Name: Snelle, schaalbare montage en laden van bioactieve eiwitten en Immunostimulants in verschillende synthetische Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Leer flash nanoprecipitatie voor het fabriceren van geavanceerde drug delivery systemen met nanocarriers. Deze methode maakt het mogelijk om bioactieve moleculen en eiwitten te laden onder steriele omstandigheden.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij erkennen dat personeel en instrumentatie ondersteuning van de structurele biologie faciliteit aan de Northwestern University. De steun van de R.H. Lurie uitgebreide kanker centrum van Northwestern University en de Noordwestelijke Universiteit structurele biologie faciliteiten wordt erkend. De detector van de directe elektron Gatan K2 werd gekocht met middelen die door de Chicago biomedische Consortium met steun uit de fondsen Searle op The Chicago Gemeenschap Trust. Wij danken ook de volgende faciliteiten aan de Northwestern University: de Keck interdisciplinaire oppervlak wetenschap faciliteit, de structurele biologie-faciliteit, de biologische Imaging faciliteit, het Center for Advanced Molecular Imaging en de analytische Bionanotechnologie apparatuur Core. Dit onderzoek werd gesteund door de subsidie van de National Science Foundation 1453576, de nationale instituten van gezondheid directeur van nieuwe Innovator Award 1DP2HL132390-01, het centrum voor regeneratieve nanogeneeskunde katalysator Award en de 2014 McCormick katalysator Award. SDA werd gedeeltelijk ondersteund door de NIH predoctoraal biotechnologie opleiding Grant T32GM008449.

<ol><li>Stano, A., Scott, E. A., Dane, K. Y., Swartz, M. A., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunable+T+cell+immunity+towards+a+protein+antigen+using+polymersomes+vs.+solid-core+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Tunable T cell immunity towards a protein antigen using polymersomes vs. solid-core nanoparticles.</a> Biomaterials. 34 (17), 4339-4346 (2013).</li>
<li>Discher, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymersomes%3A+tough+vesicles+made+from+diblock+copolymers%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Polymersomes: tough vesicles made from diblock copolymers.</a> Science. 284 (5417), 1143-1146 (1999).</li>
<li>Vasdekis, A. E., Scott, E. A., O'Neil, C. P., Psaltis, D., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+intracellular+delivery+based+on+optofluidic+polymersome+rupture%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Precision intracellular delivery based on optofluidic polymersome rupture.</a> ACS Nano. 6 (9), 7850-7857 (2012).</li>
<li>Yi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailoring+Nanostructure+Morphology+for+Enhanced+Targeting+of+Dendritic+Cells+in+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Tailoring Nanostructure Morphology for Enhanced Targeting of Dendritic Cells in Atherosclerosis.</a> ACS Nano. 10 (12), 11290-11303 (2016).</li>
<li>Shum, H. C., Kim, J. W., Weitz, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+fabrication+of+monodisperse+biocompatible+and+biodegradable+polymersomes+with+controlled+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Microfluidic fabrication of monodisperse biocompatible and biodegradable polymersomes with controlled permeability.</a> Journal of the American Chemical Society. 130 (29), 9543-9549 (2008).</li>
<li>Pessi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics-assisted+engineering+of+polymeric+microcapsules+with+high+encapsulation+efficiency+for+protein+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Microfluidics-assisted engineering of polymeric microcapsules with high encapsulation efficiency for protein drug delivery.</a> International Journal of Pharmaceutics. 472 (1-2), 82-87 (2014).</li>
<li>O'Neil, C. P., Suzuki, T., Demurtas, D., Finka, A., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+the+encapsulation+of+biomolecules+into+polymersomes+via+direct+hydration%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">A novel method for the encapsulation of biomolecules into polymersomes via direct hydration.</a> Langmuir. 25 (16), 9025-9029 (2009).</li>
<li>Saad, W. S., Prud'homme, R. K. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1748013215301201">Principles of nanoparticle formation by flash nanoprecipitation.</a> Nano Today. 11 (2), 212-227 (2016).</li>
<li>Johnson, B. K., Prud'homme, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+for+rapid+self-assembly+of+block+copolymer+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Review+Letters%22%5BJournal%5D)">Mechanism for rapid self-assembly of block copolymer nanoparticles.</a> Physical Review Letters. 91 (11), 118302(2003).</li>
<li>Han, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+confined+impingement+jets+mixer+for+flash+nanoprecipitation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">A simple confined impingement jets mixer for flash nanoprecipitation.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 101 (10), 4018-4023 (2012).</li>
<li>Allen, S., Osorio, O., Liu, Y. G., Scott, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facile+assembly+and+loading+of+theranostic+polymersomes+via+multi-impingement+flash+nanoprecipitation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Facile assembly and loading of theranostic polymersomes via multi-impingement flash nanoprecipitation.</a> Journal of Controlled Release. 262, 91-103 (2017).</li>
<li>Bobbala, S., Allen, S. D., Scott, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+nanoprecipitation+permits+versatile+assembly+and+loading+of+polymeric+bicontinuous+cubic+nanospheres%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Flash nanoprecipitation permits versatile assembly and loading of polymeric bicontinuous cubic nanospheres.</a> Nanoscale. 10 (11), 5078-5088 (2018).</li>
<li>Allen, S. D., et al. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s12274-018-2069-x">Polymersomes scalably fabricated via flash nanoprecipitation are non-toxic in non-human primates and associate with leukocytes in the spleen and kidney following intravenous administration.</a> Nano Research. , (2018).</li>
<li>Karabin, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+micellar+delivery+via+inducible+transitions+in+nanostructure+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Sustained micellar delivery via inducible transitions in nanostructure morphology.</a> Nature Communications. 9 (1), 624(2018).</li>
<li>Mascoli, C. C., Weary, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limulus+amebocyte+lysate+%28LAL%29+test+for+detecting+pyrogens+in+parenteral+injectable+products+and+medical+devices%3A+advantages+to+manufacturers+and+regulatory+officials%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Parenteral+Drug+Association%22%5BJournal%5D)">Limulus amebocyte lysate (LAL) test for detecting pyrogens in parenteral injectable products and medical devices: advantages to manufacturers and regulatory officials.</a> Journal of the Parenteral Drug Association. 33 (2), 81-95 (1979).</li>
<li>Pustulka, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+nanoprecipitation%3A+particle+structure+and+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Flash nanoprecipitation: particle structure and stability.</a> Molecular Pharmaceutics. 10 (11), 4367-4377 (2013).</li>
<li>Tang, C., Amin, D., Messersmith, P. B., Anthony, J. E., Prud'homme, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+directed+self-assembly+of+pH-responsive+antioxidant+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Polymer directed self-assembly of pH-responsive antioxidant nanoparticles.</a> Langmuir. 31 (12), 3612-3620 (2015).</li>
<li>Gindy, M. E., Panagiotopoulos, A. Z., Prud'homme, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composite+block+copolymer+stabilized+nanoparticles%3A+simultaneous+encapsulation+of+organic+actives+and+inorganic+nanostructures%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Composite block copolymer stabilized nanoparticles: simultaneous encapsulation of organic actives and inorganic nanostructures.</a> Langmuir. 24 (1), 83-90 (2008).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

Wij hebben verstrekt gedetailleerde instructies voor het snelle fabricage van polymersomes met behulp van PEG17-bl- PPS35-SH als de diblock-copolymeer. Vesiculaire polymersomes zijn de primaire statistische morfologie geassembleerd op deze verhouding van PEG hydrofiele en hydrofobe PPS blok molecuulgewicht. Wanneer meerdere keren Gemeenschapsverdrag, ze hebben een diameter en polydispersiteit die overeenkomt met polymersomes nadat hij door een 200 nm membraan geëxtrudeerd gevormd via</e...

Nanocarriers toestaan voor de gecontroleerde aflevering van kleine en macromoleculaire lading, waaronder actieve entiteiten dat als niet ingekapseld, zou een zeer afbreekbaar en/of voor toediening in vivote hydrophobic. Van de nanocarrier morphologies regelmatig vervaardigd, bieden polymere blaasjes analoog aan liposomen (ook wel polymersomes genoemd) de mogelijkheid voor het gelijktijdig laden van hydrofiele en hydrofobe lading1,2. Ondanks hun veelbelovende voordelen zijn polymersomes nog steeds zeldzaam in klinische toepassingen, gedeeltelijk vanwege enkele cruciale uitdagingen goed opgepakt in hun productie. Voor klinisch gebruik moeten polymersome formuleringen plaatsvinden in grootschalige, steriel en consistente partijen.
Een aantal technieken kan worden gebruikt om de vorm polymersomes van een copolymeer van diblock, zoals poly(ethylene glycol) -blok-poly (propyleen sulfide) (PEG -bl- PPS), die bevatten oplosmiddelen dispersie3, dunne film rehydratie1 , 4, microfluidics 5,6en directe hydratatie7. Oplosmiddel dispersie omvat lange incubatie tijden in de aanwezigheid van organische oplosmiddelen, die kunnen sommige bioactieve payloads, zoals eiwitten denatureren. Dunne film rehydratie biedt geen controle over de polydispersiteit van het gevormde polymersomes, vaak duurder en tijdrovender extrusie technieken om aanvaardbare monodispersity vereist. Bovendien zijn zowel microfluids als directe hydratatie moeilijk te schaal voor grotere productievolumes. Van de verschillende nanocarrier fabricage methoden biedt flash nanoprecipitation (FNP) de mogelijkheid om grootschalige en reproduceerbare formuleringen8,9,10. Terwijl de FNP was eerder gereserveerd voor de formulering van solid-core nanodeeltjes, ons lab heeft onlangs uitgebreid het gebruik van de FNP te nemen van de consistente vorming van uiteenlopende PEG -bl- PPS nanostructuur morphologies11, 12, met inbegrip van polymersomes11 en bicontinuous nanospheres12. We vonden dat FNP kan vormen monodispers formuleringen van polymersomes zonder de noodzaak voor extrusie was, wat resulteert in superieure polydispersiteit indexwaarden in vergelijking met niet-geëxtrudeerde polymersomes gevormd door dunne film rehydratie en oplosmiddel dispersie 11. Bicontinuous nanospheres, met hun grote hydrofobe domeinen, konden niet worden gevormd door dunne film rehydratie, ondanks die onder een aantal oplosmiddel voorwaarden met FNP12.
Hier, wij bieden een gedetailleerde beschrijving voor de synthese van de PEG -bl- PPS diblock copolymeren gebruikt bij de vorming van de polymersome, de beperkte impingement jets (CIJ) mixer gebruikt voor FNP, de FNP protocol zelf, en de implementatie van een geautomatiseerd systeem te reduceren van variabiliteit van de gebruiker. Informatie over het steriliseren van het systeem om voldoende te produceren endotoxine-vrije formuleringen voor gebruik in vivoen representatieve gegevens over de karakterisering van polymersomes gevormd door de FNP is inbegrepen. Met deze informatie, zal lezers met belangstelling voor gebruik te maken van de polymersomes in vitro en in vivo arbeidsongeschiktheid zitten kundig voor fabriceren hun eigen steriele, monodispers-formuleringen. Lezers met ervaring in de formuleringen van de nanocarrier en met polymeer synthese expertise zal zitten kundig voor hun eigen polymeersystemen FNP gebruiken als een potentiële alternatief voor hun huidige formulering technieken snel te testen. Bovendien kunnen de hierin beschreven protocollen worden gebruikt als leermiddelen voor de formulering van de nanocarriers in nanotechnologie laboratorium cursussen.

<table><tbody><tr><td>CanaKit Raspberry Pi 3 Ultimate Starter Kit - 32 GB Edition</td><td>CanaKit</td><td>UPC 682710991511</td><td></td></tr><tr><td>Linear Bearing Platform (Small) - 8mm Diameter</td><td>Adafruit</td><td>1179</td><td></td></tr><tr><td>Linear Motion 8 mm Shaft, 330 mm Length, Chrome Plated, Case Hardened, Metric</td><td>VXB</td><td>kit11868</td><td></td></tr><tr><td>Linear Rail Shaft Guide/Support - 8 mm Diameter</td><td>Adafruit</td><td>1182</td><td></td></tr><tr><td>Manual-Position Precision Slide 4.5" Stroke, 15 lb load capacity</td><td>McMaster-Carr</td><td>5236A16</td><td></td></tr><tr><td>MTPM-P10-1JK43 Iron Horse DC motor</td><td>Iron Horse</td><td>MTPM-P10-1JK43</td><td></td></tr><tr><td>Official Raspberry Pi Foundation 7" Touchscreen LCD Display</td><td>Raspberry Pi</td><td>B0153R2A9I (ASIN)</td><td></td></tr><tr><td>PicoBorg Reverse - Advanced motor control for Raspberry Pi</td><td>PiBorg</td><td>BURN-0011</td><td></td></tr><tr><td>Pololu Carrier with Sharp GP2Y0D810Z0F Digital Distance Sensor 10cm</td><td>Pololu</td><td>1134</td><td></td></tr><tr><td>Ruland PSR16-5-4-A Set Screw Beam Coupling, Polished Aluminum, Inch, 5/16" Bore A Diameter, 1/4" Bore B Diameter, 1" OD, 1-1/4" Length, 44 lb-in Nominal Torque</td><td>Ruland</td><td>PSR16-5-4-A</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylene glycol monomethyl ether</td><td>Sigma Aldrich</td><td>202495</td><td></td></tr><tr><td>Methanesulfonyl chloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>471259</td><td></td></tr><tr><td>Toluene</td><td>Sigma Aldrich</td><td>179418</td><td></td></tr><tr><td>Toluene, Anhydrous</td><td>Sigma Aldrich</td><td>244511</td><td></td></tr><tr><td>Triethylamine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T0886</td><td></td></tr><tr><td>Celite 545 (Diatomaceous Earth)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>419931</td><td></td></tr><tr><td>Dichloromethane</td><td>Sigma Aldrich</td><td>320269</td><td></td></tr><tr><td>Diethyl ether</td><td>Sigma Aldrich</td><td>296082</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Dimethylformamide, anhydrous</td><td>Sigma Aldrich</td><td>227056</td><td></td></tr><tr><td>Potassium carbonate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>791776</td><td></td></tr><tr><td>Thioacetic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T30805</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran</td><td>Sigma Aldrich</td><td>360589</td><td></td></tr><tr><td>Aluminum oxide, neutral, activated, Brockmann I</td><td>Sigma Aldrich</td><td>199974</td><td></td></tr><tr><td>Sodium methoxide solution, 0.5 M in methanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>403067</td><td></td></tr><tr><td>Propylene sulfide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P53209</td><td></td></tr><tr><td>Acetic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>320390</td><td></td></tr><tr><td>Sodium hydroxide solution 1.0 N</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S2770</td><td></td></tr><tr><td>Endotoxin-free water</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>SH30529.01</td><td></td></tr><tr><td>Paper pH strips</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-640-508</td><td></td></tr><tr><td>Endotoxin-free Dulbecco's PBS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>TMS-012</td><td></td></tr><tr><td>Borosilicate glass scintillation vials</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-337-4</td><td></td></tr><tr><td>1 mL all-plastic syringe</td><td>Thermo Scientific</td><td>S75101</td><td></td></tr><tr><td>Sepharose CL-6B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CL6B200</td><td></td></tr><tr><td>Liquid chromatography column</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C4169</td><td></td></tr><tr><td>CIJ mixer, HDPE</td><td>Custom</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>Hydrogen peroxide solution</td><td>Sigma Aldrich</td><td>216763</td><td></td></tr><tr><td>HEK-Blue hTLR4</td><td>InvivoGen</td><td>hkb-htlr4</td><td></td></tr><tr><td>RAW-Blue Cells</td><td>InvivoGen</td><td>raw-sp</td><td></td></tr><tr><td>QUANTI-Blue</td><td>InvivoGen</td><td>rep-qb1</td><td></td></tr><tr><td>PYROGENT Gel Clot LAL Assays</td><td>Lonza</td><td>N183-125</td><td></td></tr></tbody></table>

snelle, schaalbare montage en laden van bioactieve eiwitten en immunostimulants in verschillende synthetische nanocarriers via flash nanoprecipitation

Rapid, Scalable Assembly and Loading of Bioactive Proteins and Immunostimulants into Diverse Synthetic Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

Nanomaterialen presenteren een breed scala van opties voor het aanpassen van de gecontroleerde aflevering van enkelvoudige en gecombineerde moleculaire payloads voor therapeutische en imaging-toepassingen. Deze verhoogde specificiteit kan belangrijke klinische gevolgen, met inbegrip van verminderde bijwerkingen en lagere doseringen met hogere potentie hebben. Bovendien, de in situ richten en gecontroleerde modulatie van specifieke cel deelverzamelingen kunnen verbeteren in vitro en in vivo onderzoeken van elementaire biologische fenomenen en sonde functie cel. Helaas, de daarvoor vereiste deskundigheid in nanoschaal wetenschap, scheikunde en techniek vaak verbieden laboratoria zonder ervaring op deze terreinen fabriceren en aanpassen van nanomaterialen als hulpmiddelen voor hun onderzoek of voertuigen voor hun therapeutische strategieën. Wij bieden hier protocollen voor de synthese en schaalbare vergadering van een veelzijdige niet-toxisch copolymeer bloksysteem vatbaar voor de facile vorming en laden van nanoschaal voertuigen voor biomedische toepassingen. Flash nanoprecipitation wordt gepresenteerd als een methode voor het snelle fabricage van diverse nanocarriers van poly(ethylene glycol) -bl-poly (propyleen sulfide) copolymeren. Deze protocollen zal toestaan laboratoria met een breed scala van deskundigheid en middelen om gemakkelijk en reproducibly fabriceren geavanceerde nanocarrier levering systemen voor hun toepassingen. Het ontwerp en de bouw van een geautomatiseerd instrument die gebruikmaakt van een high-speed-spuitpomp ter vergemakkelijking van de flash nanoprecipitation verwerken en om verbeterde controle over de homogeniteit, grootte, morfologie en laden van polymersome nanocarriers is beschreven.

Hier hebben we een eenvoudig protocol voor de formulering van nanocarriers kan laden van hydrofiele en hydrofobe lading die veilig voor in vivo muis en11,13van de administratie van de niet-menselijke primaten zijn gepresenteerd. We hebben ook een gedetailleerd protocol voor de synthese van het polymeer gebruikt in onze representatieve resultaten, samen met een beschrijving voor de fabricage van een aangepaste instrument v...

Nanomaterialen bieden veelzijdige mechanismen van gecontroleerde therapeutische aflevering voor zowel basiswetenschap en translationeel toepassingen, maar hun fabricage vaak vereist expertise die niet beschikbaar is in de meest biomedische laboratoria. Hier presenteren we protocollen voor het schaalbare fabricage en therapeutische laden van uiteenlopende zelf gemonteerd nanocarriers met behulp van flash nanoprecipitation.

Snelle, schaalbare montage en laden van bioactieve eiwitten en Immunostimulants in verschillende synthetische Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

Nanomaterials present a wide range of options to customize the controlled delivery of single and combined molecular payloads for therapeutic and imaging ...

Wij geloven dat het gebruik van flash nanoprecipitatie om complexe nanostructuren samen te stellen, onderzoekers die geen uitgebreide ervaring hebben met chemie, techniek of nanomateriaalkunde, in staat zal stellen om zelfstandig geavanceerde geneesmiddelafgiftesystemen te fabriceren voor hun specifieke toepassingen en behoeften. Het grootste voordeel van deze techniek is de generatie van grote volumes van diverse nanostructuren met een hoge concentratie, lage polydispersiteit en geladen met bioactieve moleculen, inclusief kleine moleculaire geneesmiddelen en eiwitten, allemaal gevormd onder steriele omstandigheden. Over het algemeen kunnen individuen die nieuw zijn in polymeersynthese worstelen omdat de polypropyleensulfide component zeer gevoelig is voor oxidatie door blootstelling aan lucht.Visuele demonstratie van deze methode is cruciaal omdat de meerdere botsingsstappen moeilijk te leren zijn omdat ze zeer snel achter elkaar moeten worden uitgevoerd. Om de beperkte botsingsstralen, of CIJ-mixer, te steriliseren, werk binnen een biologische veiligheidskast om de mixer met alle gedemonteerde onderdelen in nul punt één molaire natriumhydroxide gedurende een nacht te laten weken.

rapid-scalable-assembly-loading-bioactive-proteins-immunostimulants

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Dit artikel beschrijft een methode om nanoprecipitation op basis van polymeren nanodeeltjes door middel van diblok co-polymeren te synthetiseren. Bespreken we de synthese van diblok co-polymeren, de nanoprecipitation techniek en mogelijke toepassingen.

Formulering van diblok polymere nanodeeltjes door middel van Nanoprecipitation Techniek

In dit artikel wordt een hoge doorvoer methode voorgesteld voor de synthese van Oligosacchariden en de bevestiging aan het oppervlak van polyanhydride nanodeeltjes voor verder gebruik in voor specifieke receptoren op antigeen-presenterende cellen.

High-throughput synthese van koolhydraten en functionalisering van polyanhydride Nanodeeltjes

We beschrijven beeldvorming van het hele dier en op flowcytometrie gebaseerde technieken voor het bewaken van de uitbreiding van antigeenspecifieke CD8+ T-cellen als reactie op immunisatie met nanodeeltjes in een muizenmodel voor vaccinatie.

Whole-dierlijke Imaging en Flowcytometrische technieken voor analyse van antigeen-specifieke CD8 + T cel reacties na Nanoparticle Vaccinatie

We rapporteren over een slimme toepassing van koolstofnanobuizen voor de kinetische stabilisatie van lipidedeeltjes die zelf-geassembleerde nanostructuren bevatten in hun kernen. De bereiding van lipidedeeltjes vereist vrij lage concentraties van koolstofnanobuizen, wat hun gebruik mogelijk maakt in biomedische toepassingen zoals geneesmiddelafgifte.

Facile Bereiding van Intern Self-assembled Lipid Particles gestabiliseerd door koolstof nanobuisjes

Eenvoudige homogenisatie werd gebruikt om nieuwe, hoge dichtheid, lipoproteïne-nabootsende nanodeeltjes te bereiden om de zenuwgroeifactor te inkapselen. Uitdagingen, gedetailleerde protocollen voor nanodeeltjespreparatie, in vitro karakterisering en in vivo studies worden beschreven in dit artikel.

Voorbereiding en karakterisering van nieuwe HDL-nabootsende nanodeeltjes voor ingewikkelde zenuwgroei Factor

Flash NanoPrecipitation (FNP) is een schaalbare benadering voor de productie van polymere core-shell nanodeeltjes. Lab-schaal formuleringen voor de inkapseling van hydrofobe of hydrofiele therapeutics worden beschreven.

NanoPrecipitation Flash voor de inkapseling van hydrofobe en hydrofiele stoffen in polymere nanodeeltjes

Op het snijvlak van organische en waterige oplosmiddelen assembleren op maat gemaakte amfifiele elastine-achtige eiwitten zich in complexe supramoleculaire structuren zoals blaasjes, vezels en coacervaten die worden geactiveerd door omgevingsparameters. De beschreven assemblageprotocollen leveren Op eiwitmembraan gebaseerde compartimenten (PMBC's) met tunable eigenschappen, waardoor de inkapseling van verschillende lading.

Geleid Assemblage van Elastin-achtige eiwitten in gedefinieerde supramoleculaire structuren en cargo-encapsulation in vitro

Lipide nanodeeltjes worden ontwikkeld met behulp van een microfluïdische mengplatformbenadering voor mRNA- en DNA-inkapseling.

Het formuleren en karakteriseren van lipide nanodeeltjes voor genafgifte met behulp van een microfluïdisch mengplatform

Hier wordt een eenvoudig protocol gepresenteerd voor het produceren van mRNA-nanodeeltjes op basis van poly (bèta-aminoester) polymeren, eenvoudig op maat te maken door het ingekapselde mRNA te veranderen. De workflow voor het synthetiseren van de polymeren, de nanodeeltjes en hun in vitro essentiële karakterisering worden ook beschreven. Een proof-of-concept met betrekking tot immunisatie wordt ook toegevoegd.

Synthese en karakterisering van mRNA-geladen poly (bèta-aminoesters) nanodeeltjes voor vaccinatiedoeleinden

Nanogels zijn een uitstekend en veelzijdig nanodeeltjesplatform voor de levering van biologische geneesmiddelen. Stimuli-responsieve poly(ethyleen) glycol-gebaseerde polymere nano-gels, die in staat zijn om op eiwitten gebaseerde ladingen in te kapselen, werden gesynthetiseerd met behulp van een eenstaps cross-linking co-nanopolymerisatiestrategie in waterige omstandigheden. De optimale fabricage en karakterisering van deze nieuwe nanodeeltjes worden hier gepresenteerd.

Synthese van stimuli-responsieve nanogels met behulp van waterige eenstaps crosslinking en co-nanopolymerisatie

Een gedetailleerd protocol voor het synthetiseren van lipide nanodeeltjes (LNP's) met behulp van CIJ-mixertechnologieën (Confined Impinging Jet), waaronder een CIJ met twee stralen en een vortexmixer met vier stralen met meerdere inlaten (μMIVM), wordt gedemonstreerd. De CIJ-mengers genereren reproduceerbare, turbulente micromengomgevingen, wat resulteert in de productie van monodisperse LNP's.

Het synthetiseren van lipide nanoparticles door turbulente stroming in besloten botsende straalmixers

Leer flash nanoprecipitatie voor het fabriceren van geavanceerde drug delivery systemen met nanocarriers. Deze methode maakt het mogelijk om bioactieve moleculen en eiwitten te laden onder steriele omstandigheden.

Snelle, schaalbare montage en laden van bioactieve eiwitten en Immunostimulants in verschillende synthetische Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation (Video) | JoVE Journal

Snelle, schaalbare montage en laden van bioactieve eiwitten en Immunostimulants in verschillende synthetische Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

Meer video's verkennen