Name: Een In Vivo -methode voor het uitrekenen van de Gut-bloed barrière en lever metabolisme van Microbiota producten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 54 s
Description: Leer een directe methode om de doorlaatbaarheid van de darm-bloedbarrière in vivo te meten bij ratten met behulp van portaalbloedmonsters. Deze techniek beoordeelt ook de hepatische klaring en het absorptiepad van verbindingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Het werk wordt ondersteund door het ministerie van Wetenschappen en hogeronderwijs Republiek Polen, Diamond verlenen neen: DI2017 009247.

De experimenten werden uitgevoerd op mannelijke Wistar Kyoto ratten volgens richtlijn 2010/63 EU betreffende de bescherming van dieren die voor wetenschappelijke doeleinden worden gebruikt en goedgekeurd door de I lokale bio-ethisch comité in Warschau.
1. opneming van de lijn voor Intraintestinal administratie
Opmerking: Hier stellen wij voor het beheer van de intracolonic van een markering met behulp van een katheter. Het kan worden gewijzigd door orale toediening of maagsonde op verschillende niveaus van het spijsverteringskanaal bijvoorbeeld maag of de twaalfvingerige darm. Vergeet niet om gebruik van wegwerp chirurgische kleding, met inbegrip van de chirurgenjas, kap en handschoenen, en zorgen om te volgen de veiligheidsmaatregelen aan de scherpe instrumenten gebruikt in de chirurgie (naalden, enz.) tijdens procedures 1-6 gerelateerde.
<ol><li>Snelle dieren 's nachts voordat de procedure. Voer alle procedures tijdens de narcose, dat wil zeggen, verkregen door injectie van urethaan 1,5 g/kg bw i.p. Assess juiste afstomping, door het gebrek aan ooglidreflex en hoornvlies reflexen en teen-knijp- en staart-snuifje methode.</li>
	<li>Gebruik een pediatrische Foley katheter (10F of 8F) als een Colon katheter. Mark de katheter om aan te geven van het deel dat wordt ingevoegd in de dikke darm (ca. 8 cm).</li>
	<li>Controleer de anale regio en de inhoud van de stoelgang in de endeldarm videoband de katheter in de dikke darm. Als ontlasting aanwezig is, leeg de endeldarm door het masseren van het rectale gebied.</li>
	<li>Zet een smeermiddel (bijvoorbeeld glycerine of petrolatum) langs de katheter. Bevochtig de anus en omstreken met het glijmiddel.</li>
	<li>Plaats de katheter met een gids draad ongeveer 8 cm via de externe anale sluitspier. Langzaam vooruit-achteruit en cirkelvormige bewegingen maken. Opmerking: Houd bij het controleren van de locatie van de katheter door abdominale palpatie terwijl het opnemen van de katheter.</li>
</ol>2. inferior Vena Cava catheterisatie
<ol><li>Scheren bont in de lies. Afwisselend desinfecteren van de huid met alcohol en Povidon jodium 3 keer en de liesstreek met afdeklakens dekken.</li>
	<li>Probeer te voelen van de pols op de femorale slagader en snijd de huid lengterichting voor de lengte van ongeveer 2,0 cm op de plaats waar de pols voelbaar.</li>
	<li>Ontleden de fascia en de spieren te visualiseren de neurovasculaire bundel.</li>
	<li>Ontleden van de femorale ader van de neurovasculaire bundel: eerste zenuwen, dan de femorale slagader, waarna de ader. Opmerking: Wees voorzichtig tijdens de dissectie van de neurovasculaire bundel, aangezien kleine takken van de femorale ader kunnen gemakkelijk worden beschadigd, produceren bloeden.</li>
	<li>Twee ligaturen zetten de femorale ader. Geen bindt de knopen nog. De uiteinden van de proximale ligatuur met een naald houder te vangen.</li>
	<li>Trek voorzichtig de ligatuur eindigt met de houder naar boven om te sluiten van het proximale deel van de ader. Wacht totdat de ader is gevuld met bloed en binden de distale knoop.</li>
	<li>Maken van een kleine incisie (ca. 1 mm) op de ader tussen de knoop en de proximale ligatuur, met behulp van microchirurgische schaar. Plaats de katheter met pincet of de naald met het gebogen uiteinde. Opmerking: Het doorprikken van de ader en het gebogen uiteinde van de naald gebruiken als een gids voor de katheter. Los de ligatuur proximale terwijl het opnemen van de katheter. Plaats de katheter voor 6-7.0 cm.</li>
	<li>Beveilig de katheter in de femorale ader met twee één chirurgische knopen. De proximale ligatuur evenals binden.</li>
	<li>Controleer de bij van de katheter door te proberen te trekken bloed met een spuit. Spoel de katheter met 0.3 mL van de heparinized zout (100 eenheden/mL).</li>
	<li>Sluit de chirurgische wond met twee lagen van enkele steken.</li>
</ol>3. Portal Vein catheterisatie
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58456/58456fig1.jpg"> Figuur 1 : Portaal katheter. De portal katheter bestaat uit een naald OD: 0,9 mm met een lengte van ongeveer 25.0 mm [A], een flexibel polyurethaan katheter OD: 0,025", lengte ongeveer 100.0 mm [B], een flexibele polyethyleen-tip van de katheter OD: 0.040", circa 15,0 mm lange [C], een stekker [D]. , en een ligatuur 3/0 met een lengte van 100.0 mm [E]. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58456/58456fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<ol><li>Bereiden de portal katheter volgens Figuur 1.<ol>
<li>Stop gesneden van de naald (OD: 9 mm) in de polyurethaan katheter OD: 0,025".</li>
		<li>Bind de ligatuur 3/0 op de kruising van de naald en de katheter. Opmerking: Zorg ervoor dat het langer deel van de ligatuur ten minste 6 cm lang is.</li>
		<li>Steek het uiteinde van de katheter OD: 0,025" in de polyethyleen katheter OD: 0.040".</li>
		<li>Sluit de katheter met een stekker metaal of plastic.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Middellijn laparotomie<ol>
<li>Scheren van de vacht in de buik, afwisselend desinfecteren van de huid met alcohol en Povidon jodium 3 keer en bestrijken het gebied met afdeklakens.</li>
		<li>Snijd de huid lengterichting van de xiphoid van het borstbeen hard aan de navel.</li>
		<li>Snijd de spieren van de buikwand langs de witte lijn.</li>
		<li>Vouw de cut rostrally in de Y-vorm zodat de xiphoid kraakbeen tussen twee sneden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Portal vein dissectie<ol>
<li>Bevochtig de chirurgische swabs met zoutoplossing.</li>
		<li>Exteriorize van de blindedarm, oplopend en transverse colon en dunne darm lus. Zet de darmen aan de linkerkant de hoofdmap van het mesenterium bloot te stellen. Opmerking: Bedek de darmen met gaas bevochtigd met een fysiologische zoutoplossing om de darmen uitdroogt.</li>
		<li>Aan de portal vein bloot, zorgvuldig de hepatische lobben aan de zijkanten of verplaatsen naar boven naar de diafragma met de bevochtigde swabs.</li>
		<li>Het deel van de portal-ader die niet is bedekt met het mesenterium (in de hepatische Hilus, ongeveer 5 mm lang.) lokaliseren en doorgeven van de ligatuur 3/0 (15 cm lang) onder de portal ader. Opmerking: Om de weefsels te beschermen tegen schade terwijl het plaatsen van de ligatuur, Bevochtig de ligatuur met een fysiologische zoutoplossing oplossing.</li>
		<li>De uiteinden van de ligatuur klem met pincet en draai voorzichtig om te stabiliseren van het vaartuig.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Inbrengen en stabilisatie van de katheter<ol>
<li>Doorgeven van het langere gedeelte van de portal katheter ligatuur onder het vrije gedeelte van de portal-ader en trek het zodat de katheter net naast de portal ader ligt.</li>
		<li>Steek de naald in de bovenste mesenterische ader 3 mm onder de kruising van de bovenste mesenterische ader en de portal vein. Houd de naald onder een hoek van 30° en, na het aangaan van de ader, verminderen de hoek en vooraf de naald bijna horizontaal, parallel aan de portal-ader. Opmerking: Plaats de naald voor een lengte van ongeveer 6-7 mm. De stabiliserende ligatuur moet voorzichtig de portal vein draai terwijl het opnemen van de katheter.</li>
		<li>Toepassing van 1-2 druppels weefsel lijm op de plaats waar de naald is ingebracht. Verwijder de swabs die betrekking hebben op de lever.</li>
		<li>Zet de darmen terug in de buikholte.</li>
		<li>Bevochtig de darmen met een verwarmde omhoog zoutoplossing en bedek het met bevochtigd steriel gaas.</li>
		<li>Controleer de bij van de katheter en spoel de katheter met 0.3 mL van de heparinized zout (100 eenheden/mL). Opmerking: Veneuze bloed spontaan backflows in de katheter.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Beëindiging van de operatie<ol>
<li>Na 5 minuten, Controleer de kleur van de darmen en de peristaltische bewegingen, ervoor te zorgen dat de juiste mesenterische bloedstroom wordt gehandhaafd.</li>
		<li>Sluit de buikholte met 3 steken: muur buikvlies met de binnenste laag van de spieren van de buikwand - een continu, absorbeerbare Sutuur (geologie); resterende spieren van de buikwand - een continu, absorbeerbare Sutuur (geologie); huid en onderhuids weefsel - één, niet-absorbeerbare draadjes. Opmerking: Exteriorize het distale deel van de katheter rond de navel.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Portal Vein bemonstering bloed
<ol><li>Monster portal vein bloed soms volgens de specifieke testen protocol gebruikt; Zie tabel 1.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Korte protocol</td>
			<td>Lange protocol</td>
		</tr>
<tr>
<td>t0 – basislijn (vóór intracolonic de administratie)</td>
			<td>t0 – basislijn (vóór intracolonic de administratie)</td>
		</tr>
<tr>
<td>t1 – 5 min na toediening van de intracolonic</td>
			<td>t1 – 30 min na intracolonic toediening</td>
		</tr>
<tr>
<td>t2 – 30 min na intracolonic toediening</td>
			<td>t2 – 60 min na toediening van de intracolonic</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: Portal bloed bemonstering protocollen voor gut permeabiliteit beoordeling.
Opmerking: De tijd tussen opeenvolgende bloedmonsters hangt voornamelijk de biodisponibiliteit van de geteste stoffen en de plaats van toediening (dikke darm, maag, enz.).
<ol start="2"><li>De portal katheter stekker open en laat de bloedstroom vrij.</li>
	<li>Gebruik spuit (vol. 2 mL) en botte naald OD: 0.9 mm. het verzamelen van niet meer dan 0,7 mL bloed.</li>
	<li>Spoel de katheter met 0.3 mL EDTA zoutoplossing (100 eenheden/mL) en sluit de stekker van de katheter.</li>
</ol>5. inferior Vena Cava bloedmonsters
<ol><li>Monster vena cava inferior bloed soms volgens de specifieke testen protocol gebruikt; Zie tabel 2.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Portal vein</td>
			<td>Vena cava inferior</td>
		</tr>
<tr>
<td>t0 – basislijn (vóór intracolonic de administratie)</td>
			<td>t0 – basislijn (vóór intracolonic de administratie)</td>
		</tr>
<tr>
<td>t1 – 30 min na intracolonic toediening</td>
			<td>t1 – 30 min na intracolonic toediening</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 2: Protocol van bloed bemonstering voor lever klaring meten en bijhouden van de darm-portaal bloed-lever-systemische bloed weg.
<ol start="2"><li>Open de stekker van de vena cava inferior-katheter en de bloedstroom vrij laat.</li>
	<li>Verzamelen van niet meer dan 0,7 mL bloed met behulp van spuit (vol. 2 mL) en gebroken naald OD: 0.9mm.</li>
	<li>Spoel de katheter met 0,2-0,3 mL EDTA saline (100 eenheden/mL) en sluit de stekker van de katheter.</li>
</ol>6. de administratie van een Gut permeabiliteit markering
<ol><li>Verwijder de begeleidingskabel en opblazen van de ballon van de Colon katheter, met behulp van adequate hoeveelheid steriel water (meestal 1 mL maar check de ballon van de werkelijke grootte voor de insertdatum). Opmerking: De diameter van de ballon mag niet hoger zijn dan 1 cm.</li>
	<li>Plaats de kop van de rat naar beneden (hellingsgradiënt ongeveer 15%) tot een minimum beperken van het risico van de uitstroom van de door de overheid gereguleerde oplossing van de dikke darm.</li>
	<li>Langzaam het beheren van de geteste stof (bijvoorbeeld trimethylamine, 100 mg/kg bw) via een poort van de afwatering in Colon katheter. Let op: Overschrijd niet de hoeveelheid van de door de overheid gereguleerde 0,75 mL en de voeding snelheid van 0,5 mL/min om te voorkomen dat de uitstroom van de door de overheid gereguleerde oplossing van de anus.</li>
	<li>Na 10 min leeglopen van de ballon van de katheter.</li>
	<li>Monster bloed van de vena cava inferior en de portal vein volgens de specifieke testen protocol gebruikt; Zie tabel 1 en tabel 2.</li>
	<li>Euthanaseren dier via erkende methode.</li>
</ol>7. berekening van de lever Clearance
<ol><li>Lever van mijnen, opgevat als hepatische extractie, door het verschil tussen portal bloed concentratie en vena cava inferior bloed concentratie of door de verhouding tussen de vena cava inferior portal bloed concentratie, (1 - (vena cava inferior concentratie Express / portal vein concentratie)).</li>
</ol>8. evaluatie van de analysemonsters stof concentratie n bloed
<ol><li>Afhankelijk van de teststof en de methodologie van de test, wordt het monster onverminderd door aangewezen laboratorium procedures (centrifugeren, enz.). In de voorgestelde protocollen evalueren we TMA/TMAO en SCFA concentratie met behulp van vloeibare chromatografie gekoppeld aan massaspectrometrie triple-vierpolige. Vindt u een gedetailleerde beschrijving van de methode van aanvullend materiaal.</li>
</ol>

<ol><li>Camilleri, M., Madsen, K., Spiller, R., Greenwood-Van Meerveld, B., Verne, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+barrier+function+in+health+and+gastrointestinal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+and+Motility%3A+The+Official+Journal+of+the+European+Gastrointestinal+Motility+Society%22%5BJournal%5D)">Intestinal barrier function in health and gastrointestinal disease.</a> Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 24 (6), 503-512 (2012).</li>
<li>Keita, A. V., Soderholm, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intestinal+barrier+and+its+regulation+by+neuroimmune+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+and+Motility%3A+The+Official+Journal+of+the+European+Gastrointestinal+Motility+Society%22%5BJournal%5D)">The intestinal barrier and its regulation by neuroimmune factors.</a> Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 22 (7), 718-733 (2010).</li>
<li>Farhadi, A., Banan, A., Fields, J., Keshavarzian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+barrier%3A+an+interface+between+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Intestinal barrier: an interface between health and disease.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 18 (5), 479-497 (2003).</li>
<li>Jaworska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+in+rats+is+associated+with+an+increased+permeability+of+the+colon+to+TMA%2C+a+gut+bacteria+metabolite%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Hypertension in rats is associated with an increased permeability of the colon to TMA, a gut bacteria metabolite.</a> PloS one. 12 (12), e0189310(2017).</li>
<li>Fujii, H., Nakai, K., Fukagawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+oxidative+stress+and+indoxyl+sulfate+in+progression+of+cardiovascular+disease+in+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Apheresis+and+Dialysis%3A+Official+Peer-Reviewed+Journal+of+the+International+Society+for+Apheresis%2C+the+Japanese+Society+for+Apheresis%2C+the+Japanese+Society+for+Dialysis+Therapy%22%5BJournal%5D)">Role of oxidative stress and indoxyl sulfate in progression of cardiovascular disease in chronic kidney disease.</a> Therapeutic Apheresis and Dialysis: Official Peer-Reviewed Journal of the International Society for Apheresis, the Japanese Society for Apheresis, the Japanese Society for Dialysis Therapy. 15 (2), 125-128 (2011).</li>
<li>Tomasova, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracolonic+hydrogen+sulfide+lowers+blood+pressure+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%3A+Biology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Intracolonic hydrogen sulfide lowers blood pressure in rats.</a> Nitric Oxide: Biology and Chemistry. 60, 50-58 (2016).</li>
<li>Brahe, L. K., Astrup, A., Larsen, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+butyrate+the+link+between+diet%2C+intestinal+microbiota+and+obesity-related+metabolic+diseases%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity+Reviews%3A+An+Official+Journal+of+the+International+Association+for+the+Study+of+Obesity%22%5BJournal%5D)">Is butyrate the link between diet, intestinal microbiota and obesity-related metabolic diseases?</a> Obesity Reviews: An Official Journal of the International Association for the Study of Obesity. 14 (12), 950-959 (2013).</li>
<li>Ufnal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trimethylamine-N-oxide%3A+a+carnitine-derived+metabolite+that+prolongs+the+hypertensive+effect+of+angiotensin+II+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Canadian+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Trimethylamine-N-oxide: a carnitine-derived metabolite that prolongs the hypertensive effect of angiotensin II in rats.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 30 (12), 1700-1705 (2014).</li>
<li>Huc, T., Nowinski, A., Drapala, A., Konopelski, P., Ufnal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indole+and+indoxyl+sulfate%2C+gut+bacteria+metabolites+of+tryptophan%2C+change+arterial+blood+pressure+via+peripheral+and+central+mechanisms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Indole and indoxyl sulfate, gut bacteria metabolites of tryptophan, change arterial blood pressure via peripheral and central mechanisms in rats.</a> Pharmacological Research. 130, 172-179 (2018).</li>
<li>Ufnal, M., Pham, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut-blood+barrier+permeability+-+A+new+marker+in+cardiovascular+and+metabolic+diseases%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Hypotheses%22%5BJournal%5D)">The gut-blood barrier permeability - A new marker in cardiovascular and metabolic diseases?</a> Medical Hypotheses. 98, 35-37 (2017).</li>
<li>Le Ferrec, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+of+the+intestinal+barrier.+The+report+and+recommendations+of+ECVAM+Workshop+46.+European+Centre+for+the+Validation+of+Alternative+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Alternatives+to+Laboratory+Animals%3A+ATLA%22%5BJournal%5D)">In vitro models of the intestinal barrier. The report and recommendations of ECVAM Workshop 46. European Centre for the Validation of Alternative methods.</a> Alternatives to Laboratory Animals: ATLA. 29 (6), 649-668 (2001).</li>
<li>Bohets, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+absorption+screening+in+drug+discovery+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Strategies for absorption screening in drug discovery and development.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 1 (5), 367-383 (2001).</li>
<li>Grootjans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+assessment+of+barrier+integrity+and+function+of+the+human+gut%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastrointestinal+Surgery%22%5BJournal%5D)">Non-invasive assessment of barrier integrity and function of the human gut.</a> World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2 (3), 61-69 (2010).</li>
<li>Bielinska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+salt+intake+increases+plasma+trimethylamine+N-oxide+%28TMAO%29+concentration+and+produces+gut+dysbiosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrition%22%5BJournal%5D)">High salt intake increases plasma trimethylamine N-oxide (TMAO) concentration and produces gut dysbiosis in rats.</a> Nutrition. 54, 33-39 (2018).</li>
<li>Clarke, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+Ussing+chamber+studies+of+mouse+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">A guide to Ussing chamber studies of mouse intestine.</a> American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 296 (6), G1151-G1166 (2009).</li>
<li>Denno, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+lactulose+to+mannitol+ratio+to+evaluate+childhood+environmental+enteric+dysfunction%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%3A+An+Official+Publication+of+the+Infectious+Diseases+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Use of the lactulose to mannitol ratio to evaluate childhood environmental enteric dysfunction: a systematic review.</a> Clinical Infectious Diseases: An Official Publication of the Infectious Diseases Society of America. 59 Suppl 4, S213-S219 (2014).</li>
<li>Lugea, A., Salas, A., Casalot, J., Guarner, F., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+hydrophobicity+of+the+rat+colonic+mucosa+is+a+defensive+barrier+against+macromolecules+and+toxins%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Surface hydrophobicity of the rat colonic mucosa is a defensive barrier against macromolecules and toxins.</a> Gut. 46 (4), 515-521 (2000).</li>
<li>Bloemen, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+chain+fatty+acids+exchange+across+the+gut+and+liver+in+humans+measured+at+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Short chain fatty acids exchange across the gut and liver in humans measured at surgery.</a> Clinical Nutrition. 28 (6), 657-661 (2009).</li>
<li>Huc, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonic+hydrogen+sulfide+produces+portal+hypertension+and+systemic+hypotension+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Colonic hydrogen sulfide produces portal hypertension and systemic hypotension in rats.</a> Experimental Biology and Medicine. 243 (1), 96-106 (2018).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De beschreven direct, in vivo, methode voor het meten van de permeabiliteit van de GBB onderhoudt closetophysiological voorwaarden in de gastro-intestinale systeem (behoudt de intestinale doorbloeding), en wordt vrijwel niet beïnvloed door de leverfunctie en nierfunctie.
De kritische stap van deze techniek is het inbrengen van de katheter in de portal. Dit moet gebeuren zachtjes en besluitvaardig op hetzelfde moment. Een milde en korte bloeden kan optreden van de correct uitgevoerde a...

De gut-bloed barrière (GBB), ook bekend als de intestinale barrière, is een complex gelaagde systeem dat het lumen van de darm uit de bloedbaan scheidt om de passage van schadelijke stoffen beperken terwijl het toestaan van de absorptie van voedingsstoffen1. Het bestaat uit de drie lagen: de slijm laag epitheel en lamina propria.
Talrijke factoren kunnen van invloed zijn op de GBB integriteit en functie2. Het is aangetoond dat de GBB in zowel de extraintestinal als de gastro-intestinale ziekten, met inbegrip van de cardiovasculaire en metabole ziekten3, hetgeen tot een verhoogde passage van bacteriële metabolieten van de darm naar de bloedbaan4 leiden kanwordt verstoord. Een toegenomen penetratie van gut bacteriële metabolieten kan gevolgen hebben voor de werking van het hele organisme. Bijvoorbeeld, tonen recente studies een significant effect van bacteriële metabolieten, zoals indolen, H2S, korte-keten vetzuren (SCFA) en trimethylamine N-oxide, op de bloedsomloop functies5,6,7 ,8,9. Er is ten slotte voorgesteld dat een verhoogde permeabiliteit van de GBB kan dienen als een marker van cardiovasculaire en metabole ziekten die verband houden met de morfologische en functionele wijzigingen in de darmen10. Het bijhouden van het traject van de darm-portaal bloed-lever-systemische bloed van bacteriële metabolieten kan dus van belang voor zowel fundamentele en klinische wetenschappen.
Algemeen gebruikte experimentele methoden voor de evaluatie van GBB permeabiliteit zijn uitgevoerd in vitro met behulp van gereseceerd intestinale segmenten, fragmenten van mucosa of kunstmatige membranen11,12. De nauwkeurigheid van deze methoden is aangetast door het feit dat de goede werking van de GBB constante intestinale bloedstroom vereist. Aan de andere kant, is het beschikbaar in vivo -methoden zijn gebaseerd op de evaluatie van urine of perifeer bloed concentraties van exogene markeringen13. Echter, perifere bloed en urine concentratie van exogene stoffen wordt beïnvloed door de nierfunctie, dat wil zeggen, glomerulaire filtratie snelheid en tubulaire uitscheiding, alsmede door lever metabolisme, dat wil zeggen, first-pass metabolisme. Beide parameters kunnen studie onderwerpen onafhankelijk van de GBB functie sterk uiteen.
Dit witboek beschrijft een rechtstreekse meting van de permeabiliteit van de GBB in ratten met behulp van de portal bloedmonsters. Deze methode in vivo behoudt de intestinale doorbloeding en wordt vrijwel niet beïnvloed door de leverfunctie en nierfunctie. De beschreven aanpak wordt niet vaak gebruikt, mogelijk vanwege bepaalde methodologische problemen. We beschrijven in detail de catheterisatie van de ader van de portal en de vena cava inferior net boven de samenvloeiing van de hepatische ader. Bloedmonsters van de ader van de portal en de vena cava inferior kunt evaluatie van de GBB permeabiliteit en lever goedkeuring en opvolging van gut-portaal bloed-lever-systemische bloed traject van moleculen van belang, zoals de darm bacteriële metabolieten of medicijnen. Ook presenteren we verschillende toepassingen van de methode die werden getest in ons laboratorium. Het gaat hierbij om de evaluatie van de permeabiliteit van de dikke darm TMA, een gut bacteriële metaboliet, evaluatie van lever Goedkeuringvande TMA en evaluatie van een gut-portaal bloed-lever-systemische bloed weg van SCFA.
Om te beoordelen gut-bloed barrière permeabiliteit, volgt protocol moeten worden gevolgd, in volgorde: 1 (invoeging van de lijn voor intraintestinal overheden), 3 (portal vein catheterisatie), 4 (portal veneuze bloedmonsters ), 6 (administratie van een gut permeabiliteit marker), 4.
Om te beoordelen lever goedkeuring en een darm-portaal bloed-lever-systemische bloed weg, volgt protocol moeten worden gevolgd, in volgorde: 1 (invoeging van de lijn voor intraintestinal overheden), 2 (vena cava inferior catheterisatie), 3 (portal vein catheterisatie), 4 (portal veneuze bloedmonsters), 5 (vena cava inferior bloedmonsters), 6 (administratie van een gut permeabiliteit marker), 4, 5, 7 () berekening van de lever clearance).

<table><tbody><tr><td>Naald OD: 9 mm</td><td>Becton Dickinson&nbsp; S.A.</td><td>301300</td><td></td></tr><tr><td>Polyethyleen katheter ID: 0.025", OD: 0.040"&nbsp;</td><td>Scientific Commodities, Inc.</td><td>#BB520-40</td><td></td></tr><tr><td>Polyethyleen katheter ID: 0.012", OD: 0.025"&nbsp;</td><td>Scientific Commodities, Inc.</td><td>#BB520-25</td><td></td></tr><tr><td>C-Flex Slang, Opaak Wit 1/50"ID x 1/12 " OD&nbsp;&nbsp;</td><td>Cole-Parmer Instrument Co.</td><td>06424-59</td><td></td></tr><tr><td>Pediatrische Foley-katheter (maat 10F of 8F)&nbsp;</td><td>Sigmed</td><td>0000 80305</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische ligaturen 3/0</td><td>Yavo Sp. Z o.o.&nbsp;</td><td>P48JE</td><td></td></tr><tr><td>Absorbeerbare chirurgische hechtingen - Polyglactine 910 4/0</td><td>KRUUSE Polska Sp. Zo.o.</td><td>152336</td><td></td></tr><tr><td>Weefsellijm - Loctite 454Cyanoacrylaatlijm</td><td>Loctite&nbsp;</td><td>1370127</td><td></td></tr><tr><td>Povidon jodium</td><td>EGIS Pharmaceuticals PLC</td><td>4449 11</td><td></td></tr><tr><td>Heparine - Heparinium WZF&nbsp;</td><td>WZF Polfa S.A.</td><td>02BK0417</td><td>Verdun 10 keer met fysiologische zoutoplossing</td></tr><tr><td>Glycerine 86%</td><td>Laboratorium Farmaceutyczne Avena</td><td>5.90999E+12</td><td>Dient als smeermiddel bij colonkatheterisatie</td></tr><tr><td>Xylocaine 2%</td><td>AstraZenca&nbsp;</td><td>9941342</td><td></td></tr><tr><td>Urethaange</td><td>Sigma-Aldrich (Merck)&nbsp;</td><td>U2500-500G</td><td></td></tr><tr><td>Trimethylamine-oplossing 45%</td><td>Sigma-Aldrich (Merck)&nbsp;</td><td>92262-1L</td><td></td></tr><tr><td>Spuiten 2 mL</td><td>B.Braun Melsungen AG</td><td>4606027V</td><td></td></tr><tr><td>Zoutoplossing 250 mL</td><td>Fraesenius Kabi Polska Sp. Z o.o.</td><td>15LL707WL</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische schaar, recht, lengte 115 mm, 4 1/2 "bluntachtige uiteinden</td><td>Braun</td><td>NS-010-115-PKM</td><td></td></tr><tr><td>Arterieschaar type Micro-Adson gebogen, lengte 140 mm 5 1/2 "</td><td>Braun</td><td>KN-008-140-ZMK</td><td></td></tr><tr><td>Anatomische pincet, lengte 95 mm, 3 3/4" scherp 0.7x0.55</td><td>Braun</td><td>PO-001-007-ZMK</td><td></td></tr><tr><td>Microschaartje type Vannas,&nbsp; recht, lengte 85 mm, 3 3/8 " de lengte van de messen 6 mm</td><td>Braun&nbsp;</td><td>NO-010-085-PMK</td><td></td></tr><tr><td>Doekklemmen type Backhouse, lengte 130 mm, 5 1/8"&nbsp;</td><td>Braun</td><td>HO-128-130-PMK</td><td></td></tr><tr><td>Naaldhaakjes, lengte 150 mm, 6" t=0.4 1/2&nbsp;</td><td>Braun&nbsp;</td><td>IM-927-150-PZMK</td><td></td></tr><tr><td>Fijne schaar, lengte 110 mm, recht, 4 3/8&rdquo; scherp&nbsp;</td><td>Braun</td><td>NO-052-110-PMK</td><td></td></tr><tr><td>Anatomische pincet, lengte 95 mm, 3 3/4" scherp</td><td>Braun</td><td>PO-022-001-PMK</td><td></td></tr></tbody></table>

een in vivo -methode voor het uitrekenen van de gut-bloed barrière en lever metabolisme van microbiota producten

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

De gut-bloed-barrière (GBB) regelt de overgang van voedingsstoffen, bacteriële metabolieten en drugs van intestinale lumen naar de bloedbaan. De GBB integriteit wordt verstoord in de gastro-intestinale, cardiovasculaire en metabole ziekten, wat leiden gemakkelijkere toegang van biologisch actieve stoffen, zoals darm bacteriële metabolieten, naar de bloedbaan tot kunnen. Dus, de doorlaatbaarheid van de GBB mogelijk een marker van zowel de extraintestinal als de intestinale ziekten. Bovendien, de toegenomen penetratie van bacteriële metabolieten invloed kan zijn op de werking van het hele organisme.
Veelgebruikte methoden voor het bestuderen van de permeabiliteit van de GBB zijn uitgevoerde ex vivo. De nauwkeurigheid van deze methoden is beperkt, omdat de werking van de GBB afhangt van intestinale bloedstroom. Aan de andere kant, gebruikte in vivo methoden kunnen worden beïnvloed door lever en nier prestaties, omdat deze methoden gebaseerd zijn op de evaluatie van urine of / en perifeer bloed concentraties van exogene markers. Hier presenteren we een directe meting van de permeabiliteit van de GBB in ratten met behulp van een in vivo methode gebaseerd op portal bloed bemonstering, die intestinale bloedstroom behoudt en wordt vrijwel niet beïnvloed door de lever en de nier functie.
Polyurethaan katheters worden ingevoegd in de ader van de portal en vena cava inferior net boven de hepatische veins samenvloeiing. Bloed is bemonsterd op basislijn en na toediening van een geselecteerde markering in een gewenste gedeelte van het maag-darmkanaal. Hier presenteren we enkele toepassingen van de methode met inbegrip van (1) evaluatie van de permeabiliteit van de dikke darm TMA, gut bacteriële metaboliet, (2) evaluatie van lever Goedkeuringvande TMA, en (3) evaluatie van een gut-portaal bloed-lever-perifere bloed weg voor gut bacteriën-afgeleide korte keten vetzuren. Bovendien kan het protocol ook worden gebruikt voor het bijhouden van de intestinale absorptie en lever metabolisme van geneesmiddelen of voor metingen van portal bloeddruk.

We hebben met succes de GBB permeabiliteit en lever Goedkeuringvande TMA bij ratten gemeten. We hebben aangetoond dat hypertensieve ratten een verhoogde dubbelpunt doorlatend zijn voor TMA in vergelijking met normotensive ratten (Figuur 2)4 hebben. In een andere studie vonden we dat hoog zout inname heeft geen invloed op de GBB permeabiliteit en lever Goedkeuringvande TMA (Figuur 3),14</s...

De toegang van voedingsstoffen, microbiota metabolieten en medicijnen voor het verkeer wordt geregeld door de darm-bloed-barrière (GBB). Beschrijven we een directe methode voor het meten van de GBB permeabiliteit in vivo, die, in tegenstelling tot veelgebruikte indirecte methoden, wordt vrijwel niet beïnvloed door de functies van lever en nieren.

Een In Vivo -methode voor het uitrekenen van de Gut-bloed barrière en lever metabolisme van Microbiota producten

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

De darm-bloedbarrière is een meerlaags systeem dat de passage van voedingsstoffen, bacteriële metabolieten, drugs, en andere exogene verbindingen van darmlumen naar de bloedstroom regelt. Zoals we weten, kan de integriteit van de barrière worden aangetast in het maagdarmstelsel en in cardiovasculaire en sommige stofwisselingsziekten die kunnen leiden tot gemakkelijkere toegang tot biologisch actieve verbindingen zoals darmbacteriële metabolieten tot de bloedstroom en kan de werking van het hele organisme beïnvloeden. Daarom kan de doorlaatbaarheid van de darm-bloedbarrière een marker van zowel darm- als extraintestinale ziekten zijn.In deze video presenteren we een directe meting van de darm-bloedbarrière doorlaatbaarheid bij ratten met behulp van portal bloedafname na toediening van een teststof aan het spijsverteringskanaal. We beschrijven in detail de categorisering van de poortader en inferieure vena cava net boven de leverader samenvloeiing. Bloedafname van portaal ader en inferieure vena cava maakt het mogelijk om niet alleen de darm-bloedbarrière doorlaatbaarheid te evalueren, maar ook een levervrijheid en absorptie route van moleculen van belang, zoals darmbacteriën metabol

an-vivo-method-for-evaluating-gut-blood-barrier-liver-metabolism

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Postoperatieve ileus (POI) is een complicatie van abdominale chirurgie leidt tot verhoogde morbiditeit en een langdurig verblijf in het ziekenhuis. Omdat profylactische of therapeutische strategieën ontbreken geïntensiveerd onderzoek is noodzakelijk. Daarom hebben we een gestandaardiseerde en haalbaar muismodel naar de pathofysiologie van POI te onderzoeken en mogelijke therapeutische opties te bestuderen.

Functionele Evaluatie van darmmotiliteit en de darmwand ontsteking in Knaagdieren: Analyses in een gestandaardiseerd model van Intestinal Manipulatie

Source: Calatayud Arroyo, M., et al. Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface. J. Vis. Exp. (2018).This video demonstrates an in vitro gut host–microbe model to study bacterial viability. A co-culture of Caco-2 and HT29-MTX cells is incubated with bacteria pre-treated under simulated digestive conditions. Epithelial barrier integrity is assessed using transepithelial electrical resistance, and fractions from the medium, solubilized...

In Vitro Gut Model to Assess Bacterial Adhesion and Internalization

Dit protocol beschrijft het gebruik van uitgesneden darmweefselpreparaten of 'darmzakken' als een ex vivo model van de darmwandfunctie. Dit model kan worden gebruikt om de integriteit van zowel de epitheliale barrière als de slijmvlieglaag op specifieke darmlocaties in diermodellen van spijsverteringsziekten te beoordelen.

Ex Vivo Intestinale Sacs mucosale permeabiliteit beoordelen Modellen van gastro-intestinale aandoeningen

Twee methoden worden hier voorgesteld om te bepalen van intestinale barrièrefunctie. Een epitheliale meter (volt/ohm) wordt gebruikt voor metingen van de elektrische weerstand van de transepithelial van gekweekte epithelen rechtstreeks in weefselkweek wells. Bij muizen, wordt de FITC-dextran maagsonde methode gebruikt om te bepalen de intestinale permeabiliteit in vivo.

In Vitro en In Vivo benaderingen te bepalen van intestinale epitheliale cel permeabiliteit

Hier presenteren we een protocol voor het kweken van de darmflora van de dikke darm in vitro, met behulp van een reeks van bioreactoren die de fysiologische omstandigheden van de gastro-intestinale tractus simuleren.

Toepassing van geavanceerde In Vitro kweken van technologie om te bestuderen van de menselijke darmflora

We stelden een microfysiologisch systeem (MPS) met darm- en leverorganoïden bloot aan paracetamol (APAP). Dit artikel beschrijft de methoden voor organoïde productie en APAP farmacokinetische en toxicologische eigendomsbeoordelingen in de MPS. Het beschrijft ook de weefselfunctionaliteitsanalyses die nodig zijn om de resultaten te valideren.

Een darm/levermicrofysiologisch systeem voor farmacokinetische en toxicologische beoordeling

Gebruikmakend van intravitale microscopie, maakt de hier gepresenteerde methode real-time visualisatie van darmeppitheelcelvergieten bij levende dieren mogelijk. Daarom is geigreerd darmslijmvlies (acriflavine en rhodamineB-dextran) van verdoofde muizen afgebeeld tot eencellige resolutie met behulp van confocale microscopie.

Een intravitale microscopie-gebaseerde benadering om darmdoorlatendheid en epitheelcelvergieten prestaties te beoordelen

Ontregelde intestinale epitheliale barrièrefunctie en immuunresponsen zijn kenmerken van inflammatoire darmziekten die slecht worden onderzocht vanwege een gebrek aan fysiologische modellen. Hier beschrijven we een muis intestinale lus model dat een goed gevasculariseerd en exteriorized darmsegment gebruikt om mucosale permeabiliteit en leukocyten rekrutering in vivo te bestuderen.

Functionele beoordeling van intestinale permeabiliteit en neutrofiele transepitheliale migratie bij muizen met behulp van een gestandaardiseerd intestinale lusmodel

Dit artikel presenteert een unieke methode voor het analyseren van gastheer-microbioom interacties met behulp van een nieuw darmorgaancultuursysteem voor ex vivo experimenten.

Een darmorgaankweeksysteem voor het analyseren van host-microbiota-interacties

In deze studie wordt fluoresceïne-isothiocyanaat-gelabeld (FITC) dextran toegediend aan muizen via orale maagsonde om de intestinale permeabiliteit zowel in vivo als in plasma- en fecale monsters te evalueren. Omdat de darmbarrièrefunctie in veel ziekteprocessen wordt beïnvloed, kan deze directe en kwantitatieve test in verschillende onderzoeksgebieden worden gebruikt.

Beoordeling van de integriteit van de darmbarrière bij muizen met fluoresceïne-isothiocyanaat-gelabeld dextran

Leer een directe methode om de doorlaatbaarheid van de darm-bloedbarrière in vivo te meten bij ratten met behulp van portaalbloedmonsters. Deze techniek beoordeelt ook de hepatische klaring en het absorptiepad van verbindingen.

Een In Vivo -methode voor het uitrekenen van de Gut-bloed barrière en lever metabolisme van Microbiota producten

Meer video's verkennen