Name: Beoordelen van neuroprotectieve effecten van Glycyrrhizae Radix et Rhizoma uitpakken met behulp van een muismodel van voorbijgaande middelste cerebrale slagader occlusie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Leer een verbeterde MCAO-muismodelmethode om de neuroprotectieve effecten van Glycyrrhizae Radix et Rhizoma-extract te evalueren. Dit protocol vermindert significant het infarctvolume na beroerte.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Niet van toepassing.

Alle procedures waarbij dieren werden goedgekeurd door de ethische commissie van Pusan National University (erkenningsnummer, PNU-2016-1087). Een grafisch overzicht van deze studie is afgebeeld in Figuur 1.
1. voorbereiding en toediening van GRex
Opmerking: De GR gebruikt in deze studie werd gekocht van een commerciële farmaceutisch bedrijf.
<ol><li>200 g GR plaats in 2.000 mL methanol en Incubeer bij kamertemperatuur (25 ° C) gedurende 5 dagen.</li>
	<li>Filteren van het mengsel met behulp van filtreerpapier met 0,26 mm dikte en 5 µm poriegrootte en verwijder de bovendrijvende substantie. 1000 mL methanol Voeg aan het residu GR en filtert u opnieuw.</li>
	<li>Combineren van de twee supernatant, filteren door filterpapier concentreren onder vacuüm en vervolgens het residu te produceren GRex freeze-dry.</li>
	<li>Los van de GRex in dimethylsulfoxide (DMSO), verdund met 0,9% fysiologische zoutoplossing, en filtreer door een 0,45 µm spuit filter. Vervolgens aangepast, de uiteindelijke concentratie van DMSO < 5%.</li>
	<li>Grijs (300 mg/kg lichaamsgewicht) 1 h na de reperfusie van MCAO via mondelinge maagsonde beheren. Beheren van DMSO verdund in een fysiologische zoutoplossing (10 mL/kg lichaamsgewicht) alleen voor de normale groep en de controlegroepen, respectievelijk. Opmerking: De concentratie van GRex gebruikt in dit experiment werd bepaald volgens de concentratie die actief zijn via onze eerdere studie8was.</li>
</ol>2. muismodel van MCAO
<ol><li>Gebruik mannelijke C57BL/6 muizen veroudering 6 weken en met een gewicht van 22-25 g. bieden alle dieren met gratis toegang tot de standaard chow en water en huis hen in een omgeving met gecontroleerde temperatuur (22 ± 1 ° C) en een 12 h licht/donker cyclus.<ol>
<li>Verdeel de muizen in groepen van zes muizen per stuk, die moeten bestaan uit sham bediende normaal, controle en GRex behandelgroepen.</li>
		<li>MCAO chirurgie (wijziging van de methode van Koizumi et al. uitvoeren 9) over de controle en de GRex behandelgroepen met een stereomicroscoop.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Inademing verdoving in de muizen met behulp van 2% Isofluraan in 70% N2O en 30% O2induceren. Anesthesie wordt voldoende geacht wanneer de muis reageert niet op mechanische prikkel toegepast op zijn staart. Het handhaven van de lichaamstemperatuur van de muizen bij 36.5 ± 0,5 ° C met behulp van een lichaam temperatuur-bedrijf deken met een thermometer verbonden.</li>
	<li>Verwijder al het haar op de borst en nek van de muizen door scheren gevolgd door gebruik van haar verwijdering room, de chirurgische site van huid met betadine scrub afgewisseld met alcohol voor twee keer desinfecteren en breng een insnede van ongeveer 2 cm lang met chirurgische Blade in het midden van de nek. Zorgvuldig isoleren de linker gemeenschappelijke halsslagader (LCCA), externe halsslagader en de tak van de interne halsslagader uit de omliggende bindweefsel.</li>
	<li>De externe halsslagader en de gemeenschappelijke halsslagader met een chirurgische hechtdraad (4-0 zijde hechtdraad, half hitch knoop) tijdelijk blokkeren de bloedstroom in de interne halsslagader afbinden tijdens de operatie.</li>
	<li>Invoegen van een silicium-gecoat nylon Sutuur (geologie) (8-0 monofilamenten, 11 mm lang) via de interne halsslagader naar de oorsprong van de linker MCA. Aanpassen van de dikte van het silicium beklede deel van de gloeidraad naar een bereik van 0.10-0,12 mm.</li>
	<li>Het meten van de afname van de relatieve cerebrale doorbloeding (rCBF) in het MCA met behulp van een laser Doppler debietmeter. MCAO zal bevestigd worden wanneer de rCBF wordt gehandhaafd op < 20% van de rust voorwaarde waarden tijdens de gehele periode van ischemische.</li>
	<li>Los van de ingevoegde gloeidraad naar het bloedvat voor 2 h terwijl de cerebrale slagader is geroteerd, en vervolgens zorgvuldig trekken de gloeidraad om te herstellen van de bloedstroom voor 22u van reperfusie. Suture van de huid door naaien op 5 plaatsen (3-0 zijde hechtdraad, twee half haperingen knoop) en laat elke muis te ontwaken uit de narcose.</li>
	<li>In de normale groep bewerking een schijnvertoning volgens dezelfde procedure hierboven (tot 2.4), met de volgende uitzondering. De gemeenschappelijke halsslagader afbinden en suture de ingesneden spieren en huid.</li>
</ol>3. meting van Volume van beschadigde hersenweefsel
<ol><li>Na euthanasie van de muizen voor meting van de schade aan de hersenen met CO2 inademing hersenen accijnzen de muis 24 uur na het begin van MCAO met behulp van iris chirurgische scharen en schuine pincet.<ol>
<li>Na het verwijderen van het hoofd met behulp van schaar, maak een incisie in de huid van de middellijn van het hoofd om te spiegelen over de huid van de schedel.</li>
		<li>De pariëtale botten breken met schuine pincet, peeling uit dura deeltjes op hetzelfde moment, en vervolgens het isoleren van de hersenen zorgvuldig van de schedel.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Knippen het verwijderde weefsel in secties (1 mm dik) met behulp van een matrix van de hersenen muis en vervolgens vlek de secties voor 17 min in een oplossing van 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC).</li>
	<li>Los van de secties in 10% formaline voor ten minste 2 uur en dan fotograferen met een digitale camera. TTC worden om levensvatbare weefsel rode vlek, terwijl het necrotische gebieden wit zullen nageleefd.</li>
	<li>Analyseren en kwantificeren van de cerebrale infarct gebied van elke sectie met behulp van ImageJ.</li>
</ol>4. de haematoxyline en eosine (H & E) en Cresyl Violet kleuring van histologische secties
<ol><li>De muizen voor histologisch onderzoek euthanaseren CO2 inademing en perfuse hen transcardially met 10 mL-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), gevolgd door 10 mL 4% paraformaldehyde (PFA). Isoleren van de hersenen met behulp van dezelfde procedure als hierboven (3.1) en dompel de hersenen 10 ml van 30% sucrose's nachts.</li>
	<li>Insluiten van het hersenweefsel in optimale scherpe temperatuur (OCT) samengestelde en snijd het coronally in 15 µm-dik secties met behulp van een cryostaat. Monteer de secties op glas-dia's, gevolgd door de kleuring met haematoxyline en eosine (H & E) of cresyl violet.</li>
	<li>Dia's glas in 80% ethanol voor 1 min, gevolgd door de kleuring in Haematoxyline oplossing gedurende 5 min. onderdompelen.<ol>
<li>Dompel de dia's in 1% zuur alcohol tweemaal, onderdompelen in verzadigde Lithiumcarbonaat oplossing voor 30 s, wassen met leidingwater voor 30 s, waarna counterstain in eosine oplossing voor 30 s.</li>
		<li>De dia's in leidingwater te spoelen, weken in 95% en absolute ethanol opeenvolgend.</li>
		<li>Drogen van de dia's, schakelt u hen in xyleen voor ten minste 10 min. en dan mount de coverslips met behulp van montage medium.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Plaats het glas dia's op een dia warmer gedurende ten minste 1 uur, gevolgd door onderdompeling in 50% ethanol verdund met chloroform's nachts.<ol>
<li>Vlek van de dia's met 0,1% cresyl violet gedurende 10 minuten in een droge oven 40 ° C.</li>
		<li>Onderdompelen in 95% ethanol voor 30 min en vervolgens uitdrogen in absolute ethanol voor 2 keer.</li>
		<li>2 keer in xyleen voor 5 min Schakel en mount met montage medium na het drogen van de lucht.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Met behulp van een Microscoop, observeren de histologische veranderingen die zich hebben voorgedaan na MCAO-geïnduceerde hersenletsel.</li>
</ol>5. statistische analyse
<ol><li>Geefderesultaten experimentele middelen ± standaardafwijking en bepalen van de statistische significantie tussen de groepen indelen met behulp van een one-way variantieanalyse (ANOVA) gevolgd door de Tukey post hoc analyse met behulp van een software van de analyse van gegevens.</li>
	<li>Instellen van de statistische significantie op een p-waarde < 0.05.</li>
</ol>

<ol><li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rising+stroke+incidence+in+young+adults%3A+more+epidemiological+evidence%2C+more+questions+to+be+answered%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li>
<li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li>
<li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Article+in+Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li>
<li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+Neurorehabilitation%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li>
<li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+exploration+of+licorice+metabolome%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li>
<li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Separation+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li>
<li>Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herbological+study+on+the+medicinal+effects+of+roasted+licorice+and+honey-roasted+licorice%5BTitle%5D)+AND+%22Yakushigaku+Zasshi%22%5BJournal%5D)">Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice.</a> Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).</li>
<li>Lim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Licorice+pretreatment+protects+against+brain+damage+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medicinal+Food%22%5BJournal%5D)">Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).</li>
<li>Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Nosotchu%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li>
<li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li>
<li>Alberts, M. J., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+strategies+for+ischemic+stroke+prevention%3A+role+of+multimodal+combination+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies.</a> Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).</li>
<li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li>
<li>Barlow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+the+brain+regions+associated+with+acute+spasticity+in+patients+diagnosed+with+an+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosensory+and+Motor+Research%22%5BJournal%5D)">Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke.</a> Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).</li>
<li>Roth, S., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+research+at+the+crossroads+-+where+are+we+heading%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Medical+Weekly%22%5BJournal%5D)">Stroke research at the crossroads - where are we heading.</a> Swiss Medical Weekly. 146, 14329(2016).</li>
<li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li>
<li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%3A+translational+potential+at+present+and+in+2050%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li>
<li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+animal+models+of+stroke%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li>
<li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li>
<li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+%28licorice%29%3A+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li>
<li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pharmacological+activities+of+licorice%5BTitle%5D)+AND+%22Planta+Medica%22%5BJournal%5D)">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li>
<li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-inflammatory+activity+of+licorice%2C+a+widely+used+Chinese+herb%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Biology%22%5BJournal%5D)">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Met de toenemende prevalentie van metabole ziekten zoals chronische hypertensie, diabetes en hyperlipidemie, die belangrijke risicofactoren voor lijn, zijn lijn preventie en behandeling geworden een belangrijk gebied van medisch onderzoek12, 13. tekorten in taal en beweging na een beroerte zijn sterk gecorreleerd met de mate van schade aan weefsel14 hersenen en leiden tot een slechte kwaliteit van leven voor patiënten en hun families-<sup ...

Schade aan de hersenen veroorzaakt door ischemie en reperfusie van de cerebrale bloedstroom leidt tot de dood van zenuwcellen en verlies van hersenweefsel. Dit soort schade aan de hersenen blijft toenemen met de toenemende prevalentie van cerebrovasculaire ziekten als gevolg van de verspreiding van metabole ziekten zoals obesitas, hypertensie en diabetes mellitus1,2. Het absolute aantal oudere patiënten met een beroerte is sterk toegenomen wereldwijd, en de kosten van medische zorg voor deze patiënten, die vaak met op lange termijn een handicap zitten, is een grote maatschappelijke Last. Daarom moeten secundaire een handicap zoveel mogelijk te verminderen van de economische last1,2worden opgevangen.
De meest gebruikte knaagdier model van cerebrale infarct is het middelste cerebrale slagader (MCA) occlusie (MCAO) model, waarin de MCA is geroteerd met een silicium beklede chirurgische hechten gloeidraad voor het blokkeren van de bloedstroom, veroorzaakt ischemische beroerte3, 4. met behulp van een gloeidraad als het occlusie-materiaal zorgt voor de controle van occlusie tijd en duurzaamheid door het manipuleren van de duur van de intra-luminal gloeidraad invoegpositie.
Eerdere studies hebben aangetoond dat zelfs wanneer hetzelfde knaagdier MCAO model wordt gebruikt, het totale volume van cerebrale infarct tussen experimenten varieert, veroorzaakt lage reproduceerbaarheid van de studies. We geoptimaliseerd om te verbeteren reproduceerbaarheid, de dikte van de gloeidraad munt gebruikt in het experiment. De resultaten van een voorstudie van de cerebrale ischemische periode en geïnduceerde infarct bleek dat een ischemische langer dan 60 min de volumetrische regio van mogen beschadigde hersenweefsel worden waargenomen en gekwantificeerd.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), ook bekend als zoethout, bestaat uit de gedroogde wortels en wortelstokken van Glycyrrhiza uralensis en G. glabra. Het is in de Chinese en Koreaanse traditionele geneeskunde gebruikt voor verschillende doeleinden, inclusief als een levensmiddelenadditief en medicinale5,6,7.
In een eerdere studie8, voorbehandeling met GR methanol extract (GRex) toonde een anti-apoptotic effect bij MCAO muizen, met inbegrip van belangrijke preventie van de daling in de eiwit expressie van B-cel lymfoom 2 (Bcl-2) en Bcl-extra grote (Bcl-xL). Deze studie werd uitgevoerd om de reproduceerbaarheid van de conventionele muismodel van MCAO verbeteren door haar efficiëntie bij het bepalen of na infarct behandeling met GRex effectief verminderd het infarct volume in MCAO-induced cerebrale schade te evalueren.

<table><tbody><tr><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td><td>Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea</td><td></td><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td></tr><tr><td>Qualitative filter paper</td><td>Advantec</td><td>Filter paper No. 2</td><td>Qualitative filter paper</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D8418-250ML</td><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td></tr><tr><td>Syringe filter (0.45 &micro;m)</td><td>Sigma</td><td>CLS431220</td><td>Syringe filter (0.45 &micro;m)</td></tr><tr><td>Stereo Microscope</td><td>Leica</td><td>M50</td><td>Stereo Microscope</td></tr><tr><td>Stereo Microscope</td><td>Nikon</td><td>SMZ745</td><td>Stereo Microscope</td></tr><tr><td>Laser Doppler</td><td>Moor Instrument</td><td>moorVMS-LDF</td><td>Laser Doppler</td></tr><tr><td>Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&amp;O2 Flowmeter System</td><td>Harvard Appratus</td><td>34-1352</td><td>Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&amp;O2 Flowmeter System</td></tr><tr><td>Homeothermic Monitoring System</td><td>Harvard Appratus</td><td>55-7020</td><td>Homeothermic Monitoring System</td></tr><tr><td>Digital Camera</td><td>Canon</td><td>Eos-M2</td><td>Digital Camera</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM3050S</td><td>Cryostat</td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Carl Zeiss</td><td>Zeiss Axio</td><td>Microscope</td></tr><tr><td>Data Analysis</td><td>Systat Software Inc.</td><td>SigmaPlot version 12</td><td>Data Analysis</td></tr><tr><td>Data Analysis</td><td>NIH Image</td><td>ImageJ</td><td>Data Analysis</td></tr><tr><td>Mouse diet</td><td>Doo Yeol Biotech</td><td>Standard rodent chow</td><td>Mouse diet</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>JOONGWAE</td><td>A02104781</td><td>Isoflurane</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>TROIKAA</td><td>ISOTROY 100</td><td>Isoflurane</td></tr><tr><td>Silk suture (4-0 Black silk)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>SK47510</td><td>Silk suture (4-0 Black silk)&nbsp;</td></tr><tr><td>Silk suture (3-0 White silk)&nbsp;</td><td>Baekjae</td><td>57</td><td>Silk suture (3-0 White silk)&nbsp;</td></tr><tr><td>Nylon suture (8-0 monofilament)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>NB825</td><td>Nylon suture (8-0 monofilament)&nbsp;</td></tr><tr><td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td><td>Sigma</td><td>T8877-25G</td><td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td></tr><tr><td>Formalin (Formaldehyde solution)</td><td>JUNSEI</td><td>69360-1263 20KG</td><td>Formalin (Formaldehyde solution)</td></tr><tr><td>Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td><td>YD Diagnostics</td><td>EasyStain</td><td>Hematoxylin (Harris Hematoxylin)</td></tr><tr><td>Eosin (1% Eosin Y Solution)</td><td>MUTO PURE CHEMICALS</td><td>3200-2</td><td>Eosin (1% Eosin Y Solution)</td></tr><tr><td>Cresyl violet (acetate)</td><td>Sigma</td><td>C5042-10G</td><td>Cresyl violet (acetate)</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148-1KG</td><td>Paraformaldehyde&nbsp;</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>JUNSEI</td><td>31365-0350 1KG</td><td>Sucrose</td></tr><tr><td>Optimum cutting temperature (OCT) compound</td><td>Scigen</td><td>4583</td><td>Optimum cutting temperature (OCT) compound</td></tr><tr><td>Disecting Knife</td><td>Fine Science Tools</td><td>10055-12</td><td>Disecting Knife</td></tr><tr><td>#4 Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11241-30</td><td>#4 Forcep</td></tr><tr><td>#5 Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td>#5 Forcep</td></tr><tr><td>#6 Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11260-20</td><td>#6 Forcep</td></tr><tr><td>#7 Fine Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>#7 Fine Forcep</td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-12</td><td>Surgical Scissors</td></tr><tr><td>Extra Fine Bonn Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14084-08</td><td>Extra Fine Bonn Scissors</td></tr><tr><td>Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15371-92</td><td>Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td></tr><tr><td>Vessel Dilating Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>18153-11</td><td>Vessel Dilating Forcep</td></tr></tbody></table>

beoordelen van neuroprotectieve effecten van glycyrrhizae radix et rhizoma uitpakken met behulp van een muismodel van voorbijgaande middelste cerebrale slagader occlusie

Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

Ischemie gevolgd door reperfusie van de cerebrale bloedstroom na een beroerte leidt tot de dood van zenuwcellen en verlies van hersenweefsel. De meest gebruikte diermodel voor de studie van de lijn is het middelste cerebrale slagader occlusie (MCAO) model. Eerdere onderzoeken hebben verschillende infarct maten gemeld, zelfs wanneer dezelfde experimentele diersoort onder vergelijkbare omstandigheden van de MCAO werd gebruikt. Daarom ontwikkelden we een verbeterde experimentele methode om aan te pakken van deze discrepantie. Muizen werden onderworpen aan MCAO met behulp van een gloeidraad als de occlusie materiaal om menselijke beroerte omstandigheden nabootsen en dikte van de gloeidraad is geoptimaliseerd om meer reproduceerbare infarct volume. Muizen die zijn behandeld met een methanol extract van Glycyrrhizae Radix et wortelstok (GRex) na beroerte inductie toonde een aanzienlijk verminderde totale infarct volume en het toegenomen aantal overlevende cellen ten opzichte van de onbehandelde controlegroep. Dit experimenteel protocol met succes gewijzigd en reproducibly blijkt de gunstige invloed van GRex op ischemische beroerte.

In de normale groep sham bediende wordt geen cerebrale infarct waargenomen overwegende dat in de controlegroep, een relatief groot aantal beschadigde gebieden wordt waargenomen. In de muizen wordt door de overheid gereguleerde 300 mg/kg grijs in de MCAO Modelgroep, een statistisch significante afname van het beschadigde gedeelte waargenomen (Figuur 2).
De histologische wijzigingen worden onderzocht ...

In deze studie wijzigen we een bestaande experimentele methode meer reproduceerbare om resultaten te verkrijgen, door de oprichting van een muismodel van middelste cerebrale slagader occlusie (MCAO). Orale toediening van Glycyrrhizae Radix et wortelstok (GR) methanol extract (GRex), na beroerte inductie, sterk gedaald totale infarct volume ten opzichte van de onbehandelde controlegroep.

Beoordelen van neuroprotectieve effecten van Glycyrrhizae Radix et Rhizoma uitpakken met behulp van een muismodel van voorbijgaande middelste cerebrale slagader occlusie

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in de neurowetenschappen en traditionele orale geneeskunde onderzoeksgebieden over screening voor neuroprotectieve natuurlijke verbindingen die relevant zijn voor het model. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de hogere reproduceerbaarheid van het infectievolume in overeenstemming is met de ischemische timingdosis. Visuele demonstratie van deze methode is van cruciaal belang omdat het typisch is om een zeer dun werktuig in het origineel in te voegen, de middelste cerebellar slagader met behulp van een steriele microscoop.Het aantonen van de procedure zal Se-Eun Lee, een rang een student studeren in mijn laboratorium. Om het Glycyrrhizae Radix et Rhizome-extract, of GRex, voor te bereiden, voegt u eerst 200 gram Glycyrrhizae Radix et Rhizome, of GR, toe aan twee liter methanol voor een vijfdaagse incubatie bij kamertemperatuur. Aan het einde van de incubatie, stam de oplossing door middel van 0,26-millimeter dik filterpapier met een vijf-micrometer porie grootte.Voeg het GR-residu toe aan een liter verse methanol en filter de oplossing opnieuw. Combineer de twee filtrates en ze door een nieuw stukje

assessing-neuroprotective-effects-glycyrrhizae-radix-et-rhizoma

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Midden cerebrale arterie (MCA) ligatie is een techniek om focale cerebrale ischemie studie in diermodellen. In deze methode wordt de middelste hersenslagader blootgesteld door craniotomie en geligeerd door cauterisatie. Deze methode geeft zeer reproduceerbare infarct volumes en hogere post-operatieve overlevingskansen in vergelijking met andere methoden beschikbaar.

De toepassing van permanente midden cerebrale slagader Ligatie in de muis

Source: Zheng, Y., et al. Experimental Models to Study the Neuroprotection of Acidic Postconditioning Against Cerebral Ischemia. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the application of acidic postconditioning (APC) to evaluate its neuroprotective effects against ischemic injury in a mouse model of middle cerebral artery occlusion (MCAO). It outlines the steps involved in reperfusion in the MCAO model and the application of APC during reperfusion to mitigate excitotoxicity, oxidative...

 Assessing the Neuroprotective Effects of Acidic Postconditioning in a Mouse Model of Cerebral Ischemia

Source: Lee, S. E., et al. Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the procedure to assess the neuroprotective effect of a test compound in a middle cerebral artery occlusion mouse model. The compound enters the brain, prevents neuronal death, and reduces infarct volume, confirming its neuroprotective effect compared to an untreated mouse.

Assessing the Neuroprotective Effects of a Test Compound in a Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

Dit protocol beschrijft repetitieve hypoxische preconditie, of korte blootstellingen aan systemische hypoxie die infarctvolumes en bloed-hersenbarrière-storingen verminderen na een voorbijgaande occlusie van de middelste hersenslagader bij muizen. Het beschrijft ook dubbele kwantificering van infarctvolume en bloed-hersenbarrière-storing na een beroerte om de werkzaamheid van neurovasculaire bescherming te beoordelen.

Kwantificering van Neurovasculaire Protection Na Repetitive Hypoxische Voorconditionering en Transient midden cerebrale slagader Occlusie in Muizen

Om de pathofysiologie van beroerte te begrijpen, is het belangrijk betrouwbare modellen. Dit document zal een van de meest gebruikte takt modellen beschrijven in muizen, genaamd de middelste cerebrale slagader occlusie (MCAo) model (ook aangeduid als de intraluminale filament of hechtdraad model) met reperfusie.

Chirurgische Aanpak voor midden cerebrale slagader occlusie en reperfusie Induced Stroke in Muizen

Chirurgische occlusie van een distale middelste cerebrale slagader tak (MCAo) is een veel gebruikte model in de experimentele beroerte onderzoek. Dit manuscript beschrijft de basistechniek vaste MCAo, gecombineerd met het inbrengen van een laterale craniale venster, dat de mogelijkheid voor longitudinaal intravitale microscopie bij muizen heeft.

Laterale Chronische Cranial Window Voorbereiding Maakt In Vivo Observatie Na distale midden cerebrale slagader Occlusie in Muizen

We beschrijven een muismodel van een beroerte veroorzaakt door de occlusie van de middelste hersenslagader met behulp van een met siliconen omhulde naald. Het protocol kan worden toegepast om een permanente occlusie of een tijdelijke ischemie te induceren, gevolgd door reperfusion.

Inductie van ischemische beroerte en ischemie-reperfusie in Muizen met behulp van het Midden-slagader occlusie Techniek en Visualisatie van Infarct Area

Hier beschrijven we een muismodel van retinale ischemie door voorbijgaande bilaterale gemeenschappelijke halsslagader occlusie met behulp van eenvoudige hechtingen en een klem. Dit model kan nuttig zijn voor het begrijpen van de pathologische mechanismen van retinale ischemie veroorzaakt door cardiovasculaire afwijkingen.

Een Murine-model van ischemisch netvliesletsel veroorzaakt door voorbijgaande bilaterale gemeenschappelijke halsslagader Occlusie

Dit protocol demonstreert een uniek muizenslagmodel met een middelgroot infarct en een uitstekende overlevingskans. Dit model stelt preklinische beroerte-onderzoekers in staat om de duur van de ischemie te verlengen, verouderde muizen te gebruiken en functionele resultaten op lange termijn te beoordelen.

Een aangepast transcraniaal occlusiemodel voor de middelste cerebrale slagader om de uitkomsten van een beroerte bij oudere muizen te bestuderen

Hier presenteren we een protocol om een distaal occlusiemodel van de middelste hersenslagader (dMCAO) op te stellen door middel van transcraniële elektrocoagulatie bij C57BL/6J-muizen en evalueren we het daaropvolgende neurologische gedrag en histopathologische kenmerken.

Inductie van acute ischemische beroerte bij muizen met behulp van de distale occlusietechniek van de middelste slagader

Leer een verbeterde MCAO-muismodelmethode om de neuroprotectieve effecten van Glycyrrhizae Radix et Rhizoma-extract te evalueren. Dit protocol vermindert significant het infarctvolume na beroerte.

Beoordelen van neuroprotectieve effecten van Glycyrrhizae Radix et Rhizoma uitpakken met behulp van een muismodel van voorbijgaande middelste cerebrale slagader occlusie (Video) | JoVE Journal

Beoordelen van neuroprotectieve effecten van Glycyrrhizae Radix et Rhizoma uitpakken met behulp van een muismodel van voorbijgaande middelste cerebrale slagader occlusie

Meer video's verkennen