gebruikt, volgens ethische vergunningen.</li>
	<li>Hydrateren het dier met een subcutane injectie van 200 µL van steriele normale zoutoplossing.</li>
	<li>De pup terug naar de moeder van de verpleging in een kooi schoon muis.</li>
	<li>Toezicht op het proces van de gegevensterugwinning. De pup moet zitten kundig voor deambulate en ga terug naar het nest.</li>
</ol>5. ogen Enucleation
<ol><li>Het dier door cervicale dislocatie euthanaseren. Enucleation en dissectie onder een stereoscoop voor betere visualisatie van de procedure uitvoeren. Opmerking: Verschillende euthanasie procedures kunnen worden gebruikt. Het is raadzaam zich strikt houden aan ethische vergunningen.</li>
	<li>Trek uit elkaar de oogleden ter verbetering van de blootstelling aan het oog.</li>
	<li>Maken een kleine snede (ongeveer 0.5 cm) in de buurt van de canthus van de deksels van het oog met een gebogen Bonn oog schaar.</li>
	<li>Gebruik de blootgestelde periocular ruimte te voegen micro gelijkmakende pincet achter (onder) de hele wereld in de baan.</li>
	<li>Pak het weefsel rondom het oog en trek het voorzichtig naar boven. Vermijd vasthouden aan de oogbol, gebruik van de omliggende weefsels dichter naar de oogkas.</li>
	<li>Plaats de gebogen Bonn oog schaar achter het oog globe in de baan.</li>
	<li>Snijden door de omliggende weefsels tot het oog wordt vrijgegeven uit het stopcontact. Opmerking: Deze techniek dissectie onderhoudt anatomie van het oog en voordelen van latere analyse.</li>
	<li>Overgaan tot de verwijdering van vreemde weefsels van het oog. De verwijdering van vreemde weefsel kan worden uitgevoerd na vaststelling, indien gewenst. Opmerking: BALB/c muizen zijn melanine ontoereikend, dus, te verhogen van contrast, een donkere achtergrond wordt aanbevolen om de dissectie procedure.</li>
	<li>Kort spoelen de geheel-eye in een petrischaal gevuld met steriele-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS).</li>
	<li>Het oog overbrengen in een tube van 2 mL, met 1,5 mL van 4% gebufferd-formaline-oplossing.</li>
	<li>Het oog voor 6 uur op kamertemperatuur vaststellen. Opmerking: Vaststelling verleent de stevigheid van het weefsel en vergemakkelijkt de dissectie van de iris. Tot vaststelling van de tijd moet worden getest en aangepast voor verschillende toepassingen.</li>
</ol>6. Iris dissectie Procedure onder stereoscoop
<ol><li>De kleefpoeders oplossing verwijderen uit de buis met een 1,5 mL kunststof Pasteur Pipet (of soortgelijke), en spoel het oog driemaal met verse PBS.</li>
	<li>Plaats het vaste oog in een zacht droog oppervlak (dissectie tribune) met de voorste kamer naar boven zijn gericht.</li>
	<li>Uitvoeren met een schuine naald 30 G, een ingangspunt posterieure aan de limbus.</li>
	<li>Holding het anterieure segment met een kleine gelijkmakende Tang, breng een tip Clayman-Vannas rechte schaar in de opening eerder gemaakt. Opmerking: Het wordt aanbevolen om de verlostang met de niet-dominante hand, en de schaar met de dominante controle.</li>
	<li>Gesneden terwijl het draaien van het oog met de gelijkmakende pincet, rond de limbus te verwijderen van het achterste segment van het oog. Nota: Uitvoeren van gedeeltelijke bezuinigingen zal toestaan de binnenste punt van de schaar te blijven in het weefsel en sterk vergemakkelijkt het proces.</li>
	<li>Plaats het anterieure segment geconfronteerd met naar beneden, bloot de lens.</li>
	<li>De lens zorgvuldig verwijderen door het met een kleine Tang grijpen en naar boven trekken. Opmerking: Er is een schuine naald inzetbaar te doorprikken en trek de lens.</li>
	<li>Plaats het anterieure segment met het hoornvlies naar beneden en de cut loodrecht op het gezichtsveld.</li>
	<li>Zachtjes grijpen het achterste aan het straalvormig lichaam weefsel met de kleine gelijkmakende pincet.</li>
	<li>Met een rechte schaar Clayman-Vannas, gaat u verder met het trim just anterior to het straalvormig lichaam te verwijderen van het trabecular gevlochten en isoleren van de iris. Controleren of het trabecular gevlochten is verwijderd; de iris moet verplaatsen binnen het hoornvlies.</li>
	<li>Zorgvuldig de anterior oogschelp Pipetteer met behulp van de kleine gelijkmakende Tang, houden van het hoornvlies, aan een 96-wells-plaat met 200 µL van PBS.</li>
	<li>Houd het hoornvlies in de put en de iris ontleden door te spoelen met PBS met een pipet. Opmerking: Als de iris blijft aanhanger aan het hoornvlies, sommige trabecular gevlochten mogelijk heden, en de schuine kant van een naald 30 G kan worden gebruikt om te helpen de iris verdringt.</li>
	<li>Verwijder het hoornvlies uit de 96-Wells met de kleine gelijkmakende Tang, en houd het geïsoleerd iris in de put voor verdere analyse.</li>
	<li>Opslaan van de vrij zwevende iris monsters bij 4 ° C. Opmerking: Ondanks wordt vastgesteld, worden de langetermijnopslag van de vrij zwevende monsters van iris wordt niet aanbevolen.</li>
</ol>7. mogelijke experimentele Read-Outs
<ol><li>Gebruiken om te visualiseren de bloedvaten in de ontleed irissen, vrij zwevende geheel-mount immunohistochemistry kleuring van methoden voor markeringen zoals bloedplaatjes endothelial cel adhesie molecuul (PECAM) -1 of isolectin B4. Als alternatief, perfusie van het gehele lichaam met vasculaire kleuring, zoals TL-geëtiketteerden ultrahoog moleculair gewicht dextrans gebruiken.</li>
	<li>Gebruik in vivo noninvasive beelden uit te voeren in silico flat-montage en kwantificeren van volledige iris therapieën met passende imagingsoftware. Opmerking: Therapieën kan worden gekwantificeerd, zowel in vivo en in vitro, met behulp van densitometrie of met therapieën analyse software9.</li>
	<li>Het verwerken van de hele oogbol voor nucleïnezuren en eiwit extractie, gevolgd door PCR of immunoblotting methoden, uitvoeren van moleculaire analyse van de geperforeerde ogen. Opmerking: Moleculaire analyse van weefsels wordt best uitgevoerd met niet-vaste weefsel, maar dissectie van niet-vaste iris is zeer uitdagend en het gebruik van het hele oog heeft statistisch significante resultaten weergegeven in eerdere studies8.</li>
</ol>

<ol><li>Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+collateral+circulation+in+the+primate+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Anterior collateral circulation in the primate eye.</a> Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).</li>
<li>Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4600930/">Ocular Angiogenesis.</a> J Ophthalmol. 2015, 892043(2015).</li>
<li>Breuss, J. M., Uhrin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-initiated+angiogenesis+and+the+uPA%2FuPAR+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Adh+Migr%22%5BJournal%5D)">VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system.</a> Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).</li>
<li>Rodrigues, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neovascular+glaucoma%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Retina+Vitreous%22%5BJournal%5D)">Neovascular glaucoma: a review.</a> Int J Retina Vitreous. 2, 26(2016).</li>
<li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophth+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).</li>
<li>DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+and+wound+repair%3A+when+enough+is+enough%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukocy+Biol%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis and wound repair: when enough is enough.</a> J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).</li>
<li>Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+angiogenesis%3A+Wound+healing+as+a+model%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Histochem+Cytoc%22%5BJournal%5D)">Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model.</a> Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).</li>
<li>Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., André, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+in+vivo+model+of+puncture-induced+iris+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization.</a> PloS One. 12 (6), e0180235(2017).</li>
<li>Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Computational+Tool+for+Quantitative+Analysis+of+Vascular+Networks%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks.</a> PloS One. 6 (11), (2011).</li>
<li>Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+neovascularization%3A+basic+mechanisms+and+therapeutic+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances.</a> Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).</li>
<li>Kvanta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+angiogenesis%3A+the+role+of+growth+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Ocular angiogenesis: the role of growth factors.</a> Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).</li>
<li>Salman, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrasilicone+Bevacizumab+Injection+for+Iris+Neovascularization+after+Vitrectomy+for+Proliferative+Diabetic+Retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Res%22%5BJournal%5D)">Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).</li>
<li>Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Etiology+and+Features+of+Eyes+with+Rubeosis+Iridis+among+Korean+Patients%3A+A+Population-Based+Single+Center+Study%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study.</a> PloS One. 11 (8), e0160662(2016).</li>
<li>Speier, S., Nyqvist, D., Köhler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li>
<li>Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neovascularization+of+the+Iris+-+an+Experimental-Model+in+Cats%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophth+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats.</a> Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).</li>
<li>Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+Mechanisms+of+Iris+Neovascularization+Secondary+to+Retinal+Vein+Occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol-Chic%22%5BJournal%5D)">Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).</li>
<li>Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Experimental-Model+of+Ectropion+Uveae+and+Iris+Neovascularization+in+the+Cat%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophth+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat.</a> Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).</li>
<li>Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+is+sufficient+to+produce+iris+neovascularization+and+neovascular+glaucoma+in+a+nonhuman+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol-Chic%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).</li>
<li>Paula, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+Rubeosis+Iridis+Induced+by+Intravitreal+Latex-derived+Angiogenic+Fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction.</a> Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).</li>
<li>Takei, A., Ekström, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Transfer+of+Prolyl+Hydroxylase+Domain+2+Inhibits+Hypoxia-inducible+Angiogenesis+in+a+Model+of+Choroidal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization.</a> Sci Rep. 7, 42546(2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

In het huidige protocol, wordt een nieuwe methode voor de inductie van iris vasculaire reactie door uveal punctie gepresenteerd. De punctie wond genezing mechanismen activeert en bevordert vasculaire reacties in de iris10,11. Dit is in overeenstemming met oogbeschadigingen en/of pathologieën, zoals PDR en NVG, waar hevige angiogenic reacties van het netvlies in het achterste segment van het oog in de klinische toestand van rubeosis iridis, een toegenomen vascular...

De iris, samen met het straalvormig lichaam en de vaatvlies, omvat de uvea, dat het meest gevacuoliseerd weefsel van het oog is. Iris therapieën is van essentieel belang bij het handhaven van de homeostase in de voorste kamer van het oog. Als gevolg van overvloedige anastomotic verbindingen tussen slagaders en aders geven iris bloedvaten voedingsstoffen en de levering van zuurstof niet alleen aan de iris zelf, maar ook tot het hele anterieure segment van de oog-1.
De vorming van nieuwe bloedvaten of angiogenese van bestaande, is van fundamenteel belang in fysiologische processen, zoals ontwikkeling en wond genezing2. Angiogenese is fijn geregeld door een veelheid van canonieke factoren, zoals de vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) en plasminogen activator inhibitor (PAI), evenals meerdere inflammatoire factoren en een gebrek aan evenwicht van deze factoren kan leiden tot pathologische angiogenese3.
In het oog is neovascularization de oorzaak van zicht-bedreigende ziekten, zoals proliferatieve diabetische retinopathie (PDR) en neovascular glaucoom (NVG). In deze oogbeschadigingen en/of ziekten, ligt de focal neovascularization vaak in de retinale weefsel, maar het gebrek aan evenwicht in de inflammatoire en angiogenic factoren in beide de posterieure en anterieure oogbeschadigingen en/of kamers van het oog heeft in verband gebracht met rubeosis iridis, de klinische term voor iris pathologische neoangiogenesis4. Deze aandoeningen geven de mogelijkheid van de volwassen iris ondergaan van angiogenese. Bij muizen, oogbeschadigingen en/of therapieën is onvolwassen na de geboorte en blijft rijping postpartum. Deze eigenaardigheid van ontwikkeling wordt benut in de muismodel van zuurstof-geïnduceerde retinopathie, een model dat nauw samen van de Nabootsers van de klinische toestand van retinopathie van prematuriteit5. Bovendien, angiogenese en ontstekingen spelen een sleutelrol in de wond genezing mechanismen6, en wond genezing zelf angiogenese modellen7gekoppeld is geweest.
In deze studie beschrijven we een model van lekke band-geïnduceerde iris neovascularization. Uveal lekke banden worden uitgevoerd van de buitenste grens van de limbus, die iris neovascularization door triggering de wond genezing systeem veroorzaken. Als gevolg van de transparantie van het hoornvlies, de iris therapieën kunnen gemakkelijk in vivo door noninvasive methoden geanalyseerd. Geperforeerde ogen presenteren een verhoging van vasculaire bed in de iris, die gekoppeld aan een stijging van het plasminogen activeren en inflammatoire merkers8 is. Het gepresenteerde model heeft een groot potentieel als een nieuwe tool angiogenese en screening van angiogenic verbindingen te bestuderen en kunt direct in vivo visualisatie van de processen van de angiogenic.

<table><tbody><tr><td>Bonn eye scissors</td><td>Bausch &amp; Lomb</td><td>23060</td><td></td></tr><tr><td>Clayman-Vannas curved scissors</td><td>Bausch &amp; Lomb</td><td>E3383 C</td><td></td></tr><tr><td>Clayman-Vannas straight scissors</td><td>Bausch &amp; Lomb</td><td>E3383 S</td><td></td></tr><tr><td>Objective adapter for camera</td><td>Handcrafted</td><td>N/A</td><td>Of elk systeem dat het aanpassen van een camera aan het microscoop mogelijk maakt</td></tr><tr><td>Heating Pad 100-110 watts</td><td>Non Applicable</td><td>N/A</td><td>Beschikbaar in dierenwinkels/dierenartspraktijken</td></tr><tr><td>Hypodermic 30g beveled needle</td><td>KDM GmBH germany</td><td>911914</td><td></td></tr><tr><td>Iphone 4S</td><td>Apple</td><td>Non Applicable</td><td>Of ander apparaat met hoge resolutie voor beeldregistratie</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>KDG 9623</td><td></td></tr><tr><td>McPherson tying forceps</td><td>Bausch &amp; Lomb</td><td>E1815 S</td><td></td></tr><tr><td>Micro tying forceps</td><td>Bausch &amp; Lomb</td><td>63140</td><td></td></tr><tr><td>Minims tetracaine hydrochloride</td><td>Bausch &amp; Lomb</td><td>N/A</td><td>1 % (w/v) oogdruppels</td></tr><tr><td>Neutral-buffered formalin</td><td>Bioreagens</td><td>0018-40</td><td></td></tr><tr><td>Normal saline solution</td><td>Fresenius Kabi</td><td>210352</td><td>0,9 % (w/v) NaCl in injecteerbaar water</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td>Gebalanceerde en gebufferde PBS pH 7.4</td></tr><tr><td>Petri dish 10 cm</td><td>Starstedt</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 3 cm</td><td>Starstedt</td><td>83.3900</td><td></td></tr><tr><td>Safe Seal Tube 2.0 mL</td><td>Starstedt</td><td>72.685.200</td><td>Of andere buisjes in de stijl van Eppendorf</td></tr><tr><td>TC plate 96-well</td><td>Starstedt</td><td>83.3924</td><td></td></tr><tr><td>Transfer pipette 3.5 mL</td><td>Starstedt</td><td>86.1171</td><td>Of andere Pasteur-pipetstijl</td></tr><tr><td>Univentor 400 anesthesia unit</td><td>Univentor Limited</td><td>N/A</td><td>Of gelijkwaardige flowregulator met inductiekamer en masker voor vluchtige anesthesie</td></tr><tr><td>Wild M650 surgical microscope</td><td>Wild Heerbrugg</td><td>N/A</td><td>Of andere chirurgische of vergrotingsstereoscoop</td></tr></tbody></table>

punctie-geïnduceerde iris neovascularization als een muismodel van rubeosis iridis

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We beschrijven een model van iris punctie-geïnduceerde neovascularization als een algemeen model voor noninvasive evaluatie van angiogenese. Het model is ook relevant voor het targeten van neovascular glaucoom, een gezicht-bedreigende complicatie van diabetische retinopathie. Deze methode is gebaseerd op de inductie van iris vasculaire reactie door een reeks van zelfsluitende uveal lekke banden op BALB/c muizen en profiteert van de postpartum rijping van muis oogbeschadigingen en/of therapieën. Muis pups ondergaan uveal lekke banden vanaf postnatale dag 12,5, wanneer de pups natuurlijk hun ogen, tot postnatale dag 24,5 open. Als gevolg van de transparantie van het hoornvlies, kan iris therapieën worden geanalyseerd gemakkelijk door de tijd door noninvasive in vivo methoden. De semi-transparante iris voor BALB/c muizen kunnen bovendien, flatmounted met minimale aspecifieke achtergrondkleuring p.a. gedetailleerde immunohistologic. In dit model, angiogenese is vooral het gevolg van de inflammatoire en plasminogen activeren van systemen. De punctie-geïnduceerde model is de eerste voor het opwekken van iris neovascularization in kleine knaagdieren, en heeft het voordeel van het toestaan van directe noninvasive in vivo analyse van het angiogenic-proces. Bovendien, het model kan worden gecombineerd met angiogenic modulerende stoffen, waarin wordt benadrukt het potentieel in de studie van angiogenese met een perspectief in vivo .

Albino BALB/c muis pups op P12.5 werden onderworpen aan uveal lekke banden, elke vierde dag herhaald (experimentele dag 0, 4, 8, 12), tot P24.5. P27.5, muizen werden euthanized en irissen zorgvuldig ontleed (experimentele dag 15). Foto's van muis ogen werden genomen met een camera die is aangesloten op een chirurgische stereoscoop voordat alle punctie series in experimentele dagelijks te beoordelen noninvasive evaluatie van de vasculaire reactie van iris. Uveal puncties induceren een vasc...

Iris neovascularization, een gemeenschappelijke complicatie van ischemische retinale ziekte, kan leiden tot zicht-bedreigende neovascular glaucoom. Hier beschrijven we een lymfkliertest protocol voor experimentele iris neovascularization die kan worden gebruikt voor noninvasive evaluatie van angiogenese-modulerende stoffen induceren.

Punctie-geïnduceerde Iris Neovascularization als een muismodel van Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Het algemene doel van deze procedure is het induceren van irisvasculatuur, wat directe in-vivo visualisatie van angiogeneseprocessen mogelijk maakt. Deze methode kan helpen om belangrijke vragen in de oogheelkunde te beantwoorden, met name bij neovasculaire ziekten. Het grote voordeel van deze techniek is dat albinomuizen worden gebruikt om directe in-vivo visualisatie van de bloedvaten mogelijk te maken.Deze methode kan inzicht geven in oculair neovasculair oedeem. Het kan ook worden toegepast als een algemeen model van angiogenese, zoals het testen van nieuwe angiogenesetherapieën. Visuele demonstratie van deze methode is cruciaal, omdat de irisdissectie uitdagend is vanwege de kleine omvang van het muizenoog.Met oefening kan het echter worden beheerst. Nadat een P12.5 muis is verdoofd en voorbereid op de procedure, plaats hem in de laterale buikligging onder een stereoscoop en controleer of de masker goed is gepositioneerd. Het oog moet het gezichtsveld vullen.Duidelijk scherpstellen van het oog is onmisbaar. Gebruik vervolgens kleine snoertangen in de niet-dominante hand om het oog voorzichtig uit te steken door neerwaartse druk op de oogleden uit te oefenen, dorsaaal en ventra

puncture-induced-iris-neovascularization-as-mouse-model-rubeosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

In this video, an anesthetized rat undergoes an ocular procedure where magnetic beads are injected into the anterior chamber under a magnetic field to block the iridocorneal angle. This blockage obstructs the trabecular meshwork, preventing aqueous humor drainage and leading to increased intraocular pressure, damaging the retinal ganglion cells and optic nerve. This develops a glaucoma-like condition.

Experimental Glaucoma Induction via Iridocorneal Angle Obstruction In a Mouse Model

Source: Lani-Louzada, R., et al., Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates the induction and monitoring of elevated intraocular pressure (IOP) in a rat model. The process involves cauterizing the limbal blood vessels, resulting in vessel occlusion and elevated IOP. The rat is then allowed to recover, and IOP is regularly monitored in both the experimental and control eyes for comparison.

 Induction of Elevated Intraocular Pressure in a Rat Model

Hier presenteren we het protocol voor laser-geïnduceerde choroïdale neovascularisatie (CNV) bij muizen, een experimenteel model dat de vasculaire kenmerken van neovasculaire leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD) nastreeft. Eenmaal onder de knie, kan het op betrouwbare en effectieve wijze CNV induceren als modelsysteem om verschillende experimentele maatregelen te testen.

Een muismodel voor Laser-geïnduceerde Choroïdale Neovascularisatie

Dit artikel beschrijft een werkwijze voor het induceren van retinale ischemie-reperfusieschade door verhoogde intraoculaire druk bij muizen. Retinale ischemie-reperfusieschade door verhoogde intraoculaire druk dient om menselijke pathologieën gekenmerkt door gecompromitteerd zuurstof en van voedingsstoffen in het netvlies model, waardoor onderzoekers potentiële cellulaire mechanismen en therapieën voor menselijke ziekten van het netvlies neurovasculaire eenheid onderzocht.

Een muismodel van retinale ischemie-reperfusie letsel door misbruik van intra-oculaire druk

Hier presenteren we het nut van longitudinale in vivo imaging in de follow-up van de morfologische veranderingen van laser-geïnduceerde choroidal neovascularization in muizen.

In Vivo Multimodale beeldvorming en analyse van Laser-geïnduceerde Choroidal Neovascularization muismodel

Chronische oculaire hypertensie wordt geïnduceerd door het toepassen van een circumlimbal hechtdraad bij ratten en muizen, wat leidt tot functionele en structurele verslechtering van de retinale peesknoopcellen overeenstemming met glaucoom.

Een Model van glaucoom veroorzaakt door Circumlimbal hechtdraad bij ratten en muizen

Zuurstofgeïnduceerde retinopathie (OIR) kan worden gebruikt om ischemische netvliesaandoeningen zoals retinopathie van prematuriteit en proliferatieve diabetische retinopathie te modelleren en om te dienen als model voor proof-of-concept studies bij het evalueren van antiangiogene geneesmiddelen voor neovasculaire ziekten. OIR induceert robuuste en reproduceerbare neovascularisatie in het netvlies die kan worden gekwantificeerd.

Zuurstofgeïnduceerde retinopathiemodel voor ischemische netvliesziekten bij knaagdieren

In dit rapport presenteren we een protocol waarmee de onderzoeker een muismodel van intraoculaire uveïtis kan genereren. Meer algemeen aangeduid als experimentele auto-immune uveïtis (EAU), dit gevestigde model legt vele aspecten van de menselijke ziekte vast. Hierin zullen we beschrijven hoe de progressie van de ziekte kan worden geïnduceerd en gevolgd met behulp van verschillende uitlezingen.

Experimentele auto-immune uveïtis: een intraoculair inflammatoir muismodel

Hier beschrijven we een geoptimaliseerd protocol voor retinale ader occlusie met behulp van rose bengal en een lasergeleid retinaal beeldvormingscoopsysteem met aanbevelingen om de reproduceerbaarheid ervan in genetisch gemodificeerde stammen te maximaliseren.

Optimalisatie van het Retinal Vein Occlusion Mouse Model om variabiliteit te beperken

Het doel van dit protocol is het karakteriseren van een nieuw model van glaucoomneurodegeneratie op basis van 360° thermische cauterisatie van de limbale vasculaire plexus, die subacute oculaire hypertensie induceert.

Volledige cirkel Cauterisatie van limbale vasculaire plexus voor chirurgisch geïnduceerd glaucoom bij knaagdieren

Dit protocol modelleert retinale ischemie-reperfusieschade in een muizenoog door retinale ischemie te induceren via canulatie van de voorste kamer en intraoculaire drukverhoging, gevolgd door intraoculaire druknormalisatie om de reperfusie te starten.

Inductie van retinale ischemie-reperfusieschade in een muisoogmodel

Leer irisneovascularisatie induceren in albino muizen voor in-vivo visualisatie van angiogenese. Deze methode helpt onderzoekers bij het bestuderen van oculaire neovasculaire ziekten en het testen van nieuwe therapieën.

Punctie-geïnduceerde Iris Neovascularization als een muismodel van Rubeosis Iridis

Meer video's verkennen