13 oktober 2018
Hier beschrijven we de gedetailleerde methodologie vereiste stress-enhanced angst leren (SEFL) experimenten, een preklinische model van posttraumatische stress-stoornis, in zowel de ratten en muizen. Het model maakt gebruik van aspecten van Pavlov angst conditionering en bevriezing als een index van verbeterde angst in knaagdieren.
Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het gebied van gedragsneurowetenschappen, zoals hoe de onderliggende biologische mechanismen van PTSS beter te begrijpen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het robuust, betrouwbaar, kwantitatief is en bij meerdere soorten kan worden uitgevoerd. Begin met het opzetten van een set van angst conditionering kamers om te dienen als context A, en een tweede set van angst conditionering kamers om te dienen als context B.Place elke angst conditionering kamer in een geluid verzachtende hokje om inbraak van buitenaf lawaai te voorkomen.
Plaats vervolgens rastervloeren in elke angstconditioneringskamer voor de levering van voetschokken, met behulp van een ander rasterpatroon voor elke context om de vloerstructuur tussen contexten te onderscheiden. Plaats vervolgens zwarte plexiglas driehoekige inserts in context B om de interne lay-out van de twee contexten te onderscheiden. Veeg de kamerwanden en deuren af en spuit de pannen onder de roostervloeren met een verdunde reinigingsoplossing.
Nadat de roostervloer is gereinigd, sluit u een schokgenerator en scrambler aan die een schok van 1 milliamp of lagere amplitude op elke netvloer kan leveren voor de levering van voetschokken. Ten slotte, gebruik maken van een multimeter om de stroom wordt geleverd door de schok generator te testen door het plaatsen van elke sonde op een andere balk van het rooster vloer, en bevestigen dat de gewenste schok amplitude wordt geproduceerd. Op dag één zet context A op met rastervloeren en zichtbaar licht.
Zorg ervoor dat de multimeter aan verschillende staven is bevestigd om de gewenste schokbestendigheid te bevestigen. Vervoer dieren van het vivarium naar de experimentele ruimte in hun huis kooien geplaatst op een kar, en plaats individueel in de vier angst conditionering kamers. Voor muis experimenten, gebruik maken van de schok generator en scramblers te leveren 10 een seconde, een milliamp voet schokken willekeurig gepresenteerd meer dan 60 minuten door het raster vloeren van de kamers met trauma geconditioneerde onderwerpen.
Voor ratten experimenten, gebruik maken van de schok generator en scramblers te leveren 15 een seconde, een milliamp voet schokken willekeurig gepresenteerd over 90 minuten door het raster bars van de kamers met trauma geconditioneerde onderwerpen. Na 90 minuten voor de rat, of 60 minuten voor de muis experimenten, terug te keren alle dieren naar hun huis kooien en onmiddellijk terug te keren naar het vivarium. Op dag twee, het opzetten van context A en vervoer dieren naar de experimentele kamer zoals gedaan op dag een.
Plaats dieren in context A gedurende acht minuten, zonder shock levering, en video opnemen van het gedrag tijdens de hele sessie. Na acht minuten, terug alle dieren naar hun huis kooien en onmiddellijk terug te keren naar het vivarium. Op dag drie, het opzetten van context B met een andere set van rastervloeren van die gebruikt in context A en zwarte driehoekige of witte gebogen plexiglas inserts.
Gebruik indien nodig infrarood of nabij-infrarood licht om de kamers te verlichten en controleer de schokbestendigheid met de multimeter. Veeg de kamers af en spuit de pannen onder de roostervloeren met de oplossing die niet in context A.Next wordt gebruikt, vervoer dieren van het vivarium naar de experimentele ruimte in een zwart plastic bad en plaats ze individueel in angstconditioneringskamers. Na een basislijnperiode van 180 seconden, levert u één seconde, één milliampvoetschok voor ratten of een enkele twee seconden, één milliamp voetschok voor muizen, aan alle dieren.
Verwijder vervolgens alle dieren 30 seconden na de levering van de schok en keer onmiddellijk terug naar het vivarium. Op dag vier van de procedure, het opzetten van context B zoals gedaan op dag drie. Vervoer dieren van het vivarium naar de experimentele ruimte in hetzelfde transport als op dag drie.
Plaats dieren in context B gedurende acht minuten zonder shock levering, en video record bevriezing gedurende de sessie. Verwijder ten slotte alle dieren na acht minuten en keer onmiddellijk terug naar het vivarium. De resultaten wijzen erop dat de dieren in de traumavoorwaarde beduidend hogere niveaus van het bevriezen in context A vergeleken met de geen traumacontroles toonden, wijzend op aanwinst van vrees aan de traumacontext.
Zowel het trauma als geen traumadieren vertoonden minimale vriesniveaus die niet van elkaar verschilden. Verder vertoonden de traumadieren een lagere shockreactiviteit in vergelijking met de geen traumacontroles, en traumadieren vertoonden een grotere bevriezing in vergelijking met de geen traumacontroles, wat aangeeft dat de blootstelling aan de traumatische stressor de angst onmiddellijk na de milde stressor verhoogde. Na deze procedure kunnen andere methoden zoals het verhoogde plus doolhof, open veld en licht-donkere doos worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals hoe trauma angstachtige fenotypen beïnvloedt.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Dit artikel beschrijft de methodologie voor het uitvoeren van experimenten naar stress-versterkte angst Conditionering (SEFL), een prekliniek model voor het bestuderen van posttraumatische stressstoornis (PTSS) bij knaagdieren. De aanpak integreert Pavloviaanse angstconditionering en beoordeelt angstresponsen aan de hand van bevriezingsgedrag.
Stress-versterkt angstleren (SEFL) biedt een robuust preklinisch model voor het onderzoeken van mechanismen van angstdysregulatie die relevant zijn voor de validatie van targets bij PTSS. Het model maakt een kwantitatieve beoordeling mogelijk van trauma-geïnduceerde sensitisatie van angstleren, wat bijdraagt aan mechanistische risicoreductie in de vroege ontdekkingsfase. Door langdurige angsthypermnesie na acute stress te reproduceren, helpt SEFL bij het evalueren van target-engagement en padmodulatie in ziekterelevante systemen.
SEFL past binnen het ontdekkingscontinuüm, van het testen van doelwit-hypotheses via lead-optimalisatie tot preklinische effectiviteitsbeoordeling, met name voor CNS-doelwitten die angst- en stressreacties moduleren.