Name: Retroductal Nanoparticle injectie aan de lymfkliertest submandibulaire klier (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-03T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Leer retroductale nanopartikelinjectie in de submandibulaire klier van muizen met een 32 gauge katheter. Deze methode omzeilt systemische circulatie en biedt een reproduceerbare aanpak voor lokaal geneesmiddelonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Onderzoek gemeld in deze publicatie werd gesteund door het nationale Instituut van Dental en craniofaciale onderzoek (NIDCR) en het National Cancer Institute (NCI) van de National Institutes of Health onder Award nummer R56 DE025098, UG3 DE027695 en CA206296 van de F30. De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijk de officiële standpunten van de National Institutes of Health. Dit werk werd ook ondersteund door de NSF DMR-1206219 en de IADR Innovation in mondelinge zorg Award (2016).
Wij wil Jayne Gavrity bedanken voor haar hulp bij het uitvoeren van IVIS experimenten. We bedank Karen Bentley voor haar inbreng en hulp bij het uitvoeren van EM. We zouden graag bedanken Pei-Lun Weng voor zijn hulp met IHC. Wij wil Matthew Ingalls bedanken voor zijn hulp ter voorbereiding van de figuur. We zouden graag bedanken Dr. Elaine Smolock en Emily Wu voor kritische lezing van dit manuscript.

Alle in vivo procedures zoals hieronder beschreven werden goedgekeurd door het Comité van de Universiteit voor dier middelen aan de University of Rochester, Rochester, NY.
1. voorbereiding
<ol><li>32G intracraniële katheter buis met draad inzet, gesneden 3 cm van de buis om te vormen van een schuine einde, ongeveer 45° op de lengteas. Bevestigen dat de draad ten minste 1 cm langer dan de slang is.</li>
	<li>Laden 50 µL van PSMA nanoparticle oplossing (Figuur 1) of ander materiaal dat injectie, in een injectiespuit Hamilton. Verklein de kans op barotrauma tijdens de injectie en hechten de katheter buis, met de stilet verwijderd, naar de spuit en verdrijf dood volume.</li>
	<li>Inspecteer de injectie oplossing om ervoor te zorgen dat de nanoparticle is volledig solvated om te voorkomen dat ductaal obstructie na de toediening.</li>
	<li>Bereid atropine-oplossing 0,1 mg/ml. Opmerking: Omdat atropine lichtgevoelig is en na verloop van tijd degradeert, deze oplossing moet worden gemaakt van de dag van de injectie en beschermd tegen licht tot toegediend.</li>
</ol>2. toegang tot en het visualiseren van ductaal ingangspunt
<ol><li>Weeg C57/BL6 muizen met behulp van een analytische balans.</li>
	<li>Met een 0,5 mL injectiespuit met 29G x ½" naald, anesthetize muizen met een intraperitoneally geïnjecteerd steriele zoutoplossing van 100 mg/kg ketamine en 10 mg/kg xylazine. Ga naar de volgende stap wanneer de muis niet meer reageert op prikkels, die in het algemeen optreedt binnen 5 tot 10 minuten na de injectie. Opmerking: Deze procedure kan ook worden uitgevoerd onder Isofluraan, maar vergt een aangepaste neus kegel die toegang tot de mondholte biedt.</li>
	<li>Om te voorkomen dat droogte tijdens de procedure, smeermiddel van toepassing voor de ogen en plaatst u de muisaanwijzer in een liggend op een aangepaste podium. Opmerking: Als u wilt behouden van passende voorwaarden voor intra-orale procedure, hulpmiddelen moeten worden ontsmet of gesteriliseerd vóór elk gebruik.</li>
	<li>Open de mondholte door het veiligstellen van de maxillaire snijtanden over een metalen balk en gebruiken van een elastische band om te passen neerwaartse spanning achter de mandibulaire snijtanden (figuur 2A).</li>
	<li>De muis onder de ontleden Microscoop uitlijnen zodat de onderkant van de kaak is gevisualiseerd.</li>
	<li>Om het verbreden van de mond, gebruiken een aangepaste, gebogen stalen oprolmechanisme spanning bilateraal om de buccale mucosa.</li>
	<li>Om te visualiseren de submandibulaire papillen, pak en zachtjes tillen de tong van de verdieping van de mond met behulp van botte pincet. Opmerking: De papillen wordt weergegeven als twee bleke uitsteeksels onder de tong (figuur 2B).</li>
	<li>Plaatsen om te verlichten de visualisatie en de verdere manipulatie in de mondholte, katoen tussen de tong en de buccale mucosa.</li>
</ol>3. ductaal Cannulation en plaatsing van de lijn
<ol><li>Met fijne, begrijpen gekromde pincet, katheter buis met het verzonken vlak van de draad. Uitlijnen voor optimale Handbediening tijdens cannulation, de slang met de kromming van de verlostang (figuur 3A).</li>
	<li>Met behulp van de Microscoop ontleden, verplaats de pincet en draad in het gezichtsveld. Opmerking: De draad moet worden uitsteken van de buis.</li>
	<li>Zachtjes druk uitoefenen in de basis van één submandibulaire Papil met behulp van de draad inzet voor de productie van een kleine, oppervlakkige, mucosal lekke band (0.076 mm doorsnede) die latere vermelding van de katheter buis (0,25 mm doorsnede vergemakkelijken zal). Als er resistentie is opgetreden, snijd u verse schuine tips over zowel de buizen en de inzet van de draad met een scherpe ontleden schaar.</li>
	<li>Na de post, trekken de stilet en de aanwezigheid van speeksel op de site van de punctie met behulp van de Microscoop ontleden, bevestigen. Vermijd krachtige of plotselinge verplaatsing (intrekking of invoegpositie) van de stilet die kan bloeden of ductaal integriteit in gevaar brengen.</li>
	<li>Intrekken van de stilet binnen de buis (figuur 3B).</li>
	<li>Om ervoor te zorgen dat injectie leidingen zal passen in de Wharton buis openen, invoegen buizen met de stilet als een rigide gids in het eerder gemaakte lek (Figuur 2 C). Opmerking: Als niet snel uitgevoerd, lokale zwelling kan voorkomen dat opnieuw invoegen.</li>
	<li>Om te voorkomen dat de tegendruk van langdurige ductaal obstructie, door de buis te trekken. Inspecteren om te controleren dat er een opening, zichtbaar onder microscopie, kan worden gezien in de submandibulaire Papil. Als zichtbaar bloeden optreedt, verwijdert u de pistolen en probeer te brengen vanaf stap 3.2 op de tegengestelde submandibulaire papillen.</li>
	<li>Beheren zonder de muis te bewegen, intraperitoneale injectie van 1 mg/kg atropine oplossing, voor het verminderen van de speekselvloed tijdens de procedure. Wacht 5-10 min.</li>
	<li>Pak het eind van de slang van de spuit, en invoegen in de opening met behulp van de ontleden Microscoop (Figuur 3 c). Als weerstand wordt aangetroffen, snijdt u een verse schuine einde aan de buis en reattempt.</li>
	<li>Zodra de slang binnen de submandibulaire Papil is, langzaam verder 3-5 mm in de buis. Laat de slang van de verlostang.</li>
	<li>Ter verbetering van de afdichting tussen de slang en de submandibulaire papil, drogen de interface door zachtjes bevlekken met gaas voor 1 min.</li>
	<li>Inspecteren om te bevestigen dat de positie van de buis niet tijdens het drogen is verschoven.</li>
</ol>4. injectie
<ol><li>Injecteren van materiaal met een snelheid van 10 µL/min. inspecteren om te bevestigen dat de muis ingetogen blijft en geen tekenen van nood (figuur 2D vertoont). Opmerking: Injecties van 15-50 µL worden goed verdragen. Injectie van grotere volumes kan leiden tot barotrauma.</li>
	<li>Na de injectie, spuit druk voor 5 min om de bewaring van materiaal binnen de Wharton buis en SMG (Figuur 4) te blijven. Inspecteer de submandibulaire papilla periodiek om ervoor te zorgen dat de buizen niet de ductaal opening heeft verlaten.</li>
	<li>Met behulp van fijne pincet, pak en zachtjes trekken de slang uit de submandibulaire papillen. Opmerking: Het is normaal om te observeren wat vloeistof uitgang van de papillen.</li>
	<li>Het oprolmechanisme en katoen uit de mondholte alvorens de muis uit het werkgebied verwijderen. Opmerking: Het dier mag niet worden overgelaten zonder toezicht totdat het voldoende bewustzijn te handhaven sternale lighouding heeft herwonnen. Bovendien zorgen dat de muis niet is ondergebracht bij andere muizen tot volledig hersteld.</li>
</ol>5. onderzoek en analyse
Opmerking: Een in vivo Imaging systeem (IVIS) kan worden gebruikt ter beoordeling van de retentie van fluorescently geëtiketteerde nanodeeltjes na injectie (zoals getoond 1 uur en 24 uur na de injectie in Figuur 5).
<ol><li>Verwijderen de ventrale vacht overliggende de SMGs door scheren of met behulp van een chemische ontharingsmiddelen om beter te visualiseren fluorescent signaal binnen de SMG via de huid. Opmerking: Na euthanasie, SMG weefsel ook geoogst kan worden opgelost ('s nachts in 4% paraformaldehyde) en gekleurd met behulp van immunohistochemistry te bevestigen persistentie van fluorescently geëtiketteerde NP één dag na injectie (Figuur 6).</li>
</ol>

<ol><li>Miranda-Rius, J., Brunet-Llobet, L., Lahor-Soler, E., Farre, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+Secretory+Disorders%2C+Inducing+Drugs%2C+and+Clinical+Management%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Salivary Secretory Disorders, Inducing Drugs, and Clinical Management.</a> International Journal Of Medical Sciences. 12 (10), 811-824 (2015).</li>
<li>Acauan, M. D., Figueiredo, M. A. Z., Cherubini, K., Gomes, A. P. N., Salum, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy-induced+salivary+dysfunction%3A+Structural+changes%2C+pathogenetic+mechanisms+and+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy-induced salivary dysfunction: Structural changes, pathogenetic mechanisms and therapies.</a> Archives of Oral Biology. 60 (12), 1802-1810 (2015).</li>
<li>Dirix, P., Nuyts, S., Vander Poorten, V., Delaere, P., Van den Bogaert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+xerostomia+after+radiotherapy+on+quality+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Supportive+Care+in+Cancer%22%5BJournal%5D)">The influence of xerostomia after radiotherapy on quality of life.</a> Supportive Care in Cancer. 16 (2), 171-179 (2008).</li>
<li>Vissink, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+management+of+salivary+gland+hypofunction+and+xerostomia+in+head-and-neck+cancer+patients%3A+successes+and+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology+Biology+Physics%22%5BJournal%5D)">Clinical management of salivary gland hypofunction and xerostomia in head-and-neck cancer patients: successes and barriers.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 78 (4), 983-991 (2010).</li>
<li>Delporte, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+fluid+secretion+after+adenoviral-mediated+transfer+of+the+aquaporin-1+cDNA+to+irradiated+rat+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Increased fluid secretion after adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA to irradiated rat salivary glands.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (7), 3268-3273 (1997).</li>
<li>Samuni, Y., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+in+salivary+glands%3A+from+the+bench+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Gene delivery in salivary glands: from the bench to the clinic.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1812 (11), 1515-1521 (2011).</li>
<li>Beahm, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+approaches+to+the+submandibular+gland%3A+A+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical approaches to the submandibular gland: A review of literature.</a> International Journal of Surgery. 7 (6), 503-509 (2009).</li>
<li>Zheng, C., Shinomiya, T., Goldsmith, C. M., Di Pasquale, G., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convenient+and+reproducible+in+vivo+gene+transfer+to+mouse+parotid+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+diseases%22%5BJournal%5D)">Convenient and reproducible in vivo gene transfer to mouse parotid glands.</a> Oral diseases. 17 (1), 77-82 (2011).</li>
<li>Zheng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+Radiation-Induced+Salivary+Hypofunction+Following+hKGF+Gene+Delivery+to+Murine+Submandibular+Glands%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Prevention of Radiation-Induced Salivary Hypofunction Following hKGF Gene Delivery to Murine Submandibular Glands.</a> Clinical Cancer Research. 17 (9), 2842-2851 (2011).</li>
<li>Okazaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+rat+salivary+gland+tissue+repair+by+basic+fibroblast+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Acceleration of rat salivary gland tissue repair by basic fibroblast growth factor.</a> Archives of Oral Biology. 45 (10), 911-919 (2000).</li>
<li>Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle-mediated+gene+silencing+confers+radioprotection+to+salivary+glands+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo.</a> Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).</li>
<li>Cotrim, A. P., Sowers, A., Mitchell, J. B., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+irradiation-induced+salivary+hypofunction+by+microvessel+protection+in+mouse+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Prevention of irradiation-induced salivary hypofunction by microvessel protection in mouse salivary glands.</a> Molecular Therapy. 15 (12), 2101-2106 (2007).</li>
<li>Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersed+donor+salivary+gland+cells+are+widely+distributed+in+the+recipient+gland+when+infused+up+the+ductal+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnic+%26+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree.</a> Biotechnic & Histochemistry. 84 (6), 253-260 (2009).</li>
<li>Grundmann, O., Fillinger, J. L., Victory, K. R., Burd, R., Limesand, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+radiation+therapy-induced+salivary+gland+dysfunction+in+mice+by+post+therapy+IGF-1+administration%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Restoration of radiation therapy-induced salivary gland dysfunction in mice by post therapy IGF-1 administration.</a> BMC Cancer. 10, 417-417 (2010).</li>
<li>Limesand, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-Like+Growth+Factor-1+Preserves+Salivary+Gland+Function+After+Fractionated+Radiation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology+Biology+Physics%22%5BJournal%5D)">Insulin-Like Growth Factor-1 Preserves Salivary Gland Function After Fractionated Radiation.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 78 (2), 579-586 (2010).</li>
<li>Marmary, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26759233">Radiation-induced loss of salivary gland function is driven by cellular senescence and prevented by IL-6 modulation.</a> Cancer Research. , (2016).</li>
<li>Baum, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+responses+to+adenoviral-mediated+transfer+of+the+aquaporin-1+cDNA+for+radiation-induced+salivary+hypofunction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Early responses to adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA for radiation-induced salivary hypofunction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (47), 19403-19407 (2012).</li>
<li>Arany, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pro-apoptotic+gene+knockdown+mediated+by+nanocomplexed+siRNA+reduces+radiation+damage+in+primary+salivary+gland+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Pro-apoptotic gene knockdown mediated by nanocomplexed siRNA reduces radiation damage in primary salivary gland cultures.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 113 (6), 1955-1965 (2012).</li>
<li>Benoit, D. S. W., Henry, S. M., Shubin, A. D., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pH-responsive+polymeric+siRNA+carriers+sensitize+multidrug+resistant+ovarian+cancer+cells+to+doxorubicin+via+knockdown+of+polo-like+kinase+1%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">pH-responsive polymeric siRNA carriers sensitize multidrug resistant ovarian cancer cells to doxorubicin via knockdown of polo-like kinase 1.</a> Molecular pharmaceutics. 7 (2), 442-455 (2010).</li>
<li>Malcolm, D. W., Varghese, J. J., Sorrells, J. E., Ovitt, C. E., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effects+of+Biological+Fluids+on+Colloidal+Stability+and+siRNA+Delivery+of+a+pH-Responsive+Micellar+Nanoparticle+Delivery+System%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">The Effects of Biological Fluids on Colloidal Stability and siRNA Delivery of a pH-Responsive Micellar Nanoparticle Delivery System.</a> ACS Nano. , (2017).</li>
<li>Baranello, M. P., Bauer, L., Benoit, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28styrene-alt-maleic+anhydride%29-based+diblock+copolymer+micelles+exhibit+versatile+hydrophobic+drug+loading%2C+drug-dependent+release%2C+and+internalization+by+multidrug+resistant+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Poly(styrene-alt-maleic anhydride)-based diblock copolymer micelles exhibit versatile hydrophobic drug loading, drug-dependent release, and internalization by multidrug resistant ovarian cancer cells.</a> Biomacromolecules. 15 (7), 2629-2641 (2014).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fracture-Targeted+Delivery+of+%CE%B2-Catenin+Agonists+via+Peptide-Functionalized+Nanoparticles+Augments+Fracture+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Fracture-Targeted Delivery of β-Catenin Agonists via Peptide-Functionalized Nanoparticles Augments Fracture Healing.</a> ACS Nano. 11 (9), 9445-9458 (2017).</li>
<li>Baranello, M. P., Bauer, L., Jordan, C. T., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s12195-015-0391-x">Micelle Delivery of Parthenolide to Acute Myeloid Leukemia Cells.</a> Cellular and Molecular Bioengineering. 8 (3), 455-470 (2015).</li>
<li>Kuriki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cannulation+of+the+Mouse+Submandibular+Salivary+Gland+via+the+Wharton%27s+Duct%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), e3074(2011).</li>
<li>Nair, R. P., Zheng, C., Sunavala-Dossabhoy, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retroductal+Submandibular+Gland+Instillation+and+Localized+Fractionated+Irradiation+in+a+Rat+Model+of+Salivary+Hypofunction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Retroductal Submandibular Gland Instillation and Localized Fractionated Irradiation in a Rat Model of Salivary Hypofunction.</a> Journal of Visualized Experiments. (110), (2016).</li>
<li>Wang, Y., Malcolm, D. W., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+and+sustained+delivery+of+siRNA%2FNPs+from+hydrogels+expedites+bone+fracture+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Controlled and sustained delivery of siRNA/NPs from hydrogels expedites bone fracture healing.</a> Biomaterials. 139 (Supplement C), 127-138 (2017).</li>
<li>Hoffman, M. D., Van Hove, A. H., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradable+hydrogels+for+spatiotemporal+control+of+mesenchymal+stem+cells+localized+at+decellularized+bone+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Degradable hydrogels for spatiotemporal control of mesenchymal stem cells localized at decellularized bone allografts.</a> Acta Biomaterialia. 10 (8), 3431-3441 (2014).</li>
<li>Nguyen, C. Q., Yin, H., Lee, B. H., Chiorini, J. A., Peck, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL17%3A+potential+therapeutic+target+in+Sjogren%27s+syndrome+using+adenovirus-mediated+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%22%5BJournal%5D)">IL17: potential therapeutic target in Sjogren's syndrome using adenovirus-mediated gene transfer.</a> Laboratory Investigation. 91 (1), 54-62 (2011).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Retroductal injectie is essentieel voor gelokaliseerde drug levering aan de speekselklier. Deze techniek heeft toepassingen in de screening van de therapeutische middelen voor de voorwaarden waaronder het syndroom van Sjogren en RIH9,10,28. Directe drug bezorging binnen de SMG via retroductal injectie biedt een belangrijk voordeel ten opzichte van systemische toediening in haar potentieel uit-target effecten, met inbegrip van im...

Speekselklier dysfunctie heeft vele etiologie, met inbegrip van het Sjögren-syndroom, een auto-immuun gemedieerde verlies van functionele secretoire weefsel en straling geïnduceerde hyposalivation (RIH), een gemeenschappelijke sequella van hoofd en nek kanker radiotherapie1. Verlies van speeksel functie als gevolg van beide voorwaarden predisposes personen aan mondelinge en systemische infectie, tandbederf, spijsvertering en slikken dysfunctie, bijzondere waardevermindering van meningsuiting en depressie1,2,3. Dientengevolge lijdt levenskwaliteit aanzienlijk, met interventies beperkt tot palliatie van symptomen in plaats van genezen4. Voor het onderzoek naar nieuwe therapieën in vivo, is het van belang voor het beheer van biologische actieve stoffen rechtstreeks naar de speekselklier.
Retroductal injectie is een waardevolle methode om biologische actieve stoffen leveren rechtstreeks aan de speekselklieren en testen van de werkzaamheid in ziekte, letsel of onder normale weefsel homeostase. De drie grote speekselklieren zijn de oorspeekselklier (PG), de submandibulaire (SMG) en de sublinguaal (SLG), alle van welke lege in de mondholte via uitscheidingsmechanisme leidingen. De anatomie van de RattenUitrustingen SMG toelaat rechtstreekse toegang via de cannulation van de Wharton duct, gelegen in de vloer van de mond onder de tong5. Na de cannulation, de solvated drugs kan rechtstreeks aan de SMG worden toegediend. Na retroductal de levering, extra klierweefsel diffusie wordt beperkt door de omliggende weefsel capsule die de uitwisseling van materiaal regelt met omringende structuren6. De SMG zijn koker ook bij de mens zijn gestructureerd en routinematig tijdens SMG chirurgie en parotitis7worden benaderd. Bij mensen en muizen is de PG eveneens toegankelijk via Stensen de buis in de buccale mucosa-8.
In lymfkliertest modellen van RIH, is SMG retroductal injectie gebruikt voor het leveren van therapeutics met inbegrip van groeifactoren, primaire cellen adenovirale vectoren, cytokines en antioxidant verbindingen te moduleren van de cellulaire reactie op schade en de daaruit voortvloeiende te verminderen weefsel schade5,9,10,11,12,13,14,15,16. Het meest opvallende klinische succes van retroductal injectie is het beheer van adenovirale vector naar directe uitdrukking van een water-kanaal (Aquaporin-1; AQP1) bij patiënten na de straling voor hoofd en nek kanker17.
Eerder, hebben we ontwikkeld en de werkzaamheid van een retroductally geïnjecteerd polymere nanoparticle-siRNA systeem ter bescherming van speekselklier functie van RIH11,18,19,20komt te staan. Als een verlengstuk van ons afgelopen werk, hier, tonen wij ons protocol voor retroductal SMG injectie met behulp van een fluorescently geëtiketteerde nanoparticle (NP) kan laden en leveren anders slecht oplosbare drugs21,22, 23.
We hebben gesynthetiseerd de NP uit een copolymeer van de diblock bestaat uit poly (styreen-alt-maleïnezuuranhydride anhydride)-b-poly(styrene) (PSMA) via de omkeerbare toevoeging keten fragmentatie (vlot) polymerisatie, zoals eerder beschreven21. Door middel van de uitwisseling van het oplosmiddel monteren deze polymeren spontaan zelf in micel NP structuren met een hydrofobe interieur en hydrofiele exterieur21. De NPs worden aangeduid met Texas-rood fluorophore wilt toestaan de verificatie van NP levering in de klieren zonder dat het dier offeren. Live dieren imaging en SMG immunohistochemistry wordt weergegeven na 1 uur en 1 dag na de injectie.
Dit bijgewerkt en reproduceerbaar cannulation protocol mogelijk moet maken dat anderen te bereiken retroductal injectie. We verwachten dat deze verfijnde techniek cruciaal voor in vivo studies en therapeutische ontwikkeling24,25 worden zal.

<table><tbody><tr><td>Pilocarpine hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6503</td><td>Pilocarpine</td></tr><tr><td>Student Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-9</td><td>Spring Scissors for Tracheostomie</td></tr><tr><td>Sterile Saline Solution</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>Saline</td></tr><tr><td>Dumont #7 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>Gebogene pincetten</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>Rechte pincetten</td></tr><tr><td>Standard Pattern Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td>Blunte pincetten</td></tr><tr><td>Fine Scissors- Tungsten Carbide</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>Dissectie schaar</td></tr><tr><td>Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Capillaire buizen</td></tr><tr><td>Lubricant Eye Ointment</td><td>Refresh</td><td>N/A</td><td>Refresh Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Goat polyclonal anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 Antilichaam</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-Fenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>ver6.0</td><td>Statistische Software</td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>Applicateur voor oogzalf</td></tr><tr><td>0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2"</td><td>BD</td><td>7629</td><td>Spuit voor intraperitoneale injectie</td></tr></tbody></table>

retroductal nanoparticle injectie aan de lymfkliertest submandibulaire klier

Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland

Twee gemeenschappelijke doelen van speekselklier therapeutics zijn preventie en behandeling van weefsel disfunctie na een auto-immune of straling schade. Door lokaal leveren bioactieve stoffen aan de speekselklieren, kunnen grotere concentraties van weefsel veilig worden bereikt versus systemische toediening. Bovendien, uit doelweefsel effecten van extra klierweefsel accumulatie van materiaal drastisch kunnen worden verminderd. In dit verband is retroductal injectie een veel gebruikte methode voor het onderzoeken van zowel de speekselklier biologie en de pathofysiologie. Retroductal beheer van groeifactoren, primaire cellen, adenovirale vectoren en kleine molecuul drugs heeft aangetoond dat klier functie ondersteund bij het vaststellen van letsel. Wij hebben eerder de werkzaamheid van een retroductally geïnjecteerd nanoparticle-siRNA strategie te handhaven klier functie na bestraling getoond. Hier, een zeer effectieve en reproduceerbare methode voor het beheren van nanomaterialen aan de lymfkliertest submandibulaire klier door Wharton de koker is gedetailleerd (Figuur 1). We beschrijven toegang tot de mondholte en een overzicht van de noodzakelijke stappen voor het cannulate Wharton de koker, met verdere opmerkingen bijeenkomen kwaliteitscontroles gedurende de hele procedure.

Retroductal injectie kan worden gebruikt voor het beheer van NPs op de lymfkliertest SMG (Figuur 1). Hier, leveren wij 50 µg PSMA NPs aangeduid met Texas Red fluorophore.
Juiste plaatsing van de muis kunt facile toegang en visualisatie van de verdieping van de mond (figuur 2A-B). De submandibulaire mannetjesvissen worden aangemerkt als twee vlezige uits...

Lokale drug levering aan de submandibulaire klieren is van belang in begrip speekselklier biologie en voor de ontwikkeling van nieuwe therapieën. We presenteren een bijgewerkte en gedetailleerde retroductal injectie protocol, ter verbetering van de nauwkeurigheid van de levering en experimentele reproduceerbaarheid. De hier vermelde toepassing is de levering van polymere nanodeeltjes.

Retroductal Nanoparticle injectie aan de lymfkliertest submandibulaire klier

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally ...

Het algemene doel van deze procedure is om nanomaterialen direct toe te dienen aan de submandibulaire klier van muizen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een directe toediening van verbindingen naar de submandibulaire klier mogelijk maakt, terwijl de systemische circulatie wordt omzeild. De implicaties van deze techniek zijn gericht op de behandeling van disfunctie van de speekselklieren na bestralingsbehandeling voor hoofd- en nekkwaadaardige tumoren.Over het algemeen kunnen personen die nieuw zijn met deze methode worden uitgedaagd door het lokaliseren en canuleren van de submandibulaire ductus terwijl het dier gerust is. Om met deze procedure te beginnen, snijdt u drie centimeter van een 32 gauge intracraniale katheterslang met draadinzet om een schuine kant te vormen van ongeveer 45 graden ten opzichte van de lange as. Bevestig dat de draad minimaal een centimeter langer is dan de slang.Het creëren van een schuine rand aan de slang zal ductale canuleerbaarheid vergemakkelijken. Als de slang tijdens de procedure gebogen raakt, moet een nieuwe schuine rand worden gesneden. Laad vervolgens 50 microliter PSMA-nanopartikeloplossing of ander injectiemateriaal in een Hamilton-slangpomp.Om de kans op burrow-trauma tijdens injectie te verkleinen, bevestigt u de katheterslang aan de slangpomp en verwijdert u het dode volume. Inspecteer de injectieoplossing om ervoor te zorgen dat de nanodeeltje volledig gesolvateerd is om ductale obstructie te voorkomen. Bereid vervolgens een atropine-oplossing van 0,1 milligram per milliliter.Om het ductale toegangspunt te visualiseren, plaatst u een verdovingsmuis in de rugligging op een aangepaste houder. Breng vervolgens zalf aan op de ogen om uitdroging tijdens de procedure te voorkomen. Hierna bevestigt u de maxillaire snijtanden over een metalen balk en gebruikt u een elastisch bandje om neerwaartse spanning achter de mandibulaire snijtanden toe te passen.Lign de muis onder de dissectiemicroscoop om de basis van de kaak te visualiseren. Om de mond te verbreden, gebruikt u een aangepaste gebogen stalen retractor om bilaterale spanning op het buccale slijmvlies toe te passen. Om de submandibulaire papil te visualiseren, grijpt u en tilt u voorzichtig de tong van de bodem van de mond met stompe pincetten.Plaats een stukje katoen tussen de tong en het buccale slijmvlies om verdere manipulatie binnen de mondholte mogelijk te maken. Om ductale canuleerbaarheid en lijnplaatsing uit te voeren, grijpt u de katheterslang met een draadinzet. Voor optimale handmatige controle tijdens canuleerbaarheid, lijnt u de slang uit met de kromming van de pincetten.Gebruik de dissectiemicroscoop om de pincetten en draad in het zichtveld te verplaatsen. Gebruik de draadinzet om voorzichtig druk uit te oefenen op de basis van een submandibulaire papil om een kleine oppervlakkige mucosale punctie te produceren die later de toegang van de katheterslang zal vergemakkelijken. Als weerstand wordt ondervonden, snijdt u verse schuine punten op zowel de slang als de draadinzet met scherpe dissectie-schaar.Na de toegang trekt u de stilet terug en bevestigt u vervolgens met de dissectiemicroscoop de aanwezigheid van speeksel op de punctieplaats. Trek vervolgens de stilet verder terug in de slang. Vermijd forse of plotselinge bewegingen van de stilet die kunnen leiden tot bloeding of schade aan de ductale integriteit.Om ervoor te zorgen dat de injectieslang in de opening van de Wharton-ductus past, steekt u een slang met de stilet als stijve gids in de eerder gemaakte punctie. Om terugdruk van langdurige ductale obstructie te voorkomen, trekt u de slang terug. Zorg eronder de microscoop voor dat een opening in de submandibulaire papil te zien is.Als er zichtbaar bloeden optreedt, verwijdert u de stilet en probeert u de procedures op de tegenoverliggende submandibulaire papil opnieuw. Bedien vervolgens, zonder de muis te verplaatsen, een milligram per kilogram atropine-oplossing intraperitoneaal om verheffing tijdens de procedure te verminderen. Wacht vervolgens vijf tot tien minuten.Onder de dissectiemicroscoop steekt u de slangpomp in de opening. Als weerstand wordt ondervonden, snijdt u een nieuwe schuine kant op de slang en probeert u het opnieuw. Zodra de slang zich binnen de submandibulaire papil bevindt, brengt u deze langzaam drie tot vijf millimeter in de ductus.Laat vervolgens de slang los van de pincetten. Om de afdichting tussen de slang en de submandibulaire papil te verbeteren, droogt u het grensvlak door een minuut lang voorzichtig te deppen met gaas. Controleer of de positie van de slang niet is verschoven tijdens het drogen.Injecteer in deze procedure het materiaal met een snelheid van 10 microliter per minuut. Zorg ervoor dat de muis gerust blijft en geen tekenen van stress vertoont. Houd na de injectie vijf minuten lang de druk in de slangpomp om de retentie van het materiaal in de Wharton-ductus en de submandibulaire klier te verbeteren.Inspecteer de submandibulaire papil regelmatig om ervoor te zorgen dat de slang niet uit de ductale opening komt. Het handhaven van de injectiedruk zal de effectiviteit van retroductale levering verbeteren. Grijp en trek met behulp van fijne pincetten de slang voorzichtig uit de submandibulaire papil.Verwijder de retractor en het katoen uit de mondholte voordat u de muis van de houder wegbeweegt. Om de nanodeeltje-levering te verifiëren, toont het in vivo beeldvormingssysteem de lateralisatie van het rode fluorescerende signaal naar de behandelde zijde van de muis een uur na injectie. En deze afbeelding toont dat het nanodeeltje-signaal 24 uur na injectie significant is afgenomen.Om de aanwezigheid van nanodeeltjes in de submandibulaire klieren 24 uur na injectie te bevestigen, werden ze gesneden en bekeken met behulp van fluorescerend beeldvorming. Hier getoond zijn de niet geïnjecteerde controle-submandibulaire klieren die zijn gekleurd voor aquaporine 5 en keritine vijf, respectievelijk markering voor secretoire acini en ductale cellen. Bij retroductaal geïnjecteerde submandibulaire klieren tonen aquaporine vijf en keritine vi

retroductal-nanoparticle-injection-to-the-murine-submandibular-gland

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Een protocol voor de canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via kanaal van de Wharton is beschreven. Voor dit experiment wordt het trypaan blauw-oplossing gebruikt als een verver om aan te tonen hoe deze techniek effectief infusies levert in de gerichte klier, en om de betrouwbaarheid van deze nieuwe aanpak voorstellen als een potentieel klinisch drug / celtherapie voor het herstel van de speekselklieren.

Canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via Duct de Wharton&#39;s

Deze video beschrijft een intraductale injectietechniek waarbij we injectiemix leveren in de kanalen van de borstklieren van muizen.

Intraductale injectie: het leveren van injectie mix in de kanalen van de muis borstklier

The video demonstrates an ultrasound-guided injection technique for administering therapeutic drugs into the salivary glands of a human patient.

An Ultrasound-Guided Injection of Therapeutic Drugs into Human Salivary Glands

Een protocol voor de niet-invasieve intraductale afgifte van waterige reagentia voor de muis borstklier wordt beschreven. De methode maakt gebruik van gelokaliseerde injectie in de tepels van melkklieren targeting mamma-kanalen specifiek. Deze techniek kan worden aangepast voor verschillende verbindingen waaronder siRNA, chemotherapeutische middelen en kleine moleculen.

Intraductale Injectie voor Gelokaliseerde Drug Delivery naar de muis borstklier

Lymfeklieren zijn de immunologische weefsels die de immuunrespons orkestreren en een cruciaal doelwit zijn voor vaccins. Biomaterialen zijn gebruikt om lymfeklieren beter te richten en de levering van antigenen of hulpstoffen te controleren. Dit artikel beschrijft een techniek die deze ideeën combineert om biocompatibele polymeerdeeltjes in lymfeklieren te injecteren.

Intra-lymfeklierinjectie van biologisch afbreekbare polymeerdeeltjes

Hypofunctie van de speekselklieren, een belangrijk nadelig effect van radiotherapie in het hoofd- en nekgebied, vermindert de kwaliteit van leven van een patiënt. Het aantonen van de werkzaamheid van nieuwe therapieën in diermodellen is een voorwaarde voordat er een klinische overgang plaatsvindt. Dit protocol beschrijft retroductale toediening en lokale bestraling van submandibulaire rattenklieren.

Retroductal Submandibulaire Gland Blaasinstillatie en gelokaliseerde gefractioneerde bestraling in een Rat Model van het speeksel hypofunction

We beschrijven een protocol om operatief bloot en stabiliseren de lymfkliertest submandibulaire speekselklier voor intravital geschikt zijn met behulp van rechtop intravital microscopie. Dit protocol is gemakkelijk aan te passen aan andere exocrine klieren van het hoofd en nek regio van muizen en andere kleine knaagdieren.

Voorbereiding van lymfkliertest submandibulaire speekselklier rechtop Intravital microscopie

Speekselklieren zijn voorgesteld als een weefseldoelplaats voor gentherapie, vooral op het gebied van vaccinatie door genoverdracht. We demonstreren genafgifte in een niet-menselijk primatenmodel met behulp van retrograde parotisinfusie.

Retrograde parotisklierinfusie via het kanaal van Stensen in een niet-menselijke primaat voor vectored genafgifte

In dit protocol werd de endotheelbarrièrefunctie van de submandibulaire klier (SMG) geëvalueerd door verschillende moleculair gewogen fluorescerende tracers in vivo in de hoekaders van proefdiermodellen te injecteren onder een laserscanmicroscoop met twee fotonen.

In vivo Vasculaire permeabiliteitsdetectie bij submandibulaire klier van muizen

Immunofluorescerende beeldvorming wordt beperkt door het vermogen om complexe, tijdsafhankelijke biologische processen in slechts één momentopname in de tijd waar te nemen. Deze studie schetst een live-imaging-benadering die wordt uitgevoerd op nauwkeurig gesneden plakjes submandibulaire klier van muizen. Deze aanpak maakt de real-time observatie mogelijk van cel-cel interacties tijdens homeostase en de processen van regeneratie en herstel.

Ondervraging van cel-celinteracties in de speekselklier via ex vivo beeldvorming van levende cellen

Hier beschrijven we het protocol voor in vivo toediening van magnetische ijzeroxide nanodeeltjes die RNA-oligomeren vervoeren naar uitgezaaide borstkanker in diermodellen, waardoor een klinisch haalbare benadering wordt geboden voor de therapeutische uitschakeling van oncogene nucleïnezuren.

Monitoring van de accumulatie van nanodrugs bij borstkankermetastasen bij muizen

Leer retroductale nanopartikelinjectie in de submandibulaire klier van muizen met een 32 gauge katheter. Deze methode omzeilt systemische circulatie en biedt een reproduceerbare aanpak voor lokaal geneesmiddelonderzoek.

Retroductal Nanoparticle injectie aan de lymfkliertest submandibulaire klier

Meer video's verkennen