Name: Mondelinge Biofilm vorming op verschillende materialen voor tandheelkundige implantaten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 19 s
Description: Leer hoe orale biofilmvorming op titanium en zirconia voor tandheelkundige implantaten wordt geëvalueerd met geavanceerde microscopietechnieken. Deze methode helpt bij het analyseren van bacteriële levensvatbaarheid en morfologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs bedanken voor zijn genereuze hulp met de EDS en SEM José Augusto Maulin van microscopie intervals laboratorium (School van geneeskunde van Ribeirão Preto) analyses en Hermano Teixeira Machado voor zijn genereuze technische bijstand in de videouitgave.

Deze studie werd goedgekeurd door de institutionele Review Board van de School voor tandheelkunde van Ribeirão Preto, en de vrijwilligers deelnemer ondertekende schriftelijke toestemming (proces 2011.1.371.583).
1. de Biofilm vorming in Situ
<ol><li>
Selectie van de deelnemers
	<ol>
<li>Selecteer patiënten op basis van de volgende criteria: een gezonde persoon met een volledig gebit en geen klinische symptomen van orale ziekten.</li>
		<li>Uitsluiten van patiënten op basis van de volgende Uitsluitingscriteria: zwangerschap, borstvoeding, cariës, parodontale ziekte of behandeling met antibiotica in de laatste 3 maanden, roker of een systemische ziekte die de parodontale status kan beïnvloeden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Voorbereiding van intraoral apparaat
	<ol>
<li>Record de maxillaire boog door middel van een alginaat indruk.</li>
		<li>Type IV steen voor te bereiden door 19 mL water met 100 g stenen poeder toe te voegen. Giet de steen in de mal alginaat om een model van de maxillaire boog te maken.</li>
		<li>Ontwerpen en fabriceren van een acryl intraoral apparaat ter ondersteuning van de proefstukken (titanium en keramische schijven).<ol>
<li>Fabriceren nulspanningsveilig gespen van NiCr draad (0.7 mm in doorsnede) met behulp van orthodontische tangen #139 en plaats deze op het model. Als u wilt plaatsen de klem tussen de bovenste premolars, buig u één uiteinde van elke draad zodat zij een lus vormen.<ol>
<li>Passen de lus in de regio van de interdentale Papil. Invoegen in de occlusaal, een zachte kromming om niet te bemoeien met de punten van contact en met de occlusie. Maak een 90° vouwen aan het eind van de klem voor een retentie in het acryl.</li>
				<li>Om de klem in de bovenste tweede Kies past, passen de kromming van de draad in de cervicale derde (vestibulaire) aan de contour van de tand (distale) en maak een 90° vouwen aan het eind van de klem voor een retentie in het acryl. Opmerking: Om te zorgen voor voldoende retentie/stabiliteit naar het intraoral apparaat, de nulspanningsveilig beugels werden gepositioneerd tussen de bovenste premolars en distale aspect van de tweede Kies aan beide zijden van de tandheelkundige boog.</li>
			</ol>
</li>
			<li>Manipuleren van de eigen uithardende acryl hars volgens de instructies van de fabrikant en druk op de acryl hars tussen 2 glazen platen (met een 3 mm dikke spacer viel) tijdens de kunststof fase, om een 3 mm dik blad.</li>
			<li>Leg de acrylplaat op de palatale regio van het model, volgens het ontwerp van het apparaat, en versiering uit de overtollige acrylaat hars met een carver, voordat de polymerisatie.</li>
			<li>Fabriceren wax schijven met behulp van een metalen matrix [10 mm diameter, 2 mm dikte (oppervlakte van 78,5 mm2)] door gesmolten wax in de matrix te plaatsen en te wachten voor de wax te stollen. Handmatig insluiten 4 wax schijven in het acryl hars, 2 van hen tussen de premolars en de andere 2 naast de tweede kiezen.</li>
			<li>Laat de acryl hars polymeriseren in een drukvat onder 20 psi van samengeperste lucht gedurende 20 minuten.</li>
			<li>Afwerking van het intraoral apparaat met een elektrische dental lab handinstrument en cutter en het Pools met schurende rubber.</li>
			<li>Stel het apparaat voor een goede pasvorm in de mond met behulp van de hierboven beschreven apparatuur.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Voorbereiding van de titanium en zirconia specimens Opmerking: Specimens (n = 14) zijn 10 mm in diameter en 2 mm in dikte en hebben een oppervlakte van 78,5 mm2.<ol>
<li>Pools de specimens oppervlakken met watergekoelde sandpapers van afnemende abrasiviteit (600, 1200 en 2000 grit), voor ongeveer 20 min. Opmerking: Het polijsten van de specimens werd uitgevoerd om te standaardiseren van de oppervlakteruwheid op 0,2 µm.</li>
		<li>Reinig en Desinfecteer de specimens en intraoral apparaat met vloeibaar wasmiddel en leidingwater, en gebruik vervolgens een ultrasoonbad isopropyl alcohol voor 15 min. droog ze met absorberend keukenpapier.</li>
		<li>Het herstellen van de specimens in het intraoral mondelinge apparaat met ongeveer 0,1 mL van niet-giftige hot melt lijm (Figuur 1).</li>
		<li>Installeer het apparaat met de modellen in de mondholte. Opmerking: Het intraoral apparaat met de monsters moet gedurende 48 uur gedragen worden. Het apparaat werd verwijderd en opgeslagen in een fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), terwijl de patiënt was het eten en uitvoeren van mondelinge schoonmaken.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. beoordeling van bacteriële levensvatbaarheid
Opmerking: Het monster grootte n = 10.
<ol><li>Bereid een verven-oplossing door het toevoegen van 3 µL van SYTO9 (groene nucleïnezuur fluorescerende kleurstof) en 3 µL van propidium jodide (rode fluorescerende nucleïnezuur kleurstof) aan 1 mL steriel gedistilleerd water. Opmerking: Bereiden oplossingen beschermd tegen licht.</li>
	<li>De specimens overbrengen in een 24-well-plate en ze grondig te wassen met PBS niet-aanhanger cellen verwijderen.</li>
	<li>Voeg het juiste volume (1 mL) van fluorescente kleurstof oplossing ter dekking van de biofilm-bevattende specimen. Voeg de kleurstof zeer zorgvuldig om niet te disorganize de biofilm.</li>
	<li>Incubeer het monster gedurende 20-30 minuten bij kamertemperatuur, beschermd tegen licht.</li>
	<li>Voorzichtig wassen de biofilm monster met steriel gedistilleerd water te verwijderen van de eventuele overtollige kleurstof.</li>
	<li>Plaats van het model in een glazen bodem schotel en multiphoton laser scanning microscopie voor de biofilm analyse uit te voeren. Opmerking: De analyse van de levensvatbaarheid van de bacteriecellen werd uitgevoerd met behulp van een systeem van multiphoton microscopie. De fluorescentie van propidium jodide werd ontdekt met behulp van een filter met een golflengte van excitatie/emissie van 546/680 nm en 477/600 nm voor de SYTO9. De grootte van de beelden verkregen was 5.16188 x 5.16188 mm, hetgeen overeenkomt met 26.64 mm2 van de totale oppervlakte van elk specimen (78,5 mm2) of 33.94% van de totale oppervlakte. De beelden werden gemaakt van de meest centrale gedeelte van het monster, met een resolutie van 1024 x 1024 pixels. Het rode kanaal en groene kanaal afbeeldingen werden geanalyseerd afzonderlijk met behulp van Fiji software31. Elke cel werd geselecteerd met een selectiegereedschap en de intensiteit van de fluorescentie werd gemeten via de geïntegreerde dichtheid van de pixels, af te trekken van de achtergrond van de afbeelding.</li>
</ol>3. analyse van de chemische samenstelling van de de Specimens met energie dispersieve infraroodspectroscopie (EDS)
Opmerking: Het monster grootte n = 3.
<ol><li>Selecteer 3 exemplaren van elke biofilm-vrije testmateriaal en beoordelen van de chemische samenstelling in 2 verschillende gebieden van elk monster met behulp van een Scannende Elektronen Microscoop gekoppeld aan een dispersief energie-spectrometer, met een electron beam spanning van 10 kV32.</li>
</ol>4. morfologische analyse van de bacteriële Biofilm door Scanning elektronen microscopie
Opmerking: Het monster grootte n = 1.
<ol><li>De biofilm vast door de specimens in 2,5% Glutaaraldehyde verdund in 0,1 M natrium cacodylate buffer, pH 7.0-7.3, gedurende 24 uur onder te dompelen.</li>
	<li>Wassen van het monster in PBS buffer (pH = 7.6).</li>
	<li>Postfix de biofilm met 1% osmium tetroxide gedurende 1 uur.</li>
	<li>Wassen van het monster in PBS buffer (pH = 7.6).</li>
	<li>De biofilm monsters zorgvuldig uitdrogen, houden ze ondergedompeld in toenemende concentraties van ethanol oplossingen (50%, 70%, 90%, 95% en 100%). Opmerking: Voer 3 uitwisseling van ethanol op een 100% concentratie. De totale uitdroging stap duurt ongeveer 2 h.</li>
	<li>Overdracht van de specimens aan het kritieke punt droger en diverse vervangingen laten uitvoeren met kooldioxide (CO2) totdat de specimens zich droog.</li>
	<li>De gedroogde monsters uit het apparaat verwijderen en monteren ze op de Scannende Elektronen Microscoop houders.</li>
	<li>Sputter-vacht een 20 nm laagje goud op het oppervlak van het model voor 120 s.</li>
	<li>Plaats de schijven goud beklede in de zaal scannende elektronen microscoop. Het verkrijgen van afbeeldingen uit 5 verschillende gebieden van elk specimen, op 20-30 kV onder variabele druk en op 650 X vergroting12.</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het protocol beschreven in deze studie werd ontwikkeld om de vorming van de biofilm op titanium en zirconia materialen voor prothetische abutments, met inbegrip van de analyse van de levensvatbaarheid van de bacteriële cel en morfologische kenmerken te evalueren. Om dit te verwezenlijken, is een model in situ van biofilm formatie ontworpen, bestaande uit een intraoral apparaat in staat om geschikt voor monsters van de test-materialen en houd ze aan de dynamische mondelinge omgeving gedurende 48 uur blootgesteld....

Bacteriële biofilms zijn complexe, functioneel en structureel georganiseerd microbiële gemeenschappen, gekenmerkt door een verscheidenheid van microbiële soorten die een polymeer van extracellulaire, biologisch actieve matrix1,2te synthetiseren. De bacteriële hechting op biotische of abiotische oppervlakken wordt voorafgegaan door een formatie van de verworven pellicle, voornamelijk bestaande uit speeksel glycoproteïnen1,3,4. Zwakke fysisch-chemische interacties tussen de micro-organismen en de pellicle worden in eerste instantie vastgesteld en gevolgd door sterkere interacties tussen bacteriële adhesines en glycoproteïne receptoren van de verworven pellicle. Microbiële diversiteit stijgt geleidelijk door de coaggregation van secundaire kolonisten aan de receptoren van de al toegevoegde bacteriën, vormen een diepteverschillen Gemeenschap1,3,4, 5.
Homeostase van de mondelinge microbiota en de symbiotische relatie met de host is belangrijk bij het handhaven van de mondgezondheid. De dysbiosis binnen de mondelinge biofilms kan verhogen het risico voor de ontwikkeling van cariës en Parodontitis2,5. Klinische studies tonen aan dat een oorzaak-en-gevolg relatie tussen de accumulatie van biofilm op tanden of tandheelkundige implantaten en de ontwikkeling van gingivitis of peri-implantaat mucositis6,7. De progressie van het inflammatoire proces leidt tot peri-implantitis en het daaruit voortvloeiende verlies van het implantaat8.
Tandheelkundige implantaten en hun prothesecomponenten zijn gevoelig voor bacteriële kolonisatie en biofilm vorming9. Het gebruik van materialen met een chemische samenstelling en de oppervlakte topografie waarmee lage microbiële hechting kan verminderen de prevalentie en de progressie van peri-implantaat ziekten9,10. Titanium is het meest gebruikte materiaal voor de vervaardiging van prothetische abutments voor implantaten; echter, keramische materialen werden onlangs ingevoerd en zijn populariteit als een alternatief voor titanium wint omwille van hun esthetische eigenschappen en biocompatibiliteit11,12. Ook belangrijker, zijn keramische materialen geassocieerd met een zogenaamd verminderde potentieel aan micro-organismen, voornamelijk te wijten aan hun oppervlakteruwheid, bevochtigbaarheid en oppervlakte vrije energie10,13te houden.
In vitro studies hebben bijgedragen tot vooruitgang in het begrip van microbiële hechting prothetische landhoofd oppervlakken9,14,15,16,17. De dynamische omgeving van de mondholte, gekenmerkt door haar variërende temperatuur en de pH en de beschikbaarheid van nutriënten, alsook door de aanwezigheid van shear troepen, is echter niet reproduceerbaar in in vitro experimentele protocollen18, 19. Om dit probleem te verhelpen, is een alternatief het gebruik van in situ modellen van biofilm formatie, die voordelig de driedimensionale structuur voor ex vivo analyse10,20, behoudt 21 , 22 , 23 , 24.
De analyse van de complexe structuur van de biofilm gevormd op mondelinge substraten vereist het gebruik van microscopie technieken staat de weergave van optisch dichte zaak25. Multiphoton laser scanning microscopie is een moderne optie voor biofilm structurele analyse26. Het wordt gekenmerkt door het gebruik van niet-lineaire optica met een verlichting bron dicht bij de infrarood golflengte, gepulseerde tot femtosecondes27. Deze methode is geïndiceerd voor de verwerving van de afbeelding van autofluorescence materialen of materialen gekenmerkt door fluorophores, naast afbeeldingen gegenereerd door niet-lineaire optische signalen afgeleid van een fenomeen dat bekend staat als tweede-harmonische generatie. Onder de voordelen van multiphoton microscopie is de diepte van de grote afbeelding verkregen met de minimumgrootte voor een celschade veroorzaakt door de intensiteit van het licht van excitatie27.
Voor een analyse van de levensvatbaarheid van biofilm op abiotische oppervlakken door multiphoton microscopie, het gebruik van fluorescerend nucleïnezuur kleurstoffen met verschillende spectrale kenmerken en een capaciteit van de penetratie in bacteriecellen is vereist28. Fluorophores SYTO9 (groen-fluorescerende) en propidium jodide (rood-fluorescerende) kunnen worden gebruikt voor een visuele differentiatie tussen levende en dode bacteriën28,29,30. Propidium jodide doordringt enige bacteriën met beschadigde membranen, terwijl SYTO9 bacteriële cellen met een intacte en beschadigde membraan treedt. Wanneer beide kleurstoffen aanwezig in een cel zijn, propidium jodide heeft een grotere affiniteit voor nucleïnezuren en verdringt SYTO9, rode28,30te markeren.
Met het oog op de mondelinge omgeving complexiteit en orale biofilm heterogeniteit, microscopie technieken nodig zijn, die de biofilm analyse van het oppervlak van de tanden en tandheelkundige materialen kunt inschakelen. Dit artikel beschrijft een aantal protocollen ten uitvoer gelegd voor het vergelijken van mondelinge biofilm vorming op titanium en keramische materialen voor prothetische abutments, alsmede de methoden die betrokken zijn bij de mondelinge biofilms analyses de morfologische en cellulair niveau.

<table><tbody><tr><td>Hydrogum 5</td><td>Zhermack Dental</td><td>C302070</td><td></td></tr><tr><td>Durone IV</td><td>Dentsply</td><td>17130500002</td><td></td></tr><tr><td>NiCr wire&nbsp;</td><td>Morelli</td><td>55.01.070</td><td></td></tr><tr><td>JET auto polymerizing acrylic</td><td>Cl&aacute;ssico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dental wax&nbsp;</td><td>Cl&aacute;ssico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pressure pot&nbsp;</td><td>Essencedental</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sandpapers 600 grit</td><td>NORTON</td><td>T216</td><td></td></tr><tr><td>Sandpapers 1200 grit</td><td>NORTON</td><td>T401</td><td></td></tr><tr><td>Sandpapers 2000 grit</td><td>NORTON</td><td>T402</td><td></td></tr><tr><td>Metallographic Polishing Machine</td><td>Arotec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl alcohol</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>W292907</td><td></td></tr><tr><td>Hot melt adhesive</td><td>TECSIL</td><td>PAH M20017</td><td></td></tr><tr><td>Filmtracer LIVE/DEAD Biofilm Viability Kit</td><td>Invitrogen</td><td>L10316</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Tips, 10 &micro;L</td><td>KASVI</td><td>K8-10&nbsp;&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Tips, 1,000 &micro;L</td><td>KASVI</td><td>K8-1000B&nbsp;&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>24-well plate&nbsp;</td><td>KASVI</td><td>K12-024</td><td></td></tr><tr><td>Glass Bottom Dish</td><td>Thermo Scientific</td><td>150680</td><td></td></tr><tr><td>AxioObserver inverted microscope&nbsp;</td><td>ZEISS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chameleon vision ii laser</td><td>Coherent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Objective EC Plan-Neofluar 40x/1.30 Oil DIC</td><td>ZEISS</td><td>440452-9903-000</td><td></td></tr><tr><td>SDD sensors - X-Max 20mm&sup2;</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyde solution</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>G5882</td><td></td></tr><tr><td>Sodium cacodylate Buffer&nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>97068&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Osmium tetroxide</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>201030</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>S9638</td><td>Gebaten voor de bereiding van fosfaat gebufferde zoutoplossing</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P9791&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>MERK</td><td>1.06404</td><td></td></tr><tr><td>Kcl</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P9333&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol absolute for analysis EMSURE</td><td>MERK</td><td>1.00983</td><td></td></tr><tr><td>CPD 030 Critical Point Dryer</td><td>BAL-TEC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>JSM-6610 Series Scanning Electron Microscope</td><td>JEOL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SCD 050 Sputter Coater</td><td>BAL-TEC</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mondelinge biofilm vorming op verschillende materialen voor tandheelkundige implantaten

Oral Biofilm Formation on Different Materials for Dental Implants

Tandheelkundige implantaten en hun prothesecomponenten zijn gevoelig voor bacteriële kolonisatie en biofilm vorming. Het gebruik van materialen waarmee lage microbiële hechting kan verminderen de prevalentie en de progressie van peri-implantaat ziekten. Met het oog op de mondelinge omgeving complexiteit en orale biofilm heterogeniteit, microscopie technieken nodig zijn die een biofilm analyse van het oppervlak van de tanden en tandheelkundige materialen kunt inschakelen. Dit artikel beschrijft een aantal protocollen ten uitvoer gelegd voor het vergelijken van mondelinge biofilm vorming op titanium en keramische materialen voor prothetische abutments, alsmede de methoden die betrokken zijn bij de mondelinge biofilms analyses de morfologische en cellulair niveau. Het objectmodel in situ te evalueren van mondelinge biofilm vorming op titanium en zirconia materialen voor tandheelkundige prothese abutments, zoals beschreven in deze studie biedt een bevredigende behoud van de 48 h biofilm, waardoor het aantonen van methodologische toereikendheid. Multiphoton microscopie kan de analyse van de vertegenwoordiger van een gebied van de biofilm gevormd op de test-materialen. Verder staat het gebruik van fluorophores en de verwerking van de beelden met behulp van multiphoton microscopie de analyse van de bacteriële levensvatbaarheid in een zeer heterogene populatie van micro-organismen. De voorbereiding van biologische monsters voor elektronenmicroscopie bevordert de structurele behoud van biofilm, afbeeldingen met goede resolutie en geen artefacten.

De dichtheid van de kolonisatie van de biofilm na 48u van in situ groei in deze studie werd vertegenwoordigd door het aandeel van de gekoloniseerde gebied op de schijven van het titanium en zirconia ten opzichte van de oppervlakte van het monster met behulp van multiphoton microscopie (op de gescande 26.64 mm2). Figuur 2 geeft de dichtheid van de bacteriële kolonisatie op het oppervlak van de 3 geteste materialen. Een hogere dichtheid van ...

Hier presenteren we een protocol om te evalueren van mondelinge biofilm vorming op titanium en zirconia materialen voor tandheelkundige prothese abutments, met inbegrip van de analyse van de levensvatbaarheid van de bacteriële cellen en morfologische kenmerken. Een in situ -model die samenhangen met krachtige microscopie technieken wordt gebruikt voor de analyse orale biofilm.

Mondelinge Biofilm vorming op verschillende materialen voor tandheelkundige implantaten

Dental implants and their prosthetic components are prone to bacterial colonization and biofilm formation. The use of materials that provides low ...

Vorming van orale biofilm op verschillende materialen voor tandheelkundige implantaten. Bacteriële biofilms zijn complexe, functioneel en structureel georganiseerde microbiële gemeenschappen, gekenmerkt door een diversiteit aan microbiële soorten die extracellulaire, biologisch actieve polymeermatrix synthetiseren. Tandheelkundige implantaten en hun prothetische componenten zijn vatbaar voor bacteriële kolonisatie en biofilmvorming.Het gebruik van materialen met een chemische samenstelling en oppervlaktetopografie die lage microbiële adhesie biedt, kan de prevalentie en progressie van peri-implantaatziekten verminderen. Gezien de complexiteit van de algehele omgeving en de heterogeniteit van orale biofilm, zijn microscopische technieken nodig die de structurele analyse van biofilm van tanden en tandgemateriaaloppervlakken mogelijk maken. Dit artikel beschrijft een reeks protocollen die zijn geïmplementeerd voor het vergelijken van orale biofilmvorming op verschillende materialen voor tandheelkundige implantaten.De stappen die bij het gebruik van biofilmvorming in dit onderzoek werden gevolgd, waren als volgt: De maxillaire boog opnemen door middel van een alginaatinspuiting. Giet de alginaatinspuiting met Type IV-steen om een model van de maxillaire boog te maken. Maak retentieclips van microchroomdraad en plaats ze op het model.Behandel het zelfhardende acrylhars volgens de instructies van de fabrikant en druk het acrylhars tijdens de plastische fase tussen twee glazen platen om een plaat van drie millimeter dik te maken. Leg de acrylplaat op het palatinale gebied van het model, volgens het ontwerp van het apparaat, en snijd het overtollige acrylhars af voordat het wordt gepolymeriseerd. Maak waschijven met een matrix met een diameter van 10 millimeter en een dikte van twee millimeter.Bevat vier waschijven in het acrylhars, twee ervan tussen de premolaren en de andere twee naast de tweede kiezen. Laat het acrylhars polymeriseren in een drukpotten onder 20 pond gecomprimeerde lucht gedurende 20 minuten. Voltooi het intra-orale apparaat met behulp van een elektrische handgreep en frezen en polijsten punten.Polijst de oppervlakken van de monsters met watergekoelde schuurpapieren van afnemende scherpte. Reinig de monsters met vloeibaar afwasmiddel en kraanwater en isopropylalcohol ultrasoon bad gedurende 15 minuten. Droog vervolgens af met absorberende papieren handdoeken.Bevestig de monsters in het intra-orale apparaat met niet-toxisch smeltlijm. Installeer het apparaat met de monsters in de mondholte. Het intra-orale apparaat met de monsters moet gedurende 48 uur worden gedragen.Bereid een verfaardosering voor door drie microliter SYTO 9 en drie microliter propidiumjodide toe te voegen aan één milliliter steriel gedistilleerd water. Breng de monsters over naar een 24-wellplaat en was grondig met PBS om niet-hechtende cellen te verwijderen. Voeg de juiste hoeveelheid fluorescente kleurstofoplossing toe om het biofilm bevattende monster te bedekken.Voeg de kleurstof zeer voorzichtig toe om de biofilm niet te desorganiseren. Incubeer het monster gedurende 20 tot 30 minuten bij kamertemperatuur, beschermd tegen licht. Was het biofilmmonster voorzichtig met steriel gedistilleerd water om overtollige kleurstof te verwijderen.Plaats het monster in een schaal met glazen bodem voor biofilmanalyse, met behulp van multifoton laserscanning microscopie. De grootte van de verkregen beelden was 5,16 x 5,16 mm, wat overeenkomt met 26,64 vierkante millimeter van het totale oppervlak van elk monster of 33,94% van het totale oppervlak. Beelden werden geanalyseerd met behulp van Fiji-software.Elke cel werd geselecteerd met behulp van het selectiegereedschap en de intensiteit van de fluorescentie werd gemeten door de geïntegreerde dichtheid van pixels, waarbij de achtergrond van het beeld werd afgetrokken. Selecteer drie specimens van elk testmateriaal en beoordeel de chemische samenstelling in twee verschillende gebieden van elk specimen, met behulp van een rasterelektronenmicroscoop gekoppeld aan een dispersieve energiespectrometer. Fixeer het biofilm door de monsters gedurende 24 uur in 2,5% glutaraldehyde gedurende 24 uur in 0,1 M natriumcacodylate buffer te dompelen.Was in PBS-buffer. Post-fixeer met 1% osmiumtetroxide gedurende één uur. Was in PBS-buffer.Ontwater de biofilmmonsters voorzichtig, waarbij ze in toenemende concentraties ethanoloplossingen worden gehouden. Breng de monsters over naar de kritische puntdrooginstallatie en maak verschillende vervangingen met koolstofdioxide totdat de monsters zijn gedroogd. Verwijder de gedroogde monsters uit het apparaat en monteer ze op de houders van de rasterelektronenmicroscoop.Verspreid een laag van 20 nanometer goudlaag op de monstersoppervlakken gedurende 120 seconden. De kolonisatie dichtheid van de biofilm na 48 uur in situ groei werd in dit onderzoek weergegeven door de verhouding van het gekoloniseerde gebied tot de titanium en Zirkonia schijven in verhouding tot het totale gescande oppervlak van het monster met behulp van multifoton microscopie. De figuur toont bacteriën die hechten aan de oppervlakken van de testmaterialen.Een hogere dichtheid van biofilm werd waargenomen op de oppervlakken van gegoten en bewerkte titanium schijven dan in zirkonia schijven. Deze figuur toont levende en dode bacteriën die hechten aan het oppervlak van de monsters. In dit protocol dringt het nucleic-acid-gekleurde propidiumjodide alleen door in bacteriën met een beschadigde membraan en geeft daarom een rood fluorescent signaal af dat gerelateerd is aan dode cellen.SYTO 9 dringt door in de bacteriële cellen met intacte of beschadigde membraan en geeft een groen fluorescent signaal af van levende micro-organismen. De cellulaire bacteriële levensvatbaarheid was vergelijkbaar tussen de testmaterialen met een overwicht van levende micro-organismen in alle groepen. Er waren scheuren, groeven of slijtagedefecten aanwezig op het oppervlak van de verschillende geanalyseerde materialen, die zijn ontstaan tijdens het polijst- en/of bewerkingsproces.In de Zirkonia schijven werden grote gebieden waargenomen met afwezigheid van micro-organismen en aanwezigheid van kleine polymorfe microbiële aggregaten,

oral-biofilm-formation-on-different-materials-for-dental-implants

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Biofilms gevormd op tandoppervlakken zijn zeer complex en worden blootgesteld aan een constante aangeboren en exogene milieu-uitdagingen, die hun architectuur moduleren, fysiologie en transcriptoom. We ontwikkelden een toolbox om de samenstelling, de structurele organisatie en gen-expressie van orale biofilms, die kan worden aangepast aan andere gebieden van de biofilm onderzoek te onderzoeken.

Een analytisch instrument-box voor de Uitgebreide Biochemische, structurele en Transcriptome Evaluatie van orale biofilms gemedieerd door mutans streptococcen

We presenteren een protocol voor structurele en analyse van de samenstelling van natuurlijke orale biofilm van orthodontische apparatuur...

Orale Biofilm Analyse van de Palatal Expanders door middel van fluorescentie in-situ hybridisatie en confocale laser scanning microscopie

Source: Schlafer, S, and Frost Kristensen, M. Monitoring Extracellular pH in Cross-Kingdom Biofilms using Confocal Microscopy. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the cultivation of Streptococcus mutans and Candida albicans cross-kingdom biofilms under oral-like conditions to model bacterial–fungal interactions, enabling the study of microbial synergy, glucan-mediated adhesion, and acidogenic virulence in oral pathogenesis.

Establishing Bacterial–Fungal Cross-Kingdom Biofilms for Studying Oral Pathogenesis

Een protocol voor de gelijktijdige kwantificering en vergelijking van drie cellulaire en extracellulaire componenten binnen biofilms wordt gepresenteerd. De methodologie omvat het gebruik van confocale laserscanningmicroscopie, software voor biofilmstructuuranalyse en -visualisatie, en statistische analysesoftware.

Concurrent Kwantificering van Cellulaire en extracellulaire componenten van biofilms

Het doel van deze methoden papier is het gebruik van een microfluïdische systeem te beschrijven voor de ontwikkeling van multi-species biofilms dat soort gewoonlijk geïdentificeerd in humaan supragingivale tandplaque bevatten. Methoden om biofilm architectuur, biofilm levensvatbaarheid, en een aanpak om te oogsten biofilm voor cultuur-afhankelijke of cultuur-onafhankelijke analyses zijn gemarkeerd beschrijven.

Toepassing van een High-throughput<em&gt; In Vitro</em&gt; Microfluïdische System op mondelinge Multi-species biofilms Ontwikkel

Veranderingen in de mondelinge microbiome tijdens jeugd zijn van toenemende belangstelling. Vergelijking van verschillende microbiome studies blijkt een gebrek aan gestandaardiseerde bemonstering protocollen. Beperkte ruimte maakt het geluid subgingivale Sulcus (hersenanatomie) van kinderen uitdagende bemonstering. Papieren punt bemonstering wordt hier in detail gepresenteerd als de methode van keuze voor dit gebied.

Mondelinge Biofilm bemonstering voor analyse van de Microbiome bij gezonde kinderen

Natuurlijke producten vormen veelbelovende uitgangspunten voor de ontwikkeling van nieuwe geneesmiddelen en therapeutische middelen. Vanwege de grote chemische diversiteit is het vinden van nieuwe therapeutische verbindingen van planten echter een uitdagende en tijdrovende taak. We beschrijven een vereenvoudigde aanpak om antimicrobiële en antibiofilmmoleculen te identificeren uit plantenextracten en fracties.

Systematische aanpak om nieuwe antimicrobiële en antibiofilmmoleculen uit plantenextracten en -fracties te identificeren om tandheelkundige cariës te voorkomen

Het huidige protocol beschrijft een experimenteel model op basis van inktkleuring dat kan worden gebruikt voor in vitro onderzoek naar oppervlaktedecontaminatie en ruwheid van implantaten om bij te dragen aan klinische besluitvorming.

Effecten van mechanische methoden die worden gebruikt bij de behandeling van peri-implantitis op de ontsmetting en ruwheid van het implantaatoppervlak

De huidige pilot in vitro had als doel de reinigingseffectiviteit van drie verschillende decontaminatie-instrumenten en mogelijke oppervlaktewijzigingen na behandeling te evalueren, waarbij permanente rode inkt werd gebruikt om de aanwezigheid van orale biofilm na te bootsen.

Pilot in vitro onderzoek om de reinigingscapaciteit en effecten van verschillende decontaminatiemethoden op implantaatoppervlakken te beoordelen

De werkwijze beschreven isolatie en karakterisering van menselijke pulpa stamcellen (hDPSCs) door...

Isolatie, karakterisering en vergelijkende differentiatie van humane Dental Pulp stamcellen uit permanente tanden met behulp van twee verschillende methoden

Leer hoe orale biofilmvorming op titanium en zirconia voor tandheelkundige implantaten wordt geëvalueerd met geavanceerde microscopietechnieken. Deze methode helpt bij het analyseren van bacteriële levensvatbaarheid en morfologie.

Mondelinge Biofilm vorming op verschillende materialen voor tandheelkundige implantaten

Meer video's verkennen