Name: Potentiëring van antikanker antilichaam werkzaamheid door Antineoplastische Drugs: detectie van antilichaam-drug synergie met de combinatie Index vergelijking (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00.000+00:00
Duration: 15 min 4 s
Description: Leer hoe u synergie tussen antikanker antilichamen en antineoplastische geneesmiddelen evalueert met de combinatie-index vergelijking van Chou en Talalay in preklinische modellen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Steun: Fondation de Projet de L 'Université de Nantes, les Bagouz' à Manon, La Ligue contre le Cancer comité de Loire-Atlantique, comité du Morbihan en comité de Vendée, une roos pour S.A.R.A.H, L'Etoile de Martin en la Société Française de Lutte contre les Kanker et les leucémies de L'Enfant et de L'adolescent (SFCE). M.B. en J.F. worden ondersteund door La Ligue Contre Le Cancer. De auteurs bedanken de UTE-faciliteit van de structuur Fédérative de Recherche François Bonamy. De auteurs worden Dr. S. Suzin (Inserm, Parijs) voor het verstrekken van de IMR5 cellen en mevrouw H. Estéphan ook bedanken voor haar technische bijstand.

Huisvesting van dieren en experimentele procedure werden goedgekeurd door de Franse regering (overeenkomsten #C44-278 en #APAFIS 03479.01). Verzorging van de dieren en de procedures werden uitgevoerd onder Richtlijn EU 2010/63/EG en Franse wet #2013-118 betreffende de bescherming van dieren die voor wetenschappelijke doeleinden worden gebruikt.
1. evaluatie van de interactie van de Drug tussen mAb 8B6 en Topotecan In Vitro
<ol><li>bereiding van de monsters van de 96-Wells Let op: Raadpleegt de instelling Comité op het gebied van gezondheid en veiligheid en lokale verordening regels aan laboratorium veiligheid gerelateerde. Lees de informatie van het materiaal en veiligheidsinformatieblad voordat u gaat werken met media, cellijnen of reagentia. Gebruik van juiste steriele techniek en werken in een laminaire flow-kap. Alle oplossingen/apparatuur die worden gebruikt voor het manipuleren van de cellen moet steriel zijn. Opmerking: Het volgende protocol is ontworpen voor gebruik met aanhangend cellen. Wijzigingen zijn verplicht tot het toepassen van de methode op nonadherent cellen groeien in de opschorting; Dit protocol maakt gebruik van viervoud voor elke experimentele voorwaarde.<ol>
<li>IMR5 cellen in een maatkolf van T75 groeien.</li>
		<li>Op de eerste dag (dag 0), de cultuur van de cel onder een microscoop om te controleren de cel confluentie te observeren. Het medium van de cel van de kolf gecombineerd, wassen met 5 mL-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en voeg 3 mL 0,05% ethyleendiamminetetra azijnzuuroplossing (NA2EDTA) / PBS oplossing. De kolf terugkomen in de incubator voor 3 min (37 ° C, 5% CO2).</li>
		<li>Onderzoeken van de cultuur van de cel onder een Microscoop voor mobiele-detachement. Opmerking: Indien nodig, terug de kolf naar de incubator voor een extra 3 tot en met 5 min, afhankelijk van het celtype tumor.</li>
		<li>Voeg 10 mL van volledige cel medium aan op de maatkolf en de celsuspensie overbrengen in een steriele 15 mL conische buis. De cellen gedurende 5 minuten bij 300 x gcentrifugeren. Met behulp van een hemocytometer cellen tellen.</li>
		<li>Verwijderen en verwijder het supernatant. Resuspendeer de pellet cel in volledige groeimedium. Het gemiddeld volume te verkrijgen van een eindconcentratie van 1 x 105 cellen/mL.</li>
		<li>Zaad 84 wells van een 96-Wells cultuur plaat met 104 cellen, oftewel 100 µL celsuspensie. Volg de experimentele lay-out weergegeven in Figuur 2.</li>
		<li>Incubeer de cellen gedurende 18 uur in de cel incubator (37 ° C, 5% CO2).</li>
	</ol></li>
	<li>Drug oplossing voorbereiding Opmerking: Voor drug/mAb sensibilisatie studies, wijzigt u de timing, de lengte en de behandeling van de concentratie aan de specifieke drug/mAb in kwestie. Let erop dat de beginconcentratie 3 x de uiteindelijke concentratie is.<ol>
<li>De volgende ochtend (dag 1), bereiden de volgende drug-oplossingen met behulp van volledige groeimedium.<ol>
<li>
mAb oplossing voorbereiding
			<ol>
<li>MAb in 500 µL van volledige groeimedium om een werkoplossing antilichaam met een mAb-concentratie van 240 µg/mL verdund.</li>
				<li>Vijf twee-voudige seriële verdunningen uitvoeren zoals aangegeven in Figuur 2.</li>
			</ol>
</li>
			<li>
Topotecan oplossing voorbereiding
			<ol>
<li>Verdund, als boven, de drug in 500 µL van volledige groeimedium om een werkoplossing drug met een eindconcentratie van 120 nM.</li>
				<li>Vijf twee-voudige seriële verdunningen uitvoeren zoals aangegeven in Figuur 2.</li>
			</ol>
</li>
			<li>
Antilichaam en drug voorbereiding van de oplossing
			<ol>
<li>Verdun de drug en mAb oplossingen in 500 µL van volledige groeimedium om een oplossing op 120 nM drug en 240 µg/mL mAb (werkende oplossing).</li>
				<li>Vijf twee-voudige seriële verdunningen uitvoeren zoals aangegeven in Figuur 2.</li>
			</ol>
</li>
		</ol>
</li>
		<li>Om te komen tot de uiteindelijke concentratie, breng u 50 µL van elke drug-oplossing in de overeenkomstige putten, zoals aangegeven in de experimentele lay-out ( Figuur 2). Opmerking: Breng 50 µL van volledige groeimedium in de onbehandelde cel putten, zoals aangegeven in Figuur 2.</li>
		<li>Incubeer de cellen gedurende 72 uur in de incubator (37 ° C, 5% CO2).</li>
	</ol></li>
	<li>MTT assay
	<ol>
<li>Voeg 10 µL van MTT reagens oplossing in elk putje.</li>
		<li>Incubeer bij 37 ° C gedurende 4 uur.</li>
		<li>Voeg 100 µL van lysis van de oplossing (10% SDS in 0,01 M HCl) in elk putje, met behulp van een meerkanaalspipet, en meng door pipetteren.</li>
		<li>Incubeer bij 37 ° C gedurende 4 uur in een bevochtigde kamer (95% vochtigheid).</li>
		<li>Lees de absorptie bij 570 nm (een570) en 620 nm (een620) met behulp van een spectrofotometer. Opmerking: Meng elk monster weer door pipetteren vóór het lezen van de extinctie; absorptie bij 620 nm kunt de correctie van niet-specifieke achtergrondwaarden.</li>
		<li>Berekening van de gecorrigeerde extinctie: gecorrigeerd absorptie = een570- een620.</li>
		<li>De levensvatbaarheid van de cellen als volgt berekenen: levensvatbaarheid van cellen = 100 x (gemiddelde gecorrigeerde extinctie proeven / controle van de gemiddelde gecorrigeerde extinctie).</li>
		<li>De Fractie geteisterde waarden (Fa) met behulp van de volgende vergelijking berekenen: 1 - (monster gemiddelde gecorrigeerde extinctie / controle van de gemiddelde gecorrigeerde extinctie).</li>
	</ol></li>
	<li>Software van de analytische simulatie van de interactie van de drug voor single en drug combinatie studies
	<ol>
<li>Voer de simulatiesoftware om het startvenster te openen.</li>
		<li>Klik op de knop Nieuw Experiment om de Main -venster te openen.</li>
		<li>Typ de naam van het experiment in het venster naam . Opmerking: Een datum kan worden toegevoegd in het venster van de datum .</li>
		<li>Klik op de knop Nieuwe Single Drug .</li>
		<li>Typ de naam in het venster van de Volledige naam .</li>
		<li>Typ de afkorting in het Abbrev -venster.</li>
		<li>Typ de drugseenheid van de concentratie in het venster eenheden .</li>
		<li>Voer Gegevens punt 1 dosis en VA-waarde, drukt u op Enter.</li>
		<li>Herhaal deze stap totdat alle gegevenspunten worden ingevoerd.</li>
		<li>Klik op de knop gereed .</li>
		<li>Volg dezelfde stappen voor het invoeren van mAb gegevenspunten. Opmerking: Gebruik dezelfde concentratie eenheid zoals wordt gebruikt door Drug.</li>
		<li>Klik op de knop Nieuwe Drug Combo .</li>
		<li>Selecteer Drug en mAb.</li>
		<li>Constante verhouding selecteren en klik op OK.</li>
		<li>Typ de naam in het venster van de Volledige naam .</li>
		<li>Typ de afkorting in het Abbrev -venster.</li>
		<li>Typ de drug/mAb-verhouding in de verhouding van venster.</li>
		<li>Gegevens punt 1 dosis en op Enterdrukt. Opmerking: De automatisch berekend de doses van mAb en Combo.</li>
		<li>Voer de Gegevens punt 1 Fa -waarde en druk op Enter.</li>
		<li>Herhaal deze stap totdat alle gegevenspunten worden ingevoerd.</li>
		<li>Klik op de knop gereed en klik vervolgens op de knop Rapport genereren .</li>
		<li>Drugs en mAb selecteren en klik vervolgens op OK.</li>
		<li>Selecteer de keuzelijst met invoervak en klik vervolgens op OK.</li>
		<li>Selecteer koptekst, CI tabelen samenvattende tabel. Klik vervolgens op OK.</li>
		<li>Typ de bestandsnaam van het analysis bestand en klik op Opslaan om het rapport te genereren. Opmerking: Na het klikken op OK, het rapport wordt automatisch geopend in van de computer standaardwebbrowser.</li>
		<li>Kies afdrukken uit het bestandsmenu van de webbrowser als u wilt afdrukken van het rapport. Het verslag bevat een samenvatting tabel sectie titel, datum, bestandsnaam, beschrijving opmerking, parameters (m, Dm en r), ED50 voor een agent gebruikt in monotherapie of in combinatie, en de CI-tabel voor elke combinatie bij ED50, ED 75, ED90en ED95. Opmerking: CI waarde < 1 geeft aan synergie, CI waarde = 1 geeft aan additiviteit en een CI-waarde van > 1 geeft aan antagonisme.</li>
	</ol></li>
</ol>2. productie van menselijke Neuroblastoma Xenografts in Nonobese diabetische knik Scid Gamma muizen (NSG muizen)
Opmerking: Sluit elke besmetting van de cultuur van de cel. Omdat de kelder membraan matrix een gel boven 5 ° C vormt, moeten alle cultureware of media komen in contact met het membraan van de kelder matrix reagens prechilled/ijs-koud. Houden de kelder membraan matrix op ijs tijdens het hele proces.
<ol><li>
Voorbereiding van de celsuspensie IMR5
	<ol>
<li>Ontdooi de kelder membraan matrix reagens 's nachts door dompelen de flacon in ijs in een koelkast 4 ° C vóór gebruik.</li>
		<li>Op dag 0, oogsten de gekweekte IMR5 cellen zoals beschreven hierboven.</li>
		<li>De cellen overbrengen in een conische tube van 15 mL en centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min.</li>
		<li>Verwijder het supernatant. Wassen van de cellen 2 x met 15 mL ijskoud PBS, en bereid een celsuspensie van 5 x 107 cellen/mL in ijskoude PBS. Opmerking: Indien nodig, de celsuspensie kunnen overbrengen naar een 1,5 mL microcentrifuge buis.</li>
		<li>Swirl de kelder membraan matrix flacon. Opmerking: De kelder membraan matrix reagens moet ontdooid en verspreid.</li>
		<li>Voeg een hoeveelheid kelder membraan matrix reagens toe en meng het door pipetteren om te verkrijgen van een celsuspensie van 2.5 x 107 cellen /mL.</li>
		<li>Houd de celsuspensie op ijs.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Voorbereiding van de muizen Opmerking: De muizen moeten zes tot zeven weken oud.<ol>
<li>Muizen onder een specifieke pathogenen vrije voorwaarde te handhaven.</li>
		<li>Toestaan dat een drie - tot vijf - daagse acclimatisatie periode na de muizen zijn aangekomen.</li>
		<li>Op de dag van inenting, scheren de flank waar de injectie zal worden (zie stap 2.3.6).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Voorbereiding van de tumor cel injectie Opmerking: Houd de ijskoude kelder membraan matrix celsuspensie aseptische gedurende de hele procedure.<ol>
<li>Meng de cellen en de celsuspensie zorgvuldig te trekken in een 1 mL injectiespuit met een naald 21 G gemonteerd.</li>
		<li>Controleren om er zeker van te zijn dat er geen luchtbellen in de spuit.</li>
		<li>Desinfecteer het gebied van de inoculatie van de muis met een antiseptische oplossing.</li>
		<li>Knijp zachtjes de huid van de muis op de flank tussen vingers, op de injectieplaats.</li>
		<li>Plaats de naald precies in de plooi van de huid. Plaats de naald niet diep in het weefsel om een subcutane injectie.</li>
		<li>Injecteren subcutaan 100 µL celsuspensie (d.w.z., 2.5 x 106 cellen) IMR5 in de lagere rechter flank van de muizen.</li>
		<li>Draai de spuit om te voorkomen lekkage en intrekken van de naald.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Bewaking van veranderingen in het lichaamsgewicht en tumorgroei
	<ol>
<li>Meet de lengte (A) en de breedte (B) van de tumor met een remklauw.</li>
		<li>Bereken het volume van de tumor met behulp van de formule (A x B2) x 0,5.</li>
		<li>Therapie worden gestart wanneer de tumoren hebben een gemiddelde volume van ~ 50-60 mm3bereikt.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. geneesmiddel en antilichaam administratie in muizen
<ol><li>
Intraveneuze toediening van mAb 8B6
	<ol>
<li>Zorgvuldig Vul een 1 mL injectiespuit met een naald 25 G met mAb oplossing gemonteerd.</li>
		<li>Plaats de muis onder een warmte lamp voor 10 min de staart ader te verwijden.</li>
		<li>Het beperken van de muis in een knaagdier afdekking.</li>
		<li>Desinfecteer het gebied van de inoculatie van de muis met een antiseptische oplossing.</li>
		<li>Plaats de naald evenwijdig aan de staart ader, doordringende 2-4 mm in het lumen terwijl het houden van de schuine kant van het gezicht van naald omhoog (figuur 3A).</li>
		<li>Intraveneus injecteren van 100 µL van antilichaam oplossing (i.v.).</li>
		<li>Als de injectie is voltooid, druk zachtjes de injectieplaats te voorkomen bloeden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Intraperitoneale toediening van topotecan
	<ol>
<li>Trekken de drug-oplossing in een 1 mL injectiespuit met een naald 25 G gemonteerd.</li>
		<li>Houd de muis in een liggende positie, met haar achterste einde licht verhoogde.</li>
		<li>Desinfecteer het gebied van de inoculatie van de muis met een antiseptische oplossing.</li>
		<li>Zoek van de muis buik middellijn en mentaal het verdelen van de buik in kwadranten. Zoek de injectieplaats in het linker- of onderste Kwadrant (figuur 3B).</li>
		<li>Steek de naald in de buik (5 mm diep) ~ 10° hoek, in de linker- of onderste Kwadrant.</li>
		<li>Injecteren van 100 µL van drug oplossing intraperitoneally (i.p.).</li>
		<li>Desinfecteer de inoculatie-site.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theoretical+basis%2C+experimental+design%2C+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li>
<li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+in+combating+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li>
<li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28(2013).</li>
<li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Re%3A+%22Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population.%22+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012%3A+33%3B291-6%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li>
<li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li>
<li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies%3A+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li>
<li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hematology+%26+Oncology%22%5BJournal%5D)">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology & Oncology. 6, 1(2013).</li>
<li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li>
<li>Retter, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+proapoptotic+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody+and+evaluation+of+its+therapeutic+effect+on+melanoma+and+small+cell+lung+carcinoma+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts.</a> Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).</li>
<li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+induction+of+human+lung+cancer+cell+line+in+multicellular+heterospheroids+with+humanized+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody.</a> Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).</li>
<li>Cochonneau, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle+arrest+and+apoptosis+induced+by+O-acetyl-GD2-specific+monoclonal+antibody+8B6+inhibits+tumor+growth+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo.</a> Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).</li>
<li>Chou, T. C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChou%2C+TC+%22CompuSyn+for+drug+combinations%3A+PC+software+and+user%E2%80%99s+guide%3A+a+computer+program+for+quantitation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combinations%2C+and+the+determination+of+IC50+and+ED50+and+LD50+values%22">CompuSyn for drug combinations: PC software and user’s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values</a>. , ComboSyn Inc. Paramus, NJ. (2005).</li>
<li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220(2011).</li>
<li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232(2017).</li>
<li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD%2FSCID%2FIL2+receptor+%7Bgamma%7D+chain%28null%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li>
<li>Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+condition+scoring%3A+a+rapid+and+accurate+method+for+assessing+health+status+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice.</a> Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).</li>
<li>Teicher, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assays+for+in+vitro+and+in+vivo+synergy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Assays for in vitro and in vivo synergy.</a> Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).</li>
<li>White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+nonlinear+mixture+response+surface+paradigm+for+the+study+of+synergism%3A+a+three+drug+example%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Metabolism%22%5BJournal%5D)">A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example.</a> Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).</li>
<li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival%3A+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li>
<li>Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+XTT+cell+proliferation+assay+applied+to+cell+layers+embedded+in+three-dimensional+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Assay+and+Drug+Development+Technologies%22%5BJournal%5D)">The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix.</a> Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).</li>
<li>Thompson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+of+topotecan+in+combination+with+vincristine+for+treatment+of+pediatric+solid+tumor+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts.</a> Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).</li>
<li>Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+design+and+sample+size+determination+for+testing+synergism+in+drug+combination+studies+based+on+uniform+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Statistic+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures.</a> Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).</li>
<li>Tang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+EPHB6%2C+EFNB2%2C+and+EFNB3+expressions+in+human+neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Proceding+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma.</a> Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).</li>
<li>Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research+and+Treatment%22%5BJournal%5D)">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li>
<li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li>
<li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission%3A+short-term+curative+effects+and+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Nan+Fang+Yi+Ke+Da+Xue+Xue+Bao%22%5BJournal%5D)">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li>
<li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8%3A+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clininical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li>
<li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Basic+Clinical+Pharmacy%22%5BJournal%5D)">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li>
<li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab%3A+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li>
<li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD-scid+IL2rgamma%28null%29+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li>
<li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Bladder+Cancer%22%5BJournal%5D)">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li>
</ol>

S.Fa. zijn, J.F., S.B. aangewezen als uitvinders van in afwachting van de octrooien op de klinische toepassing van anti-O-acetyl-GD2 therapeutische antistoffen.

Om te voorspellen het effect van de interactie van de drug, drie methoden kunnen worden gebruikt: de isobologram methodologie17, de niet-lineaire mengsel model18en de combinatie index1. Combinatie index analyse is de meest gebruikte omdat de toepassing ervan wordt vereenvoudigd door de beschikbaarheid van een gebruiksvriendelijke computerprogramma. Voor dit doel, we eerst de dosis / effect-reactie van elke agent gebruikt alleen of in combinatie, door...

De conventionele aanpak in de behandeling van een groot aantal verschillende soorten kanker was gebaseerd op monotherapie. Zelfs als het nog steeds in veel gevallen gebruikt wordt, ontmoette deze methode verscheidene obstakels leidt tot kiezen voor gecombineerde therapieën2. In het bijzonder zijn de kankercellen gevoeliger voor het ontwikkelen van weerstand bij het behandeld met een enkele drug door inducerende alternatieve overleving mechanismen3, wat resulteert in therapeutisch falen in patiënten4. Bovendien, in monotherapie, drugs zijn meestal bestuurd bij een hoge dosis. Deze situatie vaak resulteert in het vóórkomen van sterke dosis-afhankelijke bijwerkingen die kunnen worden ondraaglijk en kracht van de artsen om te stoppen met de behandeling2. Om deze redenen, de vereniging van antikanker moleculen is nu de voorkeur aan monotherapie.
Ideale drug combinaties zou die in synergie tegen tumorcellen, zonder verhoogde toxiciteit tegen normale cellen handelen. Synergie verwijst naar de interactie van twee of meer drugs die produceert een therapeutisch effect groter is dan de som van elke individuele drug afzonderlijk handelen. Dergelijke interactie kunnen resulteren in betere klinische therapeutische werkzaamheid2. Het beperkt behandeling weerstand verhoogt de werkzaamheid en toxiciteit2kan ook worden verminderd. In feite, kan de dosering van elk medicijn te verlagen hun bijwerkingen door te richten verschillende routes worden verminderd. Bovendien kan een van de moleculen ook dienen als een sensibiliserende agent tegen kankercellen. Het effect van de tweede drug kan worden versterkt op gesensibiliseerde cellen en minder doseringen kunnen gebruikte5.
Gecombineerde therapie kan bevatten twee of meer chemotherapeutische geneesmiddelen en/of biologics, zoals monoclonal antilichamen6. Deze mAbs speciaal te richten op cellen uitspreken van een cel oppervlakte-antigeen van belang en zijn in staat om te doden van tumorcellen via immunologische wegen, met inbegrip van antilichaam afhankelijk cel-gemedieerde cytotoxiciteit (ADCC), met de betrokkenheid van immuun effector cellen 7, en aanvulling-afhankelijke cytotoxiciteit (CDC)6. Ze kunnen ook handelen via een niet-immunologische mechanisme gemedieerd door apoptosis8,9,10,11. In dit geval kan de inductie van het proces van geprogrammeerde celdood sensibiliseren kankercellen verzwakken van hun functie en de bijbehorende chemotherapeutische drugs doeltreffender te maken in een lagere dosering. Als zodanig, proapoptotic mAb zijn goede kandidaten voor het ontwerpen van combinatie regimes met Antineoplastische drugs.
Verschillende wiskundige modellen zijn beschreven om te beoordelen van de drug synergie; een van hen is gebaseerd op de combinatie index methode1. Deze methode is gebaseerd op het beginsel van de mediaan-effect ontwikkeld door Chou1. De mediaan-effect vergelijking correleert de dosis van de drug en drug effecten als volgt.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
Hier, is D de dosis van het geneesmiddel; DM is de mediaan-effect dosis; FA is de breuk die beïnvloed door de dosis; m is de exponent die de vorm van de dosis / effect-perceel1betekent. De dosis van de mediaan-effect wordt gebruikt voor het berekenen van de dosis Dx van een medicament dat remt of "x" procent van cellen doodt. De CI-waarde wordt dan berekend om te beoordelen van het additieve effect van de combinatie van drugs, als volgt1.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
CI de waarde 1 geeft aan een additief effect en CI de waarde < 1 geeft aan een synergie-effect, terwijl de waarde van een CI van > 1 geeft aan antagonisme1. De toepassing van deze methode wordt verder bevorderd door de beschikbaarheid van een computerprogramma, CompuSyn, die synergie en antagonisme op alle doses bepaalt of effect-niveaus gesimuleerd automatisch12.
Onze fractie heeft ontwikkeld de mAb 8B6 specifiek voor O-acetyl-GD2 ganglioside (OAcGD2) neuroblastoom antigeen13 en verder aangetoond dat deze mAb staat voor het opwekken van de dood van de cel met kenmerken van apoptosis11is. Om te testen of mAb 8B6 kunnen cellen van het neuroblastoom aan de Antineoplastische agent topotecan sensibiliseren, aangepast we de bovengenoemde methode ontwikkeld door Chou1. Eerst bepalen we de effectieve dosis 50 (ED50) waarden van mAb 8B6 en topotecan. Vervolgens de cellen van het neuroblastoom met equipotent verhoudingen van de twee verbindingen op basis van ED50 waarden zijn blootgesteld aan de CI-waarden met behulp van de bovengenoemde simulatiesoftware bepalen. Met deze methode kunt ons om aan te tonen van de synergie tussen mAb 8B6 en topotecan in vitro. Vervolgens beschrijven we een protocol voor de beoordeling van de werkzaamheid en de veiligheid van deze combinatie regime in vivo. Dit protocol kan gemakkelijk worden toegepast om te selecteren van krachtige en veilige antikanker mAb en chemotherapeutische agent combinaties in preklinische studies. Een schematische weergave van deze studie wordt gegeven in Figuur 1.

<table><tbody><tr><td>Cell Proliferation kit (MTT)</td><td>Roche</td><td>11-465-007-001</td><td></td></tr><tr><td>CompuSyn software</td><td>ComboSyn</td><td></td><td>Combosyn kan gratis worden gedownload via http://www.combosyn.com</td></tr><tr><td>Elektrisch scheerapparaat</td><td>Bioseb</td><td>BIO-1556</td><td></td></tr><tr><td>Foetaal runder serum</td><td>Eurobio</td><td>CVFSVFF00-01</td><td>10% verhit en geïnactiveerd foetaal runder serum in RPMI 1640</td></tr><tr><td>Firefox&nbsp;</td><td>Mozilla Corporation</td><td></td><td>Firefox kan gratis worden gedownload via http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td></tr><tr><td>Warmtelamp</td><td>Verre&amp;Quartz</td><td>4003/1R</td><td></td></tr><tr><td>Menselijke neuroblastoom IMR-5 cellijn</td><td>Accegen Biotechnology</td><td>ABC-TC0450</td><td>IMR-5 is een kloon van de menselijke neuroblastoomcel lijn IMR32 5459762. IMR-5 cellen werden vriendelijk ter beschikking gesteld door Dr. Santos Susin (U.872, Parijs, Frankrijk)</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Gibco</td><td>25030-024</td><td>2 mM in RPMI 1640</td></tr><tr><td>Lyse-oplossing&nbsp;</td><td>Roche&nbsp;</td><td>11-465-007-001</td><td></td></tr><tr><td>mAb 8B6</td><td>Universiteit van Nantes</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr><tr><td>Multiskan FC</td><td>Thermofischer Scientific&nbsp;</td><td>N08625</td><td></td></tr><tr><td>Naald 21G 1 &frac12;&nbsp;</td><td>BD Microlance</td><td>304432</td><td></td></tr><tr><td>Naald 25G 1</td><td>Terumo</td><td>NN-2525R</td><td></td></tr><tr><td>NSG muizen</td><td>Charles River Laboratories</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>Nunc MicroWell 96-wells microplates</td><td>Thermofisher</td><td>167008</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>VWR</td><td>L182-10</td><td></td></tr><tr><td>PBS, 0,05% EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>PC die Windows 7 draait</td><td>Microsoft</td><td></td><td>Windows 7 kan worden gekocht via http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td></tr><tr><td>Penicilline-Streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>100 eenheden/mL penicilline en 100 mg/mL streptomycine in RPMI 1640</td></tr><tr><td>Reagens reservoir</td><td>Thermofischer Scientific</td><td>8094</td><td></td></tr><tr><td>Muis beugel</td><td>Bioseb</td><td>TV-150-SM</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>31870-025</td><td></td></tr><tr><td>Spuit 1 mL</td><td>Henke Sass Wolf</td><td>5010.200V0</td><td></td></tr><tr><td>Topotecan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T2705</td><td></td></tr></tbody></table>

potentiëring van antikanker antilichaam werkzaamheid door antineoplastische drugs: detectie van antilichaam-drug synergie met de combinatie index vergelijking

Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Potentiëring van vijandige monoclonal antilichamen (mAb) door chemotherapeutische agenten vormt een waardevolle strategie voor het ontwerpen van effectiever en veiliger therapie tegen kanker. Wij bieden hier een protocol ter identificatie van een rationele combinatie bij het preklinische stap. Eerst beschrijven we een cel-gebaseerde test om te beoordelen van de synergie tussen antikanker mAb en cytotoxische medicatie, die gebruikmaakt van de combinatie index vergelijking van Chou en Talalay1. Het gaat hierbij om de meting van tumor cel drugs - en antilichaam-gevoeligheid met behulp van een MTT assay, gevolgd door een analyse van de geautomatiseerde computer voor het berekenen van de waarden van de index (CI) combinatie. CI waarden van < 1 geven synergie tussen geteste mAbs en cytotoxische stoffen1. Om te bevestigen de in vitro bevindingen in vivo, beschrijven we verder een methode voor de beoordeling van de werkzaamheid regime combinatie in een xenograft tumor model. In dit model vertragingen de gecombineerde regime aanzienlijk tumorgroei, wat in een aanzienlijke langere overleving in vergelijking met single-agent besturingselementen resulteert. Nog belangrijker is, blijkt de in vivo experimenten dat de combinatie regime wordt goed verdragen. Dit protocol staat toe de doeltreffende evaluatie van antikanker drug combinaties in preklinische modellen en de identificatie van rationele combinatie in klinische proeven te evalueren.

De representatieve resultaten en cijfers zijn aangepast met toestemming van eerder gepubliceerde werk14.
Anti-OAcGD2 mAb 8B6 verbetert synergetisch de remmende effecten van Topotecan op neuroblastoom celgroei lijn:
Om de drug en de concentraties van het antilichaam moet worden gebruikt voor de beoordeling van de synergie tussen ...

Dit protocol wordt beschreven hoe synergie tussen een antikanker antilichaam en Antineoplastische drugs in preklinische modellen met behulp van de combinatie index vergelijking van Chou en Talalay beoordelen.

Potentiëring van antikanker antilichaam werkzaamheid door Antineoplastische Drugs: detectie van antilichaam-drug synergie met de combinatie Index vergelijking

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

Immunotherapie in combinatie met chemotherapie is een innovatieve aanpak om efficiënte therapie bij kanker te ontwikkelen. De belangrijkste doelstellingen zijn het bereiken van synergetische, therapeutische effecten, dosis- en toxiciteitsreductie, en het minimaliseren of vertragen van de inductie van resistentie tegen geneesmiddelen. Echter, om praktische en ethische redenen, is het niet mogelijk om synergisme bij patiënten te bepalen. Voordat de combinatie in klinische proeven rechtstreeks wordt uitgevoerd, moeten dus prenicaptor-combinatiestudies, in vitro en/of bij dieren, worden uitgevoerd om de beweegredenen voor klinische studies te verkrijgen. Een eenvoudige robuuste methode voor de kwantificering van synergisme tussen geneesmiddelen is gebaseerd op combinatie-indexvergelijking ontwikkeld door Shouan Talale, zoals geïllustreerd in deze video. Met behulp van deze methode, en de geautomatiseerde simulatie, bewijzen we hier, het synergisme tussen Monoclonal Antibody 8B6, dat specifiek is voor de O-Acetyl-GD2 Ganglioside neuroblastoom antigeen en het chemotherapeutische medicijn Topotecan op neuroblastoomcellen. Kortom, na het bepalen van de effectieve dosis 50 waarden van elke verbinding in de menselijke IMO, 5 neuroblastoom cellijn, deze cellen werden geïntubeerd met billijke verhoudingen van de twee verbindingen, en de combinatie index waarden werden berekend met behulp van geautomatiseerde computersimulatie. Vervolgens bevestigden we deze resultaten in Vivo, in een IMO, 5 tumor xenografisch model. We kweekten IMR-5 cellen in een T75 fles, observeerden ze onder een microscoop, om celvloeiing te controleren. Asperate celmedium uit de kolf, wassen met 5 mL PBS. Voeg 3 mL van 0,05% EDTA/PBS-oplossing toe. Breng de kolf 3 minuten terug naar de couveuse. Bestudeer de celcultuur onder een microscoop voor celloslating. Voeg 10 mL volledig celmedium toe aan de kolf en breng de celsuspensie over in een steriele conische buis van 15 mL. Centrifuge gedurende vijf minuten bij 300 g.Count cellen met behulp van een hemocytometer. Verwijder en gooi de supernatant weg. Stel cellen opnieuw op in Complete Growth Medium.Pas het medium volume aan om de uiteindelijke concentratie van 100, 000 cellen/mL.Seed 84 putten, 96 goed kweekplaat met elk 10.000 cellen te verkrijgen, wat 100 microliter celsuspensie is. Incubeercellen gedurende 18 uur in de Cel Incubator.Verdun monoklonale antilichaam in 500 microliters van Complete Growth Medium om een antilichaam werkoplossing te verkrijgen met een monoklonale antilichaam concentratie 240 microgram per mL.Perform 5 tweevoudige seriële waanideeën zoals aangegeven in het protocol. Verdun het medicijn in 500 microliters van Complete Growth Medium om een medicijnwerkoplossing te verkrijgen met een uiteindelijke concentratie van 120 nanomolar. Voer 5, tweevoudige seriële wanen uit, zoals aangegeven in het protocol. Verdun op dezelfde manier het medicijn plus monoklonale anibodies oplossingen. Om tot de uiteindelijke concentratie te komen, breng je 50 microliter van elke medicijnoplossingen over in de overeenkomstige putten, zoals weergegeven in deze experimentele lay-out. Broed de cellen 72 uur in de couveuse. Voeg 10 microliter MTT reagens oplossing in elke put. Incubeer op 37 graden Celsius gedurende 4 uur. Voeg 100 microliter lycine-oplossing in elke put met behulp van een multichannel pipet en meng grondig door pipet. Incubeer op 37 graden Celsius gedurende 4 uur in een bevochtigde kamer. Bevrijd de absorberenden op 570 en 620 nanometer met behulp van een spectrofotometer. Bereken de cel levensvatbaarheid als volgt. Bereken de door de breuk aangetaste waarden met de volgende vergelijking. Voer de simulatiesoftware uit, klik op de nieuwe experimentknop om het hoofdvenster te verkrijgen. Typ de naam van het experiment. Klik op nieuwe single drug. Typ de naam. Typ de afkorting. Typ de concentratie-eenheid voor drugs. Voer gegevens 1 dosis en FA waarde in. Druk op Enter.Herhaal deze stap totdat alle gegevenspunten zijn ingevoerd. Klik op Finished.Volg dezelfde stappen om monoklonale antilichaamgegevenspunten in te voeren. Klik op New Drug Combo.Select drug en monoklonale antilichamen. Selecteer Constant Ratio.Klik op OK. Typ de naam. Typ de afkorting. Typ de verhouding monoklonale antilichaamverhouding. Voer gegevens in 1 dosis. Druk op Enter.The programma berekent automatisch de doses MonoclonAl Antibody 8B6 en combo. Voer gegevens 1 FA-waarde in.Druk op Enter.Herhaal deze stap totdat alle gegevenspunten zijn ingevoerd. Klik op Voltooid.Klik vervolgens op Rapport genereren.Selecteer geneesmiddel en monoklonale antilichaam en klik vervolgens op OK. Selecteer Combo en klik op OK. Selecteer Koptekst, CI-tabel en overzichtstabel en klik op OK. Typ de bestandsnaam en de analyse en klik op opslaan om het rapport te genereren. Het rapport wordt automatisch geopend in de standaard webbrowser. Het rapport bevat een overzichtstabelsectie met titel, datum, eindnaam, beschrijvingsnotitie, m, Dm en r-parameters, effectieve dosis 50 voor een agent die wordt gebruikt als monotherapie of in combinatie, en de combinatieindextabel voor elke combinatie bij de effectieve dosis 50, 75, 90 en 95.A combinatieindexwaarde minder dan 1 geeft synergisme aan. Een waarde gelijk aan een waarde geeft additiviteit aan. Een waarde groter dan 1 duidt op antagonisme. Dooi kelder membraan matrix 's nachts door het onderdompelen van de flacon in ijs in 4 graden C koelkast voor gebruik. Alle cultuur slijtage, of media in contact komen met de kelder membraan metrische moet worden gephilled. Oogst de cultuur IMR5. Breng de cellen 5 minuten naar een conische buis van 15 mL en centrifuge op 300 g. Gooi de supernatant weg. Was cellen met 15 mL ijskoude PBS twee keer. Bereid een celsuspensie voor 5 miljoen cellen per mL in ijskoude PBS. Breng de celsuspensie over in een microbuis van 1,5 mL. Draaibare kelder membraan matrix flacon. Voeg 1 volume van de kelder membraan matrix reagens, gemengd door pipetting te verkrijgen cel suspensie van 2,5 miljoen cellen per mL.Houd de cel suspensie op ijs. Scheer de flank van waar de injectie zal worden gedaan. Meng cellen en trek voorzichtig de celsuspensie in een 1 mL spuit gemonteerd met een 21 g naald. Controleer of er geen luchtbellen in de spuit zitten. Desintingsgebied van de muizen met een antiseptische oplossing. Knijp voorzichtig de muishuid op de flank tussen de vingers op de injectieplaats. Steek de naald precies in de huidplooi. Plaats de naald niet diep in het weefsel om onderhuidse injectie te verzekeren. Injecteer 100 microliter imr5-celopening onderhuids. Draai de spuit om vloeistofverspreiding te voorkomen en trek de naald terug. Monitor muizen op lichaamsgewicht en tumorgroei. Meet de lengte en breedte van de tumor met een kaliber. Bereken het tumorvolume met behulp van deze formule. Start therapie wanneer tumoren een gemiddeld volume van 50 tot 60 mm hebben bereikt

potentiation-anticancer-antibody-efficacy-antineoplastic-drugs

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Er werd een doorvoer, real-time test ontwikkeld om gelijktijdig (1) eukaryotische cel-penetrante antibiotica te identificeren die zich richten op een intracellulair bacterieel pathogeen, en (2) de cytotoxiciteit van eukaryotische cellen te beoordelen. Een variatie op dezelfde technologie werd vervolgens gecombineerd met digitale doseertechnologie om gemakkelijke, hoge resolutie, dosis-respons en twee- en driedimensionale synergiestudies mogelijk te maken.

High Throughput, real-time, Dual-uitlezing Het testen van intracellulaire antimicrobiële activiteit en eukaryote cel cytotoxiciteit

Synergetische drug combinaties zijn moeilijk en tijdrovend te identificeren empirisch. Hier beschrijven we een methode voor het vaststellen en valideren van synergetische kleine moleculen.

High-throughput identificatie van synergetische Drug combinaties door de overlapping2 methode

In dit protocol beschrijven we how to make Loewe additiviteit gebaseerde drug interactie metingen voor paarsgewijs en drieweg drug combinaties.

Diagonale methode maatregel synergie tussen een willekeurig aantal Drugs

Antimicrobiële synergie testen wordt gebruikt ter beoordeling van het effect van twee of meer antibiotica in combinatie gebruikt en worden doorgaans uitgevoerd door een van twee methoden: de dambord array of de bepaling van de tijd-doden. Hier presenteren we een geautomatiseerd, inkjet printer-bijgewoonde dambord matrix synergie techniek en een studie van de klassieke tijd-kill synergie.

Antimicrobiële synergie testen door de Inkjet Printer-bijgewoonde geautomatiseerde dambord matrix en de handmatige methode van de tijd-kill

Grote genetische schermen in modelorganismen hebben geleid tot de identificatie van negatieve genetische interacties. Hier beschrijven we een workflow voor gegevensintegratie met behulp van gegevens van genetische schermen in modelorganismen om medicijncombinaties af te bakenen die gericht zijn op synthetische dodelijke interacties bij kanker.

Een workflow voor gegevensintegratie om medicijncombinaties te identificeren die gericht zijn op synthetische dodelijke interacties

Een zeer nauwkeurig in vitro high-throughput testsysteem werd ontwikkeld om geneesmiddelen tegen kanker te evalueren met behulp van patiënt-afgeleide tumororganoïden (BOB's), vergelijkbaar met kankerweefsels, maar zijn ongeschikt voor in vitro high-throughput testsystemen met 96-well en 384-well platen.

High-Throughput In Vitro Assay met behulp van patiënt-afgeleide tumor organoïden

Dit protocol presenteert een geautomatiseerde, op afbeeldingen gebaseerde high-throughput-techniek om verbindingen te identificeren die natural killer cel-gemedieerde borstkankerceldoding moduleren in de aanwezigheid van een therapeutisch anti-HER-2-antilichaam.

High-Content screening assay voor de identificatie van antilichaam-afhankelijke cellulaire cytotoxiciteit modificerende verbindingen

Hier presenteren we een methode om verbindingen te identificeren die het ADCC-mechanisme moduleren, een belangrijk kankerceldodend mechanisme van antitumorantilichamen. Het cytotoxische effect van NK-cellen wordt gemeten in sferoïden van borstkankercellen in aanwezigheid van Trastuzumab. Beeldanalyse identificeert levende en dode killer- en doelcellen in sferoïden.

Kwantificering van antilichaamafhankelijke cellulaire cytotoxiciteit in een tumorsferoïde model: aanvraag voor ontdekking van geneesmiddelen

Hier presenteren we een protocol voor een antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit (ADCC) assay met behulp van een ADCC-bioassaykit. Deze methode biedt een waardevol hulpmiddel voor het ophelderen van het ADCC-mechanisme en het evalueren van het therapeutisch potentieel van antilichamen in kankerimmunotherapie.

Beoordeling van antilichaamafhankelijke, celgemedieerde cytotoxiciteit in kankercellen met behulp van antilichaamafhankelijke celgemedieerde cytotoxiciteit Reporter Bioassay

Een procedure om groen fluorescerende eiwit-expresserende pancreaskankercellen (PANC-1 GFP) orthotopisch in de pancreas van Balb-c Ola Hsd-Fox1nu muizen te implanteren om tumorprogressie en metastase te beoordelen, wordt hier gepresenteerd.

Fluorescerende orthotope Muis Model van pancreaskanker

Leer hoe u synergie tussen antikanker antilichamen en antineoplastische geneesmiddelen evalueert met de combinatie-index vergelijking van Chou en Talalay in preklinische modellen.

Potentiëring van antikanker antilichaam werkzaamheid door Antineoplastische Drugs: detectie van antilichaam-drug synergie met de combinatie Index vergelijking (Video) | JoVE Journal

Potentiëring van antikanker antilichaam werkzaamheid door Antineoplastische Drugs: detectie van antilichaam-drug synergie met de combinatie Index vergelijking

Meer video's verkennen