Name: Een muismodel van Hyperandrogenic te bestuderen polycysteus ovarium syndroom (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-02T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Leer een muismodel van polycysteus ovarium syndroom ontwikkelen met dihydrotestosteron pellets. Deze methode onderzoekt de effecten van hyperandrogenisme op de reproductieve gezondheid en nageslacht.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door de National Institutes of Health (subsidies R00-HD068130 naar S.W.) en de Baltimore Diabetes Research Center: piloten en haalbaarheid subsidie (S.W.).

Hier presenteren we gedetailleerde protocollen voor DHT pellet voorbereiding en inbrengen, en voor reproductieve en metabole testen. De muizen gebruikt in deze studie werden een gemengde achtergrond (C57/B6, CD1, 129Sv) en werden onderhouden met voedsel en water ad libitum in een 14/10 h licht/donker cyclus bij 24 ° C in de Broadway onderzoek gebouw dier faciliteit aan de Johns Hopkins University School of Geneeskunde. Alle procedures zijn door de Johns Hopkins Universiteit Animal Care en gebruik Comité goedgekeurd.
1. Maak PCOS-achtige muismodel
<ol><li>
DHT pellet voorbereiding
	<ol>
<li>Autoclaaf silastic buis te steriliseren. Silastic buizen snijden aan een lengte van 15 mm met een scheermesje;</li>
		<li>Zegel van één kant door het injecteren van medische zelfklevende siliconen in de buis met een afgestompte naald van 20 G, gekoppeld aan een 3 mL spuit. Plunjer moet geschrapt worden van de spuit en vervolgens lijm ingevoegd in het reservoir. De plunjer wordt opnieuw opgenomen en lijm ingedrukt totdat deze begint te blijken uit de naald. De afgestompte naald is gemaakt door het snijden van de kant van de scherpe uiteinde van 20 G naald met een sterke schaar. De lengte van silicium in de buis moet meer dan 2 mm te voorzien in postproductie trimmen;</li>
		<li>Droog 's nachts; Controleer op luchtbellen aan de verzegelde kant. Mensen met geen luchtbellen worden gebruikt voor DHT pellets. Anderen kunnen worden gebruikt voor neen-DHT controle pellets.</li>
		<li>Draag handschoenen, masker, bril en laboratoriumjas alvorens DHT-pellet in een zuurkast te voorkomen DHT Gasbedwelming met behulp van de huid.</li>
		<li>Pour DHT poeder in een plastic wegen boot en druk op de open zijde van de lijm buizen afgetopt (geproduceerd in A1.1) tot de DHT-poeder.</li>
		<li>DHT poeder kan omlaag worden aangedruct met een grote paperclip die is rechtgetrokken.  Voortgezet totdat DHT een hoogte van 4 mm (of gewenste lengte bereikt). Controleer de lengte van DHT met een liniaal en verzegel de open zijde met siliconen, droog 's nachts.</li>
		<li>Snijd elke verzegelde kant om de lengte van silicium 2 mm lang. De totale lengte van pellet zullen 8 mm.</li>
		<li>Zegel van beide kant van lege silastic buis als controle (neen-DHT) pellet.</li>
		<li>Houd de korrels in een conische tube van 50 mL, omwikkeld met een folie (om te voorkomen dat blootstelling aan licht) bij kamertemperatuur tot gebruik. De DHT pellets handhaven volledige werkzaamheid gedurende ten minste 3 maanden van opslag.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
DHT inbrengen en vervanging
	<ol>
<li>Tot 20 DHT zijn pellets of besturingselement pellets afzonderlijk ondergedompeld in een conische tube van 50 mL met 30 mL steriele 0,9% zoutoplossing gedurende 24 uur bij 37 °C gedurende evenwichtsinstelling net voor de insertdatum.</li>
		<li>Voorafgaand aan de operatie, de oppervlakken en handschoenen zijn ontsmet met clidox en het werkoppervlakten zijn bedekt met schone plastic back absorberend papier (het stootkussen van het chirurgische).  Alle instrumenten die in contact met dieren komen zijn ontsmet vóór het binnenrijden van het dier faciliteit in autoclaaf.  Instrumenten kunnen droog en koel voorafgaand aan gebruik.</li>
		<li>2-maand oude vrouwelijke muizen worden gebruikt (4 – 5 muizen/kooi). Muizen zijn intraperitoneally ingespoten met Xylazine (3,5 mg/kg bw) en Ketamine (78,8 mg/kg bw) met behulp van een insuline spuit. Berekeningen voor mengen en doseren van anesthesie is in tabel 1.</li>
		<li>Nadat voldoende verdoving wordt bereikt, zoals gemeten door verlies van Teen reflex en ademhaling vertraagde, zal de muis worden klaargestoomd voor chirurgie.</li>
		<li>Desinfecteren van de huid van het gebied met betadine met steriel gaas en reinig met 70% ethanol.  Het gebied zal opnieuw worden geschilderd met betadine.</li>
		<li>Een gat rond 5 mm lengte met onder de huid in de buurt van de nek scharen. Maak een kleine tunnel (15 mm) met een trochar van 10 G in de rostraal richting. De pellet is dorsally ingevoegd met de trochar.</li>
		<li>De opening wordt vervolgens verzegeld met chirurgische lijm. Handmatig bij benadering de wond randen met pincet en zachte poetsen lijnen toe te passen van een dunne film van vloeibare lijm op de randen benaderd wond. Opbouw 3 dunne lagen plakband over de opening om ervoor te zorgen dat de lijm is gelijkmatig verdeeld over de wond. De lijm moet 1 cm aan elke kant van de randen apposed wond uitbreiden. Sutuur (geologie) of chirurgische clips kunnen ook worden gebruikt om te sluiten van het gat. Zet muizen terug in de kooi, individueel gehuisvest, met een warmte pad voor herstel. Vervang pellet elke 4 weken om een constant peil van androgeen blootstelling. De oorspronkelijke pellet zal worden verwijderd en nieuwe pellet wordt ingevoegd zoals beschreven in A1.15 in de vergelijkbare positie.</li>
		<li>Test Oestrische cyclicity na 3 dagen van DHT inbrengen. Oestrische cyclus fase wordt beoordeeld door vaginale cytologie.  Vaginale cellen worden verzameld voor 16 opeenvolgende dagen met behulp van een pipet p10 te spuiten steriele zoutoplossing (ongeveer 10 µL) in de vaginale Holte en dan het intrekken van de zoutoplossing met de dezelfde steriele Pipetteer tip.  Vaginale cellen endometriumvoering van de vaginale wand meng met zoutoplossing en worden verzameld.</li>
		<li>Gespreide zoutoplossing met cellen op een gelabelde dia. Elke dia kan zes monsters bevatten. Dia's worden aangeduid te merken welk monster is geplaatst in elk van de zes locaties.</li>
		<li>Na de zoutoplossing heeft volledig uitgedroogd op de dia, dia's in een container met 100% ethanol cellen vast te zetten. Dia's moeten worden vastgesteld voor ten minste 5 minuten, maar in fixeerspray voor onbepaalde tijd tot verder gebruik kunnen blijven.</li>
		<li>Dia's gestoken door kleuring oplossingen voor 1 min voor buffer B en C. Wash dia met kraanwater en droog, bij kamertemperatuur.</li>
		<li>Cel morfologie onder een 10 X objectieve lichte Microscoop te onderzoeken.  Cel morfologie te onderscheiden van de proestrus (P), estrus (E), metestrus (M) en diestrus (D) wordt beschreven in verwijzingen27,28,29.</li>
		<li>Tellen de dagen in elk stadium en gedeeld door het totale aantal dagen te berekenen percentage tijd in elke fase.</li>
		<li>Test glucosetolerantie bij 21 dagen na DHT inbrengen door vasten de muizen 's nachts (16u) en injecteren van 2 g/kg lichaamsgewicht van 20% dextrose intraperitoneally. Bijvoorbeeld, als een muis lichaamsgewicht 25 g bedraagt, zullen deze muis worden ingespoten met 250 µL van 20% dextrose met een 50 cc (0,5 mL) insuline spuit. Glucoseniveaus worden beoordeeld door glucometer en test strips door bemonstering van bloed uit staart ader op 0, 15, 30, 60, 90, 120 min. Dit wordt beschreven in detail elders30.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Bloedinzameling
	<ol>
<li>Verzamelen van bloed op verschillende dagen na DHT inbrengen (wij beperken collectie volume 100 µL voor steroïde en 30ul voor LH/FSH assay) tussen 9 en 10u door submandibulaire ader bloeden met lancet. Dit wordt beschreven in11.</li>
		<li>Centrifugeren van bloed bij 6.000 x g bij 4 ˚C gedurende 10 minuten, en het verzamelen van de serum-laag in een andere 1,5 mL-buis die kan worden opgeslagen op-80 °C tot assay.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. beoordelen van reproductieve profielen van vrouwelijke nakomelingen van chronisch DHT ingevoegd dammen
<ol><li>
Paring
	<ol>
<li>De vrouwelijke muis te beproeven wordt verplaatst naar de kooi met een bewezen vruchtbare man (die eerder pups met een vrouwelijke muis) 15 dagen na pellet inbrengen.</li>
		<li>Document van dam lichaamsgewicht elke week om te bepalen als de muis zwanger is. Dam gewicht toename van meer dan 3 g een week geeft aan zwangerschap.</li>
		<li>Het verzamelen van bloed van dammen de tweede week nadat we verhoogd lichaamsgewicht van dammen groter is dan 3 g van de week daarvoor observeren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Puberteit beoordeeld door vaginale opening en eerste estrus
	<ol>
<li>Controleren van de vaginale opening door visuele inspectie elke dag nadat pups gespeend zijn op 21 postnatale dag (PND), meet de afstand van de anogenital en de leeftijd van de vaginale opening opnemen.</li>
		<li>Zodra vagina opent, verzamelen vaginale cellen dagelijks, zoals beschreven in 1.2.8–1.2.11 om te controleren Oestrische cyclicity.</li>
		<li>Cel morfologie als beschreven 1.2.12 te observeren, en de eerste estrus is gedefinieerd als de datum dat alle cellen cornified epitheliale cellen zijn.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Lichaam gewicht en oor punch
	<ol>
<li>Dompel de lancet tip in de tattoo-pasta en elke pup met tatoeage op de teen markeren zoals wordt beschreven in referentie12 7 PND en weeg muizen elke 7 dagen tot 70 dagen oud.</li>
		<li>Oor punch muizen om te nummeren hen met behulp van systeem in Figuur 1 tussen 12 tot en met 16 PND. Onderscheid van geslacht, onderzoeken van de ventrale zijde van lichaam, zal vrouwtjes moeten zichtbaar tepels.</li>
		<li>Het verzamelen van bloed aan 21, 26, 70 PND na geboorte zoals hierboven beschreven in punt 1.3.1</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hormonale Assay
	<ol>
<li>DHT niveaus in het bloedserum door beide enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) worden gemeten en door vloeistofchromatografie tandem massa spectrometrie (LC-MS)23,24,31,32. T wordt gemeten door LC-MS of een rat/muis ELISA die is gevalideerd door de Universiteit van Virginia Ligand Assay kern in het Center for Research in reproductie23,24.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancy+complications+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome.</a> Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).</li>
<li>Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+polycystic+ovary+syndrome+for+pregnancy+and+for+the+health+of+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Obstet.+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring.</a> Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).</li>
<li>de Wilde, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+and+Metabolic+Health+of+74+Children+From+Women+Previously+Diagnosed+With+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Comparison+With+a+Population-Based+Reference+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Sci%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort.</a> Reprod. Sci. , 1933719117749761 (2018).</li>
<li>Caldwell, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+reproductive%2C+metabolic%2C+and+endocrine+features+of+polycystic+ovary+syndrome+in+female+hyperandrogenic+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models.</a> Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).</li>
<li>van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+and+metabolic+phenotype+of+a+mouse+model+of+PCOS%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS.</a> Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).</li>
<li>Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroidogenic+versus+Metabolic+Programming+of+Reproductive+Neuroendocrine%2C+Ovarian+and+Metabolic+Dysfunctions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions.</a> Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).</li>
<li>Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polycystic+ovary+syndrome+and+its+developmental+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Endocr.+Metab+Disord%22%5BJournal%5D)">Polycystic ovary syndrome and its developmental origins.</a> Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).</li>
<li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol Reprod. 93 (3), 69(2015).</li>
<li>Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Gut+Microbiome+Is+Altered+in+a+Letrozole-Induced+Mouse+Model+of+Polycystic+Ovary+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome.</a> PLoS One. 11 (1), e0146509(2016).</li>
<li>Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Letrozole-induced+polycystic+ovaries+in+the+rat%3A+a+new+model+for+cystic+ovarian+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Med.+Res%22%5BJournal%5D)">Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease.</a> Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).</li>
<li>Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+polycystic+ovary+syndrome%3A+phenotypic+presentation%2C+pathophysiology%2C+and+the+effects+of+different+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Reprod.+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions.</a> Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).</li>
<li>Yanes, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular-renal+and+metabolic+characterization+of+a+rat+model+of+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Gend.+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome.</a> Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).</li>
<li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol. Reprod. 93 (3), 69(2015).</li>
<li>Filippou, P., Homburg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+foetal+hyperexposure+to+androgens+a+cause+of+PCOS%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS?</a> Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).</li>
<li>Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+Offspring+From+Chronic+Hyperandrogenemic+Dams+Exhibit+Delayed+Puberty+and+Impaired+Ovarian+Reserve%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve.</a> Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).</li>
<li>Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgen+excess+fetal+programming+of+female+reproduction%3A+a+developmental+aetiology+for+polycystic+ovary+syndrome%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome?</a> Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).</li>
<li>Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+origin+of+polycystic+ovary+syndrome+-+a+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Developmental origin of polycystic ovary syndrome - a hypothesis.</a> J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).</li>
<li>Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sheep+models+of+polycystic+ovary+syndrome+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype.</a> Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).</li>
<li>Pierre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysregulation+of+the+Anti-Mullerian+Hormone+System+by+Steroids+in+Women+With+Polycystic+Ovary+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).</li>
<li>Dumesic, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperandrogenism+Accompanies+Increased+Intra-Abdominal+Fat+Storage+in+Normal+Weight+Polycystic+Ovary+Syndrome+Women%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).</li>
<li>Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+adrenal+and+ovarian+androgen+generation%3A+Increased+peripheral+5+alpha-reductase+activity+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).</li>
<li>Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+hepatotoxicity+during+long-term+and+low-dose+flutamide+treatment+in+hirsutism%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Gynecol.+Obstet%22%5BJournal%5D)">The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism.</a> Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgen+Receptor+in+the+Ovary+Theca+Cells+Plays+a+Critical+Role+in+Androgen-Induced+Reproductive+Dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction.</a> Endocrinology. , en20161608(2016).</li>
<li>Andrisse, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+Dose+Dihydrotestosterone+Drives+Metabolic+Dysfunction+via+Cytosolic+and+Nuclear+Hepatic+Androgen+Receptor+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms.</a> Endocrinology. , en20161553(2016).</li>
<li>Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+signaling+displayed+a+differential+tissue-specific+response+to+low-dose+dihydrotestosterone+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice.</a> Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).</li>
<li>van Houten, E. L., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+to+study+polycystic+ovary+syndrome%3A+a+possible+link+between+metabolism+and+ovarian+function%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function?</a> Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).</li>
<li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19575469">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. , Appendix 4, Appendix 4I (2009).</li>
<li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+knockout+of+the+androgen+receptor+in+gonadotropes+reveals+crucial+roles+for+androgen+in+gonadotropin+synthesis+and+surge+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice.</a> Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).</li>
<li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL%2F6J+mice%3A+I.+Cycle+frequency%2C+length+and+vaginal+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li>
<li>Dinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+Glucose+Tolerance+Test%2C+Measurement+of+Lung+Function%2C+and+Fixation+of+the+Lung+to+Study+the+Impact+of+Obesity+and+Impaired+Metabolism+on+Pulmonary+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).</li>
<li>Nilsson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+a+Comprehensive+Sex+Steroid+Profile+in+Rodent+Serum+by+High-Sensitive+Gas+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry.</a> Endocrinology. 156 (7), (2015).</li>
<li>McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+sex+steroids+in+murine+blood+and+reproductive+tissues+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Steroid+Biochem.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).</li>
<li>Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+Seoul+virus+infection+are+not+related+to+adult+sex+steroid+concentrations+in+Norway+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats.</a> J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).</li>
<li>Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((17beta-estradiol+alters+the+activity+of+conventional+and+IFN-producing+killer+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells.</a> J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).</li>
</ol>

Niets te onthullen.

Hyperandrogenism is een belangrijk kenmerk van PCOS. Het serum DHT niveaus (twee vouwen hoger in DHT Mouses dan in neen-DHT Mouses) gebruikt in dit protocol lager zijn dan die door andere onderzoekers in eerdere studies gerapporteerd en zijn gekalibreerd om na te bootsen proportioneel vrouwen met PCOS5,19, 20,21. In tegenstelling tot andere modellen verandert dit 2-fold DHT model niets aan het...

Hyperandrogenism is het waarmerk van polycysteus ovarium syndroom (PCOS) volgens de criteria van de NIH en de overtollige androgeen en PCOS (AE-PCOS) samenleving. Vrouwen met PCOS hebben moeite om zwanger en hebben een verhoogd risico van zwangerschap complicaties1. Zelfs als ze zwanger zijn, hebben hun vrouwelijke nakomelingen een gezondheidsrisico resultaten2,3. Dierlijke modellen zijn ontwikkeld met behulp van verschillende strategieën4,5,6,7,8,9,10,11 , 12 en vertonen veel kenmerken van PCOS (anovulatie en of verminderde glucose en insuline tolerantie) met verhoogd lichaamsgewicht en obesitas verbonden aan de grootte van de uitgebreide adipocyte en adipocyte gewicht toegenomen. Er zijn twee belangrijke strategieën om te produceren van dierlijke modellen die worden gebruikt voor het bestuderen van PCOS. Een is behandeling met hoge niveaus van androgenen rechtstreeks (exogene androgeen injectie/invoeging) of niet indirect (zoals het blokkeren van androgeen conversie naar oestrogeen met aromatase remmer) na geboorte13. Een andere is door foetale hyperexposure van androgenen tijdens dracht14,15 te bestuderen van de nakomelingen. Bijvoorbeeld, ontwikkelen vrouwelijke nakomelingen van rhesus monkey16,17, schapen18en knaagdieren blootgesteld aan mannelijke androgeen uteriene deperiode PCOS-achtige eigenschappen later in het leven. Deze modellen aanzienlijk verbeterd ons begrip van verhoogde androgeen effecten, en foetale programing en uteriene milieu-effecten. Echter, deze modellen hebben hun eigen beperkingen: 1) dieren ontwikkelen obesitas en daarom is het moeilijk te scheiden van de gevolgen van de hyperandrogenemia van obesitas geïnduceerde reproductieve en metabole dysfunctie; 2) vóór zwangerschap, vrouwen met PCOS vertonen al hoge niveaus van androgeen, aldus eicellen zijn blootgesteld aan androgeen overtollige vóór bevruchting; 3) de farmacologische doses van testosteron (T) of dihydrotestosteron (DHT) gebruikt na de geboorte of tijdens de zwangerschap kunnen niet overeen met de androgeen-omgeving van PCOS. Niveaus van testosteron en DHT zijn gemeten in ovariële folliculaire vloeistof en/of serum en testosteron en DHT niveaus zijn 1,5 tot 3,9 vouw hoger bij vrouwen met PCOS5,19,20,21 ,22,23 t.o.v. onaangetast vrouwen. We hebben een volwassen muis model23,24,25 dat reproductieve en metabole dysfunctie binnen twee weken na de opening van chronische DHT blootstelling ten gevolge van het inbrengen van een pellet met 4 mm lengte van ontwikkelt gemaakt Crystal DHT poeder (totale lengte van pellet is 8mm). Dit model produceert serum DHT niveaus die over 2-fold hoger (hierna: 2xDHT) dan die van controle Muizen zonder DHT behandeling. De 2xDHT muizen geen wijzigingen van de basale serum estradiol, testosteron en LH Ken vertonen niet ontwikkelen van obesitas, en Toon vergelijkbaar ovariële gewicht, serum niveaus van cholesterol, vrije vetzuren, leptine, TNFα en IL-623,24, 25 ten opzichte bepaalt zelfs maximaal 3,5 maanden na DHT invoeging23,24,25. Bovendien door de paring vrouwtjes die kenmerken van PCOS al ontwikkeld, kunnen we bestuderen het effect van een hyperandrogenic moeders omgeving op de metabolische en reproductieve gezondheid van de nakomelingen15.
Dit nieuwe paradigma (relevante NIH en AE-PCOS samenleving criteria) modellen de ziekte door het produceren van de relatief vergelijkbare niveaus van androgenen aan die van de vrouwen met PCOS 2 - 3-voudig hoger testosteron of DHT niveaus ten opzichte van onaangetast vrouwen. Dit model wordt echter gehandhaafd door de voortdurende exogene DHT en niet van geprogrammeerde endogene hyperandrogenism zodra DHT wordt ingetrokken. Het algemene doel van dit artikel is gericht op 1) hoe maak je de DHT pellet; 2) hoe te genereren een lean-PCOS zoals muismodel; 3) strategieën te evalueren van de vrouwelijke nakomelingen van deze dammen. Andere metingen en evaluatie van fenotypen worden niet behandeld in dit manuscript maar kunnen worden gevonden in24,25,26,5,15,23,.

<table><tbody><tr><td>Kristal 5&alpha;-DHT poeder</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8380-1G</td><td></td></tr><tr><td>Dow Corning Silastic buis</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-189-15D</td><td>0.04in/1mm binnendiameter x0.085 in/2.15 mm buitendiameter</td></tr><tr><td>Medisch adhesief siliconen</td><td>Factor II, Inc.</td><td>A-100</td><td></td></tr><tr><td>Bril, laboratoriumjassen, handschoenen en maskers.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 &micro;L pipettenpunten zonder filter</td><td>USA Scientific</td><td>11113700</td><td></td></tr><tr><td>Microscoopglas voor uitstrijkje</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-003</td><td></td></tr><tr><td>Diff Quik voor het kleuren van cellen</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9979740</td><td></td></tr><tr><td>Lancet</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9416572</td><td></td></tr><tr><td>3 mL-spuit</td><td>Becton, Dickinson and Company (BD),</td><td>30985</td><td></td></tr><tr><td>bijgevoegde naald: 20 G</td><td>BD</td><td>305176</td><td></td></tr><tr><td>Liniaal: elke lengte dan 10 cm met millimeter schaal.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise</td><td>NDC13985-704-10</td><td>100 mg/mL</td></tr><tr><td>Ketaminehydrochloride</td><td>Hospira, Inc</td><td>NDC 0409-2051-05</td><td>100 mg/mL</td></tr><tr><td>Chirurgische klinknaap</td><td>AutoClip&reg; System, Fine Science Tool</td><td>12020-00</td><td></td></tr><tr><td>Insulinespuit</td><td>BD</td><td>329461</td><td>1/2 CC, lage dosis U-100 insulinespuit</td></tr><tr><td>Trocart</td><td>Innovative Research of America</td><td>MP-182</td><td></td></tr><tr><td>Microscoop</td><td>Carl Zeiss Primo Star</td><td>415500-0010-001</td><td>Duitsland</td></tr><tr><td>Oorpons</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-812-201</td><td></td></tr><tr><td>Testosteron rat/muis ELISA kit</td><td>IBL</td><td>B79174</td><td></td></tr><tr><td>DHT ELISA kit</td><td>Alpha Diagnostic International</td><td>1940</td><td></td></tr><tr><td>One touch ultra glucometer</td><td>Life Scan, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>One touch ultra teststrips</td><td>Life Scan, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf buis</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-402-18</td><td></td></tr><tr><td>Vleesmes</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Clidox</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0089321</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgisch onderblad</td><td>Fisher Scientific</td><td>50587953</td><td>Fabrikant: Andwin Scientific 56616018</td></tr><tr><td>Betadine Antiseptische Oplossing</td><td>Walgreens</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylaat)</td><td>3M Science. Applied to Life</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

een muismodel van hyperandrogenic te bestuderen polycysteus ovarium syndroom

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Hyperandrogenemia speelt een cruciale rol in functie van de reproductieve en metabole bij vrouwtjes en is het waarmerk van polycysteus ovarium syndroom. Het ontwikkelen van een mager PCOS-achtige muismodel dat nabootst van vrouwen met PCOS is klinisch zinvol. In dit protocol beschrijven we een dergelijk model. Door het invoegen van een 4 mm lengte van DHT (dihydrotestosteron) crystal poeder pellet (totale lengte van pellet is 8 mm), en vervangt het maandelijks, zijn wij in staat om te produceren een muismodel van PCOS-achtige met serum DHT niveaus 2 vouw hoger dan muizen niet geïmplanteerd met DHT (neen-DHT). Reproductieve en metabole dysfunctie waargenomen zonder gewicht en lichaamssamenstelling. Terwijl vertoont een hoge mate van onvruchtbaarheid, een kleine ondergroep van deze vrouwelijke muizen van PCOS-achtige kan zwanger en hun nakomelingen laten zien van vertraagde puberteit en toegenomen testosteron als volwassenen. Dit mager muismodel van PCOS-achtige is een nuttig instrument om te studeren de pathofysiologie van PCOS en de nakomelingen van deze PCOS-achtige dammen.

Serum DHT niveaus en Glucose tolerantie test
DHT niveaus werden gemeten vanaf verzamelde serum door beide ELISA en LC-MS volgens protocol 1,24-1,25, 2.9 en 3.0. De DHT absolute waarden verschillen tussen massaspectrometrie en ELISA, echter de relatieve vouw (rond 2-fold) van DHT vs neen-DHT inbrengen van beide tests vergelijkbaar is en experimenten over15,23,<sup...

We beschrijven de ontwikkeling van een mager PCOS-achtige muismodel met dihydrotestosteron pellet te bestuderen van de pathofysiologie van PCOS en de nakomelingen van deze PCOS-achtige dammen.

Een muismodel van Hyperandrogenic te bestuderen polycysteus ovarium syndroom

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van reproductie. En de endocrinologie. En zijn van toepassing op de studie van polycystend eierstoksyndroom of PCOS en hyperandrogenisme.Het voordeel van deze techniek is dat het een consistente, uniforme, lange termijn afgifte van hormonen op een kostbare effectieve manier vergemakkelijkt. JHUs de behandeling van de procedure zal Ping Xue, een technicus uit mijn laboratorium. Voor dihydrotestosteron of DHT pellet voorbereiding, gebruik een scheermesje om een 15 millimeter stuk siliconen buizen te snijden.En gebruik een drie milliliter spuit uitgerust met een afgestompte 20 meter naald om twee tot vijf millimeter medische lijm siliconen injecteren in een uiteinde van de buis. Laat de slang 's nachts drogen. En controleer op luchtbellen aan het verzegelde uiteinde.Het dragen van de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen giet DHT poeder in een plastic wayboat in de flowhood. Maak indruk op het geopende uiteinde van de met lijm bedekte buis in het poeder. Met behulp van een grote rechtgetrokken paperclip, tamp het poeder naar beneden in de slang, totdat de DHT bereikt de juiste experimentele diepte.Sluit vervolgens de geopende kant van de buis 's nachts af met siliconen. De volgende ochtend, snijd elke verzegelde kant om een twee millimeter lengte van siliconen aan beide zijden van de DHT en geen DHT controle pellets te verkrijgen. Bewaar vervolgens de pellets in de 50 milliliter conische buis verpakt met folie op kamertemperatuur voor maximaal drie maanden.Voor PCOS muis model generatie equilibrate tot 20 DHT of controle pellets in aparte 50 milliliter conische buizen met 30 milliliter van 0,9 procent zoutlijn gedurende 24 uur bij 37 graden Celsius. De volgende dag, bevestigen gebrek aan reactie op teen knijpen in een verdoofde twee maanden oude vrouwelijke muis en gebruik steriel gaas om sequentiële Povidone-jodium en 70 procent ethynol scrubs toe te dienen aan de chirurgische gebied. Maak vervolgens een incisie van vijf millimeter door de huid in de buurt van de nek.En gebruik een trocar van tien meter om een 15 millimeter tunnel te maken in de rostral-richting. Gebruik de trocar om een pellet dorsally in de tunnel te steken en de incisie af te dichten met de chirurgische lijm. Bespree de wondranden handmatig met tangen en gebruik zachte borstelstreken om drie dunne filmlagen vloeibare lijm aan te brengen tot één centimeter van elke kant van de tegengestelde wondranden.Plaats de muis vervolgens alleen in een kooi op een warmtekussen met controle tot volledige recumbency. Het vervangen van de pellet om de vier weken om een constant niveau van androgeen blootstelling te handhaven. Drie dagen na het inbrengen van pellets, gebruik een p10 pipet te spuiten tien microliters van steriele zoutoplossing in de vaginale holte en gebruik de pipet tip om onmiddellijk te herstellen van de zoutoplossing.Verdeel het vaginale celzoutmonster over een gelabelde dia. En laat de zoutoplossing drogen op kamertemperatuur. Bevestig de gedroogde glijbanen in een container van 100 procent ethynol gedurende ten minste vijf minuten.Vlek vervolgens de dia's voor een minuut elk in buffer B en buffer C van een dif-quick kleuring kit. Aan het einde van de buffer C incubatie was de glijbanen met kraanwater gedurende drie seconden en droog ze op kamertemperatuur. Om de estrous cyclicity te bepalen bekijken de dia's onder de tien keer doel van een lichte microscoop.Tel de dagen in elke fase en deel door het totale aantal dagen om procentuele tijd in elke fase te berekenen. Om de glucosetolerantie te testen, 20 dagen DHT inbrengen, snel de muizen 's nachts. Weeg de muizen de volgende ochtend, en gebruik een glucometer en teststrips om basilicum glucose niveau van staart ader bloed te meten.Injecteer de muizen met twee gram per kilogram lichaamsgewicht van 20 procent dextrose. Meet vervolgens het glucoseniveau van staartaderbloedmonsters op 15, 30, 60, 90, 120 minuten na dextrose toediening. Om vrouwelijke nakomelingen van DHT ingebrachte dames te verwerven, verplaatst u de vrouwelijke muis om in de kooi te worden getest met een bewezen vruchtbaar mannetje op dag 15, na het inbrengen van pellets.Documenteer de dames lichaamsgewicht elke week om te bepalen of de muis zwanger is. Op postnatale dag zeven, dip een lancet tip in tattoo plakken en markeer elke pup met een tatoeage op de teen. Weeg de gemarkeerde muizen om de zeven dagen tot 70 dagen oud.Tussen postnatale datum 12 tot 16, oor punch de muizen om ze te nummeren volgens het systeem zoals geïllustreerd in de figuur. Om het geslacht te onderscheiden, onderzoekt u de ventrale kant van elke getagde muis. De vrouwtjes hebben zichtbare tepels.Voor het verzamelen van bloedmonsters voor verschillende downstream-analyses gebruikt u een lancet om het geschatte experimentele volume van bloed tussen negen en tien uur te verzamelen door submandibulaire aderbloedingen. En centrifugeren de monsters om serumverzameling mogelijk te maken. Bewaar vervolgens de serummonsters in 1,5 milliliter microcentrifugebuizen bij min 80 graden Celsius tot hun analyse.Om de puberteit bij de DHT vrouwelijke nakomelingen te beoordelen, controleer elke dag na het spenen op postnatale dag 21 de vaginale opening door visuele inspectie. En gebruik kalibers om de ano-genitale afstand te meten. Hoewel de absolute waarden van serum DHT verschillen tussen massaspectrometrie en Elisa-analyse, is de relatieve volksverandering van DHT versus no-DHT-invoeging vergelijkbaar met zowel tests als verschillende experimenten.DHT niveaus zijn aanzienlijk verhoogd van pre-conceptie tot zwangerschap in zowel DHT en geen DHT muizen. Dht-niveaus zijn echter tweevoudig hoger bij DHT-muizen in vergelijking met geen DHT-muizen op zowel pre-conceptionele als zwangerschapstijdpunten. Volwassen DHT-dochters vertonen verschillen in reproductieve functie.Bijvoorbeeld, verstoorde eestrous cyclicity in vergelijking met volwassen geen DHT dochters ervaren aanzienlijk langere tijden in metestrus diestrus en minder tijd in pro-esterous en esterous. Tijdens een poging deze procedure is het belangrijk om te onthouden om de pellets uit te broeden voor 24 uur voordat ze worden gebruikt voor uniforme afgifte van het hormoon. Na deze procedure kunnen ook de reproductieve en metabolische gevolgen van DHT-blootstelling worden onderzocht.Na de ontwikkeling maakte deze techniek de weg vrij voor onderzoekers op het gebied van endrochronologie en moederlijke foetale interacties om PCOS en de impact van hyperandrogenisme op laag niveau bij vrouwelijke muizen te bestuderen. Vergeet niet dat het werken met DHT zeer gevaarlijk kan zijn en de voorzorgsmaatregelen zoals het dragen van handschoenen en een masker en een bril, en werken in een bio-veiligheidskap, moet altijd worden genomen tijdens het uitvoeren van deze procedure.

a-hyperandrogenic-mouse-model-to-study-polycystic-ovary-syndrome

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

This article describes a way to prepare and insert dihydrotestosterone (DHT) pellets to model Polycystic Ovary Syndrome (PCOS) in mice. The example protocol demonstrates the procedure in mice used for reproductive and metabolic studies.

Subcutaneous Dihydrotestosterone (DHT) Treatment: Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome (PCOS)

Veel knaagdiermodellen van endometriose worden beperkt door technische complexiteit, reproduceerbaarheid en/of behoefte aan immuungecompromitteerde dieren of speciale reportermuizen. We presenteren een vereenvoudigd systeem van laesie-inductie met behulp van elke experimentele muis met een onafhankelijk verifieerbaar, objectief scoresysteem en zonder vereiste voor ovariëctomie of overlevingsoperaties.

Een syngeneïsch murinemodel van endometriose met natuurlijk fietsende muizen

Deze studie beschrijft de directe meting van de leverglucoseproductie in een polycysteus ovariumsyndroom muismodel door gebruik te maken van een stabiele isotopische glucose tracer via staartader in zowel nuchtere als glucoserijke toestanden in tandem.

Evaluatie van leverglucoseproductie in een muismodel met polycysteus ovariumsyndroom

Follikelstimulerend hormoon (FSH) in verschillende extragonadale weefsels en organen wordt in verband gebracht met de pathogenese van meerdere ziekten. Het ovariëctomische en met FSH behandelde muismodel (OVF) kan worden gebruikt om de extragonadale werking van FSH te onderzoeken.

Onderzoek naar onafhankelijke effecten van follikelstimulerend hormoon in vivo in een muismodel

Deze studie introduceert een nieuw muismodel dat speciaal is ontworpen om endometrioom te simuleren, een klinisch significant subtype van endometriose. Door gebruik te maken van C57BL/6J-muizen wil het model de pathofysiologische mechanismen die ten grondslag liggen aan endometrioomgerelateerde onvruchtbaarheid ophelderen en een verfijnd hulpmiddel bieden om de huidige kenniskloof in de reproductieve geneeskunde te overbruggen.

Oprichting van een experimenteel muismodel van endometrioom om de gerelateerde onvruchtbaarheid te bestuderen

Dit protocol introduceert een techniek voor het induceren van modellen met polycysteus ovariumsyndroom (PCOS) bij muizen door middel van gecontroleerde afgifte van letrozol met behulp van minipompen. Onder adequate verdoving werd de minipomp subcutaan geïmplanteerd en PCOS werd met succes geïnduceerd bij de muizen na een bepaalde periode van de afgifte van de minipomp.

Een aangepaste techniek voor het induceren van polycysteus ovariumsyndroom bij muizen

Experimentele validatie van enhancer-activiteit wordt het beste benaderd door middel van functieverliesanalyse. Hier wordt een efficiënt protocol gepresenteerd dat CRISPR/Cas9-gemedieerde deletie gebruikt om allelspecifieke regulatie van genregulatie in F1 ES-cellen te bestuderen die een hybride genoom bevatten (Mus musculus129 x Mus castaneus).

Het genereren van CRISPR / Cas9 Mediated monoallelische verwijderingen in Enhancer-functie van muis embryonale stamcellen Studie

Dit protocol geeft een werkwijze kwantitatieve eencellige voeren in situ analyse van eiwitexpressie van afstamming specificatie mouse pre-implantatie embryo bestuderen. De noodzakelijke voor het verzamelen van blastocysten procedures, whole-mount immunofluorescentie detectie van eiwitten, beeldvorming van de monsters op een confocale microscoop, en nucleaire segmentatie en beeldanalyse worden beschreven.

Kwantitatieve Analyse van eiwitexpressie aan Lineage Specificatie studie in muizenmodellen preimplantatie embryo&#39;s

Dit protocol beschrijft de isolatie, cultuur en verkalking van de rat-afgeleide ventiel interstitiële cellen, een zeer fysiologische in vitro model van calcific aortaklep ziekte (CAVD). Exploitatie van dit model rat vergemakkelijkt CAVD onderzoek in het verkennen van de cel- en moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan dit complexe pathologisch proces.

Isolatie en karakterisatie van primaire Rat klep interstitiële cellen: een nieuw Model voor het bestuderen van verkalking van de aortaklep

Hier beschrijven we een hoge resolutie geheel-mount beeldvorming methode in de hele volwassen muis oor huid, waarmee we kunnen visualiseren vertakkende genuitdrukking en patronen van perifere zenuwen en bloedvaten, evenals immuun cel distributie.

Geheel-mount confocale microscopie voor volwassen oor huid: een modelsysteem om te studeren, Neuro-vasculaire vertakkende genuitdrukking en immuun cel distributie

Leer een muismodel van polycysteus ovarium syndroom ontwikkelen met dihydrotestosteron pellets. Deze methode onderzoekt de effecten van hyperandrogenisme op de reproductieve gezondheid en nageslacht.

Een muismodel van Hyperandrogenic te bestuderen polycysteus ovarium syndroom

Meer video's verkennen