Name: Synthese en karakterisering van placenta Chondroitin sulfaat een (plCSA) - Targeting lipide - polymeer nanodeeltjes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 55 s
Description: Leer de synthese van placenta Chondroitin sulfaat A-targeting lipide-polymeer nanodeeltjes voor gerichte geneesmiddelafgifte aan tumoren en trofoblasten. Deze eenvoudige, reproduceerbare methode verbetert de conjugatie van peptiden.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door subsidies van de nationale sleutel-onderzoek en ontwikkeling programma van China (2016YFC1000402), de nationale stichting van de natuurwetenschappen (81571445 en 81771617) en de Natural Science Foundation van Guangdong provincie (2016A030313178) op X.F. en de Shenzhen Basic onderzoeksfonds (JCYJ20170413165233512) naar X.F.

1. voorbereiding van de stamoplossingen
<ol><li>Bereid een waterige oplossing van 4% ethanol door absolute ethanol 4 mL met 100 mL ultrazuiver water verdunnen. Winkel de oplossing bij 4 ° C. Opmerking: Ultrapure water wordt gedefinieerd als water zonder verontreinigingen zoals bacteriën, stofdeeltjes, ionen of nucleasen. Ultrazuiver water was een waterzuiveringsinstallatie verkregen met een doel soortelijke weerstand van maximaal 18.2 mΩ·cm, wat betekent lage anionogene besmetting.</li>
	<li>Bereid een 1 mg/mL soja lecithine stockoplossing door ontbinding van 20 mg soja lecithine in 20 mL van de waterige oplossing van 4% ethanol. Winkel de soja lecithine stockoplossing bij 4 ° C.</li>
	<li>Bereid een 25 mg/mL DSPE-PEG (2000)-COOH stockoplossing door ontbinding van 100 mg DSPE-PEG-COOH in de waterige oplossing van 4% ethanol 4 mL. Opslaan van de stockoplossing bij-20 ° C.</li>
	<li>Bereid een 10 mg/mL stockoplossing van DOX door ontbinding van 50 mg DOX in 5 mL ultrazuiver water. Bewaar de stockoplossing van DOX bij 4 ° C in het donker.</li>
	<li>Bereid een 2 mg/mL stockoplossing van PLGA door ontbinding van 20 mg PLGA in 10 mL acetonitril. Opslaan van de stockoplossing van de PLGA bij 4 ° C. Let op: Acetonitril is brandbaar en giftig. Werken met zorg in een zuurkast, en adequate persoonlijke apparatuur zoals Labjassen, latex handschoenen en veiligheidsbril dragen.</li>
	<li>Bereid een 0,1 M 2-(morpholino) ethanesulfonic zuur (MES, pH 6.0) stamoplossing door ontbinding van 2,17 g mes in 100 mL ultrazuiver water. Opslaan van de stockoplossing bij 4 ° C.</li>
</ol>2. synthese van DNPs
Opmerking: Om te voorkomen dat DOX fotochemische degradatie, alle operaties werden uitgevoerd in het donker. Nanodeeltjes werden gesynthetiseerd door een eerder gemeld-voor-stapmodus ultrasoonapparaat methode11,13,14.
<ol><li>Voeg 3 mL van de waterige oplossing van 4% ethanol tot een centrifugebuis steriele 10 mL. Dan, voeg 90 µg van de stockoplossing van soja lecithine, 210 µg van de stockoplossing van DSPE-PEG-COOH en 750 µg van de stockoplossing van DOX tot 3 mL van de waterige oplossing van 4% ethanol.</li>
	<li>Plaats de centrifugebuis in een ijsbad, en plaats het ijsbad op een ultrasone processor.</li>
	<li>Pipetteer met een spuit van 1 mL, 2 mg van de PLGA stockoplossing dropwise (1 druppel/4-6 s) in de centrifugebuis. Ondertussen, bewerk ultrasone trillingen ten de buis met behulp van een ultrasoon processor op een frequentie van 20 kHz en een amplitude van de uitvoer van 30% voor 5 min voor het synthetiseren van de DNPs. Opmerking: Om te synthetiseren uniforme deeltjes met kleine afmetingen, de snelheid waarmee de PLGA oplossing is droop in de buis moet traag, en bubble generatie moet worden vermeden.</li>
	<li>De DNPs zuiveren door het wassen van de bovenstaande oplossing in 0,1 M MES buffer (pH 6.0) 3 keer met behulp van een centrifuge-filter (MWCO, 10 kDa). Centrifugeer bij 4 ° C en 1000 × g gedurende 3 minuten elke keer. Ten slotte, ongeveer 1 mL van MES-opgelost nanodeeltjes moeten blijven. Opmerking: Dit is een aanvaardbaar stopplaats in de procedure. Zoniet gewend conjugaat peptiden, nanoparticles kan worden gezuiverd door PBS buffer (pH 7.4), en de gezuiverde DNPs kunnen worden achtergelaten bij 4° C in het donker.</li>
</ol>3. de vervoeging van peptiden aan DNPs
<ol><li>
Ester activering
	<ol>
<li>Toevoegen van 0.4 mg van EDC (eindconcentratie 2 mM) tot 1 mL van DNPs.</li>
		<li>0,24 mg NHS toevoegen aan de reactie (de definitieve concentratie van 2 mM). Opmerking: Voor eenvoudige toevoeging van de juiste hoeveelheid EDC en NHS, een stamoplossing kan worden bereid als de reagentia worden ontbonden en onmiddellijk gebruikt.</li>
		<li>Mengen van de componenten van de reactie goed en plaats van de reactie op een shaker; reactie voor 30 min - 1 h staan bij kamertemperatuur in het donker.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Amine-reactie
	<ol>
<li>De pH van de buffer voor het gebruik van 7.2-7.5 PBS (20 ×, pH 7.4).</li>
		<li>Voeg 0,5 mg van de plCSA-targeting peptide (plCSA-BP, EDVKDINFDTKEKFLAGCLIVSFHEGKC) aan de reactie-oplossing. Opmerking: Vóór toevoeging, Los de peptiden in 20% acetonitril. Als peptiden niet oplosbaar, kan ultrasoonapparaat in een bad ultrasoonapparaat nuttig zijn.</li>
		<li>Meng de oplossing goed, en plaats dan op een shaker; Laat de reactie te gaan bij 4 ° C's nachts in het donker.</li>
		<li>Plaats van geconjugeerde oplossing in dialyse zakken (MWCO, 3500 Da) te dialyze en te zuiveren van de plCSA-DNPs met PBS (pH 7.4) buffer bij kamertemperatuur gedurende 24 uur in het donker. Opmerking: Als alternatief, reiniging kan worden uitgevoerd zoals in stap 2.4 plCSA-DNPs krijgen.</li>
		<li>Voor cel cultuur toepassingen, de gereconstitueerde oplossing wordt gefiltreerd door een 0,22 µm steriele injectiespuit filter verwijderen van potentiële precipitaten.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. karakterisering van plCSA-gerichte lipide-polymeer nanodeeltjes
<ol><li>
Meting van de grootte van de hydrodynamische nanoparticle met behulp van Dynamische lichtverstrooiing (DLS)
	<ol>
<li>Verdunde nanodeeltjes met ultrazuiver water (50-fold verdunning). 500 µL van het monster in een cuvet volgens de instructies van de Distributielijsten of zeta potentieel instrument laden. Opmerking: Zeta potentieel en DLS cuvettes kunnen verschillen, afhankelijk van de specificaties van het instrument.</li>
		<li>Na de meting is voltooid, registreren het deeltje diameter, polydispersiteit index (PDI) en zeta potentiële. Gemiddelde de resultaten van 4 lezingen herhaald, en berekenen van de standaarddeviatie.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Transmissie-elektronenmicroscopie (TEM) Opmerking: De morfologie van de nanodeeltjes werd waargenomen door TEM met de negatieve vlek-methode. 24<ol>
<li>Verdunde nanodeeltjes met ultrazuiver water (400-fold verdunning). Voeg 20 µL van het monster op een raster van TEM, en laten zitten voor 5 minuten.</li>
		<li>Voeg 100 µL van 2% (g/v) phosphotungstic zuur en laat het zitten voor 2 min. Wick weg de druppel.</li>
		<li>Het raster TEM bij kamertemperatuur drogen.</li>
		<li>De spanning van de versnelling TEM vastgesteldop 80 kV, en vergroten van de afbeelding aan 100.000 × te visualiseren nanoparticles.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Bepaling van de doelmatigheid van de inkapseling (EE) en LE
	<ol>
<li>Standaard curve generatie. Ontbinden van DOX in ultrazuiver water om te bereiden DOX oplossingen van vijf verschillende concentraties: 1 µg/mL, 5 µg/mL, 10 µg/mL, 50 µg Mo/mL en 100 µg/mL. Meten van de absorptie van de oplossingen van DOX 480 nm met een UV-VIS-spectrometer. Het genereren van een standaard curve op basis van de concentraties van DOX.</li>
		<li>25 µL van nanodeeltjes met 500 µL ultrazuiver water verdunnen. Meten van de absorptie bij 480 nm met een UV-VIS-spectrometer. Bereken de drug concentraties door de standaard curve.</li>
		<li>Bereken de LE met behulp van de volgende vergelijking: LE = ((hoeveelheid drugs in nanodeeltjes) / (totale gewicht van de materialen)) × 100%.</li>
		<li>Bereken de EE met behulp van de volgende vergelijking: EE = ((hoeveelheid drugs in nanodeeltjes) / (hoeveelheid toegevoegde drug)) × 100%.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Meting van de efficiëntie van de conjugatie met behulp van de bicinchoninic zuur (BCA) bepaling 25 , 26 , 27<ol>
<li>Pipetteer 25 µL van standaard peptide oplossingen (tabel 1) of plCSA-DNPs in microplate wells in tweevoud. Voeg 200 µL van het reagens werken aan elk putje en meng de plaat goed op een plaat-shaker voor 30 s.</li>
		<li>De afdekplaat en Incubeer bij 37 ° C gedurende 30 minuten.</li>
		<li>Meet de extinctie op 562 nm op een afleesapparaat. Gebruik de gegenereerde standaard curve voor het berekenen van de concentraties van de plCSA van plCSA-DNPs.</li>
		<li>Berekenen van de efficiëntie van de vervoeging met behulp van de volgende vergelijking: Vervoeging efficiëntie = ((bedrag van peptide in nanodeeltjes) / (hoeveelheid toegevoegde peptide)) × 100%.</li>
	</ol>
</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Flacon</td>
			<td>Hoeveelheid oplosmiddel (l)</td>
			<td>Volume en bron van peptide (l)</td>
			<td>Uiteindelijke peptide concentratie (μg/mL)</td>
		</tr>
<tr>
<td>A</td>
			<td>0</td>
			<td>300 voorraad</td>
			<td>1000</td>
		</tr>
<tr>
<td>B</td>
			<td>250</td>
			<td>250 van flacon een verdunning</td>
			<td>500</td>
		</tr>
<tr>
<td>C</td>
			<td>250</td>
			<td>250 flacon B verdunning</td>
			<td>250</td>
		</tr>
<tr>
<td>D</td>
			<td>250</td>
			<td>250 flacon C verdunning</td>
			<td>125</td>
		</tr>
<tr>
<td>E</td>
			<td>300</td>
			<td>200 flacon D verdunning</td>
			<td>50</td>
		</tr>
<tr>
<td>F</td>
			<td>250</td>
			<td>250 flacon E verdunning</td>
			<td>25</td>
		</tr>
<tr>
<td>G</td>
			<td>400</td>
			<td>100 van flacon F verdunning</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>H</td>
			<td>500</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1. Bereiding van standaard peptiden
5. fluorescentie microscopie beoordelingvan de plCSA-gerichte Nanoparticle opname in de cellen van de Choriocarcinoma (JEG3)
<ol><li>Zaad van cellen op steriele 12-Wells-platen op 1.0 × 104 cellen per putje met volledige DMEM/F12 (cDMEM/F12, met 1% penicilline/streptomycine en 10% foetale runderserum (FBS)). De cellen groeien tot 60% samenkomst bij 37 ° C en 5% CO2 onder vochtige omstandigheden toestaan.</li>
	<li>Verwijder het medium, en voeg 1 mL koud vers media met de inhoud van een laag serum (5% FBS) en DNPs of plCSA-DNPs (5 µg DOX equivalent).</li>
	<li>Incubeer het mengsel van cellen en nanodeeltjes bij 4 ° C gedurende 1 uur.</li>
	<li>Na incubatie, verwijder het medium, en wassen van de cellen drie keer met PBS. Vervolgens, voeg 1 mL verse cDMEM/F12 en Incubeer de cellen bij 37 ° C gedurende 30 minuten.</li>
	<li>Verwijder de cDMEM/F12 en wassen van de cellen drie keer met PBS.</li>
	<li>Voeg toe 2 mL koude 4% paraformaldehyde (PFA) en Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 15 minuten de cellen vast te stellen.</li>
	<li>Verwijder de PFA. De cellen met 2 mL PBS keer wassen. Voeg 1 mL PBS met DAPI (1 µg/mL) voor kernen kleuring, en Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten.</li>
	<li>De PBS gecombineerd, en wassen van de cellen drie keer met PBS.</li>
	<li>Voeg montage medium, en het beeld van de fluorescentie met een fluorescentie microscopie, groene en blauwe kanalen gebruiken om te visualiseren de DOX en kernen, respectievelijk.</li>
</ol>

<ol><li>Davis, M. E., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+therapeutics%3A+an+emerging+treatment+modality+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).</li>
<li>Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17439359">Nanotechnology applications in cancer.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).</li>
<li>Jabir, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+on+the+current+status+of+cancer+nanomedicines%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Medical+Research+and+Opinion%22%5BJournal%5D)">An overview on the current status of cancer nanomedicines.</a> Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).</li>
<li>Pillai, G. <a target="_blank" href="https://symbiosisonlinepublishing.com/pharmacy-pharmaceuticalsciences/pharmacy-pharmaceuticalsciences09.php">Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development.</a> SOJ Pharmacy & Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).</li>
<li>Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. <a target="_blank" href="https://www.hindawi.com/journals/jnm/2016/5436458/">What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future.</a> Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458(2016).</li>
<li>Dasari, S., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cisplatin+in+cancer+therapy%3A+molecular+mechanisms+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action.</a> European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).</li>
<li>Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticles+in+cancer+therapy+and+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).</li>
<li>Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+current+nanoparticle+and+targeting+moieties+for+the+delivery+of+cancer+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">A review of current nanoparticle and targeting moieties for the delivery of cancer therapeutics.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 48 (3), 416-427 (2013).</li>
<li>Salanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+human+cancer+by+a+glycosaminoglycan+binding+malaria+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Targeting human cancer by a glycosaminoglycan binding malaria protein.</a> Cancer Cell. 28 (4), 500-514 (2015).</li>
<li>Seiler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Oncofetal+Glycosaminoglycan+Modification+Provides+Therapeutic+Access+to+Cisplatin-resistant+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22European+Urology%22%5BJournal%5D)">An Oncofetal Glycosaminoglycan Modification Provides Therapeutic Access to Cisplatin-resistant Bladder Cancer.</a> European Urology. 72 (1), 142-150 (2017).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+doxorubicin+by+CSA-binding+nanoparticles+for+choriocarcinoma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment.</a> Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placenta-specific+drug+delivery+by+trophoblast-targeted+nanoparticles+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice.</a> Theranostics. 26 (2), 130-137 (2018).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembled+lipid--polymer+hybrid+nanoparticles%3A+a+robust+drug+delivery+platform%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Self-assembled lipid--polymer hybrid nanoparticles: a robust drug delivery platform.</a> ACS Nano. 2 (8), 1696-1702 (2008).</li>
<li>Zheng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-step+assembly+of+DOX%2FICG+loaded+lipid-polymer+nanoparticles+for+highly+effective+chemo-photothermal+combination+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS%22%5BJournal%5D)">Single-step assembly of DOX/ICG loaded lipid-polymer nanoparticles for highly effective chemo-photothermal combination therapy.</a> ACS. 7 (3), 2056-2067 (2013).</li>
<li>Fang, R. H., Aryal, S., Hu, C. -M. J., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quick+synthesis+of+lipid%E2%88%92+polymer+hybrid+nanoparticles+with+low+polydispersity+using+a+single-step+sonication+method%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Quick synthesis of lipid− polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method.</a> Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).</li>
<li>Gu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Folate-modified%2C+indocyanine+green-loaded+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+targeted+delivery+of+cisplatin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomaterials+Science%2C+Polymer+Edition%22%5BJournal%5D)">Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).</li>
<li>Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+in+vitro+evaluation+of+core-shell+type+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+the+delivery+of+erlotinib+in+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Development and in vitro evaluation of core-shell type lipid-polymer hybrid nanoparticles for the delivery of erlotinib in non-small cell lung cancer.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 81, 162-171 (2016).</li>
<li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+legumain-recognition+and+NIR+controlled+released+of+cisplatin-indocyanine+nanosphere+against+gastric+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Enhanced legumain-recognition and NIR controlled released of cisplatin-indocyanine nanosphere against gastric carcinoma.</a> European Journal of Pharmacology. 794, 184-192 (2017).</li>
<li>Grabarek, Z., Gergely, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zero-length+crosslinking+procedure+with+the+use+of+active+esters%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters.</a> Analytical Biochemistry. 185 (1), 131-135 (1990).</li>
<li>Hadjipanayis, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGFRvIII+Antibody-Conjugated+Iron+Oxide+Nanoparticles+for+Magnetic+Resonance+Imaging-Guided+Convection-Enhanced+Delivery+and+Targeted+Therapy+of+Glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma.</a> Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).</li>
<li>Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhalable+magnetic+nanoparticles+for+targeted+hyperthermia+in+lung+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy.</a> Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).</li>
<li>Jennings, M., Nicknish, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+a+site+of+intermolecular+cross-linking+in+human+red+blood+cell+band+3+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).</li>
<li>Staros, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-hydroxysulfosuccinimide+active+esters%3A+bis%28N-hydroxysulfosuccinimide%29+esters+of+two+dicarboxylic+acids+are+hydrophilic%2C+membrane-impermeant%2C+protein+cross-linkers%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers.</a> Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).</li>
<li>Valencia, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-step+assembly+of+homogenous+lipid%E2%88%92+polymeric+and+lipid%E2%88%92+quantum+dot+nanoparticles+enabled+by+microfluidic+rapid+mixing%5BTitle%5D)+AND+%22ACS%22%5BJournal%5D)">Single-step assembly of homogenous lipid− polymeric and lipid− quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing.</a> ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).</li>
<li>Altintas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanobody-albumin+nanoparticles+%28NANAPs%29+for+the+delivery+of+a+multikinase+inhibitor+17864+to+EGFR+overexpressing+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells.</a> Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).</li>
<li>Maya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cetuximab+conjugated+O-carboxymethyl+chitosan+nanoparticles+for+targeting+EGFR+overexpressing+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydrate+Polymers%22%5BJournal%5D)">Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells.</a> Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).</li>
<li>Deepagan, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+targeted+imaging+and+delivery+of+camptothecin+using+cetuximab-conjugated+multifunctional+PLGA-ZnS+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles.</a> Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).</li>
<li>Totaro, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+investigation+of+EDC%2FsNHS-mediated+bioconjugation+reactions+for+carboxylated+peptide+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates.</a> Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).</li>
<li>Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+cross-linking+and+mass+spectrometry+to+map+three-dimensional+protein+structures+and+protein-protein+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Mass+Spectrometry+Reviews%22%5BJournal%5D)">Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions.</a> Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDLR-mediated+peptide-22-conjugated+nanoparticles+for+dual-targeting+therapy+of+brain+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma.</a> Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).</li>
<li>Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-penetrating+TAT+peptide+in+drug+delivery+systems%3A+proteolytic+stability+requirements%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements.</a> Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).</li>
<li>Chu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+ocular+delivery+to+laser-induced+choroidal+neovascularization+by+dual+internalizing+RGD+and+TAT+peptide-modified+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).</li>
</ol>

X.F. en B.Z. zijn de uitvinders op het octrooi PCT/CN2017/108646 en 201710906587.6 afkomstig van SIAT dat betrekking heeft op een plCSA-gerichte nanoparticle synthese methode en de toepassing. Geen potentiële belangenconflicten werden onthuld door de andere auteurs.

Dit protocol biedt een efficiënte en reproduceerbare methode voor de synthese van plCSA-BP-geconjugeerde lipide-polymeer nanodeeltjes. De methode-voor-stapmodus ultrasoonapparaat te bereiden lipide-polymeer nanodeeltjes is snelle, reproduceerbare en verschilt van de typische nanoprecipitation methoden waarbij Verwarming, vortexing of verdamping. Vandaar, de ontwikkelde methode vermindert het installatieprogramma de synthese-tijd. Bovendien, is de EDC/NHS-bioconjugate gebruikt in dit protocol een algemeen gebruikte en gem...

Een effectieve kanker therapeutische methode vermindert en elimineert tumoren met minimale systemische toxiciteit. Vandaar, selectieve tumor richten is de sleutel tot het verkennen van de succesvolle therapeutische methoden. Nanodeeltjes bieden een veelbelovende mogelijkheid voor kankertherapie en moleculaire samenstellingen met verschillende functionele groepen zal verbeteren van de drug werkzaamheid en bijbehorende bijwerkingen1,2te verminderen. Bovendien, nanoparticle systemen voornamelijk gebruik maken van passieve en actieve targeting te bereiken doel tumoren3.
Passieve targeting exploiteert de aangeboren kenmerken van nanodeeltjes en verbeterde permeabiliteit en retentie (EPR) effecten te bereiken van tumorcellen. Kationogene liposomen zijn met succes gebruikt om het leveren van diverse geneesmiddelen aan tumoren in klinische toepassingen4,5,6. Ondanks de mogelijke effectieve kanker therapeutische werking, een lage drug-concentratie in de regio van de tumor en een onvermogen om te onderscheiden van tumorcellen van normale weefsels zijn twee belangrijke beperkingen van passief-targeting nanodeeltjes7.
Actieve gerichte strategieën te profiteren van antigeen-antilichaam, ligand-receptor en andere moleculaire erkenning interacties te leveren specifiek drugs aan tumoren8. De glycosaminoglycaan placenta chondroitin sulfaat een (plCSA) wordt over het algemeen uitgedrukt op de meeste kankercellen en placenta trophoblasts. Bovendien, de malaria proteïne VAR2CSA kunt specifiek binden aan de plCSA9,10. VAR2CSA kan dus een hulpmiddel voor het targeten van menselijke kankercellen. Wanneer VAR2CSA is geconjugeerd met nanodeeltjes, kan de full-length proteïne echter de penetratie van nanodeeltjes in tumorcellen beperken. Onlangs ontdekte we een plCSA bindend peptide (plCSA-BP), afgeleid van de malaria proteïne VAR2CSA. plCSA-BP-geconjugeerde lipide-polymeer nanodeeltjes snel gebonden aan de cellen van de choriocarcinoma en beduidend verhoogd Doxorubicine (DOX) antikanker activiteit in vivo11; deze deeltjes ook specifiek gebonden aan placenta trophoblasts en zou kunnen dienen als een instrument voor de beoogde levering van drugs aan de placenta12.
Lipide-polymeer nanodeeltjes bestaat uit een lipide enkelgelaagde shell en een hydrofoob polymeer kern en vertegenwoordigen een nieuwe drager voor drug delivery. Deze nanodeeltjes combineren de voordelen van liposomen en polymere nanocarriers, zoals controleerbare nanoparticle grootte, hoge biocompatibiliteit, aanhoudende drug release, hoge drug laden efficiëntie (LE) en uitstekende stabiliteit13. In dit werk gebruikten we een-voor-stapmodus ultrasoonapparaat methode voor het synthetiseren van lipide-polymeer nanodeeltjes. Deze methode is snel, gemakkelijk en geschikt voor schaalvergroting en is wijd verbeid gebruikt ter voorbereiding van lipide-polymeer nanodeeltjes van onze groep11,14 e.a.15,16,17,18 .
1-ethyl-3-(3-Dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC) is een populaire carbodiimide gebruikt als een agent crosslinking voor biomoleculen met amines en carboxylates19conjugating. Naast EDC is N-hydroxysulfosuccinimide (NHS) het meest voorkomende vervoeging reagens in oppervlakte- en nanoparticle vervoeging reacties20,21. NHS kan verminderen van het aantal reacties van de kant en verbeteren van de stabiliteit en rendement van ester tussenproducten22,23.
Hier beschrijven we een protocol voor het synthetiseren van lipide-polymer plCSA-gerichte nanodeeltjes. Ten eerste wordt de-voor-stapmodus ultrasoonapparaat synthese van DOX-geladen lipide-polymeer nanodeeltjes (DNPs) beschreven. Vervolgens wordt een EDC/NHS bioconjugate techniek voor het genereren van lipide-polymer plCSA-BP-geconjugeerde nanodeeltjes ingevoerd. Deze bioconjugate-techniek kan ook worden gebruikt om conjugaat van andere antistoffen en peptiden aan nanodeeltjes. Ten slotte, beschrijven we de fysisch-chemische eigenschappen en in vitro assay gebruikt voor het karakteriseren van de plCSA-gerichte lipide-polymeer nanodeeltjes. Wij zijn van mening dat deze plCSA-gerichte lipide-polymeer nanodeeltjes een doeltreffend systeem voor de beoogde levering van drugs naar de meeste menselijke kankers en de gerichte levering van lading aan de placenta te behandelen aandoeningen placenta kunnen vormen.

<table><tbody><tr><td>plCSA-peptide</td><td>Shanghai GL Biochem</td><td>573518</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Ethanol absoluut</td><td>Sinopharm Chemical</td><td>10009218</td><td>voor de synthese van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Sojabonen lecithine</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>441601</td><td>voor de synthese van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>DSPE-PEG-COOH</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>880125</td><td>voor de synthese van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Doxorubicine</td><td>JKChemical</td><td>113424</td><td>voor de synthese van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Acetonitril</td><td>Shanghai Lingfeng</td><td>1008621</td><td>voor de synthese van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>PLGA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>719897</td><td>voor de synthese van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Ultrasoon verwerker</td><td>Sonics</td><td>VCX130</td><td>voor de synthese van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Centrifugefilter (MWCO 10 kDa)</td><td>Millipore</td><td>UFC801024</td><td>voor de zuivering van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>centrifuge</td><td>Sigma</td><td>3-18KS</td><td>voor de zuivering van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>2-[morpholino]ethaansulfonzuur(MES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3671</td><td>voor peptide conjugatie</td></tr><tr><td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3450</td><td>voor peptide conjugatie</td></tr><tr><td>N-hydroxysuccinimide (NHS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>56480</td><td>voor peptide conjugatie</td></tr><tr><td>Dialysezakken</td><td>Spectrum</td><td>132592T</td><td>voor de zuivering van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30028.01</td><td>voor celcultuur</td></tr><tr><td>10 mL centrifugebuizen, polypropyleen</td><td>Aladdin</td><td>S-025</td><td>voor de synthese van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>15 mL centrifugebuizen, polypropyleen</td><td>Corning</td><td>430791</td><td>voor diverse toepassingen</td></tr><tr><td>0.22 &mu;m steriele spuitfilter</td><td>Millipore</td><td>SLGV033RB</td><td>voor de zuivering van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>1 ml spuit, polypropyleen</td><td>BD</td><td>328421</td><td>voor de synthese van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Malvern Zetasizer</td><td>Malvern</td><td>Nano ZS</td><td>voor deeltjesgrootteanalyse</td></tr><tr><td>Fosforwolfraamzuur</td><td></td><td></td><td>voor TEM</td></tr><tr><td>TEM raster</td><td>EMCN</td><td>BZ10024a</td><td>voor TEM</td></tr><tr><td>UV-VIS spectrometer</td><td>Leagene</td><td>DZ0035</td><td>voor TEM</td></tr><tr><td>Transmissie elektronenmicroscoop</td><td>JEOL</td><td>JEM-100CXII</td><td>voor deeltjesgrootteanalyse</td></tr><tr><td>BCA reagens A</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23228</td><td>voor BCA assay</td></tr><tr><td>BCA reagens B</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23224</td><td>voor BCA assay</td></tr><tr><td>96-well platen</td><td>Corning</td><td>3599</td><td>voor BCA assay</td></tr><tr><td>Plate reader</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Multiskan&trade; GO</td><td>voor BCA assay</td></tr><tr><td>12-well platen</td><td>Corning</td><td>3513</td><td>voor celcultuur</td></tr><tr><td>JEG3 cel</td><td>Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences</td><td>TCHu195</td><td>Menselijk placenta</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Hyclone</td><td>SH30272.01</td><td>fenolroodvrij</td></tr><tr><td>Foetaal bovien serum (FBS)</td><td>GIBCO</td><td>10100</td><td>voor celcultuur</td></tr><tr><td>Penicilline/streptomycine</td><td>GIBCO</td><td>15070063</td><td>voor celcultuur</td></tr><tr><td>Fluorescentiemicroscoop</td><td>OLYMPUS</td><td>CKK53</td><td>voor cellulaire opname</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Shanghai Lingfeng</td><td>1372021</td><td>voor cellulaire opname</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sangon Biotech</td><td>A606584</td><td>voor cellulaire opname</td></tr><tr><td>Montagemedium</td><td>Life</td><td>P36961</td><td>voor cellulaire opname</td></tr></tbody></table>

synthese en karakterisering van placenta chondroitin sulfaat een (plcsa) - targeting lipide - polymeer nanodeeltjes

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A (plCSA)-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Een effectieve kanker therapeutische methode vermindert en elimineert tumoren met minimale systemische toxiciteit. Actief targeting nanodeeltjes bieden een veelbelovende aanpak van kankertherapie. De glycosaminoglycaan placenta chondroitin sulfaat een (plCSA) wordt uitgedrukt op een breed scala van kankercellen en placenta trophoblasts en malaria eiwit die var2csa specifiek aan plCSA binden kan. Een gerapporteerde placenta chondroitin sulfaat A bindend peptide (plCSA-BP), afgeleid van malaria eiwit VAR2CSA, kan ook specifiek binden aan plCSA op kankercellen en placenta trophoblasts. Vandaar, kon plCSA-BP-geconjugeerde nanodeeltjes worden gebruikt als een instrument voor gerichte drug levering aan menselijke kankers en placenta trophoblasts. In dit protocol beschrijven we een methode voor het synthetiseren van lipide-polymer plCSA-BP-geconjugeerde nanodeeltjes geladen met Doxorubicine (plCSA-DNPs); de methode bestaat uit een enkele ultrasoonapparaat stap en bioconjugate technieken. Bovendien worden de verschillende methoden voor het karakteriseren van plCSA-DNPs, met inbegrip van de bepaling van de fysisch-chemische eigenschappen en cellulaire opname door cellen van de placenta choriocarcinoma (JEG3), beschreven.

In dit protocol, PLGA, DSPE-PEG-COOH en soja lecithine zijn een representatieve polymeer, lipide-PEG-COOH conjugaat lipide, respectievelijk en. De synthese van plCSA-gerichte lipide-polymeer nanodeeltjes via een-voor-stapmodus ultrasoonapparaat methode en een EDC/NHS-techniek wordt geïllustreerd in Figuur 1. Eerst, ultrasoonapparaat voorwaarden, soja lecithine, PLGA en DSPE-PEG-COOH zelf monteren aan formulier core-shell gestructureerd DNPs. De kern ...

Hier presenteren we een protocol voor de synthese van placenta chondroitin sulfaat A bindend peptide (plCSA-BP)-geconjugeerd lipide-polymeer nanodeeltjes via -voor-stapmodus ultrasoonapparaat en bioconjugate technieken. Deze deeltjes een roman hulpmiddel vormen voor de gerichte levering van therapeutics aan de meeste menselijke tumoren en placenta trophoblasts voor de behandeling van kanker en placenta aandoeningen.

Synthese en karakterisering van placenta Chondroitin sulfaat een (plCSA) - Targeting lipide - polymeer nanodeeltjes

An effective cancer therapeutic method reduces and eliminates tumors with minimal systemic toxicity. Actively targeting nanoparticles offer a promising ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het gebied van de levering van geneesmiddelen, zoals gerichte levering van therapieën aan menselijke kankers en de placenta cystoblast. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een eenvoudige en reproduceerbare methode is om peptiden geconjugeerd in andere deeltjes te synthetiseren. Om te beginnen, voeg drie millimeter van vier procent ethanol aan een steriele 10 milliliter centrifuge buis.Voeg vervolgens 90 microgram sojaleeloplossing toe, 210 microgram DSPE-PEG-carboxylzuurvoorraadoplossing en 750 microgram DOX-voorraadoplossing. Gebruik een spuit van één milliliter om twee milligram PLGA-voorraadoplossing te pipette. Plaats de centrifugebuis in een ijsbad op een ultrasone processor en sonicate gedurende twee minuten.Voeg vervolgens PLGA stock oplossing drop-wise in de centrifuge buis. Om de DNP's te zuiveren, gebruikt u een centrifugefilter om de oplossing te wassen in de MES-buffer van 0,1 molaire. Dan, centrifuge de oplossing op 1000 G gedurende drie minuten op vier graden Celsius.Om te beginnen ester activering, voeg 0,4 milligram EDC aan een milliliter van DNP's. Voeg vervolgens 0,24 milligram NHS toe aan de reactie. Laat de reactie vervolgens tot een uur optreden bij kamertemperatuur in het donker.Meng hierna de reactiecomponenten grondig en plaats de reactie op een shaker. Om de aminereactie te starten, gebruikt u PBS om de pH van de buffer te verhogen van 7,2 naar 7,5. Voeg vervolgens 0,5 milligram pICSA-targetingpeptide toe aan de reactieoplossing.Meng de oplossing goed en plaats deze op een shaker. Laat vervolgens de reactie 's nachts in het donker bij vier graden Celsius doorgaan. Vul de volgende dag dialysezakken met de conjugaatoplossing.Zuiver de pICSA DNP's met PBS-buffer bij kamertemperatuur gedurende 24 uur in het donker. Na het kweken van cellen volgens het tekstprotocol, verwijder de media en voeg een milliliter verse, koude media met vijf procent FBS en pICSA DNPs of DNPs. Vervolgens, incubeer de cel en nano-deeltje mengsel voor een uur op vier graden Celsius.Verwijder hierna de media en was de cellen drie keer met PBS. Voeg vervolgens een milliliter verse media toe en broed de cellen gedurende 30 minuten uit bij 37 graden Celsius. Verwijder hierna de media en was de cellen drie keer met PBS.Voeg vervolgens twee milliliter koude, vier procent PFA toe en broed het mengsel gedurende 10 minuten op kamertemperatuur uit. Verwijder de PFA en was de cellen met twee milliliter PBS. Voeg vervolgens een milliliter PBS met DAPI toe voor nuclei-vlekken.Laat het mengsel 10 minuten op kamertemperatuur uitbroeden. Voeg ten slotte het montagemedium en het beeld van de fluorescentie toe met een fluorescentiemicroscoop. Met behulp van dit protocol werden DNP's met succes voorbereid en geconjugeerd naar pICSA BP. Na vervoeging steeg de diameter van de primaire DNP's tot ongeveer 109 nanometer.De TEM-beelden van de DNP's en de pICSA DNP's toonden aan dat de deeltjes goed verspreid waren en over het algemeen sferische morfologie vertoonden. Het zetapotentieel van de nanodeeltjes was negatief 20,1 en 29,9 millivolt, wat aangeeft dat de nanodeeltjes zeer stabiel waren. De JEG3 cellulaire opname test aangegeven de pICSA DNPs gebonden aan de JEG3 cellen binnen 30 minuten.Daarom werd de pICSA BP efficiënt geconjugeerd aan de oppervlakte. Tijdens een poging tot deze procedure, is het belangrijk om te onthouden om het mengsel sonicate voor een tot twee minuten voor het toevoegen van PLGA. Na deze procedure kunnen onze methoden zoals HPLC-test worden uitgevoerd om de vervoegingsefficiëntie nauwkeuriger te bepalen.Na de ontwikkeling maakte deze techniek de weg vrij voor onderzoekers op het gebied van reproductieve biologie om de mogelijkheid van placenta-gerichte behandeling bij zwangerschapscomplicaties te onderzoeken.

synthesis-characterization-placental-chondroitin-sulfate-plcsa

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Dit artikel beschrijft een methode om nanoprecipitation op basis van polymeren nanodeeltjes door middel van diblok co-polymeren te synthetiseren. Bespreken we de synthese van diblok co-polymeren, de nanoprecipitation techniek en mogelijke toepassingen.

Formulering van diblok polymere nanodeeltjes door middel van Nanoprecipitation Techniek

We beschrijven de productie en karakterisering van nanodeeltjes en microdeeltjes samengesteld uit poly(melkzuur-co-glycolzuur) met behulp van vitamine E-TPGS als emulgator. Door formuleringsparameters zoals de concentratie van emulgator te variëren, is het mogelijk om nanodeeltjes te produceren met gemiddelde diameters variërend van 220 nm tot 1,98 µm.

PLGA-nanodeeltjes gevormd door enkelvoudige- of dubbele-emulsie met vitamine E-TPGS

Het doel van dit protocol is om SDF-1α, een stamcel-home-factor, te integreren in dextransulfaat-chitosan nanodeeltjes.  De resulterende deeltjes worden gemeten op hun grootte en zetapotentiaal, evenals de inhoud, activiteit en in vitro afgiftesnelheid van SDF-1α uit de nanodeeltjes.

Bereiding en karakterisering van SDF-1α-Chitosan-Dextransulfaat Nanodeeltjes

In deze studie werd een methode beschreven voor het synthetiseren van ultrakleine populaties van biocompatibele nanodeeltjes, evenals verschillende in vitro methoden om hun celinteracties te beoordelen.

Solid lipidenanodeeltjes (SLN) voor intracellulaire targeting Toepassingen

Injecteerbare tissue engineering scaffold uit poly (N-isopropylacrylamide) -graft-chondroïtinesulfaat (PNIPAAm-g-CS) bevattende alginaat microdeeltjes bereid. De hechtsterkte, zwelvermogen en in vitro biocompatibiliteit geanalyseerd in deze studie. De karakterisering technieken die hier ontwikkeld kan van toepassing zijn op andere thermogelling systemen.

Synthese van Thermogelling Poly (N-isopropylacrylamide) -graft-chondroïtinesulfaat Composites met Alginaatmicrodeeltjes voor Tissue Engineering

Vloeibaar kristal nanodeeltje (LCNP) Nanodrager wordt benut als middel voor de gecontroleerde afgifte van een hydrofoob lading naar de plasmamembraan van levende cellen.

Gerichte plasmamembraan Levering van een hydrofobe Cargo ingekapseld in een Liquid Crystal nanodeeltjes Carrier

Dit artikel beschrijft een proces voor het afstemmen van de grootte en crosslinking dichtheid van covalent kruisverwijzende nanodeeltjes van lineaire polyesters met hanger functionaliteit. Door afstemming synthese parameters (polymeer moleculair gewicht, hanger functionaliteit opneming en simulaties van de crosslinker), worden een nanoparticle van de gewenste grootte en crosslinking dichtheid bereikt voor drug delivery toepassingen.

Nanosponge Tunability in grootte en Crosslinking dichtheid

Beschrijven we een systeem dat gebruik maakt van drie methoden voor evaluatie van de veiligheid en effectiviteit van placenta-gerichte drug delivery: in vivo imaging als u wilt controleren nanoparticle accumulatie, hoge-frequentie echografie placenta en foetale ontwikkeling te volgen , en HPLC te kwantificeren drug levering aan weefsel.

Uitgebreide evaluatie van de effectiviteit en veiligheid van Placenta-gerichte Drug Delivery met behulp van drie aanvullende methoden

Dit artikel beschrijft de inkapseling van falcarindiol in lipide-gecoate 74 nm nanodeeltjes. De mobiele opname van de nanodeeltjes door menselijke stamcellen in lipide druppels wordt gecontroleerd door fluorescerende en confocal beeldvorming. Nanodeeltjes worden vervaardigd door de snelle injectie methode van oplosmiddel verschuiven, en hun grootte wordt gemeten met de Dynamische lichtverstrooiing techniek.

Opname van nieuwe lipide-gecoate nanodeeltjes met Falcarindiol door menselijke mesenchymale stamcellen

Dit protocol beschrijft de synthese en formulering van injecteerbare, supramoleculaire polymeer-nanodeeltjes (PNP) hydrogel biomaterialen. Toepassingen van deze materialen voor medicijnafgifte, biofarmaceutische stabilisatie en celencapsulatie en -levering worden gedemonstreerd.

Injecteerbare supramoleculaire polymeer-nanodeeltjes hydrogels voor cel- en medicijnafgiftetoepassingen

Leer de synthese van placenta Chondroitin sulfaat A-targeting lipide-polymeer nanodeeltjes voor gerichte geneesmiddelafgifte aan tumoren en trofoblasten. Deze eenvoudige, reproduceerbare methode verbetert de conjugatie van peptiden.

Synthese en karakterisering van placenta Chondroitin sulfaat een (plCSA) - Targeting lipide - polymeer nanodeeltjes

Meer video's verkennen