Frequente staart-tip bloedmonsters in muizen voor de beoordeling van Pulsatiele luteïniserend hormoon afscheiding

Het algemene doel van frequente staartpuntbloedmonsters is om volbloedmonsters te verkrijgen voor de meting van pulsatiele luteïniserend hormoonsecretie, aangeduid als LH bij wakkere, niet-verdoofde en normaal gedragende muizen. Deze methode kan helpen om belangrijke vragen in het veld van reproductieve neuro-endocrinologie te beantwoorden door een betrouwbaar protocol te bieden om pulsatiele luteïniserende hormoonsecretie bij muizen te beoordelen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat frequente manipulatie en gewenning zorgen voor robuuste en betrouwbare pulsatiele luteïniserende hormoonmetingen na acute of chronische experimentele behandelingen.

Behandel de muizen vijf weken voorafgaand aan de bloedafname dagelijks van maandag tot vrijdag. In de laatste twee weken, behandel de muizen ook op zaterdag en zondag. Voer het muizenbehandelingsregime uit in een bio-veiligheidscabinet.

Verwijder de eerste muis uit zijn kooi en plaats hem op een geschikte oppervlakte in de kast. Houd de muis voorzichtig op dit oppervlak vast door de basis van zijn staart vast te houden. Strijk vervolgens met de andere hand stevig over de ventrale oppervlakte van de staart van de basis tot aan de punt.

Doe dit in totaal zes keer en plaats de muis vervolgens terug in zijn kooi. Dit vormt één hanteringsset. Wacht nu zes minuten en voer een andere hanteringsset uit.

Ga door met dit patroon met tussenpozen tussen de sets, voer vier hanteringssets uit per hanteringsessie. In totaal levert dit vierentwintig staartstreken per sessie op. Als experimentele behandelingen tijdens de monsterperiode aanvullende behandelmethoden zoals scruffing of een intraperitoneale injectie omvatten, moet u de muizen ook acclimatiseren aan dergelijke behandelactiviteit tijdens de hanteringssessies.

Twee weken voor de geplande bloedafnamedag, huisvest de muizen in paren om hun verstoring tijdens de monsterperiode te minimaliseren. Bereid voor de bloedafname 0,6 milliliter microcentrifugebuisjes voor voor bloedopslag. Label de buisjes en voor drie microliter bloedafname giet u zevenenvijftig microliters ACES-buffer in elk buisje.

Zodra voorbereid, bewaar de buisjes op vier graden Celsius. Zorg ervoor dat de volgende items klaar staan bij het bio-veiligheidskabinet: pipettentips, een prullenbak, een timer, een experimenteel logboek, een ijsemmer met de bloedafnamebuisjes, scherpe, steriele schaar, een permanente marker en kleine gaasjes. Vijfenveertig minuten voor het begin van de bloedafname, verwijder de eerste muis uit zijn kooi en plaats hem op een geschikte oppervlakte.

Markeer vervolgens de staart om deze muis snel te kunnen identificeren van zijn kooipartner. Gebruik nu schaar om een ​​tot twee millimeter van het uiteinde van de staart te verwijderen. Nadat u de staart hebt geknipt, strijk voorzichtig over de staart tot er een druppel bloed op de punt ontstaat.

Verzamel vervolgens drie microliter bloed en gooi zowel het bloed als het uiteinde in de prullenbak. Zorg er vervolgens voor dat de bloedstroom is gestopt. Als dat nodig is, oefen zachtjes druk uit met steriel gaas.

Plaats de muis vervolgens zes minuten in zijn kooi. Strijk nu met zes minuten intervallen gedurende vijfenveertig minuten stevig over de staart om extra bloedmonsters van de muis te nemen. Als er geen bloeddruppel ontstaat, dep de staart af met een gaasje gedrenkt in zoutoplossing om de bloedstolling te helpen verwijderen.

Gooi tijdens de voormonsterperiode alle bloedaliquota weg. Begin na vijfenveertig minuten met de monsterperiode. Wanneer u monsters neemt, breng drie microliter bloed over in een opvangbuisje, meng het buisje door middel van inversie en plaats het terug op ijs.

Ga door met de monsterneming zolang als nodig is. Als u klaar bent, moet u de muizen euthanaseren of ervoor zorgen dat hun staartbloedstroom volledig is gestopt en vervolgens de muizen voorzien van een schone kooi. Breng vervolgens de bloedmonsters over naar een opslagdoos en bewaar de monsters op min twintig graden Celsius totdat ze kunnen worden geanalyseerd.

Luteïniserend hormoon of LH werd gemeten in frequente bloedmonsters om de respons op een acute psychosociale stressuitdaging te bepalen. Volwassen vrouwelijke C57 zwarte zes muizen werden geovariotomeerd en er werden bloedmonsters genomen gedurende negentig minuten om een pre-behandelingsbasislijn van LH-pulsatiesecretie vast te stellen. Voor de stressbehandeling tijdens de negentig minuten durende bemonstering werden experimentele dieren in knaagdierrestrictieapparaten geplaatst en naar een nieuwe kooi verplaatst, terwijl controles in hun eigen kooi bleven en niet werden vastgehouden.

De analyse toonde aan dat controledieren duidelijke ondubbelzinnige LH-pulsen hadden gedurende de gehele bemonsteringsperiode. In tegenstelling daarmee onderdrukte de psychosociale stress van de beperking snel en ondubbelzinnig de pulsatiele LH-secretie in de experimentele groep. Bij het voorbereiden om deze techniek te gebruiken, is het belangrijk om te onthouden dat milieuverstoringen zoals lawaai of onderbrekingen door andere onderzoekers, die de muizen kunnen stressen en de pulsatiele LH-secretie kunnen onderbreken, moeten worden geminimaliseerd.

Sinds de ontwikkeling ervan door Dr. Stein en anderen in het Chen-laboratorium, heeft deze techniek de weg geëffend voor onderzoekers op het gebied van neuro-endocrinologie om LH-pulsregulatie te onderzoeken in een soort waar complexe moleculaire en genetische hulpmiddelen praktisch en beschikbaar zijn.