Een Model van de ligaturen intestinale lus in narcose van specifieke pathogenen vrije kippen te bestuderen van Clostridium Perfringens virulentie

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van Chicken Necrotic Enteritis onderzoek. Zoals het vergelijken van de virulentie van specifieke Clostridium perfringens stammen die deze ziekte veroorzaken. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het opmerkelijk vermindert het aantal kippen meestal nodig voor soortgelijke ambivore experimenten.

Hoewel deze methode inzicht kan geven in virulentiepotentieel van Clostridium perfringens stammen, kan het ook worden toegepast op andere darmpathogenen zoals Clostridium difficile, of Salmonella enterica. Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn bij deze methode het moeilijk hebben omdat chirurgische ingrepen specifieke training nodig hebben en alleen worden uitgevoerd door degenen die vaardigheden hebben verworven, zoals hechten, een techniek voorafgaand aan het experiment. Na het anshesizing een 10 weken oude specifieke ziekteverwekker vrije beendoornkip, zet de monitors voor essentiële metingen op en begint met het handmatig verwijderen van de veren van de buik door zachte tractie.

Vervolgens schrob de chirurgische site met chlorhexidine gluconaat met een zachte borstel. Schrob de huid voorzichtig vijf minuten van het midden naar de periferie zonder de koers om te draaien. Voer vervolgens drie afwisselende passages uit op de chirurgische plaats met chloorhexidine gluconaatoplossing en Isopropylalcohol met steriele gaasjes.

Nogmaals, ga van het centrum naar de periferie, dan, draperen de kip. Begin met het openen van het laken boven de chirurgische site, maak dan een L-vormige lage middellijn huid incisie met een nummer drie scalpel, vanaf een centimeter knuffelen aan het borstbeen, en eindigend op een centimeter craniale aan de cloicha. Vervolg vervolgens de L-vormige incisie loodrecht op de eerste door een tweede incisie te doen vanaf het knuffeleinde van de eerste incisie en ga vijf centimeter verder naar de linkerkant van de buik door de bekkenlijn te volgen.

Deze opening zal een gemakkelijke extractie van de darmen mogelijk maken. Open vervolgens het buikvlies en de buikspieren met hetzelfde L-vormige patroon om toegang te krijgen tot de buikholte. De luchtzakjes worden nu blootgesteld en moeten vochtig worden gehouden met zout geweekt gaas.

Steek vervolgens een Snook spay haak in de buikholte door het volgen van de linker buikwand en het werken van de haak rond de buikluchtzakjes om de darmen te extraheren. Vervolgens, met behulp van droog gaas, blijven zachtjes exterioriseren van de darmen om de Jejunum bloot. Spreid de darmen uit en houd ze vochtig met frequent spuiten met Saline en door ze te bedekken met zoutoplossing gedrenkt gaas.

Het is belangrijk om heel zacht te zijn tijdens het verwijderen van darmen, omdat overmatige spanning de mesenterische bloedvaten kan scheuren die kunnen leiden tot darm-ischemische laesies en de uitkomst van de procedure sterk in gevaar kunnen brengen. Na het exterioriseren van de darmen, maak een reeks lussen in de darmen te beginnen in het Jejunum. Elke lus kan worden gebruikt voor verschillende behandelingen.

In het proximale Jejunum plaatst u een eenvoudige ligatuur met een Polyglutamine Multifilament synthetisch opneembaar materiaal terwijl u de ligatuur van grote mesenterische vaten vermijdt. Plaats vervolgens een distale ligatuur twee centimeter afstand van de proximale ligatuur om de eerste lus te voltooien. Alle proximale en distale ligaturen moeten worden verdeeld door ongeveer twee centimeter.

Elk paar ligaturen maakt een lus, dat is een hermetisch segment. Maak vervolgens een interloop of een segment van de darm tussen de lussen. Plaats een eenvoudige ligatuur een halve centimeter aborely aan de distale ligatuur van de eerste lus.

Deze ligatuur bevindt zich in het midden van de interloop en vermindert mogelijke kruisbesmetting tussen lussen. Nu, ga verder met het patroon van het creëren van een andere lus een halve centimeter aborely van de interloop ligatuur. Hier worden negen lussen en acht interloops gemaakt die 26 centimeter darmen bedekken.

Het aantal lussen kan naar behoefte worden aangepast. Ga vervolgens verder met het injecteren van een stam van Clostridium perfringens in de lussen. Gebruik in de anti-mesenterische kant van de lus een 26-meter naald in een hoek van 45 graden om 0,2 milliliter BHI-oplossing te injecteren, met een miljoen kolonievormende eenheden van bacteriën in de midloggroeifase.

In deze situatie, met negen lussen, worden vijf verschillende stammen geïnjecteerd in afwisselende lussen met de tussenliggende lussen geïnjecteerd met het voertuig alleen als negatieve controles. Na het injecteren van de ziekteverwekkers, vervang voorzichtig het darmkanaal naar het ruggebied van de buikholte onder de luchtzakjes. Sluit vervolgens de buikholte.

Hecht het buikvlies en de buikspieren langs het bekken met een eenvoudig continu hechtpatroon met behulp van een Polyglutamine Multifilament synthetisch absorbeerbaar materiaal. Ga verder door het peritoneum en de buikspieren van het borstbeen aan de cloiche te hechten met behulp van eenvoudige continue hechtingen. Vervolgens hecht de huid nauw met behulp van een Polyglutamine Multifilament synthetisch materiaal en een eenvoudig continu patroon.

Eerst hecht je langs het bekken, dan hecht je van het borstbeen tot de cloiche. Na het sluiten van de incisies, houd de kip onder algemene anesthesie met het juiste gebruik van pijnstillers om pijn bij dieren tijdens de infectietijd te minimaliseren. Blijf verdovingscontrole om een adequaat anesthesieniveau te garanderen.

Na de gewenste hoeveelheid infectietijd, zoals zeven uur in het huidige experiment, euthanaseren de vogel en het verzamelen van de darmweefsels. Met behulp van een nummer drie scalpel, knip een halve tot een centimeter lus sectie. Breng vervolgens de sectie over naar 10%Formalin voor nachtelijke fixatie en verdere histopathologische analyse.

Gebruik vervolgens hetzelfde scalpelblad op dezelfde lus om de rest van de lus uit te snijden en dat weefsel over te brengen naar een gemicrofundeerde buis voor isolatie van de bacteriën. Herhaal deze procedure voor elke lus met behulp van een nieuwe scalpel mes elke keer. Zeven uur na injectie heeft een darmlus geïnjecteerd met een controlesteriel medium een intacte slijmborstelrand zonder necrose.

Milde congestie in de darmlagen van de segmenten is niet ongewoon. Zeven uur na injectie met de ziekteverwekker, Clostridium perfringens, villi tips worden uitgehold met necrotische entry sites rond de tips. En dan necrotisch materiaal rond de villi, zijn er clusters van grote staafvormige bacteriën.

Soms necrose is te wijten aan slechte procedurele uitvoering en kan verkeerd worden geïnterpreteerd als laesies geproduceerd door bacteriën. Een veelbetekenende tekenen is de afwezigheid van bacteriën in de histologische sectie. Ook zijn de bloedvaten in de spierlaag ernstig verwijd door de accumulatie van veel degraderende erytrocyten die wijzen op vasculaire congestie.

Dit werd veroorzaakt door ligated mesenteric bloedvaten die waarschijnlijk werden gebonden aan overmatige fysieke belasting op de darmen te doen. Ischemische lussen kunnen gemakkelijk microscopisch worden geïdentificeerd tijdens de chirurgische ingrepen. Na ernstige vasculaire congestie een paar minuten na de ligatuur, zal de serosa donkerblauw zijn in plaats van zijn normale roze roodachtige kleur.

Na het bekijken van deze video, moet je een goed begrip van hoe je meerdere darmlussen in een kip model te maken door het plaatsen van ligaturen op de darmen. Eenmaal onder de knie de chirurgische ingrepen, met uitzondering van infectie tijd, kan worden gedaan in minder dan drie uur, als het goed wordt uitgevoerd. Tijdens een poging tot deze procedure, is het belangrijk om te onthouden om de kip onder diepe anesthesie te houden om de pijn te controleren en vitale functies te controleren tijdens alle procedures, met inbegrip van chirurgisch deel en na infectie tijd.

Na deze procedure of hun methoden zoals bacteriële isolatie, en rechte identificatie, zoals gendetectie door PCR kan worden uitgevoerd om externe vragen te beantwoorden, zoals herstel en identificatie van de eerste geïnjecteerde ziekteverwekker. Na deze ontwikkeling maakte deze techniek een weg vrij voor onderzoekers op het gebied van Clostridium perfringens pathogenese om Necrotic Enteritis bij kippen te verkennen. Vergeet niet dat het werken met levende dieren zeer variabel kan zijn.

En voorzorgsmaatregelen zoals continue verdoving van de kip moet altijd worden gedaan tijdens het uitvoeren van deze procedure.