Name: Veno-veneuze Extracorporale membraan oxygenatie in een muis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: Leer veno-veneuze extracorporale membraanoxygenatie in een niet-geïntubeerde, spontaan ademende muis. Deze methode maakt onderzoek naar acute en chronische longziekten mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit project werd ondersteund door KFO 311 subsidie van de Deutsche Forschungsgemeinschaft.

Experimenten werden uitgevoerd op mannelijke C57BL/6 muizen, leeftijd van 12 weken. Deze studie werd uitgevoerd in overeenstemming met de richtsnoeren van de Duitse dier wet onder Protocol TSA 16/2250.
1. materialen voorbereiding
Opmerking: Alle stappen zijn uitgevoerd in schone, niet-steriele omstandigheden. Steriele condities zou nodig zijn als het dier is te postoperatief worden overleefd.
<ol><li>3 fenestrations in een 2-Fr polyurethaan buis met behulp van een chirurgisch mes onder een microscoop met 16 X vergroting introduceren. Opmerking: Alle fenestrations moeten zich bevinden in het distale derde deel van de canule om optimale bloed drainage.</li>
	<li>Bereiden de instructieoplossing (Materialen tabel). Omvatten 30 IU/mL heparine en 2,5% v/v van een 8,4% oplossing van NaHCO3. Deze oplossing bij 4 ° C koelen totdat het klaar is voor gebruik. Het circuit met 500 uL van instructieoplossing Prime.</li>
	<li>Schakel van de canule uitstroom in de instructieoplossing en vul de ECMO machine door over te schakelen op de peristaltische pomp. Blijven circuleren de instructieoplossing door de machine voor de volgende 30 min op een debiet van 1 mL/min.</li>
	<li>0.5 L/min voor 100% zuurstof geven de oxygenator.</li>
</ol>2. anesthesie
<ol><li>Plaats het dier in een inductie kamer gevuld met een mengsel van 2,5% v/v Isofluraan/zuurstof. Bieden 0.5 L/min voor 100% zuurstof naar de verdamper. Voordat chirurgie, moet u controleren dat volledige verdoving wordt bereikt door het testen van de pedaal terugtrekking en pijn reflexen. Toepassing eye gel om drogen schade te voorkomen.</li>
	<li>Gebruik een opwarming pad te handhaven van de lichaamstemperatuur bij 37 ° C.</li>
	<li>Inademing masker anesthesie met behulp van een vaporizer Isofluraan uitvoeren en 5 mg/kg carprofen subcutaan te injecteren.</li>
	<li>Regelmatig observeren van spontane ademhaling en de concentratie van Isofluraan zodanig aanpassen dat het is 1,3 tot 2,5%.</li>
</ol>3. operatie
<ol><li>Bloot de linker halsslagader met behulp van een laterale huid incisie van 4 mm met behulp van fijn schaar aan de linkerkant van de nek. Gebruik samen met scherpe en botte voorbereiding met behulp van micro-pincet en katoenen wissers, bipolaire stolling van de kleine vaartuigen.</li>
	<li>Zodra de linker halsslagader is blootgesteld, afbinden het distale deel met behulp van een 8-0 zijde Sutuur (geologie) met behulp van micro-pincet.</li>
	<li>Plaats een slip knoop aan het proximale einde van de ader. Incise de voorste wand van de ader met behulp van de micro-schaar.</li>
	<li>Om te bereiken van volledige heparinization, door 2,5 IU/g heparine te injecteren in de halsslagader via een 26 G-braunula.</li>
	<li>Verhogen de hoofd kant van de dierlijke pad door 30° tot het vermijden van overmatig bloedverlies uit de ader tijdens het inbrengen van de canule.</li>
	<li>Invoegen van een 2-Fr polyurethaan (PU) canule in het proximale deel van de halsslagader, lichtjes draaien terwijl het duwen van het op een diepte van 4 cm; terwijl doen, zal de iliacale bifurcatie voor vena cava inferior (IVC) worden bereikt.</li>
	<li>Beveilig de canule met 8-0 zijde knopen met behulp van microforceps.</li>
	<li>Bloot de juiste halsslagader met behulp van de stappen die worden beschreven in 3.1, 3.2 en 3.3.</li>
	<li>Cannulate de juiste halsslagader met een 1-Fr PU canule en verplaats het zachtjes 5 mm in de richting van juiste atrium.</li>
	<li>Herhaal stap 3.7.</li>
	<li>Catheterize de linker femorale slagader met een ander 1-Fr PU canule en gebruiken voor invasieve druk toezicht, alsmede bloedmonsters voor gas bloedwaarden (BGA).</li>
	<li>Elektrocardiogram (ECG) naalden verbonden met een apparaat voor overname subcutaan in beide voorpoten en in de linker thoracale muur invoegen</li>
	<li>Een rectale thermometer aangesloten op een apparaat van de overname gegevens invoegen</li>
</ol>4. Veno-veneuze Extracorporale membraan oxygenatie en bloed Gas-analyse
Opmerking: Voor een schematische voorstelling van het volledige ECMO circuit, Zie Figuur 1.
<ol><li>Initiëren ECMO op het dier door te draaien op de pomp met een initiële debiet van 0,1 mL/min. aanpassen het debiet van de pomp binnen de volgende 2 min 3-5 mL/min.</li>
	<li>In het geval van de zuigkracht van de lucht in de uitstroom canule via de site cannulation, vermindering van de stroom en 0,1 mL van de instructieoplossing toevoegen aan het circuit via een lucht-overlapping reservoir.</li>
	<li>Blijven volgen in real-time modus alle vitale parameters via de data acquisitie apparaat onder stabiele stroom.</li>
	<li>Voortdurend terugvoer van de veneuze afvoer observeren en controleren van het niveau van het bloed in het lucht-trapper reservoir.</li>
	<li>Verzamelen van alle bloed lekt uit wonden in een 1 cc spuit met het puntje van een 24 G branula andreturn het aan de ECMO circuit via het lucht-overlapping reservoir.</li>
	<li>Voor BGA, gebruikt u een bloed bemonstering cartridge voor het verzamelen van ongeveer 75 µL van arteriële bloed op de volgende tijdstippen en vanaf de volgende locaties:<ol>
<li>10 minuten na de inleiding van ECMO, verzamelen bloed vanuit het IVC via een extra buis gebouwd vóór de oxygenator, via vergelijkbare extra buis na oxygenator (controle), en direct vanaf de femorale slagader.</li>
		<li>30 min na de inleiding van ECMO, verzamelen bloed uit de femorale slagader.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Geven een extra 0,1 mL van de instructieoplossing te compenseren intravasal vloeibare elke 45 min via de lucht-trapper of de femorale slagader katheter of door te zuigen de luchtbellen via het bloed zuig canule.</li>
	<li>Voor BGA, gebruikt u een bloed bemonstering cartridge voor het verzamelen van ongeveer 75 µL van arteriële bloed:<ol>
<li>1 h na de inleiding van ECMO van de femorale slagader.</li>
		<li>2 h na de inleiding van ECMO, verzamelen bloed vanuit het IVC via een extra buis gebouwd vóór de oxygenator, via vergelijkbare extra buis na oxygenator (controle), en direct vanaf de femorale slagader.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Na 2 uur, verminderen het debiet van de pomp geleidelijk (in de loop van 5 min), daarmee stoppen ECMO.</li>
	<li>Blijven registreren van vitale parameters voor een ander 10 min.</li>
	<li>Afwerking van het experiment door de exsanguinating van het dier en het oogsten van het bloed en de organen.</li>
</ol>

<ol><li>Hill, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+Extracorporeal+Oxygenation+for+Acute+Post-Traumatic+Respiratory+Failure+%28Shock-Lung+Syndrome%29%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Prolonged Extracorporeal Oxygenation for Acute Post-Traumatic Respiratory Failure (Shock-Lung Syndrome).</a> New England Journal of Medicine. 286 (12), 629-634 (1972).</li>
<li>Noah, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Referral+to+an+Extracorporeal+Membrane+Oxygenation+Center+and+Mortality+Among+Patients+With+Severe+2009+Influenza+A%28H1N1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Referral to an Extracorporeal Membrane Oxygenation Center and Mortality Among Patients With Severe 2009 Influenza A(H1N1).</a> Journal of the American Medical Association. 306 (15), 1659(2011).</li>
<li>Maslach-Hubbard, A., Bratton, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracorporeal+membrane+oxygenation+for+pediatric+respiratory+failure%3A+History%2C+development+and+current+status%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Critical.+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Extracorporeal membrane oxygenation for pediatric respiratory failure: History, development and current status.</a> World Journal of Critical. Care Medicine. 2 (4), 29-39 (2013).</li>
<li>Langer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22Awake%22+extracorporeal+membrane+oxygenation+%28ECMO%29%3A+pathophysiology%2C+technical+considerations%2C+and+clinical+pioneering%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">"Awake" extracorporeal membrane oxygenation (ECMO): pathophysiology, technical considerations, and clinical pioneering.</a> Critical Care. 20 (1), 150(2016).</li>
<li>Esper, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracorporeal+Membrane+Oxygenation%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Anesthesia%22%5BJournal%5D)">Extracorporeal Membrane Oxygenation.</a> Advances in Anesthesia. 35 (1), 119-143 (2017).</li>
<li>Millar, J. E., Fanning, J. P., McDonald, C. I., McAuley, D. F., Fraser, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammatory+response+to+extracorporeal+membrane+oxygenation+%28ECMO%29%3A+a+review+of+the+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">The inflammatory response to extracorporeal membrane oxygenation (ECMO): a review of the pathophysiology.</a> Critical Care. 20 (1), 387(2016).</li>
<li>Lubnow, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+complications+during+veno-venous+extracorporeal+membrane+oxygenation+and+their+relevance+predicting+a+system-exchange--retrospective+analysis+of+265+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+One%22%5BJournal%5D)">Technical complications during veno-venous extracorporeal membrane oxygenation and their relevance predicting a system-exchange--retrospective analysis of 265 cases.</a> Public Library of Science One. 9 (12), e112316(2014).</li>
<li>Passmore, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+lung+injury+in+an+ovine+model+of+extracorporeal+membrane+oxygenation+support%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Inflammation and lung injury in an ovine model of extracorporeal membrane oxygenation support.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 311 (6), L1202-L1212 (2016).</li>
<li>Vaquer, S., de Haro, C., Peruga, P., Oliva, J. C., Artigas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review+and+meta-analysis+of+complications+and+mortality+of+veno-venous+extracorporeal+membrane+oxygenation+for+refractory+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Intensive+Care%22%5BJournal%5D)">Systematic review and meta-analysis of complications and mortality of veno-venous extracorporeal membrane oxygenation for refractory acute respiratory distress syndrome.</a> Annals of Intensive Care. 7 (1), 51(2017).</li>
<li>Houser, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Heart+Failure+A+Scientific+Statement+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Heart Failure A Scientific Statement From the American Heart Association.</a> Circulation Research. 111 (1), 131-150 (2012).</li>
<li>Russell, J. C., Proctor, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+cardiovascular+disease%3A+tools+for+the+study+of+the+roles+of+metabolic+syndrome%2C+dyslipidemia%2C+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Small animal models of cardiovascular disease: tools for the study of the roles of metabolic syndrome, dyslipidemia, and atherosclerosis.</a> Cardiovascular Pathology. 15 (6), 318-330 (2006).</li>
<li>Madrahimov, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+mouse+model+of+cardiopulmonary+bypass%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cardio-thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Novel mouse model of cardiopulmonary bypass.</a> European Journal of Cardio-thoracic Surgery. 53 (1), 186-193 (2017).</li>
<li>Madrahimov, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiopulmonary+Bypass+in+a+Mouse+Model%3A+A+Novel+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach.</a> J. Journal of Visualized Experiments. (127), (2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

We beschreven eerder, een succesvol model van het CPB in een muis12,13. Om een dergelijk model voor acute of einde-fase longaandoeningen ontwikkelden we een easy-to-use veno-veneuze ECMO circuit voor muizen. Verschillende aan het CPB model, veno-veneuze ECMO vereist geen gecompliceerde chirurgische ingrepen zoals sternotomy en klemmen van de aorta, waardoor het risico van de wond bloeden in een volledig heparinized dier. Om te voorkomen dat de embolisatie kan lei...

Extracorporale membraan oxygenatie (ECMO) is een tijdelijke leven support systeem dat functies van de longen en het hart overneemt dat voldoende gaswisseling en perfusie. Hill et al.1 beschreef het eerste gebruik van ECMO bij patiënten in 1972; echter, het alleen werd wijd gebruikt na de succesvolle toepassing tijdens de H1N1 grieppandemie in 20092. Vandaag, is ECMO routinematig gebruikt als een levensreddende procedure in end-stage hart en Long ziekten3. Veno-veneuze ECMO is steeds werkzaam als alternatief voor invasieve beademing in wakker, niet-intubated, spontaan ademhaling van patiënten met vuurvaste respiratoir falen4.
Ondanks de wijdverspreide goedkeuring, diverse complicaties gemeld voor ECMO5,6,7. Complicaties die kunnen worden ervaren door patiënten op ECMO zijn bloedingen, trombose, sepsis, trombocytopenie, apparaat-gerelateerde storingen en lucht longembolie. Bovendien is een systemische inflammatoire respons-syndroom (heren), wat resulteert in meerdere orgel schade goed beschreven, zowel klinisch als in experimentele studies8,9. Neurologische complicaties zoals hersenen infarct worden ook vaak gerapporteerd bij patiënten die langdurig ECMO therapie ondergaan. Om te verwarren zaken, is het vaak moeilijk om te onderscheiden of complicaties worden veroorzaakt door ECMO zelf voortvloeien uit de onderliggende aandoeningen bij acute en einde-fase ziekten.
Als u wilt specifiek bestudeert de effecten van ECMO op een gezonde organisme, moet een betrouwbare experimentele diermodel komen. Er zijn weinig rapporten over de prestaties van ECMO op kleine dieren en zijn al beperkt is tot ratten. Tot op heden is geen muismodel van ECMO beschreven in de literatuur. Als gevolg van de beschikbaarheid van een groot aantal genetisch gemodificeerde muis stammen zou oprichting van een ECMO muismodel verder onderzoek in de moleculaire mechanismen die betrokken zijn bij ECMO-gerelateerde complicaties10,11.
Gebaseerd op onze eerder beschreven lymfkliertest model van cardiopulmonale bypass (CPB)12, hebben we een stabiele methode van veno-veneuze ECMO in niet-intubated, spontaan ademhaling muizen. Het ECMO circuit (Figuur 1), met uitstroom en instroom cannulas, een peristaltische pomp oxygenator en reservoir voor lucht-overlapping, is vergelijkbaar met ons eerder beschreven model van lymfkliertest CPB12 met uitzondering van het hebben van een kleinere priming volume (0,5 mL). Dit protocol toont de gedetailleerde technieken, fysiologische controle en gas bloedwaarden die betrokken zijn bij een succesvolle ECMO procedure.

<table><tbody><tr><td>Sterofundin</td><td>B.Braun Petzold GmbH</td><td>PZN:8609189</td><td>in 1:1 met Tetraspan</td></tr><tr><td>Tetraspan 6% Solution</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>PZN: 05565416</td><td>in 1:1 met Sterofundin</td></tr><tr><td>Heparin Natrium 25.000</td><td>Ratiopharm GmbH</td><td>PZN: 3029843</td><td>2,5 IE per ml van de priming</td></tr><tr><td>NaHCO3 8,4% Solution</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>PZN: 1579775</td><td>3% in priming oplossing</td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis Inc., USA</td><td>PZN:00289615</td><td>5mg/kg/LL</td></tr><tr><td>1 Fr PU Catheter</td><td>Instechlabs INC., USA</td><td>C10PU-MCA1301</td><td>carotisslagader</td></tr><tr><td>2 Fr PU Catheter</td><td>Instechlabs INC., USA</td><td>C20PU-MJV1302</td><td>halsader</td></tr><tr><td>8-0 Silk suture braided</td><td>Ashaway Line &amp; Twine Co., USA</td><td>75290</td><td>ligatuur</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Critical Care GmbH</td><td>PZN:9714675</td><td>narcose</td></tr><tr><td>Spring Scissors - 6mm Blades</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>15020-15</td><td>instrumenten</td></tr><tr><td>Spring Scissors - 2mm Blades</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>15000-03</td><td>instrumenten</td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito Hemostat</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>13009-12</td><td>instrumenten</td></tr><tr><td>Dumont #55 Forceps</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>11295-51</td><td>instrumenten</td></tr><tr><td>Castroviejo Micro Needle Holder - 9cm</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>12060-02</td><td>instrumenten</td></tr><tr><td>Micro Serrefines</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>18555-01</td><td>instrumenten</td></tr><tr><td>Bulldog Serrefine</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>18050-28</td><td>instrumenten</td></tr><tr><td>Isoflurane Vaporizer Drager 19.1</td><td>Dr&auml;gerwerk AG &amp; Co. KGaA</td><td></td><td>anesthesie 1,3 -2,5%</td></tr><tr><td>Multichannel Data Aquisition Device met ISOHEART Software</td><td>Hugo Sachs Elektronik GmbH, Germany</td><td></td><td>invasieve druk, ECG, t &deg;C</td></tr><tr><td>i-STAT draagbaar apparaat</td><td>Abbott Laboratories, Lake Bluff, Illinois, USA</td><td></td><td>bloedgasanalyse</td></tr><tr><td>i-STAT CG4+ en CG8+ cartridges</td><td>Abbott Laboratories, Lake Bluff, Illinois, USA</td><td></td><td>bloedgasanalyse</td></tr><tr><td>C57Bl/6 muizen, mannelijk, 30 g, 14 weken oud</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td>1 week vooraf ondergebracht</td></tr></tbody></table>

veno-veneuze extracorporale membraan oxygenatie in een muis

Veno-Venous Extracorporeal Membrane Oxygenation in a Mouse

Het gebruik van extracorporele membraan oxygenatie (ECMO) sterk toegenomen in de afgelopen jaren. ECMO uitgegroeid tot een betrouwbare en effectieve therapie voor acute en einde-fase longziekten. Met de toename van het klinische vraag en langdurig gebruik van ECMO zijn procedurele optimalisatie en preventie van multi orgel schade van cruciaal belang. Het doel van dit protocol is een gedetailleerde techniek van veno-veneuze ECMO presenteren in een niet-intubated, spontaan ademhaling muis. Dit protocol toont het technisch ontwerp van de ECMO en chirurgische stappen. Dit lymfkliertest ECMO model vergemakkelijkt de studie van pathofysiologie gerelateerde aan ECMO (b.v., ontsteking, bloeding en trombo-embolische gebeurtenissen). Wegens de overvloed van genetisch gemodificeerde muizen, kunnen ook de moleculaire mechanismen die betrokken zijn bij ECMO-gerelateerde complicaties worden ontleed.

Dit protocol beschrijft de methode voor veno-veneuze ECMO in een muis. Dit model is betrouwbaar en reproduceerbaar zijn, en in vergelijking met ons eerder beschreven model van het CPB met ademhalings- en bloedsomloop arrestatie12,13, is het minder technisch veeleisende vast te stellen.
ECMO stroming in het veneuze systeem werd gehandhaafd tussen de 1.5 en 5 mL/min. De ge...

Hier presenteren we een protocol met een beschrijving van de techniek van veno-veneuze Extracorporale membraan oxygenatie (ECMO) in een niet-intubated, spontaan ademhaling muis. Dit lymfkliertest model van ECMO kan effectief worden geïmplementeerd in experimentele studies van acute en einde-fase longziekten.

Veno-veneuze Extracorporale membraan oxygenatie in een muis

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van longonderzoek, zoals die met betrekking tot de therapie van acute en chronische longziekte in het eindstadium. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het het starten van moleculaire en pathologische mechanismen van multi-orgaanschade tijdens langdurige extracorporale membraan oxygenatie als een levensreddende procedure vergemakkelijkt. Gebruik onder schone, niet-steriele omstandigheden een chirurgisch mes en een ontledenmicroscoop om drie fenestraties in het distale derde van een twee Franse polyurethaankatheter onder 16x vergroting te introduceren.Plaats vervolgens de uitstroomkanule in de priming-oplossing, schakel de peristaltische pomp in om de extracorporale membraan oxygenatie, of ECMO-machine, te vullen voor priming van het circuit met een stroomsnelheid van één millimeter per minuut. Voeg na 30 minuten 0,5 liter per minuut 100% zuurstof toe aan de oxygenator en bevestig het gebrek aan respons op teensnuifje in een verdoofde volwassen muis. Na het aanbrengen van zalf op de ogen van het dier, maak een vier millimeter laterale huid incisie aan de linkerkant van de nek om de halsader te visualiseren, en gebruik micro-tangen en wattenstaafjes om het vat verder bloot te stellen.Een 8-0 gebruiken zijde hechting om het distale uiteinde van de blootgestelde ader te kruisen en plaats een slipknoop aan het proximale uiteinde. Snij de voorste wand van de ader met microscissors in en injecteer 2,5 internationale eenheden per gram heparine in de halsader via een 26-gauge branula, waardoor het hoofdeinde van het chirurgische pad met 30 graden wordt verhoogd om overmatig bloedverlies tijdens het inbrengen te voorkomen. Steek voorzichtig de fenestrated twee Franse polyurethaan canule in het proximale uiteinde van de halsader, draaien de canule iets, terwijl het duwen van de canule tot een vier centimeter diepte aan de illiac bifurcatie van de inferieure vena cava te bereiken.Het is belangrijk om de canule heel voorzichtig te duwen, maar continu zonder het gebruik van extra kracht. Als er weerstand wordt aangetroffen, trekt u de canule terug en voegt u deze opnieuw in. Zet de canule vast met 8-0 zijde knopen, en bloot de rechter halsader zoals net aangetoond.Cannulate de rechter halsader met een Franse polyurethaan canule, voorzichtig bewegen van de canule vijf millimeter in de richting van het rechter atrium, en zet de canule met 8-0 zijden knopen. Katheterize de linker dijbeenslagader met een andere Franse polyurethaan canule voor invasieve druk monitoring en bloedgas analyse, en steek elektrocardiogram naalden aangesloten op een data-acquisitie apparaat onderhuids in zowel voorpoten, en in de linker thoracale muur. Plaats vervolgens een rectale thermometer die is aangesloten op een apparaat voor het verkrijgen van gegevens.Om veno-veneuze extracorporale membraan oxygenatie te starten, zet de pomp aan op een eerste stroomsnelheid van 0,1 milliliter per minuut. Pas na twee minuten de stroomsnelheid aan op drie tot vijf milliliter per minuut. Controleer onder stabiele stroom de vitale parameters via het data-acquisitieapparaat in de real-time modus, controleer continu de terugstroom van de veneuze drainage en controleer het bloedniveau in het reservoir van luchttrappers.Gebruik een een milliliter spuit uitgerust met een 24-gauge branula om eventuele bloedlekkage te verzamelen, en het bloed terug te keren naar de ECMO circuit via de lucht vangen reservoir. Voor bloedgasanalyse, 10 minuten na ecmo-initiatie, gebruik een bloedafnamepatroon om ongeveer 75 microliter arteriële bloed te verzamelen van de inferieure vena cava vóór de oxygenator, direct na de oxygenator, en uit de dijbeenslagader. 30 en 60 minuten na ecmo-initiatie, verzamel alleen bloed uit de dijbeenslagader.45 en 90 minuten na de initiatie, 0,1 milliliter priming oplossing toe te dienen om intravasale vloeistof verlies via de luchttrap te compenseren. Twee uur na de inwijding, het verzamelen van bloed uit de oxygenator, inferieure vena cava, en dijbeen slagader. Na de laatste bloedafname, verminder de stroomsnelheid op de pomp in de loop van vijf minuten, waardoor de ECMO wordt gestopt, terwijl u de vitale parameters nog 10 minuten blijft registreren.In een typisch experiment worden de fysiologische parameters van het dier elke 10 minuten geregistreerd. In dit representatieve experiment toonden de hematologische parameters een relevante hemodilutie tijdens ECMO aan, hoewel er geen bloedtransfusie nodig was om matige bloedarmoede te compenseren. De zuurstofparameters vertoonden een goede oxygenatorprestatie bij een zuurstofluchtmengsel met een fractie van geïnspireerde zuurstof van 1,0.Verder omvatten de metabolische veranderingen tijdens ECMO ademhalingsalkalose aan het begin en aan het einde van het experiment. Er werd geen extra bloedbuffering uitgevoerd. Het is belangrijk om de juiste cannulation techniek te gebruiken om bloedstromen door het ECMO-circuit te absorberen, om de zuurstofparameters te controleren via bloedgasanalyse en om bloedverlies veroorzaakt door bloedafname te vervangen door extra priming-oplossing.Deze techniek maakt de weg vrij voor onderzoekers op het gebied van longziekte om de protocollen voor levensreddende behandelingen aanzienlijk te verbeteren door het gebruik van meer dan 80 beschikbare knock-in, knock-out muismodellen.

veno-venous-extracorporeal-membrane-oxygenation-in-a-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video demonstrates the procedure of replicating a thrombotic stroke in a mouse model by blocking the right common carotid artery and exposing the mouse to a low-oxygen environment. This process reduces blood and oxygen flow to the brain, causing blood clot formation and brain damage.

Inducing Thrombotic Stroke Through Hypoxia and Ischemia in a Mouse Model

De endotheliale glycocalyx / endotheliale oppervlaktelaag is ideaal bestudeerd met behulp van intravitale microscopie. Intravitale microscopie is technisch uitdagend in een bewegend orgaan zoals de longen. We zien hoe gelijktijdige helderveld en fluorescentiemicroscopie kan worden gebruikt om endotheeloppervlak laagdikte schatten in een vrij...

In vivo meting van de muis Pulmonary Endothelial oppervlaktelaag

Dit document wordt beschreven hoe u cardiopulmonale bypass bij muizen. Dit nieuwe model zal het vergemakkelijken van het onderzoek in de moleculaire mechanismen die betrokken zijn bij orgel schade.

Cardiopulmonale Bypass in een muismodel: een nieuwe benadering

Een aortocaval fistel werd gecreëerd door het prikken van de Murine infra-nieraorta door beide muren in de inferieure Vena Cava en werd gevolgd door het creëren van een stenose in zijn uitstroom via gedeeltelijke ligatie van de inferieure vena cava. Dit reproduceerbare model kan worden gebruikt om centraal veneuze stenose te bestuderen.

Murine model van centraal veneuze stenose met behulp van Aortocaval fistel met een uitstroom stenose

Het protocol beschrijft een eenvoudige methode voor het resectie van een intacte muizenlever voor metabolische studies door middel van poortaderperfusie.

Ex Vivo Leverperfusie door de poortader in muis

Dit protocol biedt een stapsgewijze procedure voor het uitvoeren van meervoudige intraveneuze toediening van bolusdoses en invasieve hemodynamische monitoring bij muizen. Onderzoekers kunnen dit protocol gebruiken voor toekomstige screening van therapeutische verbindingen voor hypertensie van de longslagader.

Meervoudige intraveneuze bolusdosering en invasieve hemodynamische beoordeling in een door hypoxie geïnduceerd model voor hypertensie van de longslagader van muizen

Een muischirurgisch model om reperfusie (IR) -letsel in de linkerlong te creëren met behoud van ventilatie en het vermijden van hypoxie.

Een muismodel van orotracheale intubatie en beademde longischemie reperfusiechirurgie

Een normotherm ex vivo leverperfusie (NEVLP) systeem werd gecreëerd voor muizenlevers. Dit systeem vereist ervaring in microchirurgie, maar zorgt voor reproduceerbare perfusieresultaten. Het vermogen om muizenlevers te gebruiken vergemakkelijkt het onderzoek van moleculaire routes om nieuwe perfusaatadditieven te identificeren en maakt de uitvoering van experimenten gericht op orgaanherstel mogelijk.

Normothermic Ex Vivo Lever Machine Perfusie in Muis

Een dual-mode imaging-systeem is ontwikkeld voor non-contact beoordeling van cutane zuurstofvoorziening van de weefsels en vasculaire functie.

Dual-mode beeldvorming van Cutane zuurstofvoorziening van de weefsels en de vaatfunctie

Een uitgebreid overzicht van de technieken die betrokken zijn bij het genereren van een muismodel van orale kanker en kwantitatieve controle van de tumor invasie in de tong door middel van multi-foton microscopie van gelabelde cellen wordt gepresenteerd. Dit systeem kan dienen als een nuttig platform voor de moleculaire beoordeling en werkzaamheid van het geneesmiddel van anti-invasieve verbindingen.

Multi-foton Imaging van de tumorcel invasie in een orthotope Muis Model van Oral plaveiselcelcarcinoom

Leer veno-veneuze extracorporale membraanoxygenatie in een niet-geïntubeerde, spontaan ademende muis. Deze methode maakt onderzoek naar acute en chronische longziekten mogelijk.

Veno-veneuze Extracorporale membraan oxygenatie in een muis

Meer video's verkennen