Name: Functionele evaluatie van olfactorische trajecten in levende Xenopus kikkervisjes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: Leer functionele evaluatie van olfactorische trajecten in levende Xenopus kikkervisjes. Deze methode maakt in vivo beeldvorming en gedragsanalyse mogelijk om neurale verwerking en synaptische functie te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gesteund door subsidies van El Ministerio de Economía y Competitividad (MINECO; SAF2015-63568-R) door het Europees Fonds voor regionale ontwikkeling (EFRO), gefinancierd door concurrentieonderzoek awards van de M. G. F. Fuortes Memorial Fellowship, de Stephen W. Kuffeler Fellowship Fonds, Laura en Arthur Colwin begiftigd zomer Fellowship onderzoeksfonds , de Fischbach Fellowship, en het grote fonds van de generatie van de mariene biologische laboratorium en de nationale Xenopus Resource RRID:SCR_013731 (Woods Hole, MA) waar een deel van dit werk werd uitgevoerd. Wij danken ook CERCA programma / Generalitat de Catalunya voor institutionele ondersteuning. A.L. is een fellow van de Serra Húnter.

<ol><li>Hellsten, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genome+of+the+Western+clawed+frog+Xenopus+tropicalis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The genome of the Western clawed frog Xenopus tropicalis.</a> Science. 328 (5978), 633-636 (2010).</li>
<li>Session, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+evolution+in+the+allotetraploid+frog+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genome evolution in the allotetraploid frog Xenopus laevis.</a> Nature. 538 (7625), 336-343 (2016).</li>
<li>Zhang, L. I., Tao, H. W., Holt, C. E., Harris, W. A., Poo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+window+for+cooperation+and+competition+among+developing+retinotectal+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A critical window for cooperation and competition among developing retinotectal synapses.</a> Nature. 395 (6697), 37-44 (1998).</li>
<li>Li, J., Erisir, A., Cline, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+time-lapse+imaging+and+serial+section+electron+microscopy+reveal+developmental+synaptic+rearrangements%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">In vivo time-lapse imaging and serial section electron microscopy reveal developmental synaptic rearrangements.</a> Neuron. 69 (2), 273-286 (2011).</li>
<li>Dietrich, H., Glasauer, S., Straka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+Organization+of+Vestibulo-Ocular+Responses+in+Abducens+Motoneurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Functional Organization of Vestibulo-Ocular Responses in Abducens Motoneurons.</a> Journal of Neuroscience. 37 (15), 4032-4045 (2017).</li>
<li>Buhl, E., Roberts, A., Soffe, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+a+trigeminal+sensory+nucleus+in+the+initiation+of+locomotion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The role of a trigeminal sensory nucleus in the initiation of locomotion.</a> Journal of Physiology. 590, Pt 10 2453-2469 (2012).</li>
<li>Junek, S., Kludt, E., Wolf, F., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+coding+with+patterns+of+response+latencies%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Olfactory coding with patterns of response latencies.</a> Neuron. 67 (5), 872-884 (2010).</li>
<li>Stout, R. P., Graziadei, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+the+olfactory+placode+on+the+development+of+the+brain+in+Xenopus+laevis+%28Daudin%29.+I.+Axonal+growth+and+connections+of+the+transplanted+olfactory+placode%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Influence of the olfactory placode on the development of the brain in Xenopus laevis (Daudin). I. Axonal growth and connections of the transplanted olfactory placode.</a> Neuroscience. 5 (12), 2175-2186 (1980).</li>
<li>Yoshino, J., Tochinai, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+regeneration+of+the+olfactory+bulb+requires+reconnection+to+the+olfactory+nerve+in+Xenopus+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Functional regeneration of the olfactory bulb requires reconnection to the olfactory nerve in Xenopus larvae.</a> Development, Growth & Differentiation. 48 (1), 15-24 (2006).</li>
<li>Terni, B., Pacciolla, P., Masanas, H., Gorostiza, P., Llobet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tight+temporal+coupling+between+synaptic+rewiring+of+olfactory+glomeruli+and+the+emergence+of+odor-guided+behavior+in+Xenopus+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Tight temporal coupling between synaptic rewiring of olfactory glomeruli and the emergence of odor-guided behavior in Xenopus tadpoles.</a> Journal of Comparative Neurology. 525 (17), 3769-3783 (2017).</li>
<li>Goda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+screens+for+mutations+affecting+development+of+Xenopus+tropicalis%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic screens for mutations affecting development of Xenopus tropicalis.</a> PLOS Genetics. 2 (6), 91(2006).</li>
<li>Nakayama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+efficient+CRISPR%2FCas9-mediated+targeted+mutagenesis+in+Xenopus+tropicalis%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Simple and efficient CRISPR/Cas9-mediated targeted mutagenesis in Xenopus tropicalis.</a> Genesis. 51 (12), 835-843 (2013).</li>
<li>Jafkins, A., Abu-Daya, A., Noble, A., Zimmerman, L. B., Guille, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Husbandry+of+Xenopus+tropicalis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Husbandry of Xenopus tropicalis.</a> Methods in Molecular Biology. 917, 17-31 (2012).</li>
<li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="https://www.journals.uchicago.edu/doi/10.1086/393914">Early Development of Xenopus laevis. A Laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2000).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="https://searchworks.stanford.edu/view/2945881">Normal table of Xenopus laevis (Daudin). A systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis</a>. , North-Holland Publishing Company. Amsterdam. (1956).</li>
<li>Xu, H., Dude, C. M., Baker, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine-grained+fate+maps+for+the+ophthalmic+and+maxillomandibular+trigeminal+placodes+in+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Fine-grained fate maps for the ophthalmic and maxillomandibular trigeminal placodes in the chick embryo.</a> Developmental Biology. 317 (1), 174-186 (2008).</li>
<li>Friedrich, R. W., Korsching, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combinatorial+and+chemotopic+odorant+coding+in+the+zebrafish+olfactory+bulb+visualized+by+optical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Combinatorial and chemotopic odorant coding in the zebrafish olfactory bulb visualized by optical imaging.</a> Neuron. 18 (5), 737-752 (1997).</li>
<li>Ishibashi, S., Cliffe, R., Amaya, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+bi-allelic+mutation+rates+using+TALENs+in+Xenopus+tropicalis%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+Open%22%5BJournal%5D)">Highly efficient bi-allelic mutation rates using TALENs in Xenopus tropicalis.</a> Biology Open. 1 (12), 1273-1276 (2012).</li>
<li>Meijering, E., Dzyubachyk, O., Smal, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+cell+and+particle+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Methods for cell and particle tracking.</a> Methods in Enzymology. 504, 183-200 (2012).</li>
<li>Nussbaum-Krammer, C. I., Neto, M. F., Brielmann, R. M., Pedersen, J. S., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+spreading+and+toxicity+of+prion-like+proteins+using+the+metazoan+model+organism+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journalof+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Investigating the spreading and toxicity of prion-like proteins using the metazoan model organism C. elegans.</a> Journalof Visualized Experiments. (95), e52321(2015).</li>
<li>Koide, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+neural+circuitry+for+attraction+to+amino+acids+revealed+by+transposon-mediated+gene+trap+approach+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Olfactory neural circuitry for attraction to amino acids revealed by transposon-mediated gene trap approach in zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (24), 9884-9889 (2009).</li>
<li>Love, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pTransgenesis%3A+a+cross-species%2C+modular+transgenesis+resource%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">pTransgenesis: a cross-species, modular transgenesis resource.</a> Development. 138 (24), 5451-5458 (2011).</li>
<li>Tandon, P., Conlon, F., Furlow, J. D., Horb, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+the+genetic+toolkit+in+Xenopus%3A+Approaches+and+opportunities+for+human+disease+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Expanding the genetic toolkit in Xenopus: Approaches and opportunities for human disease modeling.</a> Developmental Biology. 426 (2), 325-335 (2017).</li>
<li>Pratt, K. G., Khakhalin, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+human+neurodevelopmental+disorders+in+the+Xenopus+tadpole%3A+from+mechanisms+to+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Modeling human neurodevelopmental disorders in the Xenopus tadpole: from mechanisms to therapeutic targets.</a> Disease Models & Mechanisms. 6 (5), 1057-1065 (2013).</li>
<li>Truszkowski, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragile+X+mental+retardation+protein+knockdown+in+the+developing+Xenopus+tadpole+optic+tectum+results+in+enhanced+feedforward+inhibition+and+behavioral+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Development%22%5BJournal%5D)">Fragile X mental retardation protein knockdown in the developing Xenopus tadpole optic tectum results in enhanced feedforward inhibition and behavioral deficits.</a> Neural Development. 11 (1), 14(2016).</li>
<li>Hassenklöver, T., Manzini, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+wiring+logic+in+amphibians+challenges+the+basic+assumptions+of+the+unbranched+axon+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory wiring logic in amphibians challenges the basic assumptions of the unbranched axon concept.</a> Journal of Neuroscience. 33 (44), 17247-17252 (2013).</li>
<li>Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Li, Z., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+electroporation+for+gene+transfer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Single-cell electroporation for gene transfer in vivo.</a> Neuron. 29 (3), 583-591 (2001).</li>
<li>Sild, M., Van Horn, M. R., Schohl, A., Jia, D., Ruthazer, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+Activity-Dependent+Regulation+of+Radial+Glial+Filopodial+Motility+Is+Mediated+by+Glial+cGMP-Dependent+Protein+Kinase+1+and+Contributes+to+Synapse+Maturation+in+the+Developing+Visual+System%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neural Activity-Dependent Regulation of Radial Glial Filopodial Motility Is Mediated by Glial cGMP-Dependent Protein Kinase 1 and Contributes to Synapse Maturation in the Developing Visual System.</a> Journal of Neuroscience. 36 (19), 5279-5288 (2016).</li>
<li>McDiarmid, R., Altig, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcDiarmid%2C+R+%22Tadpoles%3A+The+biology+of+anuran+larvae%22">Tadpoles: The biology of anuran larvae</a>. , The University of Chicago Press. 149-169 (1999).</li>
<li>Heerema, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+molecular+analyses+of+olfaction-mediated+avoidance+responses+of+Rana+%28Lithobates%29+catesbeiana+tadpoles%3A+Sensitivity+to+thyroid+hormones%2C+estrogen%2C+and+treated+municipal+wastewater+effluent%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Behavioral and molecular analyses of olfaction-mediated avoidance responses of Rana (Lithobates) catesbeiana tadpoles: Sensitivity to thyroid hormones, estrogen, and treated municipal wastewater effluent.</a> Hormones and Behavior. 101, 85-93 (2018).</li>
<li>Gaudin, A., Gascuel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+atlas+describing+the+ontogenic+evolution+of+the+primary+olfactory+projections+in+the+olfactory+bulb+of+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">3D atlas describing the ontogenic evolution of the primary olfactory projections in the olfactory bulb of Xenopus laevis.</a> Journal of Comparative Neurology. 489 (4), 403-424 (2005).</li>
<li>Scheidweiler, U., Nezlin, L., Rabba, J., Müller, B., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slice+culture+of+the+olfactory+bulb+of+Xenopus+laevis+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Senses%22%5BJournal%5D)">Slice culture of the olfactory bulb of Xenopus laevis tadpoles.</a> Chemical Senses. 26 (4), 399-407 (2001).</li>
<li>Manzini, I., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classes+and+narrowing+selectivity+of+olfactory+receptor+neurons+of+Xenopus+laevis+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+Physiology%22%5BJournal%5D)">Classes and narrowing selectivity of olfactory receptor neurons of Xenopus laevis tadpoles.</a> Journal of General Physiology. 123 (2), 99-107 (2004).</li>
<li>Kludt, E., Okom, C., Brinkmann, A., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+temperature+with+odor+processing+in+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Integrating temperature with odor processing in the olfactory bulb.</a> Journal of Neuroscience. 35 (20), 7892-7902 (2015).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dit witboek beschrijft technieken die nuttig zijn voor het onderzoeken van de functionaliteit van olfactorische trajecten in levende Xenopus kikkervisjes. Het huidige protocol is vooral handig voor laboratoria die werken, of toegang hebben tot Xenopus; het is echter ook interessant voor deze onderzoekers bestuderen de cellulaire en moleculaire grondslagen van neuronale regeneratie en reparatie. Resultaten van Xenopus kunnen worden gecombineerd met gegevens die zijn verzameld in andere gewerveld...

Xenopus kikkervisjes vormen een uitstekende diermodel om te bestuderen van de normale functie van het zenuwstelsel. Transparantie, een volledig gesequenceerd genoom1,2, en de toegankelijkheid van chirurgische, elektrofysiologische en imaging technieken zijn unieke eigenschappen van Xenopus larven waarmee onderzoeken neuronale functies in vivo3 . Enkele van de meerdere experimentele mogelijkheden van deze diermodel worden geïllustreerd door de grondige studies uitgevoerd op tadpole sensorische en motorische systemen4,5,6. Een bijzonder geschikt neuronale circuit te bestuderen van vele aspecten van informatie verwerking op het niveau van synapsen is de Xenopus tadpole olfactorische systeem7. In de eerste plaats de synaptische verbinding is goed gedefinieerd: olfactorische receptor neuronen (ORNs) naar de bulbus olfactorius project en synaptische contacten leggen met dendrites van mitralisklep/getuft cellen binnen de glomeruli geur kaarten. Ten tweede, zijn ORNs worden voortdurend gegenereerd door neurogenese gedurende het hele leven te handhaven van de functionaliteit van olfactorische trajecten8. En ten derde omdat de olfactorische systeem een groot regeneratieve vermogen blijkt, Xenopus kikkervisjes kunnen hun bulbus olfactorius na ablatie9volledig te hervormen.
In deze paper beschrijven we benaderingen die beeldvorming van olfactorische glomeruli in levende kikkervisjes met gedrags experimenten combineren te bestuderen van de functionaliteit van olfactorische trajecten. De hier gedetailleerde methoden werden gebruikt om de studie van het functionele herstel van de glomerulaire connectiviteit in de bulbus olfactorius na bulbus zenuw transect10. Gegevens die zijn verkregen in Xenopus kikkervisjes representatief zijn voor gewervelden omdat olfactorische verwerking evolutionaire is bewaard.
De beschreven methoden zijn geïllustreerd met behulp van X. tropicalis , maar ze kunnen eenvoudig worden geïmplementeerd in X. laevis. Ondanks de grotere omvang van de volwassen X. laeviszijn beide soorten opvallend vergelijkbaar tijdens tadpole stadia. De belangrijkste verschillen bevinden zich op het genomisch niveau. X. laevis geeft arme genetische werkwillig, meestal bepaald door haar allotetraploid genoom en de lange generatietijd (ongeveer 1 jaar). Is daarentegen meer vatbaar voor genetische modificaties vanwege de kortere generatietijd (5 tot 8 maanden) en diploïde genoom X. tropicalis . De representatieve experimenten worden geïllustreerd voor wild-type dieren en drie verschillende transgene lijnen: Hb9:GFP (X. tropicalis), NBT:GFP (X. tropicalis) en tubb2:GFP (X. laevis).
De methoden die worden beschreven in de lopende werkzaamheden moeten naast de genetische vordert in het veld Xenopus worden beschouwd. De eenvoud en de eenvoudige implementatie van de technieken gepresenteerd maakt ze bijzonder nuttig voor de evaluatie van de reeds beschreven mutanten11, evenals Xenopus regels gegenereerd door CRISPR-Cas9 technologie12. Ook beschrijven we een chirurgische ingreep gewend transect bulbus zenuwen die kunnen worden uitgevoerd in een laboratorium dat die toegang hebben tot Xenopus kikkervisjes. De benaderingen gebruikt voor de evaluatie van de reacties van de presynaptische calcium en olfactorische geleide gedrag vereisen specifieke apparatuur, zij beschikbaar op een matige kosten. Methoden worden gepresenteerd in een eenvoudig formulier ter bevordering van het gebruik ervan in de onderzoeksgroepen en de grondslagen van meer complexe tests kon instellen door het implementeren van verbeteringen of door de associatie met andere technieken, dat wil zeggen, histologische of genetische benaderingen.

<table><tbody><tr><td>Zout voor aquariums (Instant Ocean Salt)</td><td>Tecniplast</td><td>XPSIO25R</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine (Ethyl 3-aminobenzoaat methaansulfonaat)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>Pincet #5 (tip 0,025 x 0,005 mm)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501985</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Schaar (tip 0,015 x 0,015)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501778</td><td></td></tr><tr><td>Whatman kwalitatief filterpapier</td><td>Fisher Scientific</td><td>WH3030917</td><td></td></tr><tr><td>X. laevis tubb2-GFP</td><td>National Xenopus Resource (NXR), RRID:SCR_013731</td><td>NXR_0.0035</td><td></td></tr><tr><td>X.tropicalis NBT-GFP</td><td>European Xenopus Resource Center (EXRC) RRID:SCR_007164</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CellTracker CM-DiI</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C-7001</td><td></td></tr><tr><td>Calcium Green dextran, Kaliumzout, 10.000 MW, Anionisch</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C-3713</td><td></td></tr><tr><td>Borosilicaat capillaire voor micro-injectie</td><td>Sutter Instrument</td><td>B100-75-10</td><td>O.D.=1,0 mm., I.D.=0,75 mm.</td></tr><tr><td>Puller</td><td>Sutter Instrument</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Micro-injector</td><td>Parker Instruments</td><td>Picospritzer III</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard-184</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>761028-5EA</td><td></td></tr><tr><td>Microfil micropipetten</td><td>World Precision Instruments</td><td>MF28G-5</td><td></td></tr><tr><td>Staande microscoop</td><td>Zeiss</td><td>AxioImager-A1</td><td></td></tr><tr><td>Master-8 stimulator</td><td>A.M.P.I.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CCD-camera</td><td>Hamamatsu</td><td>Image EM</td><td></td></tr><tr><td>Solenoïde kleppen</td><td>Warner Instruments</td><td>VC-6 Six Channel systeem</td><td></td></tr><tr><td>Dow Corning High Vacuum Grease</td><td>VWR Scientific</td><td>636082B</td><td></td></tr><tr><td>Tubocurarine hydrochloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T2379</td><td></td></tr><tr><td>CCD-camera</td><td>Zeiss</td><td>MRC-5 Camera</td><td>Gestuurd door Zen software</td></tr><tr><td>cameralens</td><td>Thorlabs</td><td>MVL8ML3</td><td>Er zijn meerdere mogelijkheden die moeten worden aangepast aan het gebruikte cameramodel</td></tr><tr><td>Epoxy hars</td><td>RS Components</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Manifold</td><td>Warner Instruments</td><td>MP-6 perfusie manifold</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulator voor lokale levering van oplossingen</td><td>Narishige</td><td>MN-153</td><td></td></tr><tr><td>Mini magnetische klemmen</td><td>Warner Instruments</td><td>MAG-7, MAG-6</td><td></td></tr><tr><td>Polyethyleen buis</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0755</td><td>O.D.=1,57 mm., I.D.=1,14 mm.</td></tr></tbody></table>

functionele evaluatie van olfactorische trajecten in levende xenopus kikkervisjes

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus kikkervisjes bieden een uniek platform voor het onderzoek naar de functie van het zenuwstelsel. Zij bieden meerdere experimentele voordelen, zoals toegankelijkheid van talrijke imaging benaderingen, elektrofysiologische technieken en gedrags testen. Het Xenopus tadpole olfactorische systeem is bijzonder goed geschikt voor onderzoeken van de functie van synapsen gevestigd tijdens normale ontwikkeling of hervormd na blessure. Hier beschrijven we methodologieën voor evaluatie van de verwerking van olfactorische informatie in levende Xenopus larven. We schetsen een combinatie van in vivo metingen van exocytose calcium reacties in de glomeruli van de bulbus olfactorius met olfactorische geleide gedrag testen. Methoden kunnen worden gecombineerd met het transect van bulbus zenuwen te bestuderen de bedrading van synaptic connectiviteit. Experimenten zijn gepresenteerd met behulp van zowel wild-type en genetisch gemodificeerde dieren uiten GFP verslaggevers in cellen van het centrale zenuwstelsel. Toepassing van de methoden beschreven om genetisch gemodificeerde kikkervisjes kan nuttig zijn voor het ontrafelen van de moleculaire grondslagen die gewervelde gedrag definiëren.

In deze paper presenteren we een combinatie van twee complementaire benaderingen voor het uitvoeren van in-vivo -onderzoek van de functionaliteit van de Xenopus tadpole olfactorische systeem: ik) een methode voor imaging presynaptische Ca2 + veranderingen in de glomeruli van leven kikkervisjes met behulp van een fluorescerende calcium indicator, en ii) begeleide een geur gedrags test die kan worden gebruikt voor het onderzoeken van de reactie op specifieke wat...

Xenopus kikkervisjes bieden een uniek platform voor het onderzoek naar de functie van het zenuwstelsel in vivo. We beschrijven methodologieën voor evaluatie van de verwerking van olfactorische informatie in levende Xenopus larven bij fokken normaal of na blessure.

Functionele evaluatie van olfactorische trajecten in levende Xenopus kikkervisjes

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as ...

Deze methode kan nuttig zijn om belangrijke vragen te beantwoorden op het gebied van neurobiologie, zoals hoe presynaptische terminals in vivo functioneren. Het belangrijkste voordeel van deze reeks technieken is dat we gratis benaderingen tonen om de functie van reukpaden te gebruiken met Xenopus kikkervisjes als diermodel. Het demonstreren van deze procedure zal ik zijn, Beatrice Terni, en Paolo Pacciolla.Begin met de transsectieprocedure door twee stukken cellulose kwalitatief filterpapier in 0,02% MS2 22-verdovingsoplossing te bevochtigen en onder het ontleden toepassingsgebied te plaatsen. Kies dan een kikkervisje uit de tank en dompel het onder in een schotel van verdovingsoplossing. De kikkervis moet stoppen met zwemmen binnen twee tot vier minuten.Controleer op een goede verdovendering door de afwezigheid van een reactie op mechanische stimuli toegepast op het staartniveau met behulp van pincet. Plaats de verdoofde kikkervis op het filterpapier onder het toepassingsgebied. Plaats het dier met zijn rugzijde naar boven gericht, zodat hersenstructuren kunnen worden gevisualiseerd.Voor gedragsmatige experimenten, gebruik veni schaar om beide zenuwen transect om alle geurige inf

functional-evaluation-of-olfactory-pathways-in-living-xenopus-tadpoles

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

We tonen variaties van de extracellulaire multi-unit opname techniek om geur-reacties van de consument te karakteriseren in de eerste drie fasen van de ongewervelde olfactorische pad. Deze technieken kunnen gemakkelijk worden aangepast aan ensemble activiteit onderzocht andere neurale systemen.

Multi-unit Opname Methoden om neurale activiteit karakteriseren in de Locust (<em&gt; Schistocerca Americana</em&gt;) Olfactorische Circuits

Xenopus laevis kikkervisjes liever zwemmen op de witte kant van een zwart / witte tank. Dit gedrag wordt gestuurd door hun visie. Op basis van dit probleem presenteren we een eenvoudige test om de visuele functie kikkervisjes testen.

Een eenvoudige Behavioral Assay for Testing visuele functie in<em&gt; Xenopus laevis</em

De muis accessoire reukbol (AOB) is moeilijk te bestuderen in de context van zintuiglijke codering. Hier tonen we een dissectie dat een ex vivo preparaat waarin AOB neuronen blijven functioneel verbonden met hun perifere ingangen, het vergemakkelijken van onderzoek naar de informatieverwerking van de muis feromonen en kairomonen produceert.

Ex Vivo Bereidingen van de Intact Vomeronasal en accessoires bulbus olfactorius

We beschrijven een protocol voor in vivo markering van olfactorische sensorische neuronen door middel van elektroporatie en vervolgens confocale laser-scanning of multifotonmicroscopie om de neuronale morfologie en de ontwikkeling ervan in de loop van de tijd te visualiseren.

Het olfactorisch systeem als model om axonale groeipatronen en morfologie Bestudeer In Vivo

Het analyseren van de fysiologische eigenschappen van olfactorische sensorische neuronen kent nog steeds technische beperkingen. Hier registreren we ze door middel van perforated patch-clamp in een intacte voorbereiding van het olfactorische epitheel in gene-targeted muizen. Deze techniek maakt de karakterisering mogelijk van membraaneigenschappen en reacties op specifieke liganden van neuronen die gedefinieerde olfactorische receptoren tot expressie brengen.

Geperforeerde Patch-clamp-opname van de muis olfactorische sensorische neuronen in Intact neuroepithelium: functionele analyse van neuronen uiten van een geïdentificeerd Odorant Receptor

Hier beschrijven we een protocol voor het meten en analyseren van temperatuurresponsen in de reukbol van Xenopus laevis. Reukreceptorneuronen en mitralvormige cellen worden differentieel gekleurd, waarna calciumveranderingen worden geregistreerd, wat een gevoeligheid aangeeft van sommige neurale netwerken in de bol voor temperatuurdalingen die in de neus worden geïnduceerd.

Opname-temperatuur-geïnduceerde neuronale activiteit door middel van monitoring Calcium Veranderingen in de Olfactorische Bulb van<em&gt; Xenopus laevis</em

Dit protocol analyseert navigatie gedrag van Drosophila larve in reactie op de stimulatie van de gelijktijdige optogenetic van haar olfactorische neuronen. Licht van 630 nm golflengte wordt gebruikt voor het activeren van individuele olfactorische neuronen uitdrukken van een rood-verschoven kanaal rodopsine. Larvale verkeer gelijktijdig wordt bijgehouden, digitaal opgenomen en geanalyseerd met behulp van aangepaste-geschreven software.

Bijhouden van Drosophila larvale gedrag in reactie op de stimulatie van de Optogenetic van olfactorische neuronen

Dit protocol is bedoeld om te laten zien hoe een DNA/DOTAP mengsel microinjecteert in de eyebuds van een dag oude Xenopus laevis embryo's, en hoe te beeld en reconstrueren individuele groene fluorescerende eiwitten (GFP) uitdrukken optische axonale Arbors in tectal midbrains van intact, levende Xenopus tadpoles.

Micro injectie van DNA in de Oogtoppen van Xenopus laevis embryo's en beeldvorming van GFP dat optische axonale Arbors uitdrukt in intact, levend Xenopus tadpoles

Dit protocol beschrijft de dissectieprocedure, kweekconditie en live beeldvorming van een antenne-hersenexplantatiesysteem voor de studie van de olfactorische circuitassemblage.

Een explantatiesysteem voor time-lapse beeldvormingsstudies van olfactorische circuitassemblage in Drosophila

We beschrijven hier methoden voor het induceren en analyseren van olfactorische ervaring-afhankelijke remodellering van synaptische glomeruli van de antennekwab in de juveniele hersenen van Drosophila .

Ervaringsafhankelijke hermodellering van juveniele reukbare sensorische neuronen Synaptische connectiviteit van de hersenen in een kritieke periode in het vroege leven

Leer functionele evaluatie van olfactorische trajecten in levende Xenopus kikkervisjes. Deze methode maakt in vivo beeldvorming en gedragsanalyse mogelijk om neurale verwerking en synaptische functie te bestuderen.

Functionele evaluatie van olfactorische trajecten in levende Xenopus kikkervisjes

Meer video's verkennen