November 20th, 2018
Hier bieden we een protocol waarin uitgebreide instructies voor de economische vaststelling van lymfkliertest object locatie en roman object erkenning gedrags testen, met inbegrip van het ontwerp, de kosten en de bouw van de benodigde duikuitrusting, evenals uitvoering van het testen van de gedragsmatige, gegevensverzameling en analyse.
Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen over geheugenregulatie. We bepalen bijvoorbeeld de rol van specifieke eiwitten in het geheugen door transgene knock-outmuizen in deze taken te testen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een snelle en kosteneffectieve manier om geheugen testen uit te voeren in elk lab.
Demonstratie van de arena constructie is van cruciaal belang, omdat het oplosmiddel lassen zal alleen sterke resultaten opleveren als uitgevoerd met zorg. Begin met het verwerven van vijf vellen acryl, acrylcement, en een 16-gauge hypo applicator. Haal de beschermpapiercoating uit de acrylvellen.
Dan droog-fit alle materialen om te bevestigen dat de maten correct zijn. Monteer en laad de spuit vervolgens met acrylcement. Lijn de lange rand van een buitenmuur af met de bovenrand van de basis en zorg ervoor dat ze loodrecht op elkaar staan met behulp van een combinatie of machinistvierkant.
Gebruik vervolgens de spuit om een kleine en stabiele kraal cement rechtstreeks op de hoek van de twee stukken die worden samengevoegd aan te brengen. Houd de twee stukken vijf minuten op hun plaats totdat ze in eerste instantie zijn ingesteld. Herhaal dezelfde stappen om de andere buitenmuur aan de basis te bevestigen.
Bevestig vervolgens twee binnenwanden, een voor een, de basis met acrylcement. Tot slot, gebruik maken van de spuit om een kleine en gestage kraal van cement direct toe te passen op de hoek nu wordt gevormd door de buitenmuur en de binnenmuur. Begin de gewenningssessie door muizen in groepen van vier te verdelen en huis ze in individuele schone kooien.
Breng vervolgens een groep muizen naar de testruimte en laat ze minstens 30 minuten acclimatiseren. Na de acclimatisatie begint u met het opnemen van de video. Plaats elke muis in de arena met uitzicht op de muren van de release hoek, en laat de muizen om de arena's vrij te verkennen voor zes minuten.
Stop vervolgens met het opnemen van de video en breng muizen terug naar hun schone kooien tijdens het interprocesinterval. Reinig alle arena's met aanbevolen reinigingsmethoden voor dierenfaciliteiten, zoals afvegen met 70% ethanol om reuksignalen te minimaliseren. Tot slot, na het voltooien van een totaal van drie gewenningssessies, terug te keren alle muizen naar hun huis kooien.
Breng na 24 uur dezelfde groep muizen naar de testruimte en laat ze minstens 30 minuten wennen aan de testruimte, zoals gedaan voor de gewenningssessies op de vorige dag. Voer de trainingsproef uit met behulp van twee objecten die in de arena zijn geplaatst. Breng objecten met dubbelzijdige tape zes bij zes centimeter afstand van twee niet-release hoeken, zodanig dat ze worden gecompenseerd in de arena.
Laat muizen de arena en objecten gedurende 10 minuten vrij onderzoeken. Stop dan de video-opname. Plaats muizen terug in hun schone kooien voor 20 minuten, en maak de gebieden schoon met ethanol.
Als u de objectlocatietaak OLT wilt uitvoeren, verplaatst u een van de objecten die in de trainingsproef worden gebruikt naar een nieuwe niet-releasehoek en brengt u het object zes centimeter van elke hoek van die hoek aan met dubbelzijdige tape. Herhaal dezelfde video-opname van de muizen in het gebied gedurende 10 minuten, zoals eerder beschreven. Ten slotte, om de nieuwe objectherkenningstaak NORT uit te voeren, vervang het object dat tijdens het OLT niet is verplaatst door een nieuw object en breng het nieuwe object zes centimeter van de twee wanden van de hoek aan door dubbelzijdige tape.
Herhaal dezelfde video-opname van de muizen in het gebied gedurende 10 minuten, zoals eerder beschreven. Tijdens het OLT wordt het geheugen voor objectlocatie weerspiegeld door een groep muizen die gemiddeld aanzienlijk meer tijd met een object besteedt nadat het is verplaatst. Dit kan ook worden voorgesteld als een toename van de discriminatie-index.
In de NORT wordt het geheugen voor objectlocatie weerspiegeld door een groep muizen die gemiddeld aanzienlijk meer dan 50% van de onderzoekstijd met het nieuwe object besteedt of een discriminatie-index vertoont die aanzienlijk groter is dan nul. Het kiezen van objecten waarvoor muizen geen inherente voorkeur hebben, is essentieel. In een proef met een steekproefgrootte van vier vertoonden muizen bijvoorbeeld een trend om minder dan 50% van de onderzoekstijd met object A uit te geven wanneer deze werden gekoppeld aan object B.Toen object A vervolgens werd gebruikt als het nieuwe object in een NORT, met een grotere steekproefgrootte van 16, brachten muizen aanzienlijk minder dan 50% van de onderzoekstijd door met object A.Deze gegevens suggereren inherente afkeer van object A.Tijdens deze procedure , is het belangrijk om te onthouden om alle objecten en arena's tussen het gebruik grondig schoon te maken.
In deze methode kan objectonderzoek handmatig worden beoordeeld door onderzoekers of met behulp van commerciële software. Software heeft hogere upfront kosten, maar, eenmaal gekalibreerd, kan tijd en financiële middelen besparen op de lange termijn.
Dit artikel presenteert een gedetailleerd protocol voor het uitvoeren van muisobjectlocatie en nieuw objectherkenningsgedragstesten. Het behandelt de ontwerp, constructie en uitvoering van de noodzakelijke apparatuur en procedures voor effectieve gegevensverzameling en -analyse.
Cost-effective behavioral assays enable scalable memory phenotyping in mouse models, supporting early-stage target validation for CNS therapeutics. By reducing financial barriers to robust cognitive testing, this method enhances predictive confidence in preclinical de-risking strategies. It facilitates translational continuity from target engagement to functional outcomes in discovery pipelines.
This method integrates into discovery biology workflows as a functional readout following target modulation, enabling hypothesis-driven screening before lead optimization.