October 25th, 2018
Hier beschrijven we een protocol voor het produceren van oogsten naalden die kunnen worden gebruikt voor het verzamelen van full-dikte huidweefsel zonder donor site littekens. De naalden kunnen worden gecombineerd met een systeem voor het eenvoudig verzamelen om hoogvolume oogsten.
Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van essentiële vragen in het huidweefsel regeneratie veld dat is hoe de verschillende celtypes en structuren die zijn opgenomen in de natuurlijke huid te vervangen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat autologe volle dikte huid kan worden verzameld met minimale donor site morbiditeit. Het aantonen van de procedure zal Bill Farinelli zijn, die een onderzoeksmedewerker in ons lab is.
Begin deze procedure met het instellen van de productiefase zoals beschreven in het tekstprotocol. Installeer twee afgeknipte wielen concentrisch op het draaigereedschap. Gebruik een kleinere lagere grid diamant cutoff wiel over een grotere hogere grid steen cutoff wiel.
Plaats een bovenliggende lichtbron met een verstelbare arm over het draaigereedschap met het licht gericht op de snijwielen. Om de visualisatie te verbeteren, plaats een ontleden microscoop over de productie-setup, zodat het oculair is gericht op de snijschijven. Draag bij het hervormen van de naaldpunt beschermende brillen en een chirurgisch masker om te voorkomen dat fijne metaaldeeltjes de ogen of luchtwegen binnendringen.
Kies hypodermische naalden van de juiste maatgrootte op basis van experimentele vereisten. Markeer de beoogde lengte op elke oogstnaald. Laat de naald loodrecht op het draaigereedschap met de kracht op het gebruik van de rand van de buitenste snijschijf af te snijden van de overtollige lengte van de naald op het punt gemarkeerd.
Sluit de verkorte botte naald aan op de vrouwelijke Luer lock connector op het productiestadium. Pas de horizontale rotatiefase zo aan dat de naald zich in een hoek van 12 graden parallel aan de snijschijven op het draaigereedschap bevindt. Zet het bovenleidinglicht aan en pas de positie aan terwijl u de naald onder vergroting observeert totdat het licht wordt gereflecteerd op de middellijn van de naald.
Stroom op het draaigereedschap. Gebruik vervolgens de vertaalfase om de naald naar de binnenste snijschijf te brengen. Houd het voortschrijden van de naald langzaam tegen de snijschijf totdat de snijschijf ongeveer de middellijn van de naald bereikt.
Beweeg het gesneden naaldoppervlak langzaam van het binnenruitwiel op het buitenste stenen wiel om het gesneden naaldoppervlak af te maken met een fijnere lak. Trek de naald uit de buurt van de snijschijf. Draai met behulp van de verticale rotatiefase de naald 180 graden.
Herhaal deze stappen om de andere kant van de naald te hervormen. Verwijder nu de naald uit de productiefase. Reinig de binnenboring met een metalen draad die iets kleiner is dan de binnendiameter van de naald.
Met behulp van een scherpe houten stok, verwijder alle bramen die nog kunnen worden bevestigd aan de randen van de nieuw gevormde naald. Wanneer een hoog volume microkolomen nodig is, verwijder de zuiger uit een spuit van 20 milliliter. Bevestig vervolgens de spuit aan een zuigadapter.
Maak de montage compleet door een oogstnaald aan de spuit te bevestigen. Gebruik een stuk steriele zuigbuis om de zuigadapter aan te sluiten op een steriele zuigbus. Zorg ervoor dat het oogstapparaat is aangesloten op een busingang die het mogelijk maakt om ongehinderd vloeistof in de bus te laten stromen.
Sluit het apparaat nu aan op een negatieve drukbron. Oogst de microkolumns door de oogstnaald in de huid te steken. Dompel de oogstnaald tijdens de oogstprocedure met tussenpozen in een container van steriele zoutoplossing om het systeem door te spoelen.
Houd bij de hand een metalen draad of een naald die iets kleiner is dan de binnendiameter van de oogstnaald. Als de naald verstopt raakt, kan deze worden gewist door de metaaldraad in de naaldboring te plaatsen. Wanneer de gewenste hoeveelheid microkolomen zich in de bus hebben opgehoopt, koppelt u het apparaat los van de zuigkracht.
Giet vervolgens de inhoud van de zuigbus uit door een filter om de microkolomen te verzamelen. Hier getoond is een afgewerkte oogstnaald bekeken vanaf de voorkant en vanaf de zijkant. Let op de twee snijpunten bij de punt.
De rooinaalden moeten microkolomen kunnen verzamelen uit huidweefsel met een volle dikte met een slagingspercentage van ongeveer 80 tot 90%. In dit cijfer vertegenwoordigen de vinkjes een millimeter. Elke microkolom moet opperhuid, dermis en onderhuids vet bevatten.
Microcolumns kunnen direct worden toegepast op wondgenezing of ze kunnen worden gecombineerd met verschillende matrixmaterialen om combinatieconstructies te produceren. Microcolumns kunnen ook worden gehandhaafd in de cultuur voor in vitro studies. Tijdens het uitvoeren van high-volume oogsten, is het belangrijk om te onthouden om een intermitterende zoutoplossing flush op te nemen.
Hoewel deze methode is ontworpen voor herstel van de huidwond, kan een soortgelijk principe worden toegepast op andere orgaansystemen, zoals spieren waar autologe weefseltransplantatie nodig is.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Dit artikel beschrijft een protocol voor het verzamelen van huidweefsel met volledige dikte met behulp van gespecialiseerde naalden die littekenvorming op de donorplaats minimaliseren. De techniek is bedoeld om het verzamelen van grote hoeveelheden weefsel te vergemakkelijken met behoud van de integriteit van de huid.