Name: Bronchoalveolar Lavage Exosomes Lipopolysaccharide-geïnduceerde septische long letsel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: Leer de rol van exosomen bij LPS-geïnduceerde septische longletsel in muizen. Deze methode toont isolatie van bronchoalveolaire spoelvloeistof-exosomen en hun effect op epitheelcellen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs hebben verklaard geen belangenconflict.

Het totale protocol vereist 2 dagen, met inbegrip van de eerste dag van sepsis inductie en isolatie van BAL vloeistof uit het dier, en de tweede dag voor exosomes isolatie van de muis BALF. Alle procedures zijn herzien en goedgekeurd door het institutionele Animal Care en gebruik Comité aan Atlanta VA medical center.
1. Acute septische Lung Injury muismodel
<ol><li>Gebruik 6-8 weken - oude mannelijke wild-type C57BL/6J muizen (gewicht 20-22 g) voor het dier model, en uitvoeren van alle procedures met behulp van aseptische technieken en instrumenten. Autoclaaf alle chirurgische instrumenten, met inbegrip van de Tang en schaar voor 20 min bij 121 ° C.</li>
	<li>Willekeurig verdelen muizen in experimentele en controlegroep. Muizen op een chirurgische bord te bedwingen. Behandeling van muizen met Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS, 15 mg/kg) door intraperitoneaal route. Volgens de individuele lichaamsgewicht, Verdun passende LPS doseringen tot 0,1 mL PBS per muis, dan injecteren LPS oplossing met behulp van een injectiespuit 1 mL met 27 G naald en injecteren van een gelijkwaardige hoeveelheid PBS te controledieren.</li>
	<li>Muizen in de dier faciliteit van de BSL2, die uit schone kooien op passende kamer temperatuur bestaat houden.</li>
	<li>24 uur later, euthanaseren muizen met CO2 inademing.</li>
	<li>Selecteer het chirurgische gebied in het midden van de nek van de muis. Maken van een kleine incisie (ongeveer 5 mm) en scheiden zachtjes spieren voor de toegang tot de luchtpijp met behulp van botte pincet totdat de luchtpijp wordt blootgesteld.</li>
	<li>Trekken muis BAL vloeistof met 10 mL steriele injectiespuit met een naald 27 G. Voorzichtig, eerst de naald in de luchtpijp invoegen en injecteren van 1 mL steriele PBS langzaam in de luchtpijp, waarna BALF trekken in een 3 mL wegwerp injectiespuit met een naald 27 G. Gooi weg na voltooiing van de procedure, spuiten en naalden in biohazard slijpsel container.</li>
	<li>Behandelen van chirurgische instrumenten met chloordioxide, zoals eerder is beschreven door Chauret et al. 27, en vervolgens alle chirurgische instrumenten steriliseren in autoclaaf gedurende 20 minuten bij 121 ° C.</li>
</ol>2. Exosomes isolatie-serial Ultra-centrifugeren en karakterisering
<ol><li>Verzamelen muis BAL vloeistof in 15 mL conische buisjes. Om te oogsten alveolaire cellen, Centrifugeer steekproeven voor 10 min op 1000 g, bij 4 ° C.</li>
	<li>Het supernatant overbrengen naar nieuwe 15 mL conische buizen en centrifugeer monsters gedurende 30 minuten bij 4000 x g bij 4 ° C tot cel puin te verwijderen.</li>
	<li>Verzamelen het supernatant in ultracentrifuge buizen en centrifuge monsters voor 60 min bij 10.000 x g bij 4 ° C om grotere cellulaire deeltjes te verwijderen.</li>
	<li>De bovendrijvende vloeistof overdracht naar nieuwe conische buizen, filtreer vervolgens de monsters door 0,2 µm spuit-filter voor het verwijderen van de resterende grotere deeltjes.</li>
	<li>Verzamelen van de monsters in de ultracentrifuge buizen en evenwicht van de buizen. Centrifugeer steekproeven voor 2 h bij 140.000 x g bij 4° C tot de exosomes pellet. Opmerking: De grootte van exosomes varieert 20-200 nm. 0,2 µm filter wordt gebruikt voor het verwijderen van grotere deeltjes die meer dan 200 zijn nm in grootte.</li>
	<li>Gooi het supernatant zachtjes. Los van de pellet met 100 µL PBS of lysis van de oplossing, en overdracht exosomes monsters 1,5 mL buizen, en bewaren bij-80 ° C tot gebruik. Opmerking: Transmissie-elektronenmicroscoop wordt aanbevolen om te controleren of geïsoleerde exosomes.</li>
	<li>Volg het standaardmonster van TEM verwerking protocol28. Analyseren van exosomes monsters met behulp van transmissie-elektronenmicroscopie, en nemen de beelden, schaal bar 200 nm.</li>
</ol>3. voorbereiding van de miRNA en Performing miRNA-q-RT-PCR
Opmerking: miRNA-q-RT-PCR wordt aanbevolen voor het analyseren van expressie niveau van miRNAs.
<ol><li>Volg protocol van de isolatie van de standaard miRNAs en zorg ervoor dat u een gelijke hoeveelheid van gezuiverde RNAs in single-strand omgekeerde transcriptie24.</li>
	<li>Volg de real-time PCR standaardprotocol voor het detecteren van exosomal microRNA niveau in BAL vloeistof. Gebruik specifieke real-time PCR primers tegen miR-155, miR-146a en U6 SnRNA. PCR reactie worden uitgevoerd met het kwantitatieve PCR-apparaat en de waarden van de expressie naar interne controle U6 snRNA normaliseren. Opmerking: Elke groep bestaat uit drievoudige monsters24.</li>
</ol>4. Exosomes Labeling en zuivering
<ol><li>Schorten exosomes pellet met 100 µL schorsing oplossing in een polypropyleen tube van 1,5 mL, voeg dan 0.4 µL van de kleurstof van de exosomes in de andere buis met 100 µL van de luchtvering oplossing.</li>
	<li>Snel exosomes in de oplossing toevoegen aan de oplossing van de kleurstof en meng het door pipetteren. Houd de monsters gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur, beschermen tegen licht.</li>
	<li>Zet één exosome spin kolom in een tube van 1,5 mL elutie. Het mengsel oplossing overbrengen in het midden van de kolom exosome spin.</li>
	<li>Draai de kolom gedurende 2 minuten op 800 x g bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Negeren van de kolom en het eluted monster bij-20 ° C bewaren tot gebruik.</li>
</ol>5. bevestiging van Exosomes genomen door ontvangende cellen
<ol><li>1 x 104 MLE 12 distributiedatum in een dia 8-well kamer en cultuur cellen bij 37 ° C, 5% CO2zaad.</li>
	<li>10 µL van de TL-label van het exosomes aan de cellen toevoegen. Incubeer gedurende 1 uur bij 37 ° C.</li>
	<li>Verwijderen van cultuurmedia en wassen van cellen met PBS, dan herstellen van cellen met 1% paraformaldehyde voor 10 minuten bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Monteer de dia in mount medium met DAPI.</li>
	<li>Analyseren van monsters door een fluorescentie Microscoop en nemen van beelden, 40 X vergroting.</li>
</ol>6. verificatie van de interactie tussen Exosomes en ontvangende cellen
<ol><li>Zaad 2 x 105 MLE12 per putje in een 12-well cultuur plaat met passende kweekmedium en cultuur cellen bij 37 ° C, 5% CO2.</li>
	<li>20 µg exosomes aan de vloeistof die muis BAL aan MLE12 cellen toevoegen en instellen van replicaat-organismen per experimentele groep.</li>
	<li>24 h later wassen met PBS cellen en toevoegen van 600 µL lysis-buffermengsel in put. Voorzichtig schudden van de plaat en het verzamelen van lysis van de monsters in 1,5 mL tube met de pipet.</li>
	<li>De totale RNA isolatie standaardprotocol en cDNA omgekeerde transcriptie protocol volgen, de single-strand cDNA omgekeerde transcriptie29compleet.</li>
	<li>Volg de real-time PCR standaardprotocol voor het detecteren van mRNA uitdrukking niveau in ontvangende cellen29. Gebruik specifieke real-time PCR primers tegen TNF-α, IL-6, en ZO-1. PCR reacties worden uitgevoerd met het kwantitatieve PCR-apparaat en de waarden van de expressie naar de interne controle GAPDH te normaliseren. Opmerking: Elke groep bestaat uit drievoudige monsters.</li>
</ol>

<ol><li>Rubenfeld, G. D., Herridge, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+outcomes+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and outcomes of acute lung injury.</a> Chest. 131, 554-562 (2007).</li>
<li>Baron, R. M., Choi, A. J., Owen, C. A., Choi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+manipulated+mouse+models+of+lung+disease%3A+potential+and+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Lung+cellular+and+molecular+physiology%22%5BJournal%5D)">Genetically manipulated mouse models of lung disease: potential and pitfalls.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L485-L497 (2012).</li>
<li>Han, S., Mallampalli, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%3A+from+mechanism+to+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome: from mechanism to translation.</a> Journal of immunology. , Baltimore, Md. 855-860 (1950).</li>
<li>Aeffner, F., Bolon, B., Davis, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Models+of+Acute+Respiratory+Distress+Syndrome%3A+A+Review+of+Analytical+Approaches%2C+Pathologic+Features%2C+and+Common+Measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+pathology%22%5BJournal%5D)">Mouse Models of Acute Respiratory Distress Syndrome: A Review of Analytical Approaches, Pathologic Features, and Common Measurements.</a> Toxicologic pathology. 43, 1074-1092 (2015).</li>
<li>Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Lung+cellular+and+molecular+physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute lung injury.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L379-L399 (2008).</li>
<li>Terrasini, N., Lionetti, V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28328650">Exosomes in Critical Illness.</a> Critical care medicine. , (2017).</li>
<li>Fujita, Y., Kadota, T., Araya, J., Ochiya, T., Kuwano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+Vesicles%3A+New+Players+in+Lung+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+cell+and+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity.</a> American journal of respiratory cell and molecular biology. , (2017).</li>
<li>Kubo, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28684288">Extracellular Vesicles in Lung Disease.</a> Chest. 153, 210-216 (2018).</li>
<li>Krol, J., Loedige, I., Filipowicz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+widespread+regulation+of+microRNA+biogenesis%2C+function+and+decay%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">The widespread regulation of microRNA biogenesis, function and decay.</a> Nature reviews. Genetics. 11, 597-610 (2010).</li>
<li>Bartel, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNAs%3A+target+recognition+and+regulatory+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">MicroRNAs: target recognition and regulatory functions.</a> Cell. 136, 215-233 (2009).</li>
<li>Fanini, F., Fabbri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CANCER-DERIVED+EXOSOMIC+microRNAs+SHAPE+THE+IMMUNE+SYSTEM+WITHIN+THE+TUMOR+MICROENVIRONMENT%3A+STATE+OF+THE+ART%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+cell+%26+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">CANCER-DERIVED EXOSOMIC microRNAs SHAPE THE IMMUNE SYSTEM WITHIN THE TUMOR MICROENVIRONMENT: STATE OF THE ART.</a> Seminars in cell & developmental biology. , (2016).</li>
<li>Agarwal, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental%2C+Systems%2C+and+Computational+Approaches+to+Understanding+the+MicroRNA-Mediated+Reparative+Potential+of+Cardiac+Progenitor+Cell-Derived+Exosomes+From+Pediatric+Patients%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+research%22%5BJournal%5D)">Experimental, Systems, and Computational Approaches to Understanding the MicroRNA-Mediated Reparative Potential of Cardiac Progenitor Cell-Derived Exosomes From Pediatric Patients.</a> Circulation research. 120, 701-712 (2017).</li>
<li>Prattichizzo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+microRNAs+and+endothelial+hyperglycaemic+memory%3A+a+therapeutic+opportunity%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%2C+obesity+%26+metabolism%22%5BJournal%5D)">Extracellular microRNAs and endothelial hyperglycaemic memory: a therapeutic opportunity?</a> Diabetes, obesity & metabolism. 18, 855-867 (2016).</li>
<li>Huang-Doran, I., Zhang, C. Y., Vidal-Puig, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+Vesicles%3A+Novel+Mediators+of+Cell+Communication+In+Metabolic+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+endocrinology+and+metabolism%3A+TEM%22%5BJournal%5D)">Extracellular Vesicles: Novel Mediators of Cell Communication In Metabolic Disease.</a> Trends in endocrinology and metabolism: TEM. 28, 3-18 (2017).</li>
<li>Khalyfa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+Plasma+Extracellular+Microvesicle+MicroRNA+Cargo+and+Endothelial+Dysfunction+in+Children+with+Obstructive+Sleep+Apnea%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+and+critical+care+medicine%22%5BJournal%5D)">Circulating Plasma Extracellular Microvesicle MicroRNA Cargo and Endothelial Dysfunction in Children with Obstructive Sleep Apnea.</a> American journal of respiratory and critical care medicine. 194, 1116-1126 (2016).</li>
<li>Thomou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+circulating+miRNAs+regulate+gene+expression+in+other+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived circulating miRNAs regulate gene expression in other tissues.</a> Nature. 542, 450-455 (2017).</li>
<li>Gregson, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+Exosomal+RNA+Profiles+in+Bronchoalveolar+Lavage+from+Lung+Transplants+with+Acute+Rejection%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+and+critical+care+medicine%22%5BJournal%5D)">Altered Exosomal RNA Profiles in Bronchoalveolar Lavage from Lung Transplants with Acute Rejection.</a> American journal of respiratory and critical care medicine. 192, 1490-1503 (2015).</li>
<li>Valadi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-mediated+transfer+of+mRNAs+and+microRNAs+is+a+novel+mechanism+of+genetic+exchange+between+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells.</a> Nature cell biology. 9, 654-659 (2007).</li>
<li>Doxaki, C., Kampranis, S. C., Eliopoulos, A. G., Spilianakis, C., Tsatsanis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+Regulation+of+miR-155+and+miR-146a+Genes+during+Induction+of+Endotoxin+Tolerance+in+Macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Coordinated Regulation of miR-155 and miR-146a Genes during Induction of Endotoxin Tolerance in Macrophages.</a> Journal of immunology. , Baltimore, Md. 5750-5761 (2015).</li>
<li>Schulte, L. N., Westermann, A. J., Vogel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+activation+and+functional+specialization+of+miR-146+and+miR-155+in+innate+immune+sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+acids+research%22%5BJournal%5D)">Differential activation and functional specialization of miR-146 and miR-155 in innate immune sensing.</a> Nucleic acids research. 41, 542-553 (2013).</li>
<li>Alexander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-delivered+microRNAs+modulate+the+inflammatory+response+to+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+communications%22%5BJournal%5D)">Exosome-delivered microRNAs modulate the inflammatory response to endotoxin.</a> Nature communications. 6, 7321(2015).</li>
<li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TREM-1+is+induced+in+tumor+associated+macrophages+by+cyclo-oxygenase+pathway+in+human+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">TREM-1 is induced in tumor associated macrophages by cyclo-oxygenase pathway in human non-small cell lung cancer.</a> PloS one. 9, e94241(2014).</li>
<li>Xu, R., Richards, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+In+Vitro+Co-Culture+Model+in+Anti-Cancer+Drug+Development+Cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Combinatorial+chemistry+%26+high+throughput+screening%22%5BJournal%5D)">Development of In Vitro Co-Culture Model in Anti-Cancer Drug Development Cascade.</a> Combinatorial chemistry & high throughput screening. 20, 451-457 (2017).</li>
<li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TREM-1-accentuated+lung+injury+via+miR-155+is+inhibited+by+LP17+nanomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Lung+cellular+and+molecular+physiology%22%5BJournal%5D)">TREM-1-accentuated lung injury via miR-155 is inhibited by LP17 nanomedicine.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L426-L438 (2016).</li>
<li>Sadikot, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-dose+dexamethasone+accentuates+nuclear+factor-kappa+b+activation+in+endotoxin-treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+and+critical+care+medicine%22%5BJournal%5D)">High-dose dexamethasone accentuates nuclear factor-kappa b activation in endotoxin-treated mice.</a> American journal of respiratory and critical care medicine. 164, 873-878 (2001).</li>
<li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Curcumin+mediated+epigenetic+modulation+inhibits+TREM-1+expression+in+response+to+lipopolysaccharide%5BTitle%5D)+AND+%22The+international+journal+of+biochemistry+%26+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Curcumin mediated epigenetic modulation inhibits TREM-1 expression in response to lipopolysaccharide.</a> The international journal of biochemistry & cell biology. 44, 2032-2043 (2012).</li>
<li>Chauret, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorine+dioxide+inactivation+of+Cryptosporidium+parvum+oocysts+and+bacterial+spore+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+environmental+microbiology%22%5BJournal%5D)">Chlorine dioxide inactivation of Cryptosporidium parvum oocysts and bacterial spore indicators.</a> Applied and environmental microbiology. 67, 2993-3001 (2001).</li>
<li>Cizmar, P., Yuana, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+Characterization+of+Extracellular+Vesicles+by+Transmission+and+Cryo-Transmission+Electron+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Detection and Characterization of Extracellular Vesicles by Transmission and Cryo-Transmission Electron Microscopy.</a> Methods in molecular biology. , Clifton, N.J. 221-232 (2017).</li>
<li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-related+proteins+prolong+macrophage+survival+through+induction+of+Triggering+receptor+expressed+on+myeloid+cells-1%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+reports%22%5BJournal%5D)">HIV-related proteins prolong macrophage survival through induction of Triggering receptor expressed on myeloid cells-1.</a> Scientific reports. 7, 42028(2017).</li>
<li>Jackson, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Mitochondrial+Transfer+in+Direct+Co-cultures+of+Human+Monocyte-derived+Macrophages+%28MDM%29+and+Mesenchymal+Stem+Cells+%28MSC%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Analysis of Mitochondrial Transfer in Direct Co-cultures of Human Monocyte-derived Macrophages (MDM) and Mesenchymal Stem Cells (MSC).</a> Bio-protocol. 7, (2017).</li>
<li>Fujita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+Vesicles%3A+New+Players+in+Lung+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+cell+and+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity.</a> American journal of respiratory cell and molecular biology. 17, 474-484 (2017).</li>
<li>Gunasekaran, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor-Derived+Exosomes+With+Lung+Self-Antigens+in+Human+Lung+Allograft+Rejection%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+transplantation+%3A+official+journal+of+the+American+Society+of+Transplantation+and+the+American+Society+of+Transplant+Surgeons%22%5BJournal%5D)">Donor-Derived Exosomes With Lung Self-Antigens in Human Lung Allograft Rejection.</a> American journal of transplantation : official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 17, 474-484 (2017).</li>
<li>Kalra, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+proteomics+evaluation+of+plasma+exosome+isolation+techniques+and+assessment+of+the+stability+of+exosomes+in+normal+human+blood+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma.</a> Proteomics. 13, 3354-3364 (2013).</li>
<li>Baranyai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Exosomes+from+Blood+Plasma%3A+Qualitative+and+Quantitative+Comparison+of+Ultracentrifugation+and+Size+Exclusion+Chromatography+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Isolation of Exosomes from Blood Plasma: Qualitative and Quantitative Comparison of Ultracentrifugation and Size Exclusion Chromatography Methods.</a> PloS one. 10, e0145686(2015).</li>
<li>Nordin, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrafiltration+with+size-exclusion+liquid+chromatography+for+high+yield+isolation+of+extracellular+vesicles+preserving+intact+biophysical+and+functional+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine+%3A+nanotechnology%2C+biology%2C+and+medicine%22%5BJournal%5D)">Ultrafiltration with size-exclusion liquid chromatography for high yield isolation of extracellular vesicles preserving intact biophysical and functional properties.</a> Nanomedicine : nanotechnology, biology, and medicine. 11, 879-883 (2015).</li>
</ol>

Dit werk werd gesteund door VA verdienste Review 2I01BX001786-06A1 financiering van RS.

Muismodellen van ziekten worden vaak gebruikt om te evalueren van de fysiologische functie van specifieke genen en om de kosten van experimenten2. De acute septische Long schade beschreven hier bootst ontstekingsreactie gezien bij mensen met ARDS. Dit model is relevante onderzoeken de Moleculaire Pathogenese, ontwikkeling van biomarkers en het testen van mogelijke nieuwe therapieën5.
Co cultuur systemen zijn relevant voor in vivo onderzo...

ALI en ARDS zijn de levensbedreigende vormen van respiratoire insufficiëntie met ernstige hypoxemia veroorzaakt door niet-cardiogeen longoedeem die ongeveer 1 miljoen mensen wereldwijd treft jaarlijks1. De etiologie van ARDS omvat directe schade aan de longen van infecties of aspiratie en een scala aan indirecte beledigingen. De afgelopen tien jaar is er een toegenomen begrip van de moleculaire pathogenese van ARDS, specifieke gerichte behandelingen voor ARDS zijn echter nog worden ontwikkeld2,3.
Verschillende dierlijke modellen van acute long letsel hebben ontwikkeld die voorzien in een brug vertalen van experimentele therapieën op menselijke studies4,5. Gebruikte modellen omvat lokale installatie van oliezuur, bacteriën, LPS en bleomycine. Andere benaderingen omvatten ischemie-reperfusie, cecal afbinding punctie, mechanische ventilatie-geïnduceerde stretch letsel, hyperoxia of systemische toediening van bacteriën en LPS5. Deze modellen bieden een nuttige biologisch systeem om te testen van klinische hypothesen en voor de ontwikkeling van mogelijke therapieën. Als u wilt nabootsen menselijke ARDS, moeten dierlijke modellen reproduceren ontsteking en acute schade aan de epitheliale en endotheliale cellen met afwijkingen in de functie van de barrière in de longen.
Exosomes zijn membraan blaasjes met 20-200 nm in diameter, waarvan de moleculaire inhoud bevat eiwitten, DNA, RNA en lipiden, en vergemakkelijken van Inter cellulaire communicatie in weefsel communicatie via moleculaire samenstelling overdracht. Exosomes worden uitgescheiden door meerdere soorten cellen, zoals de endotheliale cellen, epitheliaale cellen, zachte spiercellen en tumorcellen, en bestaan in menselijke lichaamsvloeistof. Studies tonen aan dat exosomes cross-talk tussen immuuncellen en stromale cellen tijdens de bestrijding van infectiekiemen en steriele ontstekingsziekten reguleren, en hun abnormale vrijlating lijkt te worden geregeld door verschillende natuurlijke en experimentele prikkels tijdens fysiologische en ziekteprocessen6. Dergelijke communicatie-netwerk kan een belangrijke rol spelen in de pathogenese van longziekten en pathofysiologische progressie7,8kan beïnvloeden. Zo 18-22 nucleotide niet-coderende RNAs, miRNAs bestaan in zowel weefsels en lichaamsvloeistoffen, plasma, sera en moduleren van mRNA uitdrukking bij posttranslationele niveau9,10.
Verpakte miRNAs in exosomes differentiatie en functie van meerdere soorten cellen beïnvloeden, en buitensporige niveaus worden geassocieerd met een verscheidenheid van ziekten, waaronder kanker, longziekten, obesitas, diabetes en hart-en vaatziekten11, 12,13,14,15,16. Inwerkingtreding van de ontvangende cellen en pendelen van exosomal miRNAs vergemakkelijken intercellulaire communicatie wijzigen de hemostase communicatie17,18. Acute Long-blessure is een complexe processen, waarbij meerdere celtypen met uitgebreide intercellulaire communicatie via exosomes8. miR-155 en miR-146a delen van de gemeenschappelijke transcriptionele reguleringsmechanisme en bijdragen aan de ontstekingsreactie en de immuun tolerantie19,20. Recente studies tonen aan dat zowel ontstekingsreactie moduleren via exosomal miRNAs pendelen tussen immuuncellen21. Echter, de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan f effecten van exosomal miRNAs op de alveolaire reactie op endotoxine onduidelijk blijven, ongetwijfeld de potentiële klinische relevantie en translationeel implicatie verdienste verder onderzoek.
Co cultuur modellen gebruikt om te definiëren van de wisselwerking tussen de specifieke celtypes in de complexe omgeving, zoals de ontsteking en kanker22,23. Deze platforms bieden een alternatieve strategie te ondervragen cross talk tussen celtypen, met name voor immuun en structurele cellen.
Intra-tracheale, aërosol, intraperitoneaal of systemische toediening van LPS worden veel gebruikt voor het opwekken van experimentele long letsel24,25,26, en voor het opwekken van epitheliale en endotheel permeabiliteit is gebleken defecten. We gebruiken hier intraperitoneaal LPS ertoe een septische model van acute lung injury in muizen. Binnen de 24u intraperitoneale toediening van LPS, permeabiliteit defecten veroorzaakt in de longen met de aanwerving van ontstekingscellen. Verder laten we zien dat de exosomes van de BAL miRNA-155 en miR-146a bevatten, en exosomes aan de BAL vloeistof opwekken van pro-ontsteking cytokinen expressie in ontvangende epitheliale cellen, met inbegrip van IL-6 en TNF-α. Deze gegevens zijn de eerste om te laten zien dat exosomal miRNAs bal in dit model van acute septische long letsel worden uitgescheiden.

<table><tbody><tr><td>lipopolysaccharide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Escherichia coli 055:B5</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH7.2(1X)</td><td>Life technologies</td><td>20012-027</td><td></td></tr><tr><td>mirVana miRNA isolation kit</td><td>Thermo Fisher</td><td>449774</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Master Mix</td><td>Thermo Fisher</td><td>4369016</td><td></td></tr><tr><td>mmu-miR-155 (002571) primer</td><td>Thermo Fisher</td><td>4427975</td><td></td></tr><tr><td>has-miR-146a (000468) primer</td><td>Thermo Fisher</td><td>4427975</td><td></td></tr><tr><td>U6 snRNA primer</td><td>Thermo Fisher</td><td>4427975</td><td></td></tr><tr><td>TNF-α (Mm00443258_m1 ) primer</td><td>Thermo Fisher</td><td>4331182</td><td></td></tr><tr><td>IL-6 (Mm00446190_m1&nbsp;&nbsp; )primer</td><td>Thermo Fisher</td><td>4331182</td><td></td></tr><tr><td>ZO-1 (Mm00493699_m1&nbsp; )primer</td><td>Thermo Fisher</td><td>4331182</td><td></td></tr><tr><td>minimal essential medium (MEM)</td><td>Thermo Fisher</td><td>11095-072</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA oplossing(0,05%)</td><td>Thermo Fisher</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Exosomes werden gelabeld met PKH67 door PKH67 Green Fluorescent Cell linker Mini Kit&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MINI67-1KT</td><td></td></tr><tr><td>Exosome Spin Columns (MW3000)</td><td>Thermo Fisher</td><td>4484449</td><td></td></tr><tr><td>Beckman Coulter Optima L-100XP ultracentrifuge&nbsp;</td><td>Beckman Coulter</td><td>L-100XP</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-clear centrifuge tubes</td><td>Beckman Coulter</td><td>344058</td><td></td></tr><tr><td>Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Transmissie-elektronenmicroscopen (TEM)</td><td>JEOL Ltd</td><td>120 kV TEM</td><td></td></tr><tr><td>Olympus BX41 microscoop</td><td>Olympus</td><td>BX41</td><td></td></tr></tbody></table>

bronchoalveolar lavage exosomes lipopolysaccharide-geïnduceerde septische long letsel

Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury

Acute long letsel (ALI) en acute respiratory distress syndrome (ARDS) vormen een heterogene groep van longziekten die nog steeds een hoge morbiditeit en mortaliteit. De moleculaire pathogenese van ALI wordt beter gedefinieerd; echter, vanwege de complexe aard van de ziekte moleculaire therapieën moeten nog worden ontwikkeld. Hier gebruiken we een lipopolysaccharide (LPS) geïnduceerde muismodel van acute septische long letsel af te bakenen de rol van exosomes in de inflammatoire respons. Met behulp van dit model, hebben wij laten zien dat muizen die zijn blootgesteld aan intraperitoneaal LPS afscheiden exosomes in Broncho-alveolaire lavage (BAL) vloeistof uit de longen die zijn ingepakt met de miRNA en cytokinen tot regeling van de ontstekingsreactie. Verder gebruikt een modelsysteem co cultuur, laten we zien dat exosomes verlost van macrofagen expressie van strakke junction eiwitten in bronchiale epitheliale cellen verstoren. Deze resultaten suggereren dat 1) cross talk tussen aangeboren immuun en structurele cellen via de exosomal pendelen bijdraagt aan het inflammatoire respons en verstoring van de structurele barrière en 2) gericht op deze miRNAs een nieuw platform bieden kan te behandelen ALI en ARDS.

Om te induceren septische long letsel, werden muizen behandeld met intraperitoneaal LPS (15 mg/kg). Binnen de 24u van LPS administratie, werd neutrofiele toestroom gezien in de longen, zoals weergegeven in figuur 1A. Muis BAL vloeistof werd getrokken, gevolgd door isolatie en zuivering van exosomes. Morfologie van BALF exosomes werd bevestigd door Transmissie Electronenmicroscopie (figuur 1B).
<p class="jove_content" fo:keep-...

Muizen blootgesteld aan intraperitoneaal LPS afscheiden exosomes in Broncho-alveolaire lavage (BAL) vloeistof die zijn ingepakt met miRNAs. Met behulp van een systeem co cultuur tonen we dat exosomes vrijgegeven in de BAL vloeistof expressie van strakke junction eiwitten in bronchiale epitheliale cellen verstoren en verhogen van expressie van pro-ontsteking cytokinen die long letsel accentueren.

Bronchoalveolar Lavage Exosomes Lipopolysaccharide-geïnduceerde septische long letsel

Acute lung injury (ALI) and acute respiratory distress syndrome (ARDS) represent a heterogeneous group of lung diseases which continues to have a high ...

Het algemene doel van dit experiment is om de rol van exosomen in de inflammatoire reacties in een LPS-geïnduceerde, acute septische longbeschadiging bij muizenmodel te bepalen. Dus deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen met betrekking tot celcommunicatie bij acute longbeschadiging en acuut respiratoire distress syndroom. Vooral intercellulaire communicatie binnen de alveolair-micro omgeving via exosome shuttles.Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de isolatie en karakterisering mogelijk maakt van hoog gezuiverde bronchoalveolaire lavagelavexosomen afgeleid van endotoxinebehandelde septische muizen met acute longbeschadiging. De procedure wordt gedemonstreerd door Dr. Zhihong Yuan en Dr. Chetna Bedi. Om te beginnen, laadt u een enkele milliliter spuit uitgerust met een 27 gauge naald met 0,1 milliliters LPS en PBS per muis en houdt u de eerste zes tot acht weken oude mannelijke C57 zwarte 6J muis handmatig vast.Breng de LPS intraperitoneaal toe en breng het dier terug naar zijn kooi. 24 uur later, maak een vijf millimeter incisie in het midden van de nek van het eerste dier en gebruik stompe forceps om de spieren voorzichtig te scheiden om de luchtpijp bloot te leggen. Plaats vervolgens voorzichtig een 27 gauge naald die is bevestigd aan een steriele 10 milliliter spuit in de luchtpijp en injecteer een milliliter steriele PBS.Vervang dan onmiddellijk de 10 milliliter spuit door een drie milliliter spuit uitgerust met een nieuwe 27 gauge naald. Aspirant de bronchoalveolaire lavage vloeistof of BOLF en voeg de BOLF toe aan een geschikt gelabelde 15 milliliter kegelbuis op ijs. Om de exosomen te isoleren, centrifugeert u de BOLF-monsters en brengt u de supernatanten over naar nieuwe 15 milliliter buizen.Centrifugeer de monsters opnieuw en breng de supernatanten over naar ultracentrifugebuizen om de grotere, cellulaire deeltjes te verwijderen. Breng de supernatanten over naar nieuwe kegelbuizen en laad de monsters in 0,2 micron spuitfilters om alle resterende grotere deeltjes te verwijderen. Voeg de gefilterde monsters toe aan nieuwe ultracentrifugebuizen om de exosomen te pelletten.Gooi voorzichtig de supernatanten weg en schud de pellets opnieuw op in 100 microliter PBS per buis. Breng vervolgens de exosome monsters over naar individuele 1,5 milliliter buizen voor hun opslag op min 80 graden Celsius. Om de exosomen te zuiveren, voegt u 0,4 microliters van de juiste exosome kleurstof toe aan een buis die 100 microliters suspensieoplossing per monster bevat en voegt u snel een ontdooid exosome monster toe aan elke buis kleurstof.Meng de exosomen grondig met de kleurstof en incubeer de monsters bij kamertemperatuur gedurende vijf minuten, beschermd tegen licht. Aan het einde van de incubatie, plaatst u een exosome spinkolom per monster in een 1,5 milliliter illusiebuis en brengt u de exosome oplossingen over naar het centrum van elke spinkolom. Centrifugeer vervolgens de monsters, gooi de kolommen weg en bewaar de illusiemonsters bij min 20 graden Celsius.Om exosome opname door receptorcellen te meten, zaait u eerst een keer 10 tot de vierde muis long epitheel 12 cellen in 0,5 milliliter medium in elke put van een achtputten kamerslide voor een 16 uurscultuur bij 37 graden Celsius in 5% koolstofdioxide. Na ontdooien, voegt u 10 microliters van de gezuiverde fluorescent gelabelde exosomen toe aan elke put en brengt u de celculturen terug naar de incubator gedurende één uur. Aan het einde van de incubatie, wast u de cellen met PBS en fixeert u elke co-cultuur met 1% paraformaldehyde gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur.Verwijder het medium en monteer vervolgens de slide met medium aangevuld met DAPI en beeld de monsters af door middel van fluorescentiemicroscopie bij een 40-voudige vergroting. Om exosome interactie met receptorcellen te verifiëren, zaait u twee keer 10 tot de vijfde muis long epitheel 12 cellen in twee milliliter medium per put in een 12-putten kweekplaat die het geschikte kweekmedium bevat voor een twee uurs incubatie bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide. Aan het einde van de incubatie, voegt u 20 microgram exosomen toe aan drie putten epitheelcellen per experimentele groep en brengt u de cellen terug naar de incubator.Na 24 uur, verwijdert u het medium, wast u de cellen met PBS en voegt u 600 microliters lysis buffer toe aan elke put met zacht schudden. Breng vervolgens de gehele inhoud van elke put over naar individuele 1,5 milliliter buizen en analyseer de monsters volgens de standaard real time PCR protocollen. Binnen 24 uur na LPS toediening, wordt neutrofiele instroom waargenomen in de longen van LPS behandelde dieren.Na hun isolatie en zuivering zoals zojuist is aangetoond, kan de aanwezigheid van exosomen in de BOLF van septische longbeschadigingsdieren worden bevestigd door transmissie elektronenmicroscopie. De expressie van geselecteerde pro-inflammatoire micro RNA is significant verhoogd in bronchoalveolaire vloeistoffen exosomen van LPS behandelde dieren vergeleken met gecontroleerde PBS behandelde muizen. LPS behandelde exosomen worden opgenomen door muis bronchiole epitheelcellen zoals blijkt uit de co-lokalisatie van fluorescent gelabelde exosomen met DAPI gelabelde cellen na één uur co-cultuur.Pro-inflammatoire mediator expressie is significant verhoogd in epitheelcellen gecocultiveerd met exosomen van LPS behandelde dieren vergeleken met co-cultuur met exosomen van controle PBS behandelde muizen. Verder, cellen behandeld met exosomen van LPS behandelde muizen vertonen een significant verzwakte expressie van zonula occludens één vergeleken met controles, wat wijst op een minder intacte celintegriteit na LPS behandelde exosome co-cultuur. De intra-peritoneale injectie van LPS, de bronchoalveolaire lavagetrekking en exosome delegatie van de bronchoalveolaire lavage, alle stappen kunnen in relatief korte tijd worden voltooid.Na dit proces kunnen andere methoden zoals exosome en epitheelcel co-cultuur worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden over de cross talk tussen aangeboren en structurele cellen in de long alveolaire micro-omgeving. Cross talk tussen aangeboren immuun- en structure

bronchoalveolar-lavage-exosomes-lipopolysaccharide-induced-septic

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetica

Source: Yuan, Z., et al. Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates an in vivo mouse model for inducing and analyzing acute lung injury (ALI) using intraperitoneal administration of bacterial lipopolysaccharide. The inflammatory cascade triggered by alveolar macrophages and neutrophils leads to epithelial and endothelial barrier disruption, allowing fluid and immune cells to accumulate in the alveoli. Alveolar...

Lipopolysaccharide-Induced Acute Lung Injury in Mice for Exosome and Immune Analysis

De gastheer immuunrespons op pathogene infectie een strak gereguleerd proces. Met behulp van een lipopolysaccharide long exposure model in muizen, is het mogelijk om hoge resolutie evaluaties van de complexe mechanismen van pathogenese voeren.

Het gebruik van Oropharyngeal Intratracheaal PAMP Administratie en bronchoalveolaire lavage om de immuunrespons van de gastheer in Muizen Evalueer

We beschrijven een werkwijze voor het induceren neutrofiele longontsteking door uitdaging om vernevelde lipopolysacharide door verneveling, te modelleren acute longbeschadiging. Daarnaast worden fundamentele chirurgische technieken long isolatie, tracheale intubatie en bronchoalveolaire lavage beschreven.

Een methode voor het genereren van Pulmonale neutrofilie behulp Aerosolized Lipopolysaccharide

Herhaalde pulmonale lavages in verdoofde varkens induceren longschade lijkt op belangrijke aspecten van het menselijk acute respiratory distress syndrome (ARDS). Hiertoe worden de longen herhaaldelijk gespoeld met 0,9% zoutoplossing bij 37 ° C. Het doel van het protocol is een reproduceerbare vermindering van de gasuitwisseling en hemodynamica voor onderzoek in ARDS.

-Lavage geïnduceerde Surfactant Uitputting in Pigs als een model van de Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS)

De gezondheidsstatus van de long wordt weerspiegeld door het type en het aantal immuuncellen die aanwezig zijn in de bronchiolen van de long. We beschrijven een bronchoalveolaire lavage techniek die de isolatie en studie van niet-adherente cellen en oplosbare factoren uit het onderste luchtwegen van muizen mogelijk maakt.

Bronchoalveolaire lavage van meneuze longen om ontstekingscelinfiltratie te analyseren

Hier beschrijven we twee extracellulaire vesikel isolatie protocollen, ultrafiltratie centrifugeren en ultracentrifugatie met dichtheid kleurovergang centrifugeren, te isoleren van extracellulaire blaasjes van lymfkliertest bronchoalveolar lavage vloeibare steekproeven. De extracellulaire blaasjes lymfkliertest bronchoalveolar lavage vloeistof door beide methoden afgeleid zijn gekwantificeerd en gekenmerkt.

Isolatie van extracellulaire blaasjes aan de lymfkliertest Bronchoalveolar Lavage vloeistof met behulp van een techniek van ultrafiltratie centrifugeren

Hier gepresenteerd is een stap-voor-stap procedure om acute longschade in muizen induceren door directe intratracheal lipopolysaccharide instillatie en uit te voeren FACS analyse van bloedmonsters, bronchoalveolaire lavage vloeistof, en longweefsel. Minimale invasieve, eenvoudige handling, goede reproduceerbaarheid, en titratie van de ziekte ernst zijn voordelen van deze aanpak.

Inducerende acute Long blessure bij muizen door directe Intratracheal lipopolysaccharide instillatie

Gecombineerde ozon- en bacteriële endotoxine blootgestelde muizen vertonen wijdverspreide celdood, waaronder die van neutrofielen. We zagen cellulaire aanpassingen zoals verstoring van cytoskelet lamellipodie, verhoogde cellulaire expressie van complexe V ATP synthase subeenheid β en angiostatine in broncho-alveolaire lavage, onderdrukking van de immuunrespons van de longen en vertraagde neutrofiele rekrutering.

Visualiseren van long cellulaire aanpassingen tijdens gecombineerde ozon en LPS geïnduceerde murine acute longletsel

In deze studie is aangetoond dat een niet-invasieve endotracheale installatietechniek ALI bij ratten ontwikkelt met behulp van een basislaryngoscoop om een precieze LPS-afgifte aan de longen te garanderen. De LPS wordt toegediend via een endotracheale buis met behulp van een laryngoscoop. De omvang van het longletsel wordt op meerdere tijdstippen beoordeeld.

Niet-invasieve endotracheale toediening van lipopolysaccharide om acute longschade bij knaagdieren te induceren

Dit protocol beschrijft een werkwijze voor het efficiënt siRNA transfectie van vers geïsoleerde menselijke villous cytotrofoblasten behulp microporatie en het identificeren van DNA-eiwitcomplexen in deze cellen. Getransfecteerde cellen kunnen worden gecontroleerd door Western blot en EMSA analyses gedurende de 4 dagen cultuurtijd.

siRNA Transfectie en EMSA Analyses op vers geïsoleerde Human Villous cytotrofoblasten

Leer de rol van exosomen bij LPS-geïnduceerde septische longletsel in muizen. Deze methode toont isolatie van bronchoalveolaire spoelvloeistof-exosomen en hun effect op epitheelcellen.

Bronchoalveolar Lavage Exosomes Lipopolysaccharide-geïnduceerde septische long letsel

Meer video's verkennen