Name: Antigene liposomen voor generatie van ziekte-specifieke antilichamen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: Leer de bereiding van antigene liposomale nanopartikelen voor immunologie en allergieonderzoek met muismodellen. Deze methode genereert robuuste antilichaamreacties en vereist minder dieren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit onderzoek werd gesteund door subsidies van het ministerie van defensie (W81XWH-16-1-0302 en W81XWH-16-1-0303).

<ol><li>Gupta, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence%2C+severity%2C+and+distribution+of+childhood+food+allergy+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">The prevalence, severity, and distribution of childhood food allergy in the United States.</a> Pediatrics. 128 (1), e9-e17 (2011).</li>
<li>Sicherer, S. H., Munoz-Furlong, A., Godbold, J. H., Sampson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((US+prevalence+of+self-reported+peanut%2C+tree+nut%2C+and+sesame+allergy%3A+11-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">US prevalence of self-reported peanut, tree nut, and sesame allergy: 11-year follow-up.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 125 (6), 1322-1326 (2010).</li>
<li>Kim, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublingual+immunotherapy+for+peanut+allergy%3A+clinical+and+immunologic+evidence+of+desensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sublingual immunotherapy for peanut allergy: clinical and immunologic evidence of desensitization.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 127 (3), 640-646 (2011).</li>
<li>Vickery, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+unresponsiveness+to+peanut+in+subjects+who+have+completed+peanut+oral+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sustained unresponsiveness to peanut in subjects who have completed peanut oral immunotherapy.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 133 (2), 468(2014).</li>
<li>Jones, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicutaneous+immunotherapy+for+the+treatment+of+peanut+allergy+in+children+and+young+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Epicutaneous immunotherapy for the treatment of peanut allergy in children and young adults.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 139 (4), 1242(2017).</li>
<li>Varshney, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+controlled+study+of+peanut+oral+immunotherapy%3A+clinical+desensitization+and+modulation+of+the+allergic+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">A randomized controlled study of peanut oral immunotherapy: clinical desensitization and modulation of the allergic response.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 127 (3), 654-660 (2011).</li>
<li>Anagnostou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+efficacy+of+oral+immunotherapy+for+the+desensitisation+of+peanut+allergy+in+children+%28STOP+II%29%3A+a+phase+2+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Assessing the efficacy of oral immunotherapy for the desensitisation of peanut allergy in children (STOP II): a phase 2 randomised controlled trial.</a> Lancet. 383 (9925), 1297-1304 (2014).</li>
<li>Sampson, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Varying+Doses+of+Epicutaneous+Immunotherapy+vs+Placebo+on+Reaction+to+Peanut+Protein+Exposure+Among+Patients+With+Peanut+Sensitivity%3A+A+Randomized+Clinical+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Effect of Varying Doses of Epicutaneous Immunotherapy vs Placebo on Reaction to Peanut Protein Exposure Among Patients With Peanut Sensitivity: A Randomized Clinical Trial.</a> The Journal of the American Medical Association. 318 (18), 1798-1809 (2017).</li>
<li>Bednar, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD22+Inhibits+Murine+B+Cell+Receptor+Activation+in+a+Human+CD22+Transgenic+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Human CD22 Inhibits Murine B Cell Receptor Activation in a Human CD22 Transgenic Mouse Model.</a> Journal Immunology. 199 (9), 3116-3128 (2017).</li>
<li>Macauley, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigenic+liposomes+displaying+CD22+ligands+induce+antigen-specific+B+cell+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Antigenic liposomes displaying CD22 ligands induce antigen-specific B cell apoptosis.</a> Journal Clinical Investigation. 123 (7), 3074-3083 (2013).</li>
<li>Orgel, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+CD22+on+antigen-specific+B+cells+to+prevent+allergy+to+the+major+peanut+allergen+Ara+h+2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Exploiting CD22 on antigen-specific B cells to prevent allergy to the major peanut allergen Ara h 2.</a> Journal Allergy Clinical Immunology. 139 (1), 366-369 (2017).</li>
<li>Smarr, C. B., Hsu, C. L., Byrne, A. J., Miller, S. D., Bryce, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-fixed+leukocytes+tolerize+Th2+responses+in+mouse+models+of+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Antigen-fixed leukocytes tolerize Th2 responses in mouse models of allergy.</a> Journal of Immunology. 187 (10), 5090-5098 (2011).</li>
<li>Kulis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+2S+albumin+allergens+of+Arachis+hypogaea%2C+Ara+h+2+and+Ara+h+6%2C+are+the+major+elicitors+of+anaphylaxis+and+can+effectively+desensitize+peanut-allergic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Allergy%22%5BJournal%5D)">The 2S albumin allergens of Arachis hypogaea, Ara h 2 and Ara h 6, are the major elicitors of anaphylaxis and can effectively desensitize peanut-allergic mice.</a> Clinical and Experimental Allergy. 42 (2), 326-336 (2012).</li>
<li>Dang, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+the+accuracy+of+peanut+allergy+diagnosis+by+using+Ara+h+2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Increasing the accuracy of peanut allergy diagnosis by using Ara h 2.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 129 (4), 1056-1063 (2012).</li>
<li>Loughrey, H. C., Choi, L. S., Cullis, P. R., Bally, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+procedures+for+the+coupling+of+proteins+to+liposomes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimized procedures for the coupling of proteins to liposomes.</a> Journal Immunological Methods. 132 (1), 25-35 (1990).</li>
<li>Sen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+structure+plays+a+critical+role+in+peanut+allergen+stability+and+may+determine+immunodominant+IgE-binding+epitopes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Protein structure plays a critical role in peanut allergen stability and may determine immunodominant IgE-binding epitopes.</a> Journal of Immunology. 169 (2), 882-887 (2002).</li>
<li>Krall, N., da Cruz, F. P., Boutureira, O., Bernardes, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-selective+protein-modification+chemistry+for+basic+biology+and+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Site-selective protein-modification chemistry for basic biology and drug development.</a> Nature Chemistry. 8 (2), 103-113 (2016).</li>
<li>Jimenez-Saiz, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifelong+memory+responses+perpetuate+humoral+TH2+immunity+and+anaphylaxis+in+food+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Lifelong memory responses perpetuate humoral TH2 immunity and anaphylaxis in food allergy.</a> Journal Allergy and Clinical Immunology. 140 (6), 1604-1615 (2017).</li>
<li>Moutsoglou, D. M., Dreskin, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+Treatment+of+Peanut-Allergic+Mice+with+Bortezomib+Significantly+Reduces+Serum+Anti-Peanut+IgE+but+Does+Not+Affect+Allergic+Symptoms%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Prolonged Treatment of Peanut-Allergic Mice with Bortezomib Significantly Reduces Serum Anti-Peanut IgE but Does Not Affect Allergic Symptoms.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 170 (4), 257-261 (2016).</li>
<li>LaMothe, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerogenic+Nanoparticles+Induce+Antigen-Specific+Regulatory+T+Cells+and+Provide+Therapeutic+Efficacy+and+Transferrable+Tolerance+against+Experimental+Autoimmune+Encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Tolerogenic Nanoparticles Induce Antigen-Specific Regulatory T Cells and Provide Therapeutic Efficacy and Transferrable Tolerance against Experimental Autoimmune Encephalomyelitis.</a> Frontiers in Immunology. 9, 281(2018).</li>
<li>Srivastava, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+peanut+oral+immunotherapy+with+CpG%2Fpeanut+nanoparticles+in+a+murine+model+of+peanut+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Investigation of peanut oral immunotherapy with CpG/peanut nanoparticles in a murine model of peanut allergy.</a> J Allergy Clin Immunol. 138 (2), 536-543 (2016).</li>
<li>Bellinghausen, I., Saloga, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+allergic+immune+responses+in+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Analysis of allergic immune responses in humanized mice.</a> Cellular Immunology. 308, 7-12 (2016).</li>
<li>Pillai, S., Mattoo, H., Cariappa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cells+and+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">B cells and autoimmunity.</a> Curr Opin Immunol. 23 (6), 721-731 (2011).</li>
<li>Mantegazza, R., Cordiglieri, C., Consonni, A., Baggi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+myasthenia+gravis%3A+utility+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+General+Medicine%22%5BJournal%5D)">Animal models of myasthenia gravis: utility and limitations.</a> International Journal of General Medicine. 9, 53-64 (2016).</li>
<li>Berman, P. W., Patrick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+myasthenia+gravis.+A+murine+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Experimental myasthenia gravis. A murine system.</a> J Exp Med. 151 (1), 204-223 (1980).</li>
<li>Berman, P. W., Patrick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linkage+between+the+frequency+of+muscular+weakness+and+loci+that+regulate+immune+responsiveness+in+murine+experimental+myasthenia+gravis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Linkage between the frequency of muscular weakness and loci that regulate immune responsiveness in murine experimental myasthenia gravis.</a> J Exp Med. 152 (3), 507-520 (1980).</li>
<li>Derksen, V., Huizinga, T. W. J., van der Woude, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+autoantibodies+in+the+pathophysiology+of+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunopathology%22%5BJournal%5D)">The role of autoantibodies in the pathophysiology of rheumatoid arthritis.</a> Seminars in Immunopathology. 39 (4), 437-446 (2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De hier geschetste methoden zijn een algemeen protocol voor de vervoeging van een proteïne aan een lipide waarmee de weergave van het eiwit op Liposomale nanodeeltjes. Voor zeer grote multi subeenheid eiwitten, dit protocol mogelijk beperkte nut. De ideale methode zou zijn de invoering van een specifieke code waarmee een biorthogonal chemische koppelen strategie om te worden gebruikt. Als uiting van het eiwit recombinantly, kan dit met behulp van beschikbare site-specifieke strategieën17, en een b...

Voedselallergie is van invloed op 8% van de kinderen in de Verenigde Staten, en in de prevalentie is toegenomen in de afgelopen tien jaar1. Allergie voor pinda is van invloed op 1% van de kinderen en is niet typisch ontgroeid2. Hoewel verschillende veelbelovende klinische proeven zijn aan de gang voor de behandeling van voedselallergie, met inbegrip van mondelinge immunotherapie (OIT), sublinguale immunotherapie (SLIT) en epicutaneous immunotherapie (EPIT), zijn er momenteel geen FDA-goedgekeurde behandelingsstrategieën voor desensibilisatie pinda-allergische personen3,4,5,6,7,8. Allergische personen moeten daarom strikt allergenen Voorkom anafylaxie. Veel vragen blijven met betrekking tot routes van sensibilisatie en onderliggende mechanismen van voedsel allergie ontwikkeling.
Muismodellen zijn een waardevol instrument voor het bestuderen van de mechanismen van allergie, alsmede het ontwikkelen van nieuwe tolerogenic en desensibilisatie therapieën9,10,11,12. Dit geldt met name omdat het grote pinda allergeen (Ara h 2; Ah2) bij de mens is ook het dominante allergeen in verschillende beschreven muis modellen13,14. Terwijl Muismodellen van de pindaallergie zijn van onschatbare waarde bij het bestuderen van de mechanismen van sensibilisatie en tolerantie, is een nadeel dat ze kunnen variabele worden en het gebruik van hulpstoffen vereisen. Meer potente immunogenen zou één manier om te minimaliseren van de intrinsieke variabiliteit van dergelijke modellen. Omdat B-cellen zijn sterk geactiveerd door multivalent antigenen, zijn antigene liposomen weergeven van het allergeen een goede optie omwille van hun vermogen om potentieel B-cellen activeren door de B-cel receptor (BHG), terwijl ook de eigenschap van efficiënt het compartiment van de T-cel via worden overgenomen door de niet-specifiek antigeen-presentatie priming cellen.
Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol voor eiwit antigenen aan Liposomale nanodeeltjes met behulp van een strategie voor facile en modulaire conjugating. Met behulp van een surrogaat antigeen, anti-IgM Fab fragment, we laten zien hoe krachtig deze antigene liposomen kunnen in stimulerende B-cel-activatie. Antigene liposomen weergeven Ah2 antigeen werden gebruikt voor het ontwikkelen van een nieuwe muismodel van toegekende gevoeligheid. In dit model worden splenocytes van geverifieerde pinda allergische muizen, met pinda-specifieke geheugen B - en T-cellen, overgebracht naar de naïeve congenisch muizen. Geheugen antilichaam reacties worden veroorzaakt door injectie van liposomen geconjugeerd met Ah2 in de ontvangende muizen, zodat antilichamen tegen Ah2 ertoe worden aangespoord. Gevolgd door slechts één boost met oplosbare Ah2, leiden Ah2-specifieke antilichamen tot een sterke anafylactische reactie wanneer deze muizen zijn vervolgens uitgedaagd met Ah2. Zoals muizen ondergaan de allergische reactie op een zeer uniforme wijze reageren hebt en niet een adjuvans, deze benadering is een wenselijk pindaallergie model en de uitkomsten suggereren dat het nut in andere Muismodellen gedreven door antigenen die gericht wellicht allergenen en eventueel autoantigens.

```html
<table><tbody><tr><td>Model 2110 Fraction Collector</td><td>BioRad</td><td>7318122</td><td></td></tr><tr><td>Cholestrol</td><td>Sigma</td><td>C8667</td><td>Sigma grade 99%</td></tr><tr><td>SPDP</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21857</td><td></td></tr><tr><td>DSPC</td><td>Avanti</td><td>850365</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG 18:0</td><td>Avanti</td><td>880120</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG Maleimide</td><td>Avanti</td><td>880126</td><td></td></tr><tr><td>Extruder</td><td>Avanti</td><td>610000</td><td>1 mL spuit met houder/verwarmingsblok</td></tr><tr><td>Filters 0.1 &micro;m</td><td>Avanti</td><td>610005</td><td></td></tr><tr><td>Filters 0.8 &micro;m</td><td>Avanti</td><td>610009</td><td></td></tr><tr><td>10 mm Filter Supports</td><td>Avanti</td><td>6100014</td><td></td></tr><tr><td>Glass Round Bottom Flask</td><td>Sigma</td><td>Z100633</td><td></td></tr><tr><td>Turnover stoppers</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P-301398</td><td></td></tr><tr><td>Tubing</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P-198194</td><td></td></tr><tr><td>Leur Lock</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>k4201634503</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex G50 Beads</td><td>GE Life Sciences</td><td>17004201</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex G100 Beads</td><td>GE Life Sciences</td><td>17006001</td><td></td></tr><tr><td>Heat Inactivated Fetal Calf Serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10.000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>1x RBC lysis Buffer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>Indo-1</td><td>Invitrogen</td><td>I1203</td><td></td></tr><tr><td>CD5-PE</td><td>BioLegend</td><td>100608</td><td></td></tr><tr><td>B220-PE-Cy7</td><td>BioLegend</td><td>103222</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14170112</td><td>zonder calcium en magnesium</td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Fab anti-mouse IgM</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-007-020</td><td></td></tr><tr><td>F(ab')2 anti-mouse IgM</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-006-020</td><td></td></tr><tr><td>Peanut flour</td><td>Golden Peanut Co.</td><td>521271</td><td>12% vet licht gebrand, 50% eiwit</td></tr><tr><td>Animal feeding needles</td><td>Cadence Science</td><td>7920</td><td>22g x 1.5", 1.25 mm - recht</td></tr><tr><td>Microprobe thermometer</td><td>Physitemp</td><td>BAT-12</td><td></td></tr><tr><td>Rectal probe for mice</td><td>Physitemp</td><td>Ret-3</td><td></td></tr><tr><td>Cholera toxin, from Vibrio cholera</td><td>List Biological Laboratories, Inc.</td><td>100B</td><td>Azide vrij</td></tr><tr><td>BCA Protein Assay Kit</td><td>Pierce</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Carbonate-bicarbonate buffer</td><td>Sigma</td><td>C3041</td><td></td></tr><tr><td>TMB Stop Solution</td><td>KPL</td><td>50-85-06</td><td></td></tr><tr><td>SureBlue TMB Microwell Peroxidase Substrate</td><td>KPL</td><td>5120-0077</td><td></td></tr><tr><td>96 well Immulon 4HBX plate</td><td>Thermo Scientific</td><td>3855</td><td></td></tr><tr><td>Purified soluble Ara h 2</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>gezuiverd zoals in: Sen, et al., 2002, Journal of Immunology</td></tr><tr><td>HSA-DNP</td><td>Sigma</td><td>A-6661</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IgE anti-DNP</td><td>Accurate Chemical</td><td>BYA60251</td><td></td></tr><tr><td>Sheep anti-Mouse IgE</td><td>The Binding Site</td><td>PC284</td><td></td></tr><tr><td>Biotinylated Donkey anti-Sheep IgG</td><td>Accurate Chemical</td><td>JNS065003</td><td></td></tr><tr><td>NeutrAvidin Protein, HRP</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>31001</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IgG1 anti-DNP</td><td>Accurate Chemical</td><td>MADNP105</td><td></td></tr><tr><td>HRP Goat anti-mouse IgG1</td><td>Southern Biotech</td><td>1070-05</td><td></td></tr><tr><td>1 mL Insulin Syringes</td><td>BD</td><td>329412</td><td>U-100 Insulin, 0.40 mm (27 G) x 16.0 mm (5/8")</td></tr><tr><td>Superfrost Microscope Slides</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-14</td><td>25 mm x 75 mm x 1.0 mm</td></tr><tr><td>ACK Lysing Buffer</td><td>gibco by Life Technologies</td><td>A10492-01</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Cell Strainer</td><td>Corning</td><td>352350</td><td>70 &mu;m Nylon, White, Sterile, Individueel verpakt</td></tr><tr><td>NuPAGE 4-12% Bis-Tris Protein Gels</td><td>Invitrogen</td><td>NP0322BOX</td><td>10 gels</td></tr><tr><td>NuPAGE LDS buffer, 4x</td><td>Invitrogen</td><td>NP0008</td><td>250 mL</td></tr><tr><td>SeeBlue Plus2 Pre-stained standard</td><td>Invitrogen</td><td>LC5925</td><td>500 &micro;L</td></tr><tr><td>NuPAGE MES/SDS running buffer, 20x</td><td>Invitrogen</td><td>NP0002</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>GelCode Blue Stain</td><td>Thermo Scientific</td><td>24590</td><td>500 mL</td></tr></tbody></table>
```

antigene liposomen voor generatie van ziekte-specifieke antilichamen

Antigenic Liposomes for Generation of Disease-specific Antibodies

Antilichaam reacties bieden kritische protectieve immuniteit aan een breed scala aan pathogenen. Er blijft een groot belang bij het genereren van robuuste antilichamen voor vaccinatie evenals begrijpen hoe pathogene antilichaam reacties allergieën en auto-immuunziekte ontwikkelen. Robuuste antigeen-specifieke antilichaam reacties te genereren is niet altijd triviaal. In muismodellen vereist het vaak meerdere rondes van inentingen met adjuvans die tot een grote hoeveelheid variabiliteit in de hoeveelheid opgewekte antilichamen leidt. Een voorbeeld is in muismodellen van pindaallergieën waar meer robuust en reproduceerbare modellen die muis nummers en het gebruik van adjuvante minimaliseren gunstig zou zijn. Hier gepresenteerd is een zeer reproduceerbaar muismodel van pindaallergie anafylaxie. Dit nieuwe model is gebaseerd op twee belangrijke factoren: (1) antigeen-specifieke splenocytes worden adoptively overgebracht van een pinda-gesensibiliseerde muis in een naïef ontvangende muis, normaliseren van het aantal antigeen-specifieke geheugen B - en T-cellen over een groot aantal muizen; en (2) ontvangende muizen zijn vervolgens versterkt met een sterke multivalent immunogeen in de vorm van liposomaal nanodeeltjes worden getoond op het grote pinda allergeen (Ara h 2). Het grote voordeel van dit model is de reproduceerbaarheid, die uiteindelijk het aantal dieren in elke studie verlaagt, terwijl het minimaliseren van het aantal dieren ontvangen meerdere injecties van adjuvans gebruikt. De modulaire vergadering van deze immunogene liposomen biedt relatief facile aanpassingsvermogen aan andere allergische of auto-immune modellen waarbij Pathogeen antilichamen.

Vervoeging van de proteïne van belang met DSPE-PEG(2000) kan worden aangetoond door het uitvoeren van een vermindering een toename in tonen moleculair gewicht in vergelijking met de unconjugated proteïne. Figuur 1A toont een representatieve gel van anti-muis IgM F(ab) fragment geconjugeerde PEG-DSPE, waarin een bandshift kDa 2-3 voor de gedenatureerde proteïne. Merk op dat ongeveer 50% van het eiwit lijkt te worden gewijzigd, die verwachting gezien het feit d...

Beschreven is de voorbereiding van de antigene Liposomale nanodeeltjes en hun gebruik in stimulerende B-cel activatie in vitro en in vivo. Consistente en robuuste antilichaam reacties geleid tot de ontwikkeling van een nieuw model van de pindaallergie. Het protocol voor het genereren van antigene liposomen kan worden uitgebreid tot verschillende antigenen en immunisatie modellen.

Antigene liposomen voor generatie van ziekte-specifieke antilichamen

Antibody responses provide critical protective immunity to a wide array of pathogens. There remains a high interest in generating robust antibodies for ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van immunologie, zoals hoe witte bloedcellen geactiveerd, en hoe allergieën voor individuele allergenen ontwikkelen? Het belangrijkste voordeel van dit robuuste en reproduceerbare allergiemuismodel is dat minder muizen kunnen worden gebruikt om een lagere variantie met een experimentele populatie op te leveren. Nieuwe immunotherapieën om immuunreacties te controleren vereisen robuuste muismodellen als een eerste middel om de werkzaamheid in vivo te testen.Zo, de implicaties van deze techniek uit te breiden tot allergie immunotherapie. Hoewel deze methode inzicht kan geven in allergieën, kan deze ook worden toegepast op andere systemen, zoals auto-immuniteit waarbij ongewenste antilichaamreacties een belangrijke rol spelen bij ziekten. Over het algemeen zullen individuen die nieuw zijn bij deze methode worstelen vanwege gebrek aan ervaring in het werken met liposomale nanodeeltjes of een onervarenheid met de technieken die nodig zijn in het muiswerk.Begin met het toevoegen van 2,5 molaire equivalent van de heterobifunctionele crosslinker aan het eiwit en het plaatsen van de reactie op een oscillerende

antigenic-liposomes-for-generation-of-disease-specific-antibodies

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

De technische aspecten van het uitvoeren van LIPS (Luciferase Immunoprecipitatie Systems) worden beschreven. De algemene benadering bestaat uiten chimere genen die coderen voor antigenen gefuseerd met Renilla luciferase (RUC) in zoogdiercellen. Ruwe Ruc-antigeen extracten worden dan voorbereid en, zonder zuivering, werkzaam in de immunoprecipitatie testen op antilichamen te kwantificeren.

Antilichaam Profiling door Luciferase Immunoprecipitatie Systems (LIPS)

Bron: Heidbuechel, J. P., Engeland, C. E. Paramyxoviruses for Tumor-targeted Immunomodulation: Design and Evaluation Ex Vivo. J. Vis. Exp. (2019)Deze video demonstreert de generatie van recombinante mazelvirussen met behulp van liposomen om plasmiden die het virale antigenoom en essentiële helper-eiwitten coderen, af te leveren in producentencellen. Het getranscribeerde en gerepliceerde RNA leidt tot de vorming van virale partikels die immunostimulerende en fluorescerende reporter-eiwitten tot...

Generatie van een recombinant mazelenvirus dat een immunostimulerend eiwit codeert

This video showcases the assessment of B cell activation through the utilization of antigenic liposomes. B cells treated with calcium-sensitive Indo-1 dye are distinguished using flow cytometry, and their violet-to-blue fluorescence ratio is analyzed. As the cells encounter antigenic liposomes, it triggers B cell activation through calcium influx, progressively enhancing the violet-to-blue fluorescence signal ratio over time.

Monitoring B Cell Activation with Antigenic Liposomes using a Calcium-Flux Assay

Het doel van dit protocol is om cationische/anionische liposomen met een neuro-targeterend peptide te gebruiken als een CNS-afleversysteem om siRNA in staat te stellen de BBB over te steken. De optimalisatie van een afleversysteem voor behandelingen, zoals siRNA, zou meer behandelingsopties mogelijk maken voor prionen en andere neurodegeneratieve ziekten.

Levering van therapeutische siRNA het CZS gebruiken kationische en anionische liposomen

Een geoptimaliseerd protocol wordt gepresenteerd voor de generatie van monoklonale antilichamen op basis van de hybridoma-technologie. Muizen werden geïmmuniseerd met een immunoconjugaat. Miltcellen werden gefuseerd door PEG en een elektrische impuls met onsterfelijke myeloomcellen. Antilichaam-producerende hybridoma-cellen werden geselecteerd door HAT en antigeen-specifiek ELISA-screening.

Genereren van monoklonale muizenantilichamen door Hybridoma Technology

Beschrijven we een methode voor de productie van menselijke antilichamen specifiek voor een antigeen van belang vanaf zeldzame B-cellen die in menselijk bloed circuleren. Generatie van deze natuurlijke antilichamen is efficiënt en snel, en de verkregen antilichamen kunnen onderscheid maken tussen sterk verwante antigenen.

Generatie van discriminatoire menselijke monoklonale antistoffen uit zeldzame antigeen-specifieke B-cellen in bloed circuleert

Dit artikel bevat een gedetailleerd protocol voor de voorbereiding en de evaluatie van monoklonale antistoffen tegen natuurlijke producten voor gebruik in verschillende immunoassay. Deze procedure omvat immunisatie, celfusie, indirecte competitieve ELISA voor positieve kloon screening en monoclonal hybridoma voorbereiding. De specificaties voor de karakterisering van het antilichaam met behulp van MALDI-TOF-MS en ELISA analyses zijn ook beschikbaar.

Generatie van monoklonale antistoffen tegen natuurlijke producten

Hier beschrijven we een protocol voor het genereren van kationische nanoliposomes, die is gebaseerd op de methode van de droge-film en kan worden gebruikt voor de veilige en efficiënte levering van in vitro getranscribeerd boodschapper-RNA.

Generatie van kationische Nanoliposomes voor de efficiënte levering van In Vitro getranscribeerd Messenger RNA

Dit protocol beschrijft een efficiënte celvrije methode voor de productie van hoogwaardig proteoliposoom door middel van een bilayer-dialysemethode met behulp van een tarwecelvrij systeem en liposomen. Deze methode biedt geschikte middelen voor functionele analyse van membraaneiwitten, screening van medicijndoelen en ontwikkeling van antilichamen.

Celvrije productie van proteoliposomen voor functionele analyse en antilichaamontwikkeling gericht op membraaneiwitten

Hier presenteren we een protocol om neutralisatie-epitopen te detecteren op antigeen-displaying virusachtige deeltjes (VLP's). Immunoprecipitatie van het van het humaan immunodeficiëntievirus (HIV) afgeleide VLP's wordt uitgevoerd met behulp van envelop glycoproteïnen-specifieke monoklonale antilichamen gekoppeld aan eiwit G-geconjugeerde magnetische kralen. Gevangen VLP's worden vervolgens onderworpen aan SDS-PAGE en Western blot-analyse met behulp van virale kerneiwit Gag-specifieke...

Detectie van neutralisatiegevoelige epitopen in antigenen die worden weergegeven op op virusachtige deeltjes (VLP) gebaseerde vaccins met behulp van een capture-assay

Leer de bereiding van antigene liposomale nanopartikelen voor immunologie en allergieonderzoek met muismodellen. Deze methode genereert robuuste antilichaamreacties en vereist minder dieren.

Antigene liposomen voor generatie van ziekte-specifieke antilichamen

Meer video's verkennen