Blad Spray massaspectrometrie: Een snelle Ambient ionisatie techniek om te beoordelen direct metabolieten van plantaardige weefsels

Leaf spray MS is een snelle methode voor kwalitatieve en semi-kwantitatieve analyse van intacte plantenweefsels met een breed scala aan toepassingen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat plantenweefsels direct kunnen worden geanalyseerd zonder wezenlijke monstervoorbereiding. Hoewel deze methode goede inzichten biedt in mesembrine alkaloïden uit Sceletium, kan het ook worden gebruikt voor de analyse van verschillende andere plantensoorten en exogeen chemische stoffen zoals pesticiden.

Personen die nieuw zijn met deze methode kunnen het uitdagend vinden omdat het noodzakelijk is om het protocol voor elke plantensoort, weefseltype en stof van belang te optimaliseren. Gebruik een aangepaste nano spray bron voor leaf spray MS. Aangezien er geen vloeistofcomponenten nodig zijn voor leaf spray MS, wijzig de bron door de vloeistofchromatografie sonde uit de bron te verwijderen. De leaf spray massaspectrometrie draad die spanning op het plantenweefsel zal toepassen, heeft een pin die aan de draad is gesoldeerd aan de ene kant en een klem die aan de andere kant is gesoldeerd.

Als het systeem onlangs is gebruikt, laat het dan afkoelen voordat u een alternatieve bron in de veegkegel verwijdert. Bevestig vervolgens de nano spray leaf spray MS bron. Maak ten slotte een tune-bestand en een methodebestand zoals beschreven in het tekstprotocol.

Draag altijd handschoenen en gebruik geen plantenweefsel dat met blote handen is aangeraakt. Anders zullen contaminant ionen zoals polyethyleenglycol de spectra domineren. Breng de plantenweefsels voor de analyse naar dezelfde ruimte als het massaspectrometrie systeem om een snelle bemonstering mogelijk te maken.

Voor plantenweefsel dat geen natuurlijk puntige punt heeft, gebruik een scheermesje op een glazen plaat om een taps toelopend punt te snijden. Snijd Sceletium tortuosum bladeren 10 weken na ontkieming in dunne stroken, elk met een taps toelopend uiteinde om een punt te vormen. Gebruik pincetten om het plantenweefsel voorzichtig te selecteren aan het uiteinde dat zal worden vastgeklemd.

Houd het weefsel met pincetten vast, breng het voorzichtig over naar de klem. Pas de flexibele arm en de draad met de klem aan om het weefsel in lijn te brengen met de MS inlaat. Raadpleeg de tekst voor de optimale afstand van de ioninlaat voor elke specifieke massaspectrometer.

Als de eerste pogingen een lage signaalintensiteit produceren, kan het plantenweefsel dichter bij de ioninlaat worden gebracht. Laad het methodebestand. Geef het databestand een naam en stel de bestandsopslaglocatie in.

Schakel vervolgens het MS systeem in door op afspelen te klikken en klik op starten om te beginnen met het verzamelen van gegevens. Gebruik een pipet met een gellaadtip om een oplosmiddel toe te passen om de afstand tussen de hoge spanning en de handen van de gebruiker te maximaliseren ter bescherming. Verzamel gegevens zolang het signaal aanhoudt of totdat de adequate spectra zijn verzameld, meestal 30 tot 60 seconden.

Stop de dataverzameling en pauzeer het MS systeem. Verwijder na de acquisitie het weefsel en was de klem met 100% methanol in een pluisvrij doekje. Open het databestand en inspecteer visueel de basispiek massa chronogram.

Controleer of de signaalintensiteit ongeveer 10 miljoen tot 500 miljoen is. Maak een nieuw methodebestand met een inclusielijst van M over Z tot vier decimalen. Klik op globale lijsten en inclusie.

Onder eigenschappen van PRM, selecteer de fragmentatie-energie en andere tandem MS parameters. Om de tandem MS gegevens voor mesembrine alkaloïden te verkrijgen, fragmenteer de ionen bij 276.1583 M over Z, 290.1742 M over Z en 292.1897 M over Z bij een genormaliseerde botsingsenergie van 35. Laad vervolgens het tandem MS methodebestand en een genoemd databestand.

Schakel het MS systeem in en begin met het verzamelen van gegevens door een oplosmiddel toe te voegen indien nodig. Wanneer adequate spectra zijn verzameld, meestal na 30 tot 60 seconden, stop de acquisitie. Voer gegevensanalyse uit zoals beschreven in het tekstprotocol.

Representatieve resultaten van metabolisch profilering van Sceletium tortuosum door leaf spray MS en positieve ionisatie worden getoond met de inzet die 260 tot 295 M over Z weergeeft. In deze studie werden in totaal negen mesembrine alkaloïden gedetecteerd door leaf spray MS en puditive identificaties werden gemaakt. Het leaf spray MS totale iontelling massa chronogram vertegenwoordigt een succesvolle leaf spray MS experiment waarbij een stabiel signaal werd gehandhaafd gedurende de volledige duur van de acquisitie. Voor elke piek is het bovenste getal de tijd in minuten en de onderkant is de M over Z. Tandem massa spectra werden verzameld in positieve ionisatie gemaakt van een Sceletium tortuosum gesneden blad met leaf spray MS. Puditive identificaties van de alkaloïden werden gemaakt op basis van nauwkeurige massa en massafragmentatie voor mesembrine M en mesembrenone M isomeren, mesembrine en mesembrine M dihydro.

Na het bekijken van deze video, zou u een goed begrip moeten hebben van hoe leaf spray MS te gebruiken om plantmetabolieten te detecteren. Leaf spray MS is gebruikt om endogene verbindingen te detecteren evenals exogene verbindingen zoals pesticiden.