Name: Database-geleide Flow-cytometry voor evaluatie van het beenmerg myeloïde cel rijping (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 5 s
Description: Leer database-geleide flow-cytometry voor evaluatie van beenmerg myeloïde celrijping bij myelodysplastische syndromen. Deze methode vermindert subjectiviteit en kwantificeert verschillen met normale populaties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De antilichamen die gebruikt in deze studie werden verstrekt door BD Biosciences. De auteurs bedank hun collega, Dr. Pascale Flandrin-Gresta, van het Department of Molecular Biology, laboratorium hematologie, Universiteit ziekenhuis van Saint-Etienne (Frankrijk), die deskundigheid voor interpretatie voor NGS data voor de tweede MDS geval. De auteurs zijn dankbaar voor de clinicus Haematogen voor hun belangstelling en betrokkenheid in deze studie en voor de patiënten en gezonde donoren voor hun toestemming om deel te nemen in deze studie. De auteurs ook bedank de "Les Amis de Rémi" Stichting voor financiële steun voor publicatie.

<ol><li>Orfao, A., Ortuño, F., de Santiago, M., Lopez, A., San Miguel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotyping+of+Acute+Leukemias+and+Myelodysplastic+Syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Immunophenotyping of Acute Leukemias and Myelodysplastic Syndromes.</a> Cytometry Part A. 58, 62-71 (2004).</li>
<li>Porwit, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24919805">Revisiting guidelines for integration of flow cytometry results in the WHO classification of Myelodysplastic Syndromes - proposal from the International/European LeukemiaNet Working Group for Flow Cytometry in MDS (IMDSFlow).</a> Leukemia. 28 (9), 1793-1798 (2014).</li>
<li>Westers, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implementation+of+flow+cytometry+in+the+diagnostic+work-up+of+myelodysplastic+syndromes+in+a+multicenter+approach%3A+Report+from+the+Dutch+Working+Party+on+Flow+Cytometry+in+MDS%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia+Research%22%5BJournal%5D)">Implementation of flow cytometry in the diagnostic work-up of myelodysplastic syndromes in a multicenter approach: Report from the Dutch Working Party on Flow Cytometry in MDS.</a> Leukemia Research. 36, 422-430 (2012).</li>
<li>Meehan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AutoGate%3A+automating+analysis+of+flow+cytometry+data%5BTitle%5D)+AND+%22Immunologic+Research%22%5BJournal%5D)">AutoGate: automating analysis of flow cytometry data.</a> Immunologic Research. 58, 218-223 (2014).</li>
<li>Greenberg, P. L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21233243">NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology: myelodysplastic syndromes.</a> Journal of the National Comprehensive Cancer Network. 9, 30-56 (2011).</li>
<li>Greenberg, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelodysplastic+Syndromes%2C+Version+2.2017%2C+Clinical+Practice+Guidelines+in+Oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Comprehensive+Cancer+Network%22%5BJournal%5D)">Myelodysplastic Syndromes, Version 2.2017, Clinical Practice Guidelines in Oncology.</a> Journal of the National Comprehensive Cancer Network. 15, (2017).</li>
<li><a target="_blank" href="https://www.amazon.com/Classification-Tumours-Haematopoietic-Lymphoid-Tissues/dp/928324494X">WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Revised 4th Edition</a>. Swerdlow, S. H., et al. (2), IARC Press. Lyon, France. 86-128 (2017).</li>
<li>https://lists.purdue.edu/pipermail/cytometry/2009-March/036889.html. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://lists.purdue.edu/pipermail/cytometry/2009-March/036889.html">https://lists.purdue.edu/pipermail/cytometry/2009-March/036889.html</a> (2018).</li>
<li><a target="_blank" href="NULL">Composition of EuroFlow panels and technical information on reagents Version 1.5</a>. , (2017).</li>
<li><a target="_blank" href="NULL">EuroFlow Standard Operating Procedure (SOP) for sample preparation and staining Version 1.2.1</a>. , (2015).</li>
<li>Kalina, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EuroFlow+standardization+of+flow+cytometer+instrument+settings+and+immunophenotyping+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols.</a> Leukemia. 26, 1986-2010 (2012).</li>
<li>http;//www.miltenyibiotec.com/en/products-and-services/macs-flow-cytometry/reagents/antibodies-and-dyes/recombinant-antibodies.aspx. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http;//www.miltenyibiotec.com/en/products-and-services/macs-flow-cytometry/reagents/antibodies-and-dyes/recombinant-antibodies.aspx">http;//www.miltenyibiotec.com/en/products-and-services/macs-flow-cytometry/reagents/antibodies-and-dyes/recombinant-antibodies.aspx</a> (2018).</li>
<li>van Dongen, J. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EuroFlow+antibody+panels+for+standardized+n-dimensional+flow+cytometric+immunophenotyping+of+normal%2C+reactive+and+malignant+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">EuroFlow antibody panels for standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes.</a> Leukemia. 26, 1908-1975 (2012).</li>
<li>Matarraz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+to+the+Diagnosis+and+Classification+of+Monocytic-Lineage+Leukemias+by+Flow+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+B+%28Clinical+Cytometry%29%22%5BJournal%5D)">Introduction to the Diagnosis and Classification of Monocytic-Lineage Leukemias by Flow Cytometry.</a> Cytometry Part B (Clinical Cytometry). 92 (3), 218-227 (2015).</li>
<li>Westers, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotypic+analysis+of+erythroid+dysplasia+in+myelodysplastic+syndromes.+A+report+from+the+IMDSFlow+working+group%29%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Immunophenotypic analysis of erythroid dysplasia in myelodysplastic syndromes. A report from the IMDSFlow working group).</a> Haematologica. 102, 308-319 (2017).</li>
<li>Shen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+immunophenotypic+findings+in+chronic+myelomonocytic+leukemia+and+its+utility+in+monitoring+treatment+response%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry immunophenotypic findings in chronic myelomonocytic leukemia and its utility in monitoring treatment response.</a> European Journal of Haematology. 95, 168-176 (2015).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben. De Flow-Cytometry Afdeling Hematologie Laboratory van de Universiteit ziekenhuis van Saint-Etienne is een lid van EuroFlow Consortium.

De kwaliteit van BM aspirate kan gevolgen hebben voor de eindresultaten. De hemodilution van de BM-aspirate kan de verdeling van de cellen in verschillende stadia van rijping te wijten aan de afwezigheid van de progenitoren of precursoren cellen verstoren. Waarschijnlijk een bulk lysing methode in dienst kan helpen bij de normalisering van BM aangeblazen voor hemodilution in stroom cytometrische analyses. Daarnaast zijn de kritische stappen voor de evaluatie van BM myeloïde dysplasie van stroom cytometry de monster verwe...

Bij gebrek aan fenotypische markeringen specifiek voor de dysplastische veranderingen in myeloïde cellen tijdens de initiatie van de MDS en progressie, is een nieuwe aanpak voorgesteld in de afgelopen jaren op basis van de evaluatie van de rijping trajecten (gewijzigde uitdrukking van myeloïde antigenen tijdens de productie van volwassen myeloïde cellen) of van de abnormale verdeling van de verschillende soorten cellen in het beenmerg (BM) cel compartimenten1,2.
Dit artikel presenteert een nieuwe methode voor gestandaardiseerde toepassing van MFC oog op de opsporing van dysplastische veranderingen in BM myeloïde cel compartimenten betrekking hebben op myelodysplastisch syndromen (MDS) of andere myeloïde hematologische ziekten. Deze studie toont ook het nut van het gebruik van rijping databases voor MFC data-analyse.
Standaardisatie van de voorbereiding voorbeeldprocedure, data-acquisitie en analyse met behulp van de databases zou de identificatie van de meest relevante fenotypische afwijkingen die verband houden met dysplastische veranderingen in BM myeloïde cellen. Daarom zijn statistisch geselecteerde deelverzamelingen gebaseerd op goed gelabeld en goed erkende formaten (automatische bevolking scheidingsteken (APS) diagrammen, histogrammen, en dot plots) vereist voor de ontwikkeling van een analyse-strategie die kan worden gebruikt in latere analyse rondes. De ontdekking van robuuste fenotypische afwijkingen in MDS zou verlichten de diagnose in gevallen met of zonder minimale morfologische dysplasie en zonder cytogenetische aberrancies. Identificatie van discriminerende parameters rekening houdend met de vermindering van de immunophenotypic panelen kan vereenvoudigen de huidige scores2, toe te staan hun toepasbaarheid in de laboratoria van de klinische pathologie.
Deze methode beperkt de subjectieve interpretaties van cytometry gegevens, zoals in MDS diagnose3hebben zijn gesignaleerd. Deze stap is een voorwaarde voor de ontwikkeling van de geautomatiseerde hulpmiddelen voor het verwerken en analyseren van stroom gegevens4.
MDS bestaat uit een heterogene groep van aandoeningen van de klonen hematopoietische stamcellen (HSC) waarin het spliceosoom mutaties met specifieke epigenetische modifiers werken opleveren van het fenotype van de MDS. Het is nu bekend dat, samen met HSC mutaties, andere mechanismen zijn betrokken bij MDS pathofysiologie, zoals abnormale immuun-gemedieerde ontsteking en interacties tussen kwaadaardige HSCs en de stromale communicatie van de BM. Deze mechanismen blijven echter slecht begrepen. De brede klinische en biologische heterogeniteit van MDS maakt de diagnose en de selectie van de optimale therapie een uitdaging. In het laatste decennium, in meerdere studies hebben aangetoond dat MFC vaak meer is gevoelig voor het opsporen van dysplasie2 dan morfologie, maar technische en economische beperkingen deze techniek moeilijk maken om te standaardiseren, met resultaten vaak afhankelijk van de ervaring van de tolk3. Bovendien, is het onduidelijk hoe MFC de balans naar MDS in gevallen met of zonder minimale morfologische dysplasie en bij gebrek aan cytogenetische afwijkingen of in grensgevallen zoals hypocellular MDS, met een lage blast tellen, kan tip van andere niet-klonen BM stoornissen zoals beenmerg mislukking (dwz., aplastic bloedarmoede). Ook blijft het moeilijk om te onderscheiden grensgevallen van MDS met een overmaat van ontploffingen van acute myeloïde leukemie (AML). Om al deze redenen opnemen de klinische richtsnoeren niet MFC testen in de uiteindelijke diagnose van MDS. In 2011, heeft de Amerikaanse nationale uitgebreide kanker netwerk (NCCN) voor de schatting van het percentage CD34 + cellen, detectie van paroxismale nachtelijke hemoglobinurie klonen en aanwezigheid van cytotoxische T-cel-klonen in hypocellular MDS5MFC aanbevolen. Deze twee laatste gevallen ook betrekking hebben op een therapeutisch doel omdat klinische gegevens hebben aangetoond een goede reactie van deze patiënten op immunosuppressieve therapie6. De 2017 NCCN richtsnoeren, onder vermelding van de aanbevelingen van de International Working Group (IWG) vermeld afwijkende immunophenotyping detectie door MFC behoort tot de co criteria voor de diagnose van de MDS, maar zonder eventuele specificaties6. Bovendien, bepaalt de onlangs gepubliceerde WHO-indeling dat MFC bevindingen alleen volstaan niet om een primaire diagnose van MDS bij gebrek aan afdoende morfologische en/of cytogenetische gegevens7. MFC kan echter worden gebruikt als een aanvullende proef tonen de disregulatie van myeloïde cel rijping patronen en kwantificeren van de "afstand van normale" voor een patiënt op een bepaald tijdstip in de loop van de ziekte.
Deze methode is van toepassing op klinische laboratoria ook geïnteresseerd in de evaluatie van dysplasie in BM myeloïde cellen met behulp van MFC immunophenotyping, ter verfijning van de diagnose in MDS of andere myeloïde aandoeningen met dysplastische afwijkingen.

<table><tbody><tr><td>BD FACSCanto II flow-cytometer</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>SN: V33896301336</td><td>3-laser, 4-2-2 configuratie, Details over filters en spiegels: https://www.bdbiosciences.com/documents/BD_FACSCanto_II_FilterGuide.pdf</td></tr><tr><td>Awel C48-R Centrifuge</td><td>AWEL Industries, FR</td><td>SN: 910120016; Model No: 320002001</td><td>lage snelheid centrifuges; capaciteit 60 FACS buizen</td></tr><tr><td>Pipetten van 10&micro;L en 200&micro;L</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipetten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 mL Falcon buizen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>polypropyleen buis voor FACS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke HLA-DR</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>655874</td><td>clone L243 Muis BALB/c IgG2a, &kappa; Fluorochrome Horizon V450 (Ex max 404 nm/ Em max 448 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD45</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>560777</td><td>clone HI30 Muis IgG1, &kappa; Fluorochrome Horizon V500 (Ex max 415 nm/ Em max 500 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD16</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>656146</td><td>clone CLB/fcGran1 Muis BALB/c IgG2a, &kappa; Fluorochrome FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD13</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>347406</td><td>clone L138 Muis BALB/c X C57BL/6 IgG1, &kappa; Fluorochrome PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD34</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>347222</td><td>clone 8G12 Muis BALB/c IgG1, &kappa; Fluorochrome PerCP-Cy5.5 (Ex max 482 nm/ Em max 678 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD117</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>339217</td><td>clone 104D2 Muis BALB/c IgG1 Fluorochrome PE-Cy7 (Ex max 496 nm/ Em max 785 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD11b</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>333143</td><td>clone D12 Muis BALB/c IgG2a, &kappa; D12, Fluorochrome APC (Ex max 650 nm/ Em max 660nm</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD10</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>646783</td><td>clone HI10A Muis BALB/c IgG1, &kappa; Fluorochrome APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD35</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>555452</td><td>clone E11 Muis IgG1, &kappa; Fluorochrome FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD64</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>644385</td><td>clone 10.1 Muis BALB/c IgG1, &kappa; Fluorochrome PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD300e</td><td>Immunostep</td><td>IREM2A-T100</td><td>clone UP-H2 Muis BALB/c IgG1, k Fluorochrome APC (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD14</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>641394</td><td>clone MoP9 Muis BALB/c IgG2b, &kappa; Fluorochrome APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD36</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>656151</td><td>clone CLB-IVC7 Muis IgG1, &kappa; Fluorochrome FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD105</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>560839</td><td>clone 266 Muis BALB/c IgG1, &kappa; Fluorochrome PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD33</td><td></td><td>345800</td><td>clone P67.6 Muis BALB/c IgG1, &kappa; Fluorochrome APC (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>Muis Anti-Menselijke CD71</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>655408</td><td>clone M-A712 Muis BALB/c IgG2a, &kappa; Fluorochrome APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm)</td></tr><tr><td>Lysing Solution 10x Concentrate (IVD)</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>349202</td><td></td></tr><tr><td>FACSFlow Sheath Fluid</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>342003</td><td></td></tr><tr><td>FACSDiva CS&amp;T IVD beads</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>656046</td><td></td></tr><tr><td>RAINBOW CALIBRATION PARTICLES, 8 PEAKS</td><td>Cytognos, Salamanca, Spain</td><td>SPH-RCP-30-5A</td><td>lots EAB01, EAC01, EAD05, EAE01, EAF01, EAG01, EAH01, EAI01, EAJ01, EAK01</td></tr><tr><td>Compensation Particles Multicolor CompBeads(CE/IVD)</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>ref. #51-90-9001229 + #51-90-9001291</td><td></td></tr><tr><td>Diva software versies 6.1.2 en 6.1.3</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfaat gebufferde zouttabletten</td><td>R&amp;D Systems, Minneapolis, USA</td><td>5564</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumine&nbsp;(BSA)</td><td>Sigma-Aldrich, France</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr>

database-geleide flow-cytometry voor evaluatie van het beenmerg myeloïde cel rijping

Database-guided Flow-cytometry for Evaluation of Bone Marrow Myeloid Cell Maturation

Een werkgroep gestart binnen de Franse Cytometry Association (AFC) werd ontwikkeld om het harmoniseren van de toepassing van multiparameter stroom cytometry (MFC) voor myeloïde ziekte diagnose in Frankrijk. Het hier gepresenteerde protocol was overeengekomen en toegepaste tussen September 2013 en November 2015 in zes Franse diagnostische laboratoria (universitaire ziekenhuizen van Saint-Etienne, Grenoble, Clermont-Ferrand, Nice, en Lille en Institut Paoli-Calmettes in Marseille) en de standaardisatie van het beenmerg monster voorbereiding en gegevens overname toegestaan. Drie rijping databases werden ontwikkeld voor neutrofiele, monocytic, en erythroid lineages met beenmerg van "gezonde" donor personen (individuen zonder enig bewijs van een hematopoietische ziekte). Een robuuste analysemethode voor elke myeloïde lineage moet gelden voor routinematige diagnostische gebruik. Nieuwe gevallen kunnen worden op dezelfde manier geanalyseerd en vergeleken met de gebruikelijke databases. Dus, kwantitatieve en kwalitatieve fenotypische afwijkingen kunnen worden geïdentificeerd en personen boven 2SD vergeleken met gegevens van normale beenmerg monsters moeten worden beschouwd als indicatieve van pathologie. De belangrijkste beperking is de hogere variabiliteit tussen de gegevens die zijn bereikt met de monoklonale antilichamen verkregen met de methoden op basis van hybridoma technologieën en momenteel gebruikt in de klinische diagnose. Vaststelling van de criteria voor de technische validering van de verkregen gegevens kan helpen verbeteren van het nut van MFC voor MDS diagnostiek. De vaststelling van deze criteria vereist analyse tegen een database. De vermindering van de onderzoeker subjectiviteit in data-analyse is een belangrijk voordeel van deze methode.

De 54 BM monsters in K-EDTA antistollingsmiddel geoogst werden opgenomen in de studie. De MFC-gegevens werden geanalyseerd in het ontbreken van informatie over de patiënten. Retrospectieve studie toonde aan dat de BM monsters van 7 gezonde donoren (5 mannetjes en 2 vrouwtjes met een gemiddelde leeftijd van 47.4 [35-48], 11 personen met geen bewijs van een hematopoietische ziekte (8 reutjes en 3 teefjes met een gemiddelde leeftijd van 57,9 [35-72]) en 36 gevallen met verschillende waren p...

De MDS-diagnose is moeilijk in de afwezigheid van morfologische criteria of niet-informatieve cytogenetica. MFC kan helpen verfijnen van het diagnostisch proces van MDS. Om te worden nuttig zijn voor de klinische praktijk, de MFC analyse moet worden gebaseerd op parameters met voldoende gevoeligheid en specificiteit en gegevens moeten worden gereproduceerd tussen verschillende exploitanten.

Database-geleide Flow-cytometry voor evaluatie van het beenmerg myeloïde cel rijping

A working group initiated within the French Cytometry Association (AFC) was developed in order to harmonize the application of multiparameter flow ...

Deze methode kan helpen om belangrijke vragen te beantwoorden bij de diagnose van myeloïde ziekten zoals myelodysplasiesyndromen of andere hematologische ziekten die evolueren met rijpingsafwijkingen in myeloïde celstamen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de subjectiviteit van de onderzoeker in die analyse en interpretatie vermindert. Deze methode kan inzicht geven in welke de meest discriminerende parameters voor myelodysplasie zijn.Het maakt kwantificering van de verschillen van normale myeloïde cel populaties. Het aantonen van de procedure zal Tiphanie Picot, een post-doctorale collega van ons laboratorium. Begin met het mengen van 600 microliter van het primaire celmonster met 10 milliliter wasbuffer in een conische buis van 15 milliliter voor twee centrifugaties en 10 milliliter verse wasbuffer per wasmachine.Na de tweede wasbeurt, opnieuw opschorten de pellet in 400 microliter verse wasbuffer, en breng 350 microliter van de cel suspensie in een vijf milliliter polypropyleen FACS buis, met het hele paneel van backbone antilichamen. Na het grondig mengen van de cellen, pipet gelijke volumes van de cel antilichaam oplossing in drie nieuwe polypropyleen bui

database-guided-flow-cytometry-for-evaluation-bone-marrow-myeloid

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De kolonievormende cel (CFC) assay is een in vitro assay waarin hematopoietische voorlopercellen vormen kolonies in een semi-vast medium. Een combinatie van kolonie morfologie, celmorfologie en flowcytometrie worden gebruikt om het vermogen van de voorouders te laten groeien en differentiëren langs de verschillende hematopoietische lijnen te beoordelen.

Colony Forming Cell (CFC) test voor humane hematopoietische cellen

Terwijl infiltrerende macrofagen continu worden aangeworven op volwassen weefsels uit circulerende precursoren, zitten inwendige macrofagen hun weefsel tijdens ontwikkeling, waar ze worden gehandhaafd zonder verdere input van stamvaders. De voorlopers voor ingezette macrofagen werden recent geïdentificeerd. Hier presenteren wij methoden voor de genetische lotvorming van de ingezeten makrofage stamvaders.

Identificatie van Erythromyeloid Progenitors En Hun Nakomelingen In De Muis Embryo Door Flow Cytometry

Detectie van minimale of meetbare residuele ziekte (MRD) is een belangrijke voorspellende biomarker voor risico-evaluatie te verfijnen en het voorspellen van herval in acute myeloïde leukemie (AML). Deze uitgebreide richtlijnen en aanbevelingen met de best practices voor consistente en accurate identificatie en opsporing van MRD, kan steun bij het maken van effectieve AML behandelingsbeslissingen.

Uitgebreide Protocol bij monster en proces beenmerg voor het meten van meetbare residuele ziekte en leukemische cellen van de stam in Acute myeloïde leukemie

Duidelijk naar voren komt een protocol voor het detecteren van gelijktijdige uitdrukking van leukemie stamcel merkers op primaire acute myeloïde leukemie cellen door stroom cytometry. We laten zien hoe te kwantificeren drie voorlopercellen populaties en een vermeende LSC bevolking met de toenemende mate van rijping. We hebben bevestigd dat de aanwezigheid van deze populaties in overeenkomstige patiënt-afgeleid-xenografts.

Stroom Cytometry om te schatten leukemie cellen van de stam in primaire Acute myeloïde leukemie en patiënt-afgeleid-xenografts, bij diagnose en Follow Up

We beschrijven hierin een eenvoudige analyse van de heterogeniteit van het muriene immuun B-celcompartiment in het peritoneum, milt en beenmergweefsel door middel van flowcytometrie. Het protocol kan worden aangepast en uitgebreid naar andere muizenweefsels.

Flowcytometrische karakterisering van de ontwikkeling van murine B-cellen

Hier beschrijven we een eenvoudig protocol voor de isolatie en kleuring van muriene beenmergcellen tot fenotype hemopoietische stam- en voorlopercellen, samen met de ondersteunende niche endotheel- en mesenchymale stamcellen. Een methode om cellen in endosteale en centrale beenmerggebieden te verrijken, is ook inbegrepen.

Flowcytometrie-analyse van hematopoëtische stam- en voorlopercellen van muizenbeenmerg en stromale nichecellen

Hier wordt een op flowcytometrie gebaseerde techniek gepresenteerd die het mogelijk maakt om tegelijkertijd het aantal celdelingen, het fenotype van de oppervlaktecel en de cellulaire verwantschap te meten. Die eigenschappen kunnen statistisch worden getest met behulp van een op permutatie gebaseerd raamwerk.

Gelijktijdige beoordeling van verwantschap, delingsgetal en fenotype via flowcytometrie voor hematopoëtische stam- en voorlopercellen

Hier wordt een gedetailleerd protocol gepresenteerd om micro-omgevingspopulaties in het beenmerg te isoleren en te karakteriseren op basis van muizenmodellen van myelodysplastische syndromen en acute myeloïde leukemie. Deze techniek identificeert veranderingen in de niet-hematopoëtische beenmergniche, inclusief de endotheliale en mesenchymale stromale cellen, met ziekteprogressie.

Identificatie van micro-omgevingspopulaties in het beenmerg bij myelodysplastisch syndroom en acute myeloïde leukemie

Het huidige protocol beschrijft een kosteneffectieve methode om zeer homogene beenmergmesenchymale stamcellen (BMSC's) van muizen te zuiveren, uit te breiden en te karakteriseren. Deze aanpak vergemakkelijkt de verwerving van grote hoeveelheden BMSC's met een hoog proliferatie- en differentiatiepotentieel, het ondersteunen van muismodellen en het bevorderen van preklinisch onderzoek.

Zuivering, expansie en op flowcytometrie gebaseerde fenotypering van van muizen afgeleide beenmergmesenchymale stamcellen

Dit is een snelle en uitgebreide methode van immunofenotypering myeloïde suppressor cellen (MDSC) en het verrijken van...

Voorbereiding van de myeloïde suppressor cellen (MDSC) van naïeve en pancreas tumor-dragende muizen met behulp van flowcytometrie en geautomatiseerde Magnetic Activated Cell Sorting (AutoMACS)

Leer database-geleide flow-cytometry voor evaluatie van beenmerg myeloïde celrijping bij myelodysplastische syndromen. Deze methode vermindert subjectiviteit en kwantificeert verschillen met normale populaties.

Database-geleide Flow-cytometry voor evaluatie van het beenmerg myeloïde cel rijping

Meer video's verkennen