Name: Regioselectieve O- glycosylatie van nucleosiden via de tijdelijke 2, 3-Diol bescherming door een koppeling Ester voor de synthese van Disaccharide nucleosiden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Leer regioselectieve O-glycosylatie van nucleosiden via tijdelijke 2',3'-diol-bescherming met boronzuurester voor efficiënte synthese van disaccharide nucleosiden. Deze methode versnelt medicijnontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek werd gefinancierd door grants-in-aid van het ministerie van onderwijs, cultuur, sport, wetenschap en technologie (MEXT) van Japan (nrs 15K 00408, 24659011, 24640156, 245900425 en 22390005 voor Shin Aoki), door een subsidie van de biochemische onderzoek van Tokyo Foundation, Tokyo, Japan, en door het Fonds van de TUS (Tokyo University of Science) voor strategische onderzoeksgebieden. We zouden graag bedanken Noriko Sawabe (Faculteit Farmaceutische Wetenschappen, Tokyo University of Science) voor de metingen van de NMR-spectra, Fukiko Hasegawa (Faculteit Farmaceutische Wetenschappen, Tokyo University of Science) voor de metingen van de massa Spectra en Tomoko Matsuo (Research Institute for Science and Technology, Tokyo University of Science) voor de metingen van de elementaire analyses.

Opmerking: Alle experimentele gegevens [NMR, infrarood spectroscopies (IR), massa spectroscopies (MS), optische rotaties en elementaire analyses gegevens] van de gesynthetiseerde stoffen werden gemeld in een eerdere papier51.
1. procedure voor de O- Glycosylation reacties
<ol><li>Synthese van samengestelde α/β-12 (ingang 12 in tabel 1) Opmerking: Posten 1-13 in tabel 1 werden uitgevoerd met behulp van een soortgelijke procedure.<ol>
<li>
Tijdelijke bescherming van 2', 3'-diol ribonucleoside40
		<ol>
<li>Peervormige kolf (Erlenmeyer 1), los in een 10 mL mannosyl donor α -9 (28.4 mg, 0.0486 mmol)52, uridine 10 (7,9 mg, 0.0324 mmol) en 4-(Trifluormethyl) phenylboronic zuur 11 c (9.3 mg, 0.0490 mmol) in watervrij pyridine (0,40 mL). Opmerking: Het gebruik van een peervormige maatkolf van 10 mL wordt aanbevolen omdat de in punt 1.1.3.1 stap het reactiemengsel worden overgebracht naar de kolf 2 (een 10 mL twee-nek Rondbodemkolf met een septum gekoppeld) bevattende moleculaire zeef poeder.</li>
			<li>Verdampen mede het reactiemengsel (verkregen in stap 1.1.1.1.) met watervrij pyridine (0,40 mL, 3 x) en watervrij 1,4-dioxaan (0,40 mL, 3 x) bij kamertemperatuur tot ca. 40 ° C om het verwijderen van eventueel water.</li>
			<li>Los het residu (verkregen in stap 1.1.1.2.) in watervrij 1,4-dioxaan (0.32 mL) toe en roer het reactiemengsel op de temperatuur van de Terugvloeiing voor 1 h vormen een koppeling ester (de tijdelijke bescherming).</li>
			<li>Verwijder het oplosmiddel met behulp van een roterende verdamper, gevolgd door een vacuümpomp.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Activering van moleculaire zeven
		<ol>
<li>Voeg in een 10 mL twee-nek Rondbodemkolf met een septum die eraan verbonden zijn (kolf 2), 4 Å moleculaire zeef poeder (64 mg). Opmerking: Passende moleculaire zeef moeten worden geselecteerd volgens het oplosmiddel gebruikt voor de glycosylatie (3 Å voor acetonitril) en 4 Å voor 1,4-dioxaan, dichloormethaan en propionitrile.</li>
			<li>Verwarm de moleculaire zeven in een magnetron onder atmosferische druk en koel ze onder verlaagde druk geëvacueerd door een vacuümpomp (3 x) en droog ze vervolgens met een kanon van de warmte onder verlaagde druk en vervangt de lucht met argon gas meerdere malen.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Glycosylatie
		<ol>
<li>Los het residu van stap 1.1.1.4. in de kolf 1 in propionitrile (0.64 mL) of andere oplosmiddelen en breng deze oplossing over kolf 2. Opmerking: Acetonitril, 1,4-dioxaan, dichloormethaan en propionitrile werden gebruikt voor posten 1-7 en 9, post 10, ingang 11 en posten 8, 12 en 13, respectievelijk.</li>
			<li>Roer het reactiemengsel kolf 2 bij kamertemperatuur gedurende 0.5 uur gevolgd door afkoeling het tot-40 ° C. Opmerking: De temperatuur is gewijzigd volgens het oplosmiddel gebruikt voor de glycosylatie (-40 ° C voor dichloormethaan en propionitrile), de kamertemperatuur voor 1,4-dioxaan en -20 ° C voor acetonitril.</li>
			<li>Zilver triflaat (49.9 mg, 0,194 mmol) en p -toluenesulfenyl chloride (12,8 µL, 0.0968 mmol) toevoegen aan het reactiemengsel bij dezelfde temperatuur als in de stap 1.1.3.2 gebruikt.</li>
			<li>Roer het reactiemengsel bij dezelfde temperatuur gedurende 1,5 uur.</li>
			<li>Controleer de reactie door dunne-laag chromatografie (TLC) met hexaan/ethylacetaat [3/1 (v/v)] om te controleren de glycosyl donors [de retentie factor (Rf) (donor α -9) = 0,63] en met chloroform/methanol [10/1 (v/v))] om te controleren de glycosyl Acceptanten en producten [Rf (acceptor 10) = 0,03, Rf (gewenste product) = 0.50].</li>
			<li>Doven het reactiemengsel met verzadigde waterige natriumbicarbonaat (1,0 mL) en Verdun het met chloroform (2,0 mL), verwijderen van de onoplosbare materialen met Celitede Celite met chloroform (20 mL) grondig te wassen.</li>
			<li>Wassen en plaats met verzadigde waterige natriumbicarbonaat (20 mL, 3 x) en pekel (20 mL) met behulp van een separatory trechter van 100 mL van het filtraat (organische laag).</li>
			<li>Droog de resulterende organische laag met Natriumsulfaat, de onoplosbare materialen te filteren en concentreren van het filtraat met behulp van een rotatieverdamper.</li>
			<li>Ongeveer het resterende residu te zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform/methanol = 1/0 - 50/1 (v/v)] veroorloven ruwe 5'-O-(6"-O- acetyl-2", 3", 4"tri-O- benzyl-α/β-ᴅ-mannopyranosyl) uridine bevattende een kleine hoeveelheid bijproducten (15.2 mg, kleurloze siroop).</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Acetylation
		<ol>
<li>Los in een flesje van 5 mL, de resulterende ruwe compound bereid in stap 1.1.3.9 in watervrij pyridine (0,20 mL).</li>
			<li>Toevoegen van N,N-dimethyl-4-aminopyridine (een katalytische hoeveelheid) en azijnzuur-anhydride (20.4 µL, 0.0216 mmol: 10 equivalenten gebaseerd op de ruwe stof) aan de oplossing bij 0 ° C.</li>
			<li>Roer het reactiemengsel bij dezelfde temperatuur 0.5 uur gevolgd door een opwarming van de aarde op kamertemperatuur.</li>
			<li>Na 's nachts te roeren, het controleren van de reactie van TLC met chloroform/methanol [30/1 (v/v)] [Rf (α/β-12) = 0,45].</li>
			<li>Verdun het reactiemengsel met chloroform (20 mL).</li>
			<li>Wassen van de organische laag met 1 M zoutzuur (20 mL, 3 x), verzadigde waterige natriumbicarbonaat (20 mL, 3 x) en pekel (20 mL) met behulp van een separatory trechter van 100 mL.</li>
			<li>Droog de resulterende organische laag met Natriumsulfaat, de onoplosbare materialen te filteren en concentreren van het filtraat met behulp van een rotatieverdamper.</li>
			<li>Het resterende residu zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform/methanol = 1/0 - 90/1 (v/v)] te geven van α/β-12 (15,8 mg, 61%, α/β = 1,6/1, kleurloze amorf solid).</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Synthese van verbindingen β-22 tot en met β-30 (tabel 2) en β-33 (tabel 3) Opmerking: De synthese van β-22-Β-30en β-33werd uitgevoerd met behulp van een soortgelijke procedure.<ol><li>Synthese van samengestelde β-22 (post 1 in tabel 2)
		<ol>
<li>
Tijdelijke bescherming van 2', 3'-diol van ribonucleoside
			<ol>
<li>Los in een 10 mL peervormige kolf (erlenmeyer 3), adenosine 13 (20.4 mg, 0.0763 mmol), galactosyl donor β -21 (80.4 mg, 0.114 mmol)53en 4-(Trifluormethyl) phenylboronic zuur 11 c (21.7 mg, 0.114 mmol) in watervrij Pyridine (0,76 mL). Opmerking: Het gebruik van een peervormige maatkolf van 10 mL wordt aanbevolen omdat het reactiemengsel worden overgebracht naar de kolf 4 (een 10 mL twee-nek Rondbodemkolf met een septum gekoppeld) bevattende moleculaire zeef poeder in de stap 1.2.1.3.1.</li>
				<li>Verdampen mede het reactiemengsel (verkregen in stap 1.2.1.1.1.) met watervrij pyridine (0,76 mL, 3 x) en watervrij 1,4-dioxaan (0,76 mL, 3 x) bij kamertemperatuur tot ca. 40 ° C om het verwijderen van eventueel water.</li>
				<li>Los het residu (verkregen in stap 1.2.1.1.2.) in watervrij 1,4-dioxaan (0,76 mL) toe en roer het reactiemengsel op de temperatuur van de Terugvloeiing voor 1 h vormen een koppeling ester (een tijdelijke bescherming).</li>
				<li>Verwijder het oplosmiddel met behulp van een roterende verdamper, gevolgd door een vacuümpomp.</li>
			</ol>
</li>
			<li>
Activering van moleculaire zeven
			<ol>
<li>Voeg in een 10 mL twee-nek Rondbodemkolf met een septum die eraan verbonden zijn (kolf 4), 4 Å moleculaire zeef poeder (150 mg).</li>
				<li>Verwarm de moleculaire zeven in een magnetron onder atmosferische druk en koel ze onder verlaagde druk geëvacueerd door een vacuümpomp (3 x) en droog ze vervolgens met een kanon van de warmte onder verlaagde druk en vervangt de lucht met argon gas meerdere malen.</li>
			</ol>
</li>
			<li>
Glycosylatie
			<ol>
<li>Los het residu van stap 1.2.1.1.4. in de kolf 3 in propionitrile (1,50 mL) en breng deze oplossing over kolf 4.</li>
				<li>Roer het reactiemengsel bij kamertemperatuur gedurende 0.5 uur, gevolgd door afkoeling het tot-40 ° C.</li>
				<li>Toevoegen zilver triflaat (117.6 mg, 0.458 mmol) en p- toluenesulfenyl chloride (30.3 µL, 0.229 mmol) aan het reactiemengsel bij dezelfde temperatuur, zoals vermeld in stap 1.2.1.3.2.</li>
				<li>Roer het reactiemengsel, bij dezelfde temperatuur gedurende 1,5 uur.</li>
				<li>Controleren van de reactie van TLC met hexaan/ethylacetaat [2/1 (v/v)] om te controleren de glycosyl donors [Rf (donor β -21) = 0,62] en met chloroform/methanol [10/1 (v/v)] om te controleren de glycosyl Acceptanten en producten [Rf (acceptor 13 ) = 0,05, Rf (gewenste product) = 0.30].</li>
				<li>Doven het reactiemengsel met verzadigde waterige natriumbicarbonaat (2,0 mL) en Verdun het met chloroform (3,0 mL), verwijderen van de onoplosbare materialen via Celitede Celite met chloroform (30 mL) grondig te wassen.</li>
				<li>Wassen en plaats met verzadigde waterige natriumbicarbonaat (30 mL, 3 x) en pekel (30 mL) met behulp van een separatory trechter van 100 mL van het filtraat (organische laag).</li>
				<li>Droog de resulterende organische laag met Natriumsulfaat, de onoplosbare materialen te filteren en concentreren van het filtraat met behulp van een rotatieverdamper.</li>
				<li>Het resterende residu zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform/methanol = 1/0 - 30/1 (v/v)] veroorloven β -22 (27.4 mg 42%, kleurloze solid).</li>
			</ol>
</li>
		</ol></li>
		<li>Synthese van samengestelde β-23 (post 2 in tabel 2)
		<ol>
<li>Gedrag de reactie met behulp van 14 (28.4 mg, 0.0765 mmol)54, β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11 c (21.8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl chloride (30.3 µL, 0.229 mmol), zilveren triflaat (117.8 mg, 0.458 mmol), watervrij 1,4-dioxaan (0,76 mL), watervrij propionitrile (1,50 mL) en 4 Å moleculaire zeef (150 mg). Het resulterende residu zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform/methanol = 1/0 - 50/1 (v/v)] te geven β-23 (21.9 mg, 30%, kleurloze solid). TLC: Rf (β -23) = 0.37 [chloroform/methanol = 10/1 (v/v)].</li>
		</ol></li>
		<li>Synthese van samengestelde β-24 (ingang 3 in tabel 2)
		<ol>
<li>De reactie met behulp van 15 (21.6 mg, 0.0763 mmol), β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11 c (21.8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl chloride (30.3 µL, 0.229 mmol), zilver triflaat (117.6 mg, 0.458 mmol), watervrij 1,4-dioxaan (voeren 0,76 mL), watervrij propionitrile (1,50 mL) en 4 Å moleculaire zeef (150 mg). Het resulterende residu zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform/methanol = 1/0 - 8/1 (v/v)] te geven van β -24 (8.1 mg 12%, kleurloze solid). TLC: Rf (β -24) = 0.20 [chloroform/methanol = 10/1 (v/v)].</li>
		</ol></li>
		<li>Synthese van samengestelde β-25 (ingang 4 in tabel 2)
		<ol>
<li>Gedrag de reactie met behulp van 16 (27.0 mg, 0.0764 mmol)55, β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11 c (21.8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl chloride (30.3 µL, 0.229 mmol), zilveren triflaat (117.8 mg, 0.458 mmol), watervrij 1,4-dioxaan (0,76 mL), watervrij propionitrile (1,50 mL) en 4 Å moleculaire zeef (150 mg). Het resulterende residu zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform/methanol = 1/0 - 20/1 (v/v)] te geven van β -25 (31.4 mg, 44%, kleurloze solid). TLC: Rf (β -25) = 0.27 [chloroform/methanol = 10/1 (v/v)].</li>
		</ol></li>
		<li>Synthese van samengestelde β-26 (ingang 5 in tabel 2)
		<ol>
<li>De reactie met behulp van 10 (18,6 mg, 0.0762 mmol), β -21 (80.4 mg, 0.114 mmol), 11 c (21.7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl chloride (30.3 µL, 0.229 mmol), zilver triflaat (117.6 mg, 0.458 mmol), watervrij 1,4-dioxaan (voeren 0,76 mL), watervrij propionitrile (1,50 mL) en 4 Å moleculaire zeef (150 mg). Het resulterende residu zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform/methanol = 1/0 - 40/1 (v/v)] te geven van β -26 (26.1 mg 42%, kleurloze solid). TLC: Rf (β -26) = 0,45 [chloroform/methanol = 10/1 (v/v)].</li>
		</ol></li>
		<li>Synthese van samengestelde β-27 (ingang 6 in tabel 2)
		<ol>
<li>Voeren van de 17 (19.7 mg, 0.0763 mmol), β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11 c (21.8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl chloride (30.3 µL, 0.229 mmol), zilver triflaat (117.6 mg, 0.458 mmol), watervrij () 1,4-dioxaan-reactie 0,76 mL), watervrij propionitrile (1,50 mL) en 4 Å moleculaire zeef (150 mg). Het resulterende residu zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform/methanol = 1/0 - 40/1 (v/v)] te geven van β -27 (33.8 mg, 53%, kleurloze solid). TLC: Rf (β -27) = 0.50 [chloroform/methanol = 10/1 (v/v)].</li>
		</ol></li>
		<li>Synthese van samengestelde β-28 (ingang 7 in tabel 2)
		<ol>
<li>Voeren van de 18 (20.0 mg, 0.0763 mmol), β -21 (80.4 mg, 0.114 mmol), 11 c (21.7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl chloride (30.3 µL, 0.229 mmol), zilver triflaat (117.6 mg, 0.458 mmol), watervrij () 1,4-dioxaan-reactie 0,76 mL), watervrij propionitrile (1,50 mL) en 4 Å moleculaire zeef (150 mg). Het resulterende residu zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform en ethylacetaat/chloroform = 1/1 (v/v)] te geven β-28 (38.8 mg, 61%, kleurloze solid). TLC: Rf (β -28) = 0,33 [chloroform/methanol = 10/1 (v/v)].</li>
		</ol></li>
		<li>Synthese van samengestelde β-29 (post 8 in tabel 2)
		<ol>
<li>Voeren van de 19 (18.5 mg, 0.0761 mmol), β -21 (80.4 mg, 0.114 mmol), 11 c (21.7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl chloride (30.3 µL, 0.229 mmol), zilver triflaat (117.6 mg, 0.458 mmol), watervrij () 1,4-dioxaan-reactie 0,76 mL), watervrij propionitrile (1,50 mL) en 4 Å moleculaire zeef (150 mg). Het resulterende residu zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform/methanol = 1/0 - 10/1 (v/v)] te geven van β -29 (34.1 mg, 55%, kleurloze solid). TLC: Rf (β -29) = 0,25 [chloroform/methanol = 10/1 (v/v)].</li>
		</ol></li>
		<li>Synthese van samengestelde β-30 (ingang 9 in tabel 2)
		<ol>
<li>Gedrag de reactie met behulp van 20 (26.6 mg, 0.0766 mmol)56, β -21 (80.6 mg, 0.115 mmol), 11 c (21.8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl chloride (30.3 µL, 0.229 mmol), zilveren triflaat (117.8 mg, 0.458 mmol), watervrij 1,4-dioxaan (0,76 mL), watervrij propionitrile (1,50 mL) en 4 Å moleculaire zeef (150 mg). Het resulterende residu zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform/methanol = 1/0 - 50/1 (v/v)] te geven van β -30 (28.0 mg, 40%, kleurloze solid). TLC: Rf (β -30) = 0,48 [chloroform/methanol = 10/1 (v/v)].</li>
		</ol></li>
		<li>Synthese van samengestelde β-33 (post 1 in tabel 3)
		<ol>
<li>Gedrag de reactie met behulp van 18 (20.0 mg, 0.0762 mmol), β -31 (80.4 mg, 0.114 mmol)57, 11 c (21.7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl chloride (30.3 µL, 0.229 mmol), zilveren triflaat (117.6 mg, 0.458 mmol), watervrij 1,4-dioxaan (0,76 mL), watervrij propionitrile (1,50 mL) en 4 Å moleculaire zeef (150 mg). Het resulterende residu zuiveren door kolom-chromatografie [silicagel, chloroform/methanol = 1/0 - 30/1 (v/v)] te geven van β -33 (34.5 mg, 54%, kleurloze solid). TLC: Rf (β -33) = 0,33 [chloroform/methanol = 10/1 (v/v)].</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>2. deprotection van β-28 (Figuur 2)
<ol><li>In een flesje van 5 mL, voeg β -28 (25,2 mg, 0.0300 mmol) en 10 M methylamine in methanol (2,0 mL)58.</li>
	<li>Roer het reactiemengsel bij 0 ° C gedurende 2 uur gevolgd door de opwarming van de aarde het tot kamertemperatuur.</li>
	<li>Controleer na het mengsel voor 13u roeren, de reactie van TLC met chloroform/methanol [10/1 (v/v)] [Rf (β -35) = 0.20].</li>
	<li>Concentreren het reactiemengsel met behulp van een rotatieverdamper.</li>
	<li>Los de resulterende residu op in water (15 mL) en wassen van de waterige laag met dichloormethaan (15 mL, 3 x) met behulp van een 50 mL separatory trechter.</li>
	<li>Het concentreren van de waterige laag met een rotatieverdamper.</li>
	<li>Het resterende residu zuiveren door preparatieve krachtige vloeibare chromatografie (HPLC) [kolom: ODS (octadecylsilane) kolom (20Φ x 250 mm), eluens: water (bevat 0,1% [v/v] trifluorazijnzuur), debiet: 8,0 mL/min, detectie: 266 nm, temperatuur: 25 ° C, de retentietijd: 20 min] te geven van β -35 (7,9 mg, 62%, kleurloze amorf solid)59.</li>
</ol>3. NMR Studies van cyclische koppeling Ester (Figuur 3 en 4)
<ol><li>
Voorbereiding en meting van 36
	<ol>
<li>Los in 10 mL peervormige maatkolf uridine 10 (34.3 mg, 0.140 mmol) en 4-(Trifluormethyl) phenylboronic zuur 11 c (40.0 mg, 0.211 mmol) in watervrij pyridine (1,00 mL).</li>
		<li>Verdampen mede het reactiemengsel met watervrij pyridine (1,00 mL, 3 x) en watervrij 1,4-dioxaan (1,00 mL, 3 x) bij kamertemperatuur tot ca. 40 ° C om het verwijderen van eventueel water.</li>
		<li>Los het residu op in watervrij 1,4-dioxaan (1,40 mL) toe en roer het reactiemengsel op de temperatuur van de Terugvloeiing voor 1 h vormen een koppeling ester (een tijdelijke bescherming).</li>
		<li>Afzien van het reactiemengsel (0,14 mL) voor een ampul van 5 mL.</li>
		<li>Verwijder het oplosmiddel uit het flesje van 5 mL met behulp van een roterende verdamper, gevolgd door een vacuümpomp.</li>
		<li>Los van de resulterende residu 36 in acetonitril -d3 (0.64 mL).</li>
		<li>Maatregel 1H, 11B en 19F NMR spectroscopies met behulp van een kwarts NMR buis bij 25 ° C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Voorbereiding en meting van 38
	<ol>
<li>Voorbereiden van de reactie mengsel 38 van 11 c (40.0 mg, 0.211 mmol) met behulp van de procedure van dezelfde aard als die van de stap 3.1.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het doel van dit manuscript is om te laten zien een handige synthetische methode te bereiden disaccharide nucleosiden met behulp van onbeveiligde ribonucleosides zonder vervelende bescherming manipulaties van de groep. Wij rapporteren hierin over de regioselectieve O- glycosylations van nucleosiden via de tijdelijke 2', 3'-diol bescherming door een cyclische koppeling ester (Figuur 1B)51.
De voorbereiding ...

Disaccharide nucleosiden, die geconjugeerde van een nucleoside en een groep koolhydraten zijn met elkaar verbonden via een O-glycosidic bond, vormen een waardevolle klasse van natuurlijk voorkomende koolhydraten derivaten1,2 ,3,4,,5,,6,7. Bijvoorbeeld, zij zijn opgenomen in de biologische macromoleculen zoals tRNA (transfer RNA zuur) en poly(ADP-ribose) (ADP = adenosinedifosfaat), evenals in sommige antibacteriële middelen en andere biologisch-werkzame stoffen (b.v., adenophostins, amicetins, ezomycin)5,6,8,9,10,11,12,13, 14,,15,16,17,18,19. Vandaar, disaccharide nucleosiden en derivaten daarvan naar verwachting loodverbindingen voor ontdekking drugsonderzoek. De methoden voor de synthese van disaccharide nucleosiden worden ingedeeld in drie categorieën; enzymatische O- glycosylation20,21, chemische N- glycosylation5,9,16,22,23, 24, en chemische O- glycosylation7,9,14,16,18,19,24, 25,26,27,28,29,30,31,32,33, 34,35,,36,,37. In het bijzonder zou chemische O- glycosylation een efficiënte methode voor de Stereoselectieve synthese en grootschalige synthese van disaccharide nucleosiden. Eerder onderzoek heeft aangetoond dat de O- glycosylatie van 2'-deoxyribonucleoside 2 met de thioglycosyl donor 1, met behulp van de combinatie van p- toluenesulfenyl chloride en zilver triflaat, biedt de gewenst disaccharide nucleoside 3 (Figuur 1A; AR = aryl en PG = bescherming groep)38.
Naar aanleiding van deze resultaten besloten we te ontwikkelen van de O- glycosylatie van ribonucleosides p- toluenesulfenyl chloride/zilver triflaat promotor systeem toe te passen. Hoewel diverse voorbeelden van de O- glycosylatie van gedeeltelijk beschermde ribonucleosides aangetoonde7,9,14,16,18,geweest19 ,24,32,33,34,35,,36,,37, het gebruik van onbeschermde of tijdelijk beveiligde ribonucleosides als een glycosyl accepteerder voor O- glycosylation verwaarloosbaar is gemeld. Daarom zou de ontwikkeling van de regioselectieve O- glycosylatie van onbeschermde of tijdelijk beveiligde ribonucleosides bieden van een gunstiger synthetische methode zonder de bescherming van de manipulaties van de groep van ribonucleosides. Met het oog op de regioselectieve O- glycosylatie van ribonucleosides, we gericht op de boor-verbindingen, omdat diverse voorbeelden van regio - en/of Stereoselectieve acylering, alkylatie silyl en glycosylatie van koolhydraten derivaten bijgestaan door koppeling of borinic zuur geweest gemeld39,40,41,42,43,44,45 ,46,47,48,49,50. In dit artikel tonen we de procedure voor de synthese van disaccharide nucleosiden gebruik te maken van de regioselectieve O- glycosylatie op de 5'-hydroxylgroep van ribonucleosides via een tussenliggende koppeling ester. In de hier gepresenteerde strategie koppeling ester tussenliggende 6 zou worden geboden door de verestering van de ribonucleoside 4 met de koppeling zure 5, waarmee de regioselectieve O- glycosylatie op de 5'-hydroxylgroep met thioglycosyl donor 7 te geven van het disaccharide nucleoside 8 (Figuur 1B)51. We bestudeerde ook de interactie van een ribonucleoside en de koppeling zuur door nucleaire magnetische resonantie (NMR) spectroscopie, te observeren van de vorming van een koppeling ester. Verestering kan een koppeling ester en een glycosylatie reactie vereisen watervrije voorwaarden om te voorkomen dat de hydrolyse van de koppeling ester en de donor glycosyl. In dit artikel tonen we de typische procedures voor het verkrijgen van de watervrije voorwaarden voor succesvolle glycosylatie reacties voor onderzoekers en studenten niet alleen in de chemie, maar ook op andere onderzoeksterreinen.

<table><tbody><tr><td>Zilver trifluormethaansulfonaat</td><td>Nacalai Tesque</td><td>34945-61</td><td></td></tr><tr><td>Fenylboorzuur (bevat wisselende hoeveelheden anhydride)</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>B0857</td><td></td></tr><tr><td>p-Methoxyfenylboorzuur</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>321-69201</td><td></td></tr><tr><td>4-(Trifluormethyl)fenylboorzuur (bevat wisselende hoeveelheden anhydride)</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>T1788</td><td></td></tr><tr><td>2,4-Difluorfenylboorzuur (bevat wisselende hoeveelheden anhydride)</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>D3391</td><td></td></tr><tr><td>Cyclopentylboorzuur (bevat wisselende hoeveelheden Anhydride)</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>C2442</td><td></td></tr><tr><td>4-Nitrofenylboorzuur (bevat wisselende hoeveelheden anhydride)</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>N0812</td><td></td></tr><tr><td>4-Hexylfenylboorzuur (bevat wisselende hoeveelheden anhydride)</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>H1489</td><td></td></tr><tr><td>Adenosine</td><td>Merck KGaA</td><td>862.</td><td></td></tr><tr><td>Guanosine</td><td>Acros Organics</td><td>411130050</td><td></td></tr><tr><td>Cytidine</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>C0522</td><td></td></tr><tr><td>Uridine</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>U0020</td><td></td></tr><tr><td>5-Fluorouridine</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>F0636</td><td></td></tr><tr><td>5-Methyluridine</td><td>Sigma</td><td>M-9885</td><td></td></tr><tr><td>Methylamine (40% in Methanol,&nbsp;ca. 9.8mol/L)</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>M1016</td><td></td></tr><tr><td>N,N-dimethyl-4-aminopyridine</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>044-19211</td><td></td></tr><tr><td>Azijnzuuranhydride</td><td>Nacalai Tesque</td><td>00226-15</td><td></td></tr><tr><td>Pyridine, Gedehydrateerd</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>161-18453</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitril</td><td>Kanto Chemical</td><td>01031-96</td><td></td></tr><tr><td>1,4-Dioxaan</td><td>Nacalai Tesque</td><td>13622-73</td><td></td></tr><tr><td>Dichloormethaan</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>130-02457</td><td></td></tr><tr><td>Propionitril</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>164-04756</td><td></td></tr><tr><td>Molecuulzeef 4A poeder</td><td>Nacalai Tesque</td><td>04168-65</td><td></td></tr><tr><td>Molecuulzeef 3A poeder</td><td>Nacalai Tesque</td><td>04176-55</td><td></td></tr><tr><td>Celite 545RVS</td><td>Nacalai Tesque</td><td>08034-85</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitril-D3 (D,99.8%)</td><td>Cambridge Isotope Laboratories</td><td>DLM-21-10</td><td></td></tr><tr><td>Trifluorazijnzuur</td><td>Nacalai Tesque</td><td>34831-25</td><td></td></tr><tr><td>TLC Silicagel 60 F254</td><td>Merck KGaA</td><td>1.05715.0001</td><td></td></tr><tr><td>Chromatorex</td><td>Fuji Silysia Chemical</td><td>FL100D</td><td></td></tr><tr><td>Natriumwaterstofcarbonaat</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>191-01305</td><td></td></tr><tr><td>Zoutzuur</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>080-01061</td><td></td></tr><tr><td>Natriumsulfaat</td><td>Nacalai Tesque</td><td>31915-96</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Kanto Chemical</td><td>07278-81</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchloride</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>194-01677</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Nacalai Tesque</td><td>21914-74</td><td></td></tr><tr><td>JEOL Always 300</td><td>JEOL</td><td></td><td>Meetinstrument voor NMR</td></tr><tr><td>Lambda 400</td><td>JEOL</td><td></td><td>Meetinstrument voor NMR</td></tr><tr><td>PerkinElmer Spectrum 100 FT-IR Spectrometer</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>Meetinstrument voor IR</td></tr><tr><td>JEOL JMS-700</td><td>JEOL</td><td></td><td>Meetinstrument voor MS</td></tr><tr><td>PerkinElmer CHN 2400 analyzer</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>Meetinstrument voor elementenanalyse</td></tr><tr><td>JASCO P-1030 digitaal polarimeter</td><td>JASCO</td><td></td><td>Meetinstrument voor optische rotatie</td></tr><tr><td>JASCO PU-2089 Plus intelligente HPLC-pomp</td><td>JASCO</td><td></td><td>Voor HPLC</td></tr><tr><td>Jasco UV-2075 Plus Intelligent UV/Vis Detector</td><td>JASCO</td><td></td><td>Voor HPLC</td></tr><tr><td>Rheodyne Model 7125 Injector</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>58826</td><td>Voor HPLC</td></tr><tr><td>Chromatopac C-R8A</td><td>Shimadzu</td><td></td><td>Voor HPLC</td></tr><tr><td>Senshu Pak Pegasil ODS</td><td>Senshu Scientific</td><td></td><td>Voor HPLC</td></tr><tr><td>p-Tolueensulphenyl&nbsp;chloride</td><td></td><td></td><td>Bereid&nbsp; Ref. 38</td></tr><tr><td>Fenyl 6-O-acetyl-2,3,4-tri-O-benzyl-1-thio-a-D-mannopyranoside (a-9)</td><td></td><td></td><td>Bereid&nbsp; Ref. 52</td></tr><tr><td>4-Metylfenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-b-D-galactopyranosid (b-21)</td><td></td><td></td><td>Bereid&nbsp; Ref. 53</td></tr><tr><td>4-Metylfenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-b-D-glucopyranoside (b-31)</td><td></td><td></td><td>Bereid&nbsp; Ref. 57</td></tr><tr><td>4-Metylfenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-a-D-Mannopyranoside (a-32)</td><td></td><td></td><td>Bereid&nbsp; Ref. 67</td></tr><tr><td>6-N-Benzoyl-adenosine (14)</td><td></td><td></td><td>Bereid&nbsp; Ref. 54</td></tr><tr><td>2-N-Isobutyrylguanosine (16)</td><td></td><td></td><td>Bereid&nbsp; Ref. 55</td></tr><tr><td>4-N-Benzoylcytidine (20)</td><td></td><td></td><td>Bereid&nbsp; Ref. 56</td></tr></tbody></table>

regioselectieve o- glycosylatie van nucleosiden via de tijdelijke 2', 3'-diol bescherming door een koppeling ester voor de synthese van disaccharide nucleosiden

Regioselective O-Glycosylation of Nucleosides via the Temporary 2',3'-Diol Protection by a Boronic Ester for the Synthesis of Disaccharide Nucleosides

Disaccharide nucleosiden, die bestaan uit disaccharide en nucleobase wordt, zijn gekend als een waardevolle groep van natuurproducten met veelsoortige bioactivities. Hoewel chemische O- glycosylation een algemeen positieve strategie is te synthetiseren disaccharide nucleosiden, vereist de voorbereiding van substraten zoals glycosyl donors en acceptanten vervelend bescherming manipulaties van de groep en een zuivering op elke synthetische stap. Ondertussen verschillende onderzoeksgroepen hebben gemeld dat koppeling en borinic esters daarvan dienen als een bescherming of groep van koolhydraten derivaten om de regio - en/of Stereoselectieve acylering, alkylatie silyl en glycosylatie activeren. In dit artikel tonen we de procedure voor de regioselectieve O- glycosylatie van onbeveiligde ribonucleosides met behulp van koppeling zuur. De verestering van 2', 3'-diol van ribonucleosides met koppeling zuur maakt de tijdelijke bescherming van diol, en volgende O- glycosylation met een glycosyl donor in het bijzijn van de p- toluenesulfenyl chloride en zilver triflaat, vergunningen de regioselectieve reactie van de 5'-hydroxylgroep veroorloven het disaccharide nucleosiden. Deze methode kan worden toegepast op verschillende nucleosiden, zoals calciumguanosine, adenosine, cytosinetrifosfaat, uridine, 5-metyluridine en 5-fluorouridine. In dit artikel en de bijbehorende video vertegenwoordigen nuttige (visuele) informatie voor de O- glycosylatie van onbeschermde nucleosiden en hun analogen voor de synthese van niet alleen disaccharide nucleosiden, maar ook een verscheidenheid aan biologisch relevante derivaten.

De resultaten van de O- glycosylatie van uridine 10 met thiomannoside α -9 zijn samengevat in tabel 160,61. In post 1 resulteerde de O- glycosylatie van 10 met α -9 bij gebrek aan koppeling zuur derivaten in de vorming van een ingewikkeld mengsel. Post 2, 10 en phenylboronic zuur 11a waren gemeng...

Hier presenteren we protocollen voor de synthese van disaccharide nucleosiden door de regioselectieve O- glycosylatie van ribonucleosides via een tijdelijke bescherming van hun 2', 3'-diol wordt met behulp van een cyclische ester van koppeling. Deze methode is van toepassing op verschillende onbeschermde nucleosiden zoals adenosine, calciumguanosine, cytosinetrifosfaat, uridine, 5-methyluridine en 5-fluorouridine te geven van de corresponderende disaccharide nucleosiden.

Regioselectieve O- glycosylatie van nucleosiden via de tijdelijke 2', 3'-Diol bescherming door een koppeling Ester voor de synthese van Disaccharide nucleosiden

Disaccharide nucleosides, which consist of disaccharide and nucleobase moieties, have been known as a valuable group of natural products having ...

Deze methode kan worden verwacht om onderzoek naar geneesmiddelontdekking te helpen vanwege het korte proces dat nodig is voor de bereiding van biologisch actieve disaccharide nucleosiden in vergelijking met traditionele bestaande methoden. Het grote voordeel van deze techniek is dat onbeschermde nucleosiden kunnen worden toegepast voor glycosylering zonder een vervelende beschermingsgroepmanipulatie om disaccharide nucleosiden te synthetiseren. Visuele demonstratie van deze methode zal nuttige informatie geven voor succesvolle glycosylering van onbeschermde nucleosiden voor onderzoekers en studenten, niet alleen in de chemie, maar ook in andere onderzoeksgebieden.Begin met het optimaliseren van de reactieomstandigheden voor de synthese van verbinding Alpha-en Beta-12 zoals beschreven in het tekstprotocol. Pas vervolgens de geoptimaliseerde reactieomstandigheden toe op de synthese van Beta-22 tot Beta-30, evenals voor Beta-33, met behulp van een vergelijkbare procedure. In deze video wordt de synthese van verbinding Beta-22 gedemonstreerd.Begin met de tijdelijke bescherming van twee prime, drie prime-Diol van ribonucleoside door 20,4 milligram Adenosine-13 op te lossen in 0,76 mill

regioselective-o-glycosylation-nucleosides-via-temporary-2-3-diol

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

In dit artikel wordt een hoge doorvoer methode voorgesteld voor de synthese van Oligosacchariden en de bevestiging aan het oppervlak van polyanhydride nanodeeltjes voor verder gebruik in voor specifieke receptoren op antigeen-presenterende cellen.

High-throughput synthese van koolhydraten en functionalisering van polyanhydride Nanodeeltjes

De hierin beschreven protocol heeft tot doel uit te leggen en verkorten de vele obstakels in de weg van de ingewikkelde route die leidt tot gewijzigde nucleosidetrifosfaten. Bijgevolg Dit protocol maakt zowel de synthese van deze geactiveerde bouwstenen en hun beschikbaarheid voor praktische toepassingen.

Nucleosidetrifosfaten - Van Synthese tot biochemische karakterisering

Indoxyl glycosides zijn goed gevestigde en veelgebruikte hulpmiddelen voor enzymscreening en het bewaken van enzymactiviteit. Vooral voor glucose-type structuren bleken eerdere syntheses uitdagend en met een lage opbrengst. Onze nieuwe aanpak gebruikt indoxylzuur esters als waardevolle tussenproducten om een aanzienlijk aantal indoxyl glycosides met een goede opbrengst te verkrijgen.

Synthese van Indoxyl-glycosiden voor detectie van Glycosidase Activiteiten

Een modulaire benadering van de synthese van N- glycanen voor bevestiging aan een aluminium oxide-gecoate glazen schuif (ACG dia) als een microarray glycan heeft ontwikkeld en het gebruik ervan voor de profilering van een HIV in grote lijnen neutraliserende antilichamen aangetoond.

Chemo-enzymatische synthese van N- glycanen voor Array ontwikkeling en HIV antilichaam profilering

Dit artikel geeft een gedetailleerde procedure voor de solide fase synthese, zuivering en karakterisering van dodecamers van RNA gemodificeerd op de C2'- O- positie. UV-vis en cirkelvormige dichroïstische fotometrische analyses worden gebruikt om structurele aspecten te kwantificeren en karakteriseren, dwz enkelstrengen of dubbelstrengen.

Protocol voor de vaste fase synthese van oligomeren van RNA die een 2&#39;-<em&gt; O</em&gt; -thiophenylmethylmodificatie en karakterisering via cirkelvormige dichroïsme

Biochemische en structurele analyses van geglycosyleerde eiwitten vereist relatief grote hoeveelheden van homogene monsters. Hier presenteren we een efficiënte chemische methode voor site-specifieke glycosylatie van recombinante eiwitten gezuiverd van bacteriën door zich te richten van reactieve Cys thiolen.

Cysteïne thiolen richtend voor in Vitro site-specifieke glycosylatie van recombinante eiwitten

Een 2-azido-1-nitraat-ester kan worden geconverteerd naar de corresponderende 2-azido-1-trichloroacetimidate in een één-pot-procedure. Het doel van het manuscript is om aan te tonen van de nut van de reactor van de magnetron in de synthese van de koolhydraten.

One-pot magnetron-bijgewoonde conversie van anomere nitraat-esters naar Trichloroacetimidates

Dit protocol demonstreert het gebruik van de auto-CHO software voor hiërarchische en programmeerbare One-pot synthese van oligosacchariden. Het beschrijft ook de algemene procedure voor RRV-bepalings experimenten en eenpotglycosylatie van SSEA-4.

Hiërarchische en programmeerbare One-pot oligosaccharide synthese

Hier stellen we een eenvoudig protocol voor dat metabole oligosacharide-engineering, klikchemie en expansiemicroscopie combineert en dat bioimaging van intracellulaire gesialyleerde N-glycoproteïnen met verbeterde resolutie mogelijk maakt met behulp van routinematige microscopieapparatuur.

Visualisatie van intracellulaire sialylering met klikchemie en expansiemicroscopie

Werkwijze voor de synthese van lucht-gevoelige titaan en vanadium antikankermiddelen wordt beschreven, samen met de evaluatie van hun cytotoxische activiteit voor humane kankercellijn de MTT assay.

Anticancer Metal Complexen: Synthese en cytotoxiciteit Evaluatie door de MTT-test

Leer regioselectieve O-glycosylatie van nucleosiden via tijdelijke 2',3'-diol-bescherming met boronzuurester voor efficiënte synthese van disaccharide nucleosiden. Deze methode versnelt medicijnontwikkeling.

Regioselectieve O- glycosylatie van nucleosiden via de tijdelijke 2, 3-Diol bescherming door een koppeling Ester voor de synthese van Disaccharide nucleosiden (Video) | JoVE Journal

Regioselectieve O- glycosylatie van nucleosiden via de tijdelijke 2', 3'-Diol bescherming door een koppeling Ester voor de synthese van Disaccharide nucleosiden

Meer video's verkennen