Name: Intracerebroventriculaire behandeling met resiniferatoxine en pijntests bij muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Leer een ICV-injectieprotocol met resiniferatoxine bij muizen om TRPV1-kanalen selectief te desensibiliseren in supraspinale gebieden. Deze methode ondersteunt neurofarmaceutisch onderzoek naar pijnmodulatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Alle experimentele protocollen die hier werden gebruikt werden goedgekeurd door het Comité voor dierverzorging en gebruik van de Musashino Universiteit. Mannelijke ddY muizen (SLC, Shizuoka, Japan) werden bewaard voor ten minste 7 dagen onder een 12-h licht / donker cyclus voor experimenten met water en voedsel ad libitum. Voor de experimenten werden 5- of 6 weken oude muizen gebruikt.
1. Bereiding van drugs
<ol><li>
RTX OPMERKING: De alcoholische RTX-oplossing kan ernstige brandwonden en oogletsel veroorzaken. Zorg ervoor dat u rubberen handschoenen en glazen te gebruiken voor bescherming bij het hanteren. Deze voorraadoplossing kan 6 maanden gebruikt worden.<ol>
<li>Voeg 500 μL ethanol toe aan 1 mg RTX.</li>
		<li>Voeg 500 μL polyoxyethyleen (20) sorbitan monooleaat toe aan de oplossing boven en vortex goed.</li>
		<li>Voeg 4 mL fysiologische zoutoplossing toe aan het mengsel en de vortex.</li>
		<li>Aliquot 40 μL van de oplossing in 1,5 mL schroefdopbuizen en bewaar ze op -40 °C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Acetaminophen
	<ol>
<li>Voeg 20% w/v propyleneglycoloplossing toe aan paracetamol bij een concentratie van 30 mg/mL en los op met een sonicator. Aangezien paracetamol kan neerslaan bij kamertemperatuur enkele uren na de ontbinding, bereid je vlak voor gebruik of houd de oplossing warm tot gebruik.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Onderhuidse of Intracerebroventriculaire injectie van RTX
<ol><li>Ontdooi de gevulde oplossing bereid in 1.1. boven en verdun het tot 20 μg/mL in zout- of kunstmatige hersenvocht (ACSF) bestaande uit (in mM): 119 NaCl, 2,5 KCl, 1 NaH2PO4, 26 NaHCO3, 11 glucose, 1,3 MgSO4, 2,5 CaCl2 in evenwicht met 95% O2 en 5% CO2 (pH 7.2).</li>
	<li>Verdoven muizen met pentobarbitaal natriumzout (60 mg/kg, intraperitoneally), en controleer op verlies van de rechterreflex.</li>
	<li>Voor s.c. behandeling injecteer u DE RTX (20 μg/mL) in de achterkant van de nek bij een volume van 0,1 mL/10 g lichaamsgewicht. Voor de controlegroep injecteer u het voertuig (10% ethanol, 10% polyoxyethyleen (20) sorbitan monooleaat en 80% zoutoplossing) op dezelfde manier.</li>
	<li>Voor i.c.v. behandeling injecteer u 5 μL RTX (20 μg/mL) in de rechter zijkamer. Voor de controlegroep injecteer u het voertuig (10% ethanol, 10% polyoxyethyleen (20) sorbitan monooleaat en 80% ACSF) op dezelfde manier.<ol>
<li>Geef een wegwerpnaald van 27 G door een metalen buis (0,8 mm I.D.) om de 3,0-3,5 mm punt van de naald bloot te leggen(figuur 1A).</li>
		<li>Desinfecteer het hoofd van de muis met 70% alcohol en houd de squamosale botten van de muis stevig vast met de vingers(figuur 1B). OPMERKING: Let op de posities van de squamosale uitsteeksels, omdat deze uitsteeksels zullen dienen als oriëntatiepunten voor injectie.</li>
		<li>Beweeg de naald lateraal op de hoofdhuid, en vind de sagittale hechting als de naald tip is verslaafd aan de hechting.</li>
		<li>Beweeg de tip ongeveer 1 mm naar rechts, beweeg de tip rostrally, en vind de coronale hechting als met 2.4.3. (Figuur 1B).</li>
		<li>Steek de naald langzaam en verticaal, injecteer de RTX-oplossing in ongeveer 10 seconden en houd deze ongeveer 10 seconden vast.</li>
		<li>Trek de naald langzaam, en de muis terug te keren naar zijn huis kooi. Bloeden is meestal minimaal of afwezig. Als er ernstige bloedingen optreden, moet het gebruik van een andere muis worden overwogen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Wijs de voorbehandelde muizen toe als proefpersoon voor de RTX-test of de staartdruktest (respectievelijk stap 3 en 4).</li>
</ol>3. RTX-test
LET OP: De tests worden uitgevoerd tussen 10:00 en 17:00 uur. De testruimte wordt onderhouden op 200 lux en 24-26 °C.
<ol><li>Een week na voorbehandelingen met RTX (Stap 2.) breng je muizen minstens 60 minuten voor aanvang van de test naar de testruimte.</li>
	<li>Weeg en plaats elke muis afzonderlijk in een plexiglas kooi (29,5 × 17,5 × 13,5 cm3 hoogte) ten minste 30 minuten voorafgaand aan het starten van de test om het mogelijk te maken om te acclimatiseren aan het milieu. OPMERKING: De volgorde van de tests moet worden gecompenseerd tussen voorbehandelingsgroepen.</li>
	<li>20 minuten voor de test paracetamol (300 mg/kg) toe te dienen aan de muis.</li>
	<li>Houd de muis losjes in een kleine doek zak, en steek een 30-gauge naald in de hiel van de rechter achterpoot. Breng de naald onderhuids naar de buurt van de looppads en injecteer 20 μL RTX-oplossing (0,05 μg/mL).</li>
	<li>Meet de periode van likken / bijten gedrag in theglabrous regio van de getroffen poot in elk 5-min blok.</li>
</ol>4. Staartdruktest
OPMERKING: Een Randall-Selitto-type drukmeter wordt gebruikt om de drempel voor acute mechanische nociception te beoordelen. De tests worden uitgevoerd tussen 10:00 en 17:00 uur. De testruimte wordt onderhouden op 200 lux en 24-26 °C.
<ol><li>Een week na voorbehandelingen met RTX (Stap 2.), breng je muizen naar de testruimte en weeg en plaats je elke muis individueel in een plexiglas kooi.</li>
	<li>Markeer de vlekken op 1,5 en 2,5 cm van de voet van de staart.</li>
	<li>Houd de muis losjes in een kleine doek zak, en druk uitoefenen op de vlekken met een stompe sonde. OPMERKING: Er wordt een cutoff-druk van 250 g opgelegd om weefselschade te voorkomen.</li>
	<li>Bepaal de druk die nodig is om ontsnappen gedrag uit te lokken (staart kloppen, draaien, en piepen), en bereken de nociceptive drempel door het gemiddelde van de druk bepaald op de twee plekken.</li>
	<li>Herhaal stap 4.3. tot 4.4. elke 15 minuten.</li>
	<li>Na het verkrijgen van de basislijn, toedien paracetamol (300 mg/kg) aan de muis intraperitoneally. Herhaal na toediening stap 4.3. en 4,4 per 15 minuten.</li>
</ol>

<ol><li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li>
<li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsaicin+receptor%3A+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li>
<li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), New York, N.Y. 306-313 (2000).</li>
<li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li>
<li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li>
<li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+anxiety%2C+conditioned+fear%2C+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li>
<li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity%3A+Therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li>
<li>Nazıroğlu, M., Övey, İS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li>
<li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li>
<li>Barrière, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690(2013).</li>
<li>Jancsó, G., Kiraly, E., Jancsó-Gábor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li>
<li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li>
<li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li>
<li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021(2009).</li>
<li>Jancsó, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracisternal+capsaicin%3A+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li>
<li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li>
<li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pain%22%5BJournal%5D)">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43(2008).</li>
<li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li>
<li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+reports%22%5BJournal%5D)">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452(2017).</li>
<li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology+and+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li>
<li>Tjølsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+formalin+test%3A+an+evaluation+of+the+method%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li>
<li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li>
<li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li>
<li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir%2C+an+anti-influenza+virus+drug%2C+in+normal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+%26+clinical+pharmacology+%26+toxicology%22%5BJournal%5D)">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic & clinical pharmacology & toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li>
<li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hot+flash%3A+TRPV+channels+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te verklaren

De meest kritische stap in deze experimenten is het succes van de i.c.v. injectie. De i.c.v. injectietechniek die hier wordt gebruikt is vrij eenvoudig maar vereist wat oefening. Voorafgaand aan experimenten wordt de praktijk met kleurstoffen (bijvoorbeeld 0,5% trypanblauw in zoutoplossing) aanbevolen. Als de injectie correct wordt uitgevoerd, moet een naaldteken zichtbaar zijn op de coronale hechting en moet de geïnjecteerde kleurstof aanwezig zijn in de contralaterale ventrikel en de derde ventrikel. Bovendien moet het...

Dieren krijgen verschillende fysieke en chemische stimuli uit hun omgeving via sensoren op de perifere zenuwen. De voorbijgaande receptor potentieel vanilloid type 1 (TRPV1) is een van de thermogevoelige, niet-reflecterende kanalen die fungeren als warmtesensoren1,2, en activering en / of modulatie van TRPV1 staat bekend als een belangrijke stap voor nociception in zowel normale als inflammatoire contexten3. Hoewel het algemene expressiepatroon controversieel is, is ook de expressie van TRPV1 voorgesteld in suprachirurgische regio's, waarbij het betrokken is bij verschillende hersenactiviteiten (waaronder nociception4, thermoregulatie5, angst6, attention deficit hyperactivity disorder7en epilepsie8). Bovendien is onlangs gesuggereerd dat paracetamol, een veelgebruikte pijnstiller, bemiddelt de activering van centrale TRPV1 om zijn pijnstillende werking9,10uit te lokken .
Toediening van overtollige TRPV1 agonist met inbegrip van capsaïcine en harsiferatoxine (RTX) aan dieren leidt tot de dood van TRPV1-positieve neuronen en langdurige desensibilisatie van TRPV1 agonisten11,12. In combinatie met de lokale toepassing (intrathecal13,14, intracisternal15,16,17, en intraganglional18)heeft deze chemische ablatiebenadering een alternatieve manier geboden om de fysiologische functies van TRPV1 te onderzoeken. We hebben onlangs gemeld dat intracerebroventriculaire (i.c.v.) injectie van RTX het pijnstillende effect van paracetamol bij muizen remt, wat suggereert supraspinal-selectieve TRPV1 desensibilisatie19. In dit manuscript presenteren we het precieze protocol voor i.c.v. injectie en daaropvolgende pijntests.
Directe injectie van drugs in de ventrikels van de hersenen maakt het mogelijk om hun centrale effecten te bestuderen terwijl het minimaliseren van eventuele perifere effecten. De i.c.v. injectieprocedure die hier wordt gepresenteerd is een wijziging van de methode die door Haley en McCormick20wordt gerapporteerd. Deze methode is eenvoudig met het inbrengen van een injectienaald in de laterale ventrikels door de coronale hechting en vereist geen speciale apparatuur of chirurgische ingrepen voor cannulation.
Perifere lokale toepassing van TRPV1 agonisten roept een brandend pijngevoel en neurogene ontsteking op. Muizen die systemisch worden behandeld met RTX en TRPV1-KO muizen, zijn ongevoelig voor deze stimulatie13. We hebben intraplantar injectie van RTX (RTX test) uitgevoerd om het behoud van de perifere TRPV1 in RTX-i.c.v. te bevestigen. Muizen. Deze methode is een wijziging van de conventionele formaline test21.
Er is gemeld dat muizen systemisch behandeld met RTX en TRPV1-KO muizen een normale drempel tonen voor mechanische stimuli11,13,22. Hier presenteren we een procedure voor de staartdruktest voor het testen van veranderingen in het pijnstillende effect van paracetamol.
Al deze procedures zijn orthodox en veelzijdig, en kan worden toegepast op studies van andere drugs.

<table><tbody><tr><td>Resiniferatoxin</td><td>LKT Laboratories</td><td>R1774</td><td>gebruikt voor s.c./i.c.v. voorbehandelingen en de RTX-test</td></tr><tr><td>Acetaminophen</td><td>IWAKI SEIYAKU</td><td></td><td>geschonken door IWAKI SEIYAKU</td></tr><tr><td>Pentobarbital sodium salt</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>P0776</td><td>gebruikt voor anesthesie</td></tr><tr><td>Ethanol (99,5)</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>057-00456</td><td>gebruikt voor het oplossen van RTX</td></tr><tr><td>Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>161-21621</td><td>gebruikt voor het oplossen van RTX</td></tr><tr><td>25 &#956;L microsyringe</td><td>Hamilton</td><td>1702LT</td><td>gebruikt voor i.c.v. injectie</td></tr><tr><td>100 &#956;L microsyringe</td><td>Hamilton</td><td>1710LT</td><td>gebruikt voor intraplantaire injectie</td></tr><tr><td>26-gauge wegwerpnaald</td><td>TERUMO</td><td>NN-2613S</td><td>gebruikt voor i.c.v. injectie</td></tr><tr><td>30-gauge wegwerpnaald</td><td>NIPRO</td><td>01134</td><td>gebruikt voor intraplantaire injectie</td></tr><tr><td>Drukmeter</td><td>Ugo Basile</td><td>Analgesy-Meter Type 7200</td><td>gebruikt voor staartdruktest</td></tr></tbody></table>

intracerebroventriculaire behandeling met resiniferatoxine en pijntests bij muizen

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

De voorbijgaande receptor potentieel vanilloid type 1 (TRPV1), een thermogevoelig kation kanaal, is bekend dat pijn in de perifere zenuwen trigger. Naast de perifere functie, zijn betrokkenheid bij hersenfuncties is ook gesuggereerd. Resiniferatoxine (RTX), een ultrapotente TRPV1 agonist, is bekend dat langdurige desensibilisatie van TRPV1 induceren, en deze desensibilisatie is een alternatieve aanpak geweest voor het onderzoeken van de fysiologische relevantie van TRPV1-uitdrukkende cellen. Hier beschrijven we een protocol voor intracerebroventriculaire (i.c.v.) behandeling met RTX in muizen. Procedures worden beschreven voor het testen van nociception aan perifere TRPV1 stimulatie (RTX test) en mechanische stimulatie (staart druk test) dan volgen. Hoewel de nociceptieve reacties van muizen die RTX i.c.v. toegediend waren vergelijkbaar waren met die van de controlegroepen, waren RTX-i.c.v.-toegediende muizen ongevoelig voor het pijnstillende effect van paracetamol, wat suggereert dat i.c.v. RTX-behandeling supraspinale selectieve TRPV1-desensibilisatie kan veroorzaken. Dit muismodel kan worden gebruikt als een handig experimenteel systeem voor het bestuderen van de rol van TRPV1 in de hersenen / supraspinale functie. Deze technieken kunnen ook worden toegepast op studies van de centrale acties van andere geneesmiddelen.

De i.c.v.-behandelde muizen vertonen geen zichtbare afwijkingen in hun uiterlijk, spontane activiteiten, lichaamsgewicht19 en kernlichaamstemperatuur (met voertuigen behandelde groep, 38,4 ± 0,3 °C, n = 6; MET RTX behandelde groep, 38,7 ± 0,2 °C, n = 6).
Figuur 2A-B toont de responsiviteit van s.c.- of i.c.v.-behandelde muizen op de intraplantar-injectie van ...

De voorbijgaande receptor potentieel vanilloid type 1 (TRPV1) in de supraspinale regio is voorgesteld om een aantal rollen te spelen in de hersenfunctie. Hier beschreven is een protocol voor intracerebroventriculaire injectie van harsatoxine voor supraspinale TRPV1 desensibilisatie bij muizen. Procedures voor sommige pijntests worden ook gepresenteerd.

Intracerebroventriculaire behandeling met resiniferatoxine en pijntests bij muizen

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

Het algemene doel van deze voorbehandeling is het genereren van muizen en dat TRPV1-kanalen worden gedesensibiliseerd in supraspinale regio's. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het neurofarmacie veld. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat supraspinale selectieve TRPV1 desensibilisatie kan worden veroorzaakt door een vrij eenvoudige manier.Om deze procedure te beginnen, verdoven een muis met pentobarbital natrium intraperitoneally en controleer op verlies van rechtsreflex. Voor onderhuidse behandeling, injecteer RTX met 20 microgram per milliliter in de achterkant van de nek bij een volume van 0,1 milliliter per 10 gram lichaamsgewicht. Voor de controlegroep, injecteer het voertuig op dezelfde manier.Geef een wegwerp naald van 27 meter door een metalen buis om 3 tot 3,5 millimeter punt van de naald bloot te leggen. Houd vervolgens de squamosale botten van de muis stevig vast met de vingers. Beweeg de naald lateraal op de hoofdhuid en vind de sagittale hechting als de naald tip is verslaafd aan de hechting.Beweeg de tip ongeveer een millimeter naar rechts en beweeg de punt rostrally om de coronale hechting te vinden. Plaats de naald

intracerebroventricular-treatment-with-resiniferatoxin-pain-tests

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

This video demonstrates a method for establishing a small fiber neuropathy model in mice using the TRPV1 agonist resiniferatoxin (RTX). It outlines the steps involved in administering RTX to mice and explains how RTX induces neuronal death in small-diameter sensory neurons, thereby establishing the neuropathy model.

Establishing a Mouse Model of Small Fiber Neuropathy Using Resiniferatoxin

Source: Fukushima, A., et al. Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the procedure for intracerebroventricular injection of resiniferatoxin in mice to desensitize the TRPV1 receptors in the brain.

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin for TRPV1 Desensitization in the Mouse Brain

Source: Martinez, E., et al. Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents. J. Vis. Exp. (2019).This video demonstrates the intracranial administration of an analgesic drug in an anesthetized rat with a pre-implanted guide cannula in the prefrontal cortex. An additional analgesic drug is co-administered intraperitoneally. Following recovery, the rat’s thermal pain response is assessed using Hargreave’s apparatus, where paw withdrawal latency is measured to evaluate the analgesic...

Synergistic Effect of Intracranial and Intraperitoneal Delivery of Analgesic Drugs on Thermal Pain Response in a Rat

We presenteren een protocol om de opname van [14C]-iodoantipyrine (IAP) te meten en de activering van neurale substraten te beoordelen die betrokken zijn bij centrale post-slagingspijn (CPSP) in een knaagdierenmodel.

Autoradiografische Metingen van [<sup&gt; 14</sup&gt; C] -Iodoantipyrine in Rat Brain Naar aanleiding van Central Post-Stroke Pain

Deze studie stelt een experimenteel model van pure kleine vezel neuropathie met resiniferatoxin (RTX). Een unieke dosis RTX (50 µg/kg) is optimaal voor het ontwikkelen van een kleine vezel neuropathie model dat bootst de kenmerken van de patiënt en kan helpen bij het onderzoeken van de Nociceptieve moleculaire betekenis onderliggende neuropatische pijn.

Tot vaststelling van een muismodel van een zuivere kleine vezel neuropathie met de Ultrapotent Agonist van voorbijgaande Receptor potentiële Vanilloid Type 1

In deze paper we nadere bijzonderheden te geven voor de wijze van productie en kwaliteitscontrole van een IL4-10 recombinante fusieproteïne. Ook laten we zien hoe te testen van de effectiviteit van dit eiwit op te lossen in een muismodel van inflammatoire pijn pijn.

Ontwikkeling van recombinante eiwitten voor de behandeling van chronische pijn

Hier presenteren we een protocol voor het uitvoeren van intracraniële farmacologische experimenten gevolgd door pijn gedrag testen bij knaagdieren. Dit protocol kunnen onderzoekers te leveren van moleculaire en cellulaire doelen in de hersenen, voor farmacologische agenten in de behandeling van pijn.

Intracraniële farmacotherapie en pijn Assays bij knaagdieren

Het meest opvallende symptoom van migraine is ernstige hoofdpijn, en er wordt verondersteld dat dit wordt gemedieerd door sensorische neuronen die de hersenvliezen innerveren. Hier presenteren we een methode om stoffen lokaal op de dura toe te passen op een minimaal invasieve manier met behulp van gezichtsovergevoeligheid als output.

Durale stimulatie en periorbitale von Frey-testen bij muizen als een preklinisch model van hoofdpijn

Partiële heupzenuwligatie induceert langdurige chronische neuropathische pijn, gekenmerkt door overdreven reacties op thermische en mechanische stimuli. Dit muismodel van neuropathische pijn wordt vaak gebruikt om innovatieve therapieën voor pijnbestrijding te bestuderen. Dit artikel beschrijft in detail de chirurgische procedure om de standaardisatie en reproduceerbaarheid te verbeteren.

Partiële heupzenuwligatie: een muismodel van chronische neuropathische pijn om het antinociceptieve effect van nieuwe therapieën te bestuderen

De Vermicelli en Capellini Handling Tests van de voorpoot behendigheid profiteren van de natuurlijke neiging van knaagdieren om voedsel items met behulp van bekwame voorpootje en cijfers bewegingen te manipuleren. Dieren zijn gefilmd bij het behandelen van korte strengen van ongekookte droge pasta. Slow motion afspelen van video zorgt voor de kwantificering van voorpootje aanpassingen.

De Vermicelli en Capellini Handling Tests: Eenvoudige kwantitatieve metingen van behendige voorpootje functie in ratten en muizen

Leer een ICV-injectieprotocol met resiniferatoxine bij muizen om TRPV1-kanalen selectief te desensibiliseren in supraspinale gebieden. Deze methode ondersteunt neurofarmaceutisch onderzoek naar pijnmodulatie.

Intracerebroventriculaire behandeling met resiniferatoxine en pijntests bij muizen

Meer video's verkennen