Name: Een Model van de ligaturen intestinale lus in narcose van specifieke pathogenen vrije kippen te bestuderen van Clostridium Perfringens virulentie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: Leer een chirurgisch protocol voor het maken van geligeerde darmlussen bij kippen om de virulentie van Clostridium perfringens-stammen in situ te vergelijken. Deze methode vermindert aanzienlijk het aantal dieren dat nodig is voor onderzoek naar necrotische enteritis.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gesteund door de stoel in pluimvee onderzoek (M. Boulianne) van de Faculteit Diergeneeskunde van de Université de Montréal. Drs. Boulianne en bovenliggende ontwikkelde het model. Drs. Boulianne en bovenliggende uitgevoerd de operaties. Dr. Burns bijgestaan bij de ontwikkeling van het protocol van de verdoving. Dr. Parent de video bewerkt en schreef het manuscript. Drs Burns, Desrochers en Boulianne bewerkt het manuscript.

Alle procedures met levende dieren gebruik werden goedgekeurd door de ethische commissie van de Faculteit Diergeneeskunde, Université de Montréal (CÉUA, 'Comité d' éthique de l'utilisation des Animaux').
1. overwegingen voor de operatie
<ol><li>Selecteer 10 weken oude specifieke pathogene vrije (SPF) Livorno kippen voor de operatie. Opmerking: Hun gewicht moet tussen 1,0 en 1,2 kg.</li>
	<li>Trekken de feed 12u voorafgaand aan de procedures voor het leegmaken van het darmkanaal.</li>
	<li>Voorafgaand aan de operatie, plaatst u de kuikens onder narcose, volgens een protocol dat is geverifieerd door een anesthesist. Elke kip 15 minuten voorafgaand aan de operatie met een intramusculaire injectie (IM) van midazolam premedicate 1 mg/kg en Butorfanol 4 mg/kg. Herhaal, elke 4 h, de injectie van Butorfanol 4 mg/kg IM of wanneer de ademhaling patroon veranderingen en de frequentie toeneemt tijdens de anesthesie. Voor de narcose, tijdens alle procedures, beheren Isofluraan bij een concentratie tussen 1,5 en 2,5% met een intratracheale buis. Opmerking: Het gebruik van premedication voor sedatie en analgesie wordt aanbevolen als ze zal aanzienlijk verbeteren van de diepte van de verdoving, verminderen de hoeveelheid verdoving nodig tijdens alle procedures, evenals inschakelen van onderzoekers om controle van pijn niveaus.</li>
	<li>Het controleren van de narcose door het opnemen van de lichaamstemperatuur, hartslag en elektrocardiogram (ECG), respiratoire tempo en ritme, zuurstof saturatie, verlopen kooldioxide (CO2) en neurologische reflexen. Opmerking: Een persoon moet worden toegewezen aan deze parameters in alle procedures volgen.</li>
	<li>Volg steriliteit beginselen in de chirurgische procedures. Ervoor zorgen dat de chirurg en de assistent-chirurg jurk met steriele jassen, handschoenen, een masker en beschermende bril volgens institutionele preoperatieve protocollen. Ervoor zorgen dat de chirurg scrubs de handen met een chloorhexidine gluconaat geïmpregneerd steriele borstel tot de elleboog met de nadruk op nagels en elk oppervlak van de vinger.</li>
	<li>Het steriliseren van de chirurgische instrumenten met een sterilisator.</li>
</ol>2. de chirurgische Site-voorbereiding
<ol><li>Ten eerste, handmatig verwijderen van de veren uit de buik met een zachte tractie.</li>
	<li>De chirurgische site met een chloorhexidine gluconaat wasmiddel geïmpregneerd steriele borstel schrobben. Scrub zachtjes de huid vanuit het midden naar buiten voor een totale contacttijd van 5 min zonder terugkomen naar het midden.</li>
	<li>3 alternatieve passages op de chirurgische site met een chloorhexidine gluconaat oplossing en isopropyl alcohol met behulp van steriele gauzes uitvoeren. Opmerking: De passage moet opstarten vanaf het midden van de chirurgische site aan de grenzen om te voorkomen dat besmetting van de niet-ontsmet gebieden van de chirurgische site.</li>
	<li>Plaats de steriele chirurgische draperen over de kip.</li>
</ol>3. extractie van de dunne darmen van de buikholte
<ol><li>Incise de chirurgische draperen met een schaar om alleen de huid van de chirurgische site bloot te stellen.</li>
	<li>Incise van de huid door het uitvoeren van een '' L'' vorm laag-middellijn sneetje met een scalpel mes #3.<ol>
<li>Begint de eerste snede 1 cm caudal aan het borstbeen en eindigt het op 1 cm cranial aan de cloaca.</li>
		<li>Voer de tweede snede loodrecht op de eerste snede. Start vanaf het caudal einde van de eerste snede en blijven van 5 cm aan de linkerkant van de buik door het volgen van de bekken-lijn. Opmerking: Deze opening ontstaat een klep waarmee een gemakkelijker extractie van de darmen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Met chirurgie snij schaar, het buikvlies en de buikspieren aan te spannen met de zelfde '' L'' vorm patroon te openen van de buikholte. Opmerking: Dit zal blootstellen de lucht zakjes. Darmen bevinden zich onder deze structuren. Air zakjes moeten worden bevochtigde met gauzes verzadigd met steriele zoutoplossing van 0,85% om uitdroging en mogelijke breuk gedurende de hele procedure te voorkomen.</li>
	<li>Invoegen een Snook spay haak in de buikholte door het volgen van de links van de buikwand en werk de weg rond de buik air zakjes.</li>
	<li>Zacht exteriorize van de darmen en dit verspreid over het chirurgische gebied. Opmerking: Houd darmen bevochtigde door sproeien vaak steriele zoutoplossing 0,9% gedurende de gehele procedure. Ook kunnen gauzes bevochtigde met steriele zoutoplossing worden geplaatst op de darmen te voorkomen van uitdroging.</li>
	<li>Pak de darmen met behulp van een droog steriel gaas en trek voorzichtig uit de dunne darmen door manuele tractie bloot het jejunum. Opmerking: De mesenterische vaartuigen zijn kwetsbaar en overmatige spanning kan scheuren ze die kunnen leiden tot intestinale ischemische laesies en sterk compromis de uitkomst van de procedure.</li>
</ol>4. fabricage van intestinale Loops
<ol><li>Oprichting van lus no. 1.<ol>
<li>Plaats een eenvoudige ligatuur met een polyglactin multifilamenten absorbeerbare kunststof in de proximale jejunum door het vermijden van de ligatuur van grote mesenterische vaartuigen.</li>
		<li>Plaats een distale ligatuur 2 cm afstand van de proximale ligatuur. Opmerking: Eenvoudige ligaturen gemaakt met multifilamenten hechtdraad materiaal worden geplaatst langs het darmkanaal om hermetische segmenten te maken. De locatie van alle ligaturen wordt beschreven met een schema (Figuur 1). De lussen bestaan uit een proximale en distale ligatuur gescheiden door 2 cm.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Oprichting van interloop no. 1.<ol>
<li>Plaats een eenvoudige ligatuur 0.5 cm aborally tot de distale ligatuur van lus no.1. Opmerking: Tussen opeenvolgende lussen, er zijn interloops van 1 cm, d.w.z. segmenten een fysieke scheiding tussen de lussen maken. Als u wilt waarschijnlijk verlagen het risico van kruisbesmetting uit een lus naar de andere, wordt een eenvoudige ligatuur geplaatst in het midden van de interloop (0.5 cm vanaf de distale en proximale ligatuur van 2 aangrenzende loops). Dit vermindert het risico van een mogelijke gelekte verontreinigingen van een lus te bereiken de ligatuur van een aangrenzende lus. Deze segmenten zijn niet verplicht, maar zal verminderen het risico van kruisbesmetting.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Creatie van latere lussen en interloops.<ol>
<li>Herhaal stap 4.1 en 4.2 om het aantal gewenste lussen te verkrijgen. Opmerking: In dit experiment, 9 loops en 8 interloops werden gemaakt. Totale lengte bedraagt 26 cm. Het aantal lussen kan worden aangepast afhankelijk van de studie.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. injectie van Clostridium perfringens stammen in de lussen
<ol><li>Injecteren met een steriele spuit en naald 26 G het pathogene agens in lus no.1. Zachtjes invoegen de naald aan de antimesenteric kant van de darm in een hoek van 45°. Opmerking: In dit experiment, 0.2 mL hersenen hart infusie (BHI) 1 x 106 kve (kolonie vormende eenheden) van C. perfringens met in het midden log groeifase werd geïnjecteerd in elke lus. 5 verschillende variëteiten waren geïnjecteerd in 5 verschillende loops en de 4 overgebleven lussen werden ingespoten met een negatieve controle met geen bacteriën (steriele BHI), afwisselend van ziekteverwekkers en steriele BHI loops.</li>
	<li>Herhaal stap 5.1 te injecteren van alle lussen.</li>
	<li>Zachtjes vervangen het darmkanaal in het ruggedeelte van de buikholte, onder de lucht zakjes.</li>
</ol>6. afsluiting van de buikholte
<ol><li>De hechtdraad van het buikvlies en de buikspieren aan te spannen.<ol>
<li>Het buikvlies en de buikspieren aan te spannen langs het bekken (gemaakt in stap 3.3) met een eenvoudige continu hechtdraad-patroon met behulp van een polyglactin multifilamenten absorbeerbare kunststof Suture.</li>
		<li>Suture van het buikvlies en de buikspieren van het borstbeen nog aan de cloaca (gemaakt in stap 3.3. met een eenvoudige continu hechtdraad-patroon met behulp van een polyglactin multifilamenten absorbeerbare kunststof.</li>
	</ol>
</li>
	<li>De Sutuur (geologie) van de huid.<ol>
<li>Met behulp van een polyglactin multifilamenten synthetisch materiaal en het patroon van een eenvoudige continu hechtdraad, sluit de insnijding van de huid langs het bekken gemaakt in stap 3.2.</li>
		<li>Met behulp van hetzelfde multifilamenten ligatuur materiaal en het patroon van een eenvoudige continu hechtdraad, sluit de insnijding van de huid van het borstbeen nog aan de cloaca in stap 3.2 gemaakt.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. conclusie
<ol><li>Na de chirurgische procedures, houden de kip onder narcose met juist gebruik van pijnstillers om te minimaliseren van dierlijke pijn gedurende de tijd van de infectie. Blijven verdoving volgen teneinde een voldoende verdoving niveau te garanderen.</li>
	<li>Na de tijd van de gewenste infectie, humaan euthanaseren de kip door cervicale dislocatie onder algemene verdoving. Opmerking: Voor deze procedures, de vereiste tijd voor het opwekken van microscopische laesies met C. perfringens pathogene stammen was 7 h.</li>
	<li>Met een scalpel blad #3, snijd een 0.5 cm tot 1 cm lange lus gedeelte en plaats deze in 10% formaline voor fixatie overnachting en verdere histopathologische analyse.</li>
	<li>Met het dezelfde scalpel blad, het resterende gedeelte van de lus knippen en deze plaatsen in een steriele microcentrifuge buis voor de isolatie van de C. perfringens stammen in elke lus verder bacteriologische analyse voor hun genetische karakterisering.</li>
	<li>Herhaal stap 7.2 en 7.3 voor alle lussen door het veranderen van het scalpel blad tussen iedere lus.</li>
</ol>

<ol><li>Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+animal+models+in+disease+research%5BTitle%5D)+AND+%22Rare+diseases+and+orphan+drugs%22%5BJournal%5D)">The use of animal models in disease research.</a> Rare diseases and orphan drugs. 2 (1), 1-4 (2015).</li>
<li>Uzal, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+to+study+the+pathogenesis+of+human+and+animal+Clostridium+perfringens+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections.</a> Veterinary Microbiology. , (2015).</li>
<li>Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotic+enteritis+in+broiler+chickens.+III.+Study+of+the+factors+favoring+the+multiplication+of+Clostridium+perfringens+and+the+experimental+transmission+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease.</a> Canadian Journal of Comparative Medicine. 41 (1), 112-116 (1977).</li>
<li>Al-Sheikhly, F., Truscott, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathology+of+necrotic+enteritis+of+chickens+following+infusion+of+broth+cultures+of+Clostridium+perfringens+into+the+duodenum%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Diseases%22%5BJournal%5D)">The pathology of necrotic enteritis of chickens following infusion of broth cultures of Clostridium perfringens into the duodenum.</a> Avian Diseases. 21 (2), 230-240 (1977).</li>
<li>Wicker, D. L., Iscrigg, W. N., Trammell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+control+and+prevention+of+necrotic+enteritis+in+broilers+with+zinc+bacitracin%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">The control and prevention of necrotic enteritis in broilers with zinc bacitracin.</a> Poultry Science. 56 (4), 1229-1231 (1977).</li>
<li>Keyburn, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NetB%2C+a+new+toxin+that+is+associated+with+avian+necrotic+enteritis+caused+by+Clostridium+perfringens%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens.</a> PLoS Pathog. 4 (2), e26(2008).</li>
<li>Timbermont, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+of+Clostridium+perfringens+isolates+determines+the+ability+to+induce+necrotic+enteritis+in+broilers%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Immunol+Microbiol+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32 (6), 503-512 (2009).</li>
<li>Paradis, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+avilamycin+for+the+prevention+of+necrotic+enteritis+caused+by+a+pathogenic+strain+of+Clostridium+perfringens+in+broiler+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Pathol%22%5BJournal%5D)">Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens.</a> Avian Pathol. 45 (3), 365-369 (2016).</li>
<li>Valgaeren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lesion+development+in+a+new+intestinal+loop+model+indicates+the+involvement+of+a+shared+Clostridium+perfringens+virulence+factor+in+haemorrhagic+enteritis+in+calves%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Pathology%22%5BJournal%5D)">Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves.</a> Journal of Comparative Pathology. 149 (1), 103-112 (2013).</li>
<li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+C-terminal+domain+of+Clostridium+perfringens+alpha+toxin+as+a+vaccine+candidate+against+bovine+necrohemorrhagic+enteritis%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Res%22%5BJournal%5D)">The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> Vet Res. 47 (1), 52(2016).</li>
<li>Goossens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxin-neutralizing+antibodies+protect+against+Clostridium+perfringens-induced+necrosis+in+an+intestinal+loop+model+for+bovine+necrohemorrhagic+enteritis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet+Res%22%5BJournal%5D)">Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis.</a> BMC Vet Res. 12 (1), 101(2016).</li>
<li>Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chicken+intestinal+ligated+loop+model+to+study+the+virulence+of+Clostridium+perfringens+isolates+recovered+from+antibiotic-free+chicken+flocks%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Pathol%22%5BJournal%5D)">A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks.</a> Avian Pathol. 46 (2), 138-149 (2017).</li>
<li>Janvilisri, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+differential+proteomes+of+Clostridium+difficile+in+the+pig+ileal-ligated+loop+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model.</a> PLoS One. 7 (9), e45608(2012).</li>
<li>Aabo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+in+vivo+model+for+study+of+intestinal+invasion+by+Salmonella+enterica+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens.</a> Infection and Immunity. 68 (12), 7122-7125 (2000).</li>
<li>Meurens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+immune+response+following+Salmonella+enterica+subspecies+enterica+serovar+Typhimurium+infection+in+porcine+jejunal+gut+loops%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Res%22%5BJournal%5D)">Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops.</a> Vet Res. 40 (1), 5(2009).</li>
<li>Gerdts, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+intestinal+%27loops%27+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J Immunol Methods. 256 (1-2), 19-33 (2001).</li>
<li>Wade, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adherent+abilities+of+Clostridium+perfringens+strains+are+critical+for+the+pathogenesis+of+avian+necrotic+enteritis%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis.</a> Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).</li>
<li>Cooper, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virulence+for+chickens+of+Clostridium+perfringens+isolated+from+poultry+and+other+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources.</a> Anaerobe. 16 (3), 289-292 (2010).</li>
<li>Cooper, K. K., Songer, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virulence+of+Clostridium+perfringens+in+an+experimental+model+of+poultry+necrotic+enteritis%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis.</a> Veterinary Microbiology. 142 (3-4), 323-328 (2010).</li>
<li>Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotic+enteritis+potential+in+a+model+system+using+Clostridium+perfringens+isolated+from+field+outbreaks%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Diseases%22%5BJournal%5D)">Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks.</a> Avian Diseases. 51 (4), 834-839 (2007).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Intestinale lussen modellen zijn beschreven in vele soorten te bestuderen van host-pathogen interactions en pathogenese van ziekten veroorzaakt door verschillende intestinale ziekteverwekkers, zoals Clostridium perfringens, Clostridium difficile en Salmonella enterica7,9,13,14,15. Het is ook gebruikt voor het analyseren van de mucosa...

Het gebruik van dierlijke modellen om te studeren van besmettelijke ziekten bij mens en dier is een centraal instrument bij de beoordeling van virulentiefactoren regulering van de pathogenese van een bepaalde voorwaarde evenals aan het uitwerken van strategieën om te voorkomen of genezen van ziekten1. Ondanks de talrijke voordelen van het gebruik van dierlijke modellen om te studeren van diverse ziekten, ontstaan ethische bezwaren met betrekking tot deze praktijk. Onderzoekers moeten tot een minimum beperken dierlijke terwijl het verkrijgen van aanzienlijke en geldig resultaten. Het concept van de 3 Rs-beginselen (vervangen, verminderen en verfijnen) werd uitgewerkt om ervoor te zorgen dat sociale kwesties werden behandeld in dergelijke proeven. Kip necrotische enteritis studies, worden in vivo kip modellen gebruikt om te onderzoeken de etiologie, preventie en behandelingen van deze voorwaarde2,3,4,5. Pathogene stammen van C. perfringens uitvoering van specifieke virulentiefactoren, zoals de NetB toxine6, worden beheerd om het necrotische enteritis veroorzaken in kippen7. Het beginsel van vervanging is daarom moeilijk te bereiken in een dergelijk geval ook deze virulentiefactoren niet als kritiek op andere diersoorten mogen. De meeste modellen voor necrotische enteritis in kippen gebruik een combinatie van risicofactoren, zoals coccidiosis en veranderd dieet om te induceren necrotische enteritis gevolgd door middel van een maagsonde voor bouillon cultuur met grote aantallen C. perfringens2. Deze modellen zullen het opwekken van de ziekte in een groot aantal kippen kan, en sterfte belangrijk zijn in dergelijke proeven8, dus bezorgdheid over de vermindering en verfijning principes in het dierlijke onderzoek.
Intestinale ligaturen lussen modellen zijn een wenselijk alternatief voor de studie van ziekten veroorzaakt door intestinale ziekteverwekkers met betrekking tot het beginsel vermindering en verfijning. In deze modellen, worden intestinale segmenten genaamd 'lussen' gemaakt door het plaatsen van ligaturen langs het darmkanaal vormen van onafhankelijke en hermetische compartimenten waar ziekteverwekkers kunnen worden geïnjecteerd alleen9 of met andere moleculen, zoals vaccin kandidaten 10 , 11. de ziekteverwekkers van belang staan in nauw contact met de intestinale cellen en na een paar uur tijd van infectie, intestinale monsters kunnen worden teruggekregen voor verdere analyse. Hierdoor kan het gebruik van meerdere behandeling en controlegroepen in hetzelfde dier. Statistische analyse kan met herhaalde maatregelen modellen, die verhoogt de macht van de discriminatie tussen groepen en vermindert het aantal nodige kippen in vergelijking met mondelinge maagsonde proeven worden uitgevoerd. Ook worden chirurgische ingrepen en latere infectie tijden uitgevoerd onder continue narcose en Analgesie, dus het minimaliseren van de dierlijke pijn. Kringloop ligations zijn een ideale sjabloon voor vermindering van de nummers van de host en het creëren van een meer humane systeem in dierlijke onderzoek.
Intestinale ligaturen lussen modellen zijn ook beschreven in verschillende soorten, zoals kalveren, konijnen en muizen2,9, maar slecht in kippen7beschreven. Voor een optimaal gebruik van deze chirurgische model, zijn de juiste techniek en uitvoering zijn essentieel voor het creëren van ligaturen intestinale lussen om te voorkomen dat schade aan de intestinale integriteit. Het doel van dit manuscript is voor het beschrijven van een stap voor stap methode bij het creëren van meerdere intestinale lussen in een kip-model. Deze techniek wordt beperkt door de surgeon's vaardigheid en ervaring, zoals nauwkeurige procedures essentieel voor het succes van het project zijn.

<table><tbody><tr><td>EZ-Scrub 747</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td></td><td>4% chloorhexidine gluconate geïmpregneerde steriele borstel. Geen catalogusnummer beschikbaar. Webadres: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&nbsp;</td></tr><tr><td>Isopropyl alcohol 70% USP 4 L</td><td>Commercieel isopropyl alcohol</td><td>P016IP70</td><td>Webadres: http://www.comalc.com/products/</td></tr><tr><td>Chlorexidine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>282227-1G</td><td>Chlorhexidine gluconate oplossing, moet verdund worden tot 4%. Webadres: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&amp;region=CA&amp;gclid=EAIaIQ obChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2Z WQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td></tr><tr><td>Chirurgisch doekje Klein (27 inch x 24 inch) met 3 x 6 inch Fenestratie</td><td>Veterinary Specialty Products</td><td>32724</td><td>Webadres: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog. detail&amp;productgroup_id=15</td></tr><tr><td>Scalpelmesjes #3</td><td>Swann-Morton</td><td>301</td><td>Webadres: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td></tr><tr><td>Steriele zoutoplossing NaCl 0,9%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8776-100ML</td><td>Webadres: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&amp;region=CA</td></tr><tr><td>Vicryl 3-0</td><td>Ethicon</td><td>D9003</td><td>Polyglactin multifilament absorbeerbaar hechtmateriaal. Webadres: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td></tr><tr><td>Spuit 1 ml met 26G naald</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>329652</td><td>Webadres: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td></tr><tr><td>Brain Heart Infusion</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1104930500</td><td>Webadres: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&amp;region=CA&amp;cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td></tr><tr><td>Eppendorfbuisje</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9661-500EA</td><td>Microcentrifugebuisje. Webadres: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&amp;region=CA&amp;gclid=EAIaIQ obChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh 30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td></tr><tr><td>Formaline oplossing, gebufferd neutraal, 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128-4L</td><td>Weefsel: formaline verhouding van 1: 10 voor adequate fixatie. Webadres: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&amp;region=CA</td></tr><tr><td>Clostridium perfringens stammen</td><td>Universit&eacute; de Montr&eacute;al, Chaire en recherche avicole</td><td>N/A</td><td>Specifiek voor elk laboratorium, beschikbaar op aanvraag bij de corresponderende auteur</td></tr></tbody></table>

een model van de ligaturen intestinale lus in narcose van specifieke pathogenen vrije kippen te bestuderen van clostridium perfringens virulentie

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

Necrotische enteritis werd bestudeerd bij kippen met behulp van verschillende in vivo infectie modellen. Een combinatie van predisponerende factoren zoals coccidiosis en voeding, de meeste van deze gebruiken met maagsonde of administratie via de feed met behulp van Clostridium perfringens. In deze modellen vereist de vergelijking van meerdere C. perfringens stammen voor virulentie studies een groot aantal hosts om significante resultaten te verkrijgen. Sterfte in de loop van de studie kunnen hoge afhankelijk van het experimentele model, vandaar de ethische bezorgdheid met betrekking tot het welzijn van dieren in het onderzoek. De ontwikkeling van nieuwe modellen van de infectie waarbij minder dieren te bestuderen pathogenese, nog het verkrijgen van statistisch significante en geldige resultaten, is belangrijk bij het terugdringen van dierlijke gebruik in onderzoek. Intestinale ligaturen lus modellen zijn gebruikt om de studie van clostridial infecties in verschillende soorten zoals muizen, konijnen en kalveren. Na chirurgische ingrepen om ligaturen lus segmenten te maken, C. perfringens stammen worden geïnjecteerd rechtstreeks in de lussen om een nauw contact tussen de bacteriën en de intestinale mucosa. Monsters van de dunne darm en luminal inhoud worden genomen bij de beëindiging van de procedures na een paar uur. Meerdere bacteriestammen kunnen worden geënt in elk dier, dus vermindering van het aantal vereiste onderwerpen in de experimenten. Ook de procedures worden uitgevoerd onder algehele narcose om dieren pijn te verminderen. Bij kippen zou dit model meer aangewezen dan orale toediening te vergelijken C. perfringens stam pathogeniteit omdat minder dieren nodig zijn, geen predisponerende factoren nodig zijn voor het opwekken van de ziekte en pijn wordt gecontroleerd door pijnstillers . Het model van de intestinale ligaturen lus is slecht beschreven is bij kippen en standaardisatie is essentieel voor het optimale gebruik ervan. Dit manuscript biedt alle nodige stappen om de talrijke intestinale ligaturen loops maken in kippen en brengt informatie van de kritieke punten om geldige resultaten te verkrijgen.

Een schematische voorstelling van de 9 intestinale loops en 8 interloops is afgebeeld in Figuur 1. In dit model, een totaal van 9 loops en 8 interloops worden gemaakt met eenvoudige ligaturen. Een lus bestaat uit proximale en distale ligaturen verdeeld door 2 cm, gemeten vanaf de ligatuur proximale. Twee aangrenzende lussen worden gescheiden door een interloop van 1 cm. Om te verminderen het risico van kruisbesmetting tussen lussen door lekkage van een ligatu...

Hier presenteren we een protocol om te 'intestinale ligaturen loops' in kip dunne darmen operatief te maken. Deze procedure kan voor het vergelijken van meerdere Clostridium perfringens stammen virulentie in situ in één host. Deze methode vermindert aanzienlijk het aantal kippen meestal nodig voor soortgelijke in vivo experimenten.

Een Model van de ligaturen intestinale lus in narcose van specifieke pathogenen vrije kippen te bestuderen van Clostridium Perfringens virulentie

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van Chicken Necrotic Enteritis onderzoek. Zoals het vergelijken van de virulentie van specifieke Clostridium perfringens stammen die deze ziekte veroorzaken. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het opmerkelijk vermindert het aantal kippen meestal nodig voor soortgelijke ambivore experimenten.Hoewel deze methode inzicht kan geven in virulentiepotentieel van Clostridium perfringens stammen, kan het ook worden toegepast op andere darmpathogenen zoals Clostridium difficile, of Salmonella enterica. Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn bij deze methode het moeilijk hebben omdat chirurgische ingrepen specifieke training nodig hebben en alleen worden uitgevoerd door degenen die vaardigheden hebben verworven, zoals hechten, een techniek voorafgaand aan het experiment. Na het anshesizing een 10 weken oude specifieke ziekteverwekker vrije beendoornkip, zet de monitors voor essentiële metingen op en begint met het handmatig verwijderen van de veren van de buik door zachte tractie.Vervolgens schrob de chirurgische site met chlorhexidine gluconaat met een zachte borstel. Schrob de huid v

a-ligated-intestinal-loop-model-anesthetized-specific-pathogen-free

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Beschrijven we een nieuwe chirurgische methode voor catheterizing 'darm loops' in het ileum van schapen. Zodra de dieren hebben zich hersteld van een operatie en hebben opgeruimd antibiotica en pijnstillers, kunnen meerdere behandelingen direct worden gestort in lussen via de katheters.

Catheterisatie van de intestinale Loops bij herkauwers

De muis model van cecal ligatie en lek als een waardevol instrument voor de studie van de menselijke sepsis.

Cecal Ligatie Puncture Procedure

Sepsis verwijst naar een systemic inflammatory response syndrome als gevolg van een bacteriële infectie, en kan worden gesimuleerd door een chirurgische techniek genoemd cecal ligatie en punctie (CLP). Hier beschrijven we een methode om CLP-geïnduceerde diermodel te gebruiken om geneeskrachtige kruiden te screenen op therapeutische middelen.

Het gebruik van dierlijk model van Sepsis op nieuwe kruidentherapieën Evalueer

Source: Winston, J. A., et al. Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the procedure for inoculating antibiotic-pretreated mice with Clostridium difficile spores to establish a murine model of infection for studying pathogenesis and host responses.

Establishing a Mouse Model of Clostridium difficile Infection

This video demonstrates the generation of an ileal loop model to study intestinal permeability in a mouse model. This method provides a live model to understand the epithelial barrier function and consequent immune response.

Mouse Ileal Loop Model: A Surgical Model to Study Intestinal Permeability in the Mouse

In this video, we describe a surgical procedure to generate mouse proximal colon loop or pcLoop segment followed by intraluminal injection of fluorescent markers into the segment to study the intestinal epithelial permeability.

Generation of Mouse Proximal Colon Loop Model: A Surgical Procedure to Generate Proximal Colon Loop and Measure Intestinal Permeability by Detection of Fluorescent Markers in Serum Following Intraluminal Injection

Citrobacter rodentium infectie biedt een waardevol model voor enterische bacteriële infecties te bestuderen, evenals het hosten immuunreacties en colitis bij muizen. Dit protocol beschrijft de meting van de barrière integriteit, pathogeen belasting en histologische schade waardoor de grondige karakterisering van pathogeen en gastheer bijdragen aan murine infectieuze colitis.

De<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Muis Model: Studeren pathogeen en gastheer Bijdragen aan infectieuze colitis

Experimentele sepsis kan worden geïnduceerd in muizen met de blindedarm ligatie en punctie (CLP) methode. Voor deze protocollen autofagie in vivo beoordelen in het kader van CLP-geïnduceerde sepsis worden hier gepresenteerd: Een protocol voor het gebruik autofagie (GFP)-LC3 muizen, en een protocol voor autophagosome vorming van elektronenmicroscopie.

Cecal ligatie en punctie-geïnduceerde Sepsis als een model om Autophagy studie bij muizen

Ontregelde intestinale epitheliale barrièrefunctie en immuunresponsen zijn kenmerken van inflammatoire darmziekten die slecht worden onderzocht vanwege een gebrek aan fysiologische modellen. Hier beschrijven we een muis intestinale lus model dat een goed gevasculariseerd en exteriorized darmsegment gebruikt om mucosale permeabiliteit en leukocyten rekrutering in vivo te bestuderen.

Functionele beoordeling van intestinale permeabiliteit en neutrofiele transepitheliale migratie bij muizen met behulp van een gestandaardiseerd intestinale lusmodel

Dit protocol presenteert de operationele details van cecal ligatie en punctie (CLP) in een muismodel van sepsis. CLP is een van de meest gebruikte technieken om een diermodel van sepsis te maken. Daarom is een gestandaardiseerd CLP-protocol vereist voor het verkrijgen van betrouwbare onderzoeksresultaten.

Evaluatie van een betrouwbare biomarker in een cecale ligatie en punctie-geïnduceerd muismodel van sepsis

We beschrijven een muizenmodel van postoperatieve ileus gegenereerd via darmmanipulatie. De gastro-intestinale transitfunctie, pathologische veranderingen en activering van immuuncellen werden 24 uur na de operatie beoordeeld.

Postoperatief Ileus muizenmodel

Leer een chirurgisch protocol voor het maken van geligeerde darmlussen bij kippen om de virulentie van Clostridium perfringens-stammen in situ te vergelijken. Deze methode vermindert aanzienlijk het aantal dieren dat nodig is voor onderzoek naar necrotische enteritis.

Een Model van de ligaturen intestinale lus in narcose van specifieke pathogenen vrije kippen te bestuderen van Clostridium Perfringens virulentie (Video) | JoVE Journal

Een Model van de ligaturen intestinale lus in narcose van specifieke pathogenen vrije kippen te bestuderen van Clostridium Perfringens virulentie

Meer video's verkennen