Name: Gefractioneerde lymfkliertest speeksel functioneel-diagnostiek via Pilocarpine stimulatie volgende straling (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: Leer murine speekselfunctie evalueren met pilocarpine-stimulatie voor onderzoek naar speekselklierdysfunctie. Deze methode omvat tracheotomie, speekselcollectie en klierdissectie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Onderzoek gemeld in deze publicatie werd gesteund door het nationale Instituut van Dental en craniofaciale onderzoek (NIDCR) en het National Cancer Institute (NCI) van de National Institutes of Health onder Award nummer R56 DE025098, UG3 DE027695 en CA206296 van de F30. De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijk de officiële standpunten van de National Institutes of Health. Dit werk werd ook ondersteund door de NSF DMR-1206219 en de IADR Innovation in mondelinge zorg Award (2016).
Wij wil Dr. Eri Maruyama en Andrew Hollomon bedanken voor hun hulp met speeksel collectie. We zouden graag bedanken Pei-Lun Weng voor zijn hulp met klier dissectie. Wij wil Matthew Ingalls bedanken voor zijn hulp ter voorbereiding van de figuur. We zouden graag bedanken Dr. Elaine Smolock en Emily Wu voor kritische lezing van dit manuscript.

Alle in vivo procedures zoals hieronder beschreven werden goedgekeurd door het Comité van de Universiteit voor dier middelen aan de University of Rochester, Rochester. NY.
1. voorbereiding
<ol><li>Met behulp van een analytische balans, weeg 20 mg pilocarpine. Los het op in 2 mL steriele zoutoplossing in een microcentrifuge buis. Opmerking: Omdat pilocarpine lichtgevoelig is en activiteit na verloop van tijd verliest, deze oplossing moet worden bereid van de dag van de injectie, en beschermd tegen licht tot toegediend.</li>
	<li>Gebruik een analytische balans, wegen en alle collectie buizen en glazen capillairen aanwijzen. Het aantal collectie buizen en glazen capillairen moet overeenkomen met het aantal muizen.</li>
</ol>2. tracheostomy
<ol><li>Weeg C57/BL6 muizen met behulp van een analytische balans.</li>
	<li>Met een 0,5 mL injectiespuit met 29G x ½" naald, anesthetize muizen met een intraperitoneally geïnjecteerd steriele zoutoplossing van 100 mg/kg ketamine en 10 mg/kg xylazine. Ga naar de volgende stap wanneer de muis niet meer reageert op prikkels (d.w.z. de afwezigheid van de pedaal terugtrekking reflex), die in het algemeen optreedt binnen 5 tot 10 minuten na de injectie.</li>
	<li>Na verstrekking smeermiddel op een katoen-tipped applicator, voorzichtig toepassing op ogen en plaatst u de muisaanwijzer in een liggende positie in het werkgebied. De narcose dier moet worden bewaard op warme oppervlak. Opmerking: Alle stappen worden uitgevoerd bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Beveilig de neus, ledematen en staart naar het werkgebied met behulp van chirurgische tape.</li>
	<li>Reinigen en nat van de nek met een alcohol doekje. Opmerking: Dit zal helpen voorkomen dat bont invoeren van latere insnijdingen.</li>
	<li>Het verhogen van de huid van de nek ventral midline met pincet, maken een kleine, oppervlakkige knippen met behulp van ontleden schaar. Begeleiden van de schaar in de opening en langzaam open de messen subcutaan te scheiden van weefsel vliegtuigen.</li>
	<li>Houden van de huid aan de orde gesteld, zorgvuldig gesneden tot 1 cm onder de mond.</li>
	<li>Maak twee zijdelingse insnijdingen minderwaardig en superieure aspecten van de eerste snede. Met behulp van Tang, weerspiegelen zachtjes weg de huid zodat toegang tot de structuren van het hoofd en de nek.</li>
	<li>Met behulp van de ontleden Microscoop op 8 X vergroting, visualiseren de submandibulaire klieren (middellijn: Figuur 1).</li>
	<li>Met behulp van fijne pincet, til voorzichtig de klieren om de vier infrahyoid (riem) spieren bevolkingsspreiding in de luchtpijp bloot te stellen. Vermijd scheuren of verstoren van de omliggende therapieën of uitscheidingsmechanisme leidingen.</li>
	<li>Als het verzamelen van speeksel van meer dan één muis, herhaalt u stappen 2.1-2.10 met elke muis voordat u verdergaat. Opmerking: Deze procedure kan worden veilig uitgevoerd op maximaal 5 muizen gelijktijdig.</li>
	<li>Met een kleine ontleden schaar, door het mediale gedeelte van riem spieren tijdens uw verblijf zo dicht bij de middellijn mogelijk te verwijderen. Snij alleen maar liefst nodig om te visualiseren luchtpijp en riem spieren uit de weg te houden tijdens de procedure. Vermijd plukt geen nabijgelegen schepen, want als er volume uitputting ondergeschikt aan belangrijke bloeding, pilocarpine zal niet effectief in het inducerende secretie.</li>
	<li>Weerspiegelen de spieren van de band uit de buurt van de luchtpijp.</li>
	<li>Visualiseren van het strottenhoofd, de luchtpijp en de schildklier. Zorg ervoor dat de luchtpijp duidelijk van de bevolkingsspreiding weefsel.</li>
	<li>Breng een horizontale snede in de luchtpijp inferieur/posterior aan de schildklier met behulp van kleine ontleden schaar. Zorg ervoor dat de luchtwegen octrooi- en duidelijk van vloeistof.</li>
</ol>3. speeksel collectie
<ol><li>Verwijder de tape in de buurt van mond en hoek dissectie etappe naar beneden (45°, cranially) om te helpen met speeksel stroom.</li>
	<li>Intraperitoneale injectie van 10 µL/g lichaam gewicht pilocarpine voor een totale dosis van 100 mg/kg met een 0,5 mL injectiespuit met 29G x ½" naald, uitvoeren.</li>
	<li>Een timer te starten. Als dosering meerdere muizen, verlaagt u overlappingstijd door snel te verplaatsen en door het hebben van een assistent gelijktijdig injecteren de resterende muizen.</li>
	<li>Open de mond voor capillair toegang met behulp van standaard pincet.</li>
	<li>Zodra een kraal van speeksel in de mond wordt waargenomen, plaats het proximale uiteinde van de capillaire buis in de vloeistof, met het distale uiteinde in een verzamelen buis geplaatst onder het ontleden podium (beide buizen gewogen) geplaatst. Opmerking: Bij de vrouwelijke muizen C57/BL6 6-10 weken van leeftijd, bruto speekselvloed treedt op binnen 2 min van pilocarpine injectie.</li>
	<li>Als speeksel is gebouw in de mond, maar niet door de buis stroomt, probeer te brengen vorige stap. Zorg ervoor dat de buis niet direct tegen een mucosal oppervlakte, die de inlaat belemmeren kan wordt geplaatst.</li>
	<li>Verzamelen van speeksel voor een totaal van 12 min na pilocarpine stimulatie. Ervoor zorgen dat de stoma duidelijk blijft. Opmerking: Verhoogde ademhalingsvolume en afscheidingen (speeksel, urine, fecale) zijn normaal gedurende deze tijd.</li>
	<li>Als muizen hebben depressief speeksel functie (bijv., als gevolg van letsel of interventie), de resterende vloeistof uit de mond overbrengen in de buis van de collectie met behulp van een P200-micropipet. Als verzamelt van meerdere muizen, zorg dat de uiteinden worden gewijzigd.</li>
	<li>Het record van het gewicht van de verzamelde speeksel plus buizen 12 min na pilocarpine injectie.</li>
</ol>4. klier dissectie
<ol><li>Euthanaseren muizen door CO2 euthanasie (zoals beschreven in de AVMA richtsnoeren voor euthanasie van dieren: 2013 editie) gevolgd door Thoracotomie, zorg voor het behoud van de structuren van het hoofd en de nek. Vermijd daarom cervicale dislocatie als een methode van euthanasie.</li>
	<li>Plaats de muis in een liggende positie in het werkgebied. Klieren in de oorspronkelijke site verplaatsen via de luchtpijp (Figuur 1).</li>
	<li>Met behulp van een ontleden Microscoop onder 8 X vergroting, het visualiseren van de belangrijkste klieren: de PG, SMG en SLG. Bepalen dat de PG diffuus is, liggend aan de SMG en SLG laterale om te onderscheiden van de klieren tijdens de dissectie. Opmerking: Als de ontrafeling van de PG, dit moet gebeuren eerst omdat het de minste gedefinieerd en meest waarschijnlijk worden gescheurd.</li>
	<li>Begrijpen van de staart van de PG met pincet, te trekken uit de buurt van onderliggende structuren, en zachtjes toe te passen spanning voordat het hoofd van de PG met het ontleden van schaar te knippen.</li>
	<li>Een inbreuk op de capsule rond de SMGs met pincet. Zachtjes de linker- en SMG te scheiden.</li>
	<li>Gratis het dorsale aspect van het SMG van zelfklevend nonglandular weefsel met pincet.</li>
	<li>Verwijder de SMG vanaf de nek door te tekenen van de Wharton buis strak met een tang en snijden van de koker met het ontleden van de schaar.</li>
	<li>Zachtjes de SLG te scheiden van het gebruik van pincet SMG. Opmerking: De SLG is in het superolateral aspect van het SMG.</li>
	<li>Gebruik een analytische evenwicht, opnemen SMG gewichten.</li>
</ol>

<ol><li>Bradley, P., O'Hara, J. <a target="_blank" href="http://www.surgeryjournal.co.uk/article/S0263-9319(15)00194-5/pdf">Diseases of the salivary glands.</a> Surgery (Oxford). 33 (12), 614-619 (2015).</li>
<li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+enhancement+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Caries+Research%22%5BJournal%5D)">Salivary enhancement therapies.</a> Caries Research. 38 (3), 241-246 (2004).</li>
<li>Konings, A. W. T., Coppes, R. P., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+salivary+gland+radiosensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology+Biology+Physics%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of salivary gland radiosensitivity.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 62 (4), 1187-1194 (2005).</li>
<li>Burlage, F. R., Coppes, R. P., Meertens, H., Stokman, M. A., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parotid+and+submandibular%2Fsublingual+salivary+flow+during+high+dose+radiotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Radiotherapy+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Parotid and submandibular/sublingual salivary flow during high dose radiotherapy.</a> Radiotherapy and Oncology. 61 (3), 271-274 (2001).</li>
<li>Aure, M. H., Konieczny, S. F., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+gland+homeostasis+is+maintained+through+acinar+cell+self-duplication%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Salivary gland homeostasis is maintained through acinar cell self-duplication.</a> Developmental Cell. 33 (2), 231-237 (2015).</li>
<li>Aure, M. H., Arany, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+Glands%3A+Stem+Cells%2C+Self-duplication%2C+or+Both%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Salivary Glands: Stem Cells, Self-duplication, or Both?</a> Journal of Dental Research. 94 (11), 1502-1507 (2015).</li>
<li>Ono, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+effects+of+cevimeline+and+pilocarpine+on+salivary+mechanisms%2C+cardiovascular+response+and+thirst+sensation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Distinct effects of cevimeline and pilocarpine on salivary mechanisms, cardiovascular response and thirst sensation in rats.</a> Archives of Oral Biology. 57 (4), 421-428 (2012).</li>
<li>Proctor, G. B., Carpenter, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+salivary+gland+function+by+autonomic+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Auton+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Regulation of salivary gland function by autonomic nerves.</a> Auton Neuroscience. 133 (1), 3-18 (2007).</li>
<li>Nezu, A., Morita, T., Tojyo, Y., Nagai, T., Tanimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+agonistic+effects+of+pilocarpine+on+Ca%282%2B%29+responses+and+salivary+secretion+in+the+submandibular+glands+of+live+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Physiology%22%5BJournal%5D)">Partial agonistic effects of pilocarpine on Ca(2+) responses and salivary secretion in the submandibular glands of live animals.</a> Experimental Physiology. 100 (6), 640-651 (2015).</li>
<li>Urita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rebamipide+and+mosapride+enhance+pilocarpine-induced+salivation%5BTitle%5D)+AND+%22North+American+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Rebamipide and mosapride enhance pilocarpine-induced salivation.</a> North American Journal of Medical Sciences. 1 (3), 121-124 (2009).</li>
<li>Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle-mediated+gene+silencing+confers+radioprotection+to+salivary+glands+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo.</a> Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).</li>
<li>Kondo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+differences+in+the+acinar+cells+of+the+murine+major+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Functional differences in the acinar cells of the murine major salivary glands.</a> Journal of Dental Research. 94 (5), 715-721 (2015).</li>
<li>Evans, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+impairment+of+salivation+in+Na%2B%2FK%2B%2F2Cl-+cotransporter+%28NKCC1%29-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Severe impairment of salivation in Na+/K+/2Cl- cotransporter (NKCC1)-deficient mice.</a> Journal of Biological Chemistry. 275 (35), 26720-26726 (2000).</li>
<li>Delanian, S., Lefaix, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+radiation-induced+fibroatrophic+process%3A+therapeutic+perspective+via+the+antioxidant+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Radiotherapy+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">The radiation-induced fibroatrophic process: therapeutic perspective via the antioxidant pathway.</a> Radiotherapy and Oncology. 73 (2), 119-131 (2004).</li>
<li>Guchelaar, H. J., Vermes, A., Meerwaldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%3A+pathophysiology%2C+clinical+course+and+supportive+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Support+Care+Cancer%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, clinical course and supportive treatment.</a> Support Care Cancer. 5 (4), 281-288 (1997).</li>
<li>Lin, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+short-term+%CE%B3-irradiation+effects+on+mouse+salivary+gland+function+using+a+new+saliva+collection+device%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Measuring short-term γ-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device.</a> Archives of Oral Biology. 46 (11), 1085-1089 (2001).</li>
<li>Montenegro, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+differences+between+humans+and+rodents+in+the+ability+to+concentrate+salivary+nitrate%3A+Implications+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+biology%22%5BJournal%5D)">Profound differences between humans and rodents in the ability to concentrate salivary nitrate: Implications for translational research.</a> Redox biology. 10, 206-210 (2016).</li>
<li>Choi, J. S., Park, I. S., Kim, S. K., Lim, J. Y., Kim, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+and+Functional+Changes+of+Salivary+Gland+Dysfunction+After+Radioactive+Iodine+Ablation+in+a+Murine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Morphometric and Functional Changes of Salivary Gland Dysfunction After Radioactive Iodine Ablation in a Murine Model.</a> Thyroid. 23 (11), 1445-1451 (2013).</li>
<li>Imamura, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+pilocarpine-induced+saliva+secretion+by+adrenergic+agonists+in+ICR+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Pharmacology+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of pilocarpine-induced saliva secretion by adrenergic agonists in ICR mice.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 39 (12), 1038-1043 (2012).</li>
<li>Ma, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+Secretion+of+Saliva+in+Transgenic+Mice+Lacking+Aquaporin-5+Water+Channels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Defective Secretion of Saliva in Transgenic Mice Lacking Aquaporin-5 Water Channels.</a> Journal of Biological Chemistry. 274 (29), 20071-20074 (1999).</li>
<li>Parkes, M. W., Parks, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supersensitivity+of+salivation+in+response+to+pilocarpine+after+withdrawal+of+chronically+administered+hyoscine+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Supersensitivity of salivation in response to pilocarpine after withdrawal of chronically administered hyoscine in the mouse.</a> British Journal of Pharmacology. 46 (2), 315-323 (1972).</li>
<li>Nishiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Up-Regulated+PAR-2-Mediated+Salivary+Secretion+in+Mice+Deficient+in+Muscarinic+Acetylcholine+Receptor+Subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Up-Regulated PAR-2-Mediated Salivary Secretion in Mice Deficient in Muscarinic Acetylcholine Receptor Subtypes.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 320 (2), 516(2007).</li>
<li>Yang, B., Song, Y., Zhao, D., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotype+analysis+of+aquaporin-8+null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Phenotype analysis of aquaporin-8 null mice.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 288 (5), C1161-C1170 (2005).</li>
<li>Kamiya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-Ray-Induced+Damage+to+the+Submandibular+Salivary+Glands+in+Mice%3A+An+Analysis+of+Strain-Specific+Responses%5BTitle%5D)+AND+%22BioResearch+Open+Access%22%5BJournal%5D)">X-Ray-Induced Damage to the Submandibular Salivary Glands in Mice: An Analysis of Strain-Specific Responses.</a> BioResearch Open Access. 4 (1), 307-318 (2015).</li>
<li>Patel, R. M., Varma, S., Suragimath, G., Zope, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+and+Comparison+of+Salivary+Calcium%2C+Phosphorous%2C+Alkaline+Phosphatase+and+pH+Levels+in+Periodontal+Health+and+Disease%3A+A+Cross-sectional+Biochemical+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+and+Diagnostic+Research%22%5BJournal%5D)">Estimation and Comparison of Salivary Calcium, Phosphorous, Alkaline Phosphatase and pH Levels in Periodontal Health and Disease: A Cross-sectional Biochemical Study.</a> Journal of Clinical and Diagnostic Research. 10 (7), ZC58-ZC61 (2016).</li>
<li>Droebner, K., Sandner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+salivary+secretion+assay+in+F508del+mice--the+murine+equivalent+of+the+human+sweat+test%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Modification of the salivary secretion assay in F508del mice--the murine equivalent of the human sweat test.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 12 (6), 630-637 (2013).</li>
<li>Lamy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+mouse+whole+saliva+soluble+proteome+induced+by+tannin-enriched+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Proteome+Science%22%5BJournal%5D)">Changes in mouse whole saliva soluble proteome induced by tannin-enriched diet.</a> Proteome Science. 8 (1), 65(2010).</li>
<li>Mahomed, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+mucin+immunohistochemistry+in+salivary+gland+tumors+and+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Recent advances in mucin immunohistochemistry in salivary gland tumors and head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 47 (9), 797-803 (2011).</li>
<li>Kohlgraf, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+SPLUNC1+in+saliva+with+an+xMAP+particle-based+antibody+capture+and+detection+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Quantitation of SPLUNC1 in saliva with an xMAP particle-based antibody capture and detection immunoassay.</a> Archives of Oral Biology. 57 (2), 197-204 (2012).</li>
<li>Maimets, M., Bron, R., de Haan, G., van Os, R., Coppes, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+ex+vivo+expansion+and+post-irradiation+regenerative+potential+of+juvenile+and+aged+salivary+gland+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Radiotherapy+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Similar ex vivo expansion and post-irradiation regenerative potential of juvenile and aged salivary gland stem cells.</a> Radiotherapy and Oncology. , (2015).</li>
<li>Lombaert, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+salivary+gland+function+after+stem+cell+transplantation+in+irradiated+glands%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Rescue of salivary gland function after stem cell transplantation in irradiated glands.</a> PLoS One. 3 (4), e2063(2008).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

We presenteren een meerstaps methode voor de beoordeling van de speekselklier functie, die kan worden toegepast op de studie van de klier letsel en therapeutics. Onze procedure impliceert tracheostomy, speeksel collectie en klier dissectie, die allemaal experimentele toepassingen die een geïntegreerde studie van biologie van de speekselklier kunnen ondersteunen. Bijvoorbeeld is lymfkliertest tracheostomy gebruikt voor het beheer van de algemene luchtweg tijdens procedures belemmeren de mondholte.
<p class="jove_conte...

Speekselklier aandoeningen omvatten syndromen van dysregulated of verminderde secretie leidt tot overproductie (sialorrhea) of Onderdelenoverzicht (xerostomia en hyposalivation) van speeksel1. In beide gevallen is er een belang bij het verbeteren van ons begrip van de speekselklier biologie naar het einddoel van therapeutische ontwikkeling2.
De speekselklieren zijn zeer radiosensitive organen, en vaak zijn beschadigd tijdens het hoofd en de nek kanker radiotherapie, wat leidt tot permanente droge mond (xerostomie)3,4. In tegenstelling tot andere radiosensitive weefsels, echter de Verwerkingsfrequentie van de speekselklier is relatief laag, en het mechanisme van secretoire verlies is slecht begrepen5,6. In de omgeving van deze unieke letsel vereist weefsels regeneratie en stralingsbescherming strategieën speeksel functionele beoordeling. Experimenteel, is lymfkliertest speeksel collectie een bijzonder waardevol instrument bij de evaluatie van de klier reactie op zowel de straling en de therapeutische agenten.
Hier presenteren we een methode voor het uitvoeren en kwantificeren van de secretie van speeksel gestimuleerd met behulp van pilocarpine, een potente muscarinerge agonist7. Pilocarpine stimuleert het autonome zenuwstelsel te induceren klier secretie8,9. Om deze test op passende wijze te voeren, is een tracheostomy nodig om ervoor te zorgen dat de muis onderhoudt een patent luchtwegen gedurende de hele procedure, en verminderen de risico's van verstikking en aspiratie van gebundelde afscheidingen in de mondholte10.
Dit is een terminal procedure, culminerend in de verwijdering van de drie grote speekselklieren: de oorspeekselklier (PG), de submandibulaire (SMG) en de sublinguaal (SLG). Voor functionele studies, klier gewichten worden opgenomen en worden vaak gebruikt om te normaliseren speeksel meting11,12,13. Deze gegevens zijn bijzonder belangrijk in straling studies, waarin de atrofie van de klier een verwachte uitkomsten14,15 is
Er is variabiliteit in de literatuur met betrekking tot hoe gestimuleerde secretie van speeksel wordt uitgevoerd en gerapporteerd16. Bijvoorbeeld, pilocarpine doses binnen de literatuur bereik ten minste drie ordes van grootte17,18,19,20,21,22,23. Hier presenteren we een geoptimaliseerde hooggedoseerde pilocarpine protocol met de bedoeling van betere reproduceerbaarheid in uitvoering van de methode, evenals het verstrekken van een modulair platform van technieken (tracheostomy speeksel collectie en klier dissectie) die aangepast worden kunnen nodig.
Naast protocol demonstratie omvatten wij representatieve functionele gegevens van speeksel stroom op 2 weken na gefractioneerde straling (4 doses van 6,85 Gy) naar de SMG-regio.

<table><tbody><tr><td>Pilocarpine hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6503</td><td>Pilocarpine</td></tr><tr><td>Student Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-9</td><td>Spring Scissors for Tracheostomie</td></tr><tr><td>Sterile Saline Solution</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>Saline</td></tr><tr><td>Dumont #7 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>Gebogene pincet</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>Rechte pincet</td></tr><tr><td>Standard Pattern Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td>Blunte pincet</td></tr><tr><td>Fine Scissors- Tungsten Carbide</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>Dissectie schaar</td></tr><tr><td>Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Capillaire buisjes</td></tr><tr><td>Lubricant Eye Ointment</td><td>Refresh</td><td>N/A</td><td>Refresh Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Goat polyclonal anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 Antilichaam</td></tr><tr><td>DAPI (4'6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>ver6.0</td><td>Statistisch software</td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>Applicateur voor oogzalf</td></tr><tr><td>0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2"</td><td>BD</td><td>7629</td><td>Spuit voor intraperitoneale injectie</td></tr></tbody></table>

gefractioneerde lymfkliertest speeksel functioneel-diagnostiek via pilocarpine stimulatie volgende straling

Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation

Hyposalivation wordt meestal waargenomen in de auto-immune reactie van het Sjögren syndroom of volgende straling letsel van de grote speekselklieren. In deze gevallen blijven vragen met betrekking tot de pathogenese van de ziekte en effectieve interventies. Een geoptimaliseerde techniek waarmee functionele beoordelingvan de speekselklieren is van onschatbare waarde voor het onderzoeken van exocrine klier biologie, dysfunctie en therapeutics. Hier presenteren we een stapsgewijze aanpak voor het uitvoeren van pilocarpine speeksel secretie, met inbegrip van tracheostomy en de dissectie van de drie grote lymfkliertest speekselklieren gestimuleerd. We detail ook de juiste lymfkliertest hoofd en nek anatomie die toegankelijk is tijdens deze technieken. Deze aanpak is schaalbaar, zodat meerdere muizen tegelijk worden verwerkt dus verbetering van de efficiëntie van de workflow. Wij streven naar het verbeteren van de reproduceerbaarheid van deze methodes, die allemaal verder toepassingen binnen het veld. Naast speeksel collectie bespreken we statistieken voor kwantificeren en normaliseren van de functionele capaciteit van deze weefsels. Representatieve gegevens zijn opgenomen uit submandibulaire klieren met depressief speekselklier functie 2 weken na gefractioneerde straling (4 doses van 6,85 Gy).

Wanneer het uitvoeren van hooggedoseerde pilocarpine gestimuleerd speeksel-collectie, is het belangrijk om te houden van de luchtwegen om te voorkomen dat aspiratie of verstikking van afscheidingen in de mondholte. Een schematische voorstelling van de tracheostomy wordt verstrekt (Figuur 1). Na de tracheale insnijding van moet de stoma blijven duidelijk van de weefsels en vloeistoffen.
Om capillaire...

We presenteren een gedetailleerde aanpak voor het uitvoeren van speeksel inzameling, met inbegrip van lymfkliertest tracheostomy en het isolement van de drie grote speekselklieren.

Gefractioneerde lymfkliertest speeksel functioneel-diagnostiek via Pilocarpine stimulatie volgende straling

Hyposalivation is commonly observed in the autoimmune reaction of Sj&#246;gren's syndrome or following radiation injury to the major salivary glands. In ...

Het algemene doel van deze procedure is om de speekselfunctie van muizen te evalueren door pilocarpine-stimulatie. Deze methode kan worden toegepast om zowel de natuurlijke geschiedenis van speekselklierdisfunctie te begrijpen als om de effectiviteit van eventuele potentiële interventies te testen. Ons protocol biedt een modulair platform van technieken, inclusief muis tracheotomie, speekselverzameling en klierdissectie.Klinisch heeft deze techniek implicaties voor studies die droge mond of overproductie van speeksel beoordelen. En het kan ook worden toegepast op andere intra-orale procedures die luchtwegbeheersing vereisen. Degenen die dit protocol voor het eerst leren, kunnen de tracheotomie en klierdissectie uitdagend vinden.We hopen dat deze video je zal helpen de juiste isolatietechniek van de klier te leren, evenals de relevante anatomie. Gebruik een analytische weegschaal om 20 milligram pilocarpine af te wegen en los het vervolgens op in 2 milliliter steriel zoutoplossing. Pilocarpine-oplossingen moeten vers worden gemaakt op de dag van gebruik.Weeg vervolgens alle verzamelvaten voor de procedure af en weeg de muis om hem nauwkeurig te doseren. Gebruik de C57 zwarte 6-stam. Nadat de muis is verdoofd en de anesthesie is bevestigd met de teenprik, breng ooglijm aan met een wattenstaafje en plaats de muis in rugligging.Bevestig vervolgens zijn ledematen, neus en staart met chirurgisch plakband. Reinig en bevochtig vervolgens de nek met een alcoholdoek. Gebruik vervolgens pincetten om de ventrale middellijn van de nek te knijpen en maak met een schaar een kleine, oppervlakkige snede.Leid vervolgens de schaar in de opening en open de bladen langzaam subcutaan om de weefselvlakken te scheiden. Terwijl de huid omhoog wordt gehouden, maak je voorzichtig nog een snede van een centimeter onder de mond. Maak vervolgens twee laterale insnijdingen, inferieur en superieur aan de eerste snede.Gebruik vervolgens pincetten om de huid voorzichtig uit elkaar te trekken om toegang te krijgen tot de anatomie van het hoofd en de nek. Gebruik een dissectiesmicroscoop met achtvoudige vergroting. Gebruik fijne pincetten om voorzichtig de submandibulaire klier op te tillen om de vier infrahyoïde spieren boven de luchtpijp bloot te leggen.Vermijd het scheuren of verstoren van de omliggende vaten of uitscheidingskanalen. Als je speeksel van meer dan één muis verzamelt, bereid dan alle muizen tot dit punt voordat je verder gaat. Eén persoon kan tegelijkertijd maximaal vijf muizen hanteren.Gebruik nu kleine dissectiescharen om het mediale deel van de halsbandspieren te verwijderen terwijl je dicht bij de middellijn blijft. Verwijder net genoeg spier om de luchtpijp te visualiseren en te voorkomen dat de spieren de procedure hinderen. Bij het disseceren van de halsbandspieren is het vooral belangrijk om insnijdingen in nabijgelegen vaten te voorkomen.Een insnijding kan leiden tot volumedepletie secundair aan bloeding en daardoor pilocarpine ineffectief maken voor inductie van speekselsecretie. Om door te gaan, vouw de halsbandspieren weg van de luchtpijp om de larynx, luchtpijp en schildklier te visualiseren. Zorg ervoor dat de luchtpijp vrij is van overliggend weefsel.Maak ten slotte een horizontale incisie in de luchtpijp, inferieur aan de schildklier, met behulp van kleine dissectiescharen, niet een scalpel. Zorg ervoor dat deze luchtweg open en vrij van vocht is. Voor de speekselverzameling verwijdert u eerst het plakband bij de mond en kantelt u vervolgens het dissectiestadium 45 graden om de speekselstroom craniaal te leiden.Gebruik vervolgens een spuit van 0,5 milliliter met een 29-gauge halve inch naald om een intraperitoneale pilocarpine-injectie toe te dienen. Start vervolgens een timer. Als er meerdere muizen worden geïnjecteerd, werk dan snel met hulp van een assistent.Gebruik vervolgens standaard pincetten om de mond te openen en breng een capillair buisje in positie. Er zou binnen enkele minuten een druppel speeksel moeten vormen. Plaats het ene uiteinde van het capillair buisje in het speeksel en het andere uiteinde in een verzamelbuisje dat onder het dissectiestadium is geplaatst.Positioneer het buisje indien nodig om het speeksel op te zuigen. Vermijd contact met mucosale weefsels, omdat slijm de inlaat kan blokkeren. Verzamel speeksel gedurende 12 minuten vanaf het moment van injectie.De stoma moet gedurende de hele tijd helder blijven. Als de muis een verminderde speekselfunctie heeft, breng dan vloeistof uit zijn mond over naar het verzamelbuisje met behulp van een P200 micropipet. Gebruik altijd een ander buisje of tip voor elke muis.Na het voltooien van alle verzamelingen, weeg de verzamelvaten opnieuw. Nadat de muis is geëuthanaseerd door kooldioxide-asfyxiatie, maak een zorgvuldige thoracotomie en plaats de muis in rugligging op het dissectiestadium. Positioneer vervolgens de klieren op de oorspronkelijke chirurgische plaats.Onder achtvoudige vergroting visualiseer je de belangrijkste klieren, de PG, SMG en SLG. De PG is diffuus en is lateraal gepositioneerd ten opzichte van de SMG en de SLG. Dissecteer eerst de PG.Pak de staart van de PG met pincetten en trek hem weg van de onderliggende structuren. Bouw op tot een zachte spanning en snijd vervolgens het hoofd van de PG af met dissectiescharen. Breek vervolgens de capsule rond de SMG's met pincetten.Scheed vervolgens voorzichtig de linker en rechter SMG. Bevrijd vervolgens het dorsale aspect van de SMG van het omliggende niet-klierweefsel. Om de SMG te verwijderen, draai de ductus van Wharton vast met pincetten en snijd de ductus met dissectiescharen.De SLG bevindt zich in het superolaterale aspect van de SMG. Om de twee klieren te scheiden, grijpt u ze elk met aparte pincetten en plaatst u een punt in de weefselvlak tussen de klieren. Bouw vervolgens langzaam spanning op en de twee klieren zullen geleidelijk

murine-salivary-functional-assessment-via-pilocarpine-stimulation

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Een protocol voor de canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via kanaal van de Wharton is beschreven. Voor dit experiment wordt het trypaan blauw-oplossing gebruikt als een verver om aan te tonen hoe deze techniek effectief infusies levert in de gerichte klier, en om de betrouwbaarheid van deze nieuwe aanpak voorstellen als een potentieel klinisch drug / celtherapie voor het herstel van de speekselklieren.

Canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via Duct de Wharton&#39;s

De functie van zoogdieren neuronen-volwassene geboren blijft een actief gebied van onderzoek. Ioniserende straling remt de geboorte van nieuwe neuronen. Met computer-tomografie geleide focale bestraling (CFIR), kunnen driedimensionale anatomische targeting van specifieke neurale populaties nu worden gebruikt om de functionele rol van volwassen neurogenese beoordelen.

Functionele Ondervraging van Adult hypothalamus Neurogenese met Focal Radiologische Remming

Hypofunctie van de speekselklieren, een belangrijk nadelig effect van radiotherapie in het hoofd- en nekgebied, vermindert de kwaliteit van leven van een patiënt. Het aantonen van de werkzaamheid van nieuwe therapieën in diermodellen is een voorwaarde voordat er een klinische overgang plaatsvindt. Dit protocol beschrijft retroductale toediening en lokale bestraling van submandibulaire rattenklieren.

Retroductal Submandibulaire Gland Blaasinstillatie en gelokaliseerde gefractioneerde bestraling in een Rat Model van het speeksel hypofunction

We beschrijven een methode met behulp van doelgerichte perifere bestraling om vermoeidheid-achtig gedrag in muizen te induceren. De geselecteerde niet-dodelijke bestralingsdosis leidt tot een week lang verlaging van de vrijwillige-wiel draait activiteit.

Een muismodel van vermoeidheid geïnduceerd door Peripheral Bestraling

Speekselklier hypofunction is een frequente gevolg van auto-immune ziekte en straling therapie. Reproduceerbaar evaluatie van speekselklier functie in muismodellen van deze ziekten is een technische uitdaging. Hier wordt een eenvoudige methode voor nauwkeurige en reproduceerbare meting van speeksel productie in muizen beschreven.

Een methode voor het meten van speekselklier functie in muizen

Lokale drug levering aan de submandibulaire klieren is van belang in begrip speekselklier biologie en voor de ontwikkeling van nieuwe therapieën. We presenteren een bijgewerkte en gedetailleerde retroductal injectie protocol, ter verbetering van de nauwkeurigheid van de levering en experimentele reproduceerbaarheid. De hier vermelde toepassing is de levering van polymere nanodeeltjes.

Retroductal Nanoparticle injectie aan de lymfkliertest submandibulaire klier

Met behulp van driedimensionale organotypic culturen te visualiseren morfologie en functionele markers van speekselklieren kunnen nieuwe inzichten in de mechanismen van weefselbeschadiging na straling. Hier beschreven is een protocol bij sectie, cultuur, bestralen, vlek, en beeld 50 – 90 μm dikke speekselklier secties voorafgaand aan en na blootstelling aan ioniserende straling.

De behandeling van de straling van Organotypic culturen van submandibulaire en Parotis speekselklieren modellen sleutel in vivo kenmerken

Immunofluorescerende beeldvorming wordt beperkt door het vermogen om complexe, tijdsafhankelijke biologische processen in slechts één momentopname in de tijd waar te nemen. Deze studie schetst een live-imaging-benadering die wordt uitgevoerd op nauwkeurig gesneden plakjes submandibulaire klier van muizen. Deze aanpak maakt de real-time observatie mogelijk van cel-cel interacties tijdens homeostase en de processen van regeneratie en herstel.

Ondervraging van cel-celinteracties in de speekselklier via ex vivo beeldvorming van levende cellen

Hier presenteren we een protocol voor het toepassen van vuurnaalden onder echografie op de klier- of spierlagen voor de behandeling van sialorree bij patiënten na een tracheotomie na een beroerte.

Ultraschone geleide vuurnaaldacupunctuur voor behandeling van sialorree bij tracheotomiseerde patiënten

Een muizenmodel van neuromusculaire elektrostimulatie (NMES), een veilige en goedkope klinische modaliteit, aan de voorste compartiment spieren wordt beschreven. Dit model heeft het voordeel van het wijzigen van een beschikbaar klinische inrichting voor het opwekken van gerichte en specifieke spiercontracties in muizen.

Een muizenmodel van Muscle Training door Neuromusculaire elektrische stimulatie

Leer murine speekselfunctie evalueren met pilocarpine-stimulatie voor onderzoek naar speekselklierdysfunctie. Deze methode omvat tracheotomie, speekselcollectie en klierdissectie.

Gefractioneerde lymfkliertest speeksel functioneel-diagnostiek via Pilocarpine stimulatie volgende straling

Meer video's verkennen