Protocol voor het maken van chronische wonden bij diabetische muizen

Dit muismodel kan helpen bij het beantwoorden van vragen op medisch gebied van wond chroniciteit. Het grote voordeel van dit model is dat de chronische wonden bij muizen veel aspecten van de chronische wonden bij de mens nabootsen. Om te beginnen plaatst u de muis op een schoon oppervlak en houdt u deze op zijn plaats door de basis van zijn staart te knijpen.

Bereid dan de haarknipper en wees klaar om ze snel weg te trekken als de muis plotselinge bewegingen maakt. Scheer de hele rug van de nek naar de staart, inclusief rondom de staart. Licht lopen het blad tegen de richting van de haargroei voor de meest efficiënte snit.

Druk de tondeuse niet diep in de huid, omdat dit kan blauwe plekken of snijden. Bereid vervolgens de huid voor op een toepassing van ontharingslokine. Bevochtig de huid met een met water doordrenkte papieren handdoek om chemische brandwonden te voorkomen.

Druk licht op met voldoende druk om het afgeknipte haar tegen de huid nat te maken. Terwijl de huid nat is, wrijf dan een kleine klodling van ontharinglosion in het geschoren gebied gedurende 15 tot 20 seconden. Eenmaal aangebracht, laat de lotion reageren met de huid voor 20 tot 45 seconden.

Voordat u de lotion afspoelt, veegt u op verschillende locaties op verschillende locaties wat lotion weg om de reactie te controleren. Als de huid roze en haarloos is, is de reactie compleet. Dan, grip op de muis om het af te wassen.

Met behulp van de niet-dominante hand met de duim druk op de basis van zijn staart tegen de palm en sluit de andere vingers. Dan met de neus van de muis omhoog en weg van het water, laat water over de rug van het dier lopen. Dan snel, maar voorzichtig, wrijf de achterkant van de muis met de andere hand weg te wassen van de lotion.

Na het verwijderen van alle ontharingscrème, droog de huid met een papieren handdoek. Het is belangrijk om geen lotion toe te passen op de oren, staart, of ergens in de buurt van het gezicht. Als dit gebeurt, onmiddellijk veeg de lotion met een natte handdoek en vervolgens lopen water over de muis om schade aan deze gebieden te voorkomen.

Als er donkere vlekken worden opgemerkt na het gebruik van de crème, opnieuw de crème aan te brengen op die gebieden. De donkere vlekken van de huid zal groeien haar sneller gedurende de duur van het experiment. Dus clip het haar kort om de drie tot vijf dagen wanneer dat nodig is.

Een patch of twee die niet over de wondplaats zijn is aanvaardbaar, maar als de achterkant van de muis meer donkere vlekken heeft, gebruik het dan niet voor het chronische wondmodel. Na het verwijderen van het haar, huis de muis alleen voor ten minste een dag voor het verwonden, omdat de huid te gevoelig zal zijn van de ontharinglosion. 30 minuten voor de operatie, injecteer de muis met 120 microliters buprenorfine intraperitoneally in steriele PBS.

Alle volumes in deze procedure gaan uit van een muis van 60 gram. 20 minuten voor de operatie, injecteer de muis met 480 microliters van ATZ intraperitoneally in steriele PBS. Splits het volume aan weerszijden van de buik.

Na het toedienen van de ATZ, plaats de muis in een kleine plastic container op de top van een warme verwarming pad totdat de operatie begint. Bedek de kleine container met een papieren handdoek om de warmte te helpen bevatten. De muis moet kalmeren als het opwarmt.

Na bevestiging van een verdoofde toestand, ga verder met het verwonden. Om te beginnen met de wondprocedure, spuit een chem veeg met 70% ethanol om de achterkant van de muis af te vegen om de wond site en het huidoppervlak schoon te maken. Veeg niet overmatig of er zal een risico van het doden van de bacteriën aanwezig op de huid.

Het succes van het chronische wondmodel is afhankelijk van niet-steriele aandoeningen. Deze muizen zijn niet kiemvrij en zijn ondergebracht in een conventioneel vivarium. Het bacteriële microbioom dat zich op de huid bevindt is cruciaal voor de daaropvolgende initiatie en ontwikkeling van chronische wonden bij behandeling met remmers van antioxidantenzymen.

Bedenk nu waar de wond is. In het ideale gebruik van de rugkant van de muis gecentreerd en uit de buurt van donkere vlekken van de huid. Voer nu de verwondingen aan het aankleden in 30 tot 45 seconden uit.

Druk eerst licht op een zeven millimeter huidbiopsie punch op de gewenste wondplaats en draai de punch rond net diep genoeg om een indruk van de punch te verlaten. Dan accijns de geschetste huid door het optrekken van het midden van de punch met pincet en snijden langs de omtrek met chirurgische schaar. Na voltooiing, bedek de wond stevig met een half stuk transparante film dressing.

Breng binnen 10 minuten na het verwonden een 60 microliter aliquot van MSA in steriele PBS aan en deponeer MSA actueel op de wond. Later, zes uur na de operatie, een ander doet van buprenorfine. Extra doses kunnen worden gegeven als dat nodig is.

Chronische wondinitiatie vindt plaats in minder dan zes uur en de wondmarge is zichtbaar veranderd door oxidatieve stress. Een chronische wond is een wond die open blijft, vergroot in vergelijking met de eerste wond en biofilm bevat. Na 20 dagen is de wond volledig chronisch.

Biofilm vormen bacteriën die domineren de wond site omvatten Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, en diverse Staphylococcus en Corynebacterium soorten. Deze bacteriën worden ook gevonden in menselijke chronische wonden. Na het bekijken van deze video moet je een goed begrip van hoe chronische wonden te creëren bij muizen.

Zodra u deze chronische wonden hebt vastgesteld, u ze vervolgens gebruiken om veel van cellulaire moleculaire mechanismen die betrokken zijn bij de initiatie van wond chroniciteit te onderzoeken.