Name: Roman Objectherkenning en Object locatie gedrags testen in muizen op een begroting (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Leer objectlocatie- en objectherkenningstesten voor geheugenevaluatie bij muizen. Dit protocol biedt een snelle en kosteneffectieve methode voor gedragsonderzoek in neurowetenschappen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gefinancierd door R00 NS089938 van NIH en zaad financiering van chronische hersenletsel en Discovery thema's aan The Ohio State University aan EDK.

Het volgende protocol is goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) op de Ohio State University (OSU).
1. opbouw van de arena 's
<ol><li>Bestellen van de materialen genoemd in tabel 1: vijf bladen van acryl, acryl cement en een 16 G Hypo Group applicator.</li>
	<li>Draag de juiste veiligheidsuitrusting volgens de instructies van de fabrikant, waaronder eventueel ogen, huid en andere vormen van bescherming.</li>
	<li>Verwijder de beschermende papier coating uit de acrylplaten.</li>
	<li>Droge passen alle materialen om te bevestigen dat de maten juiste (figuur 1A zijn).</li>
	<li>Samenstellen en laden van de spuit met acryl cement.</li>
	<li>Uitlijnen van de lange zijde van een buitenmuur (deel B) met een bovenrand van de base (deel C) en ervoor zorgen dat zij loodrecht op elkaar met behulp van een combinatie of machinist vierkant.</li>
	<li>Met behulp van de injectiespuit, een kleine en gestage kraal van cement rechtstreeks toepassen op de hoek van de twee stukken wordt toegetreden.</li>
	<li>Houd de twee stukken (delen B en C) op zijn plaats totdat ze worden aanvankelijk vastgelegd (ongeveer 5 min). Opmerking: Doorgaans, zullen zij 80% verharde in 24 h, maar montage kan blijven na 5 min.</li>
	<li>Herhaal stap 1.5-1.7 met de andere buiten muur (deel B) aan de dezelfde basis.</li>
	<li>De twee binnenmuren (deelA), een voor een, aan de base met behulp van stappen 1.5-1.7 koppelen.</li>
	<li>Bovendien gebruiken de spuit voor het toepassen van een kleine en gestage parel van cement rechtstreeks naar de hoek nu wordt gevormd door de buitenwand (deel B) en de binnenkant muur (deelA).</li>
	<li>Deze stukken op zijn plaats voor 5 min houden.</li>
	<li>Na 24-48 h, overgaan tot het opzetten van de gedragsmatige testomgeving.</li>
</ol>2. het opzetten van de gedrags test omgeving en de toestellen
<ol><li>Plaats milieu signalen (zoals beschreven in de sectie discussie) tegenover elkaar en tegenover de arena's van het testen gebied (figuur 1B).</li>
	<li>Regelen van de vier testen Arena op een 2-bij-2 wijze of op de vloer of stevige tafel op voldoende afstand van de signalen en de camera te maximaliseren visuele input voor de muizen (figuur 1B).</li>
	<li>Controleer of de lijn van het zicht met behulp van een meter stok gestut vanaf elke arena vloer over de muur naar de signalen om te bevestigen dat deze afstanden tussen de arena's en de signalen geschikt zijn.</li>
	<li>Het bepalen van de optimale optische weglengte waarmee video documentatie van alle vier arenas door de hoogte van de camera of de hoogte van de tabel aan te passen. (Figuur 1B).</li>
	<li>Sluit de camera aan op een USB-verlengkabel.</li>
	<li>Gebruik kabel circuits erbij, de kabel lopen over het plafond en onderaan een muur op een computer met video capture software.</li>
	<li>Verberg de computer achter een gordijn dat de muizen in het testen van de onderzoeker (Figuur 1 c) moet worden gescheiden.</li>
	<li>Monteren van 4 elk van ten minste 3 verschillende objecten die ongeveer 2-5 cm in lengte en breedte zijn en maar liefst 10 cm in hoogte om te gebruiken voor het testen van (Figuur 1 d).</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58593/58593fig1.jpg"> Figuur 1: Behavioral testen voorbereiding. (A) Open--veldproeven arena vergadering met deel A overeenkomt met de binnenwand, als de buitenste muur, deel B en deel C als basis. De afgewerkte arena zal hebben twee buitenmuren (delen B) waarop de hele rand van de base en twee binnenmuren (delen A) die tussen de buitenmuren op de aangrenzende randen van de base (deel C past). Alle muren zal rusten op de top van de base. (B) vertegenwoordiger regeling van arena's op een tabel 0.62 m hoog, 60 x 90 cm milieu signalen, verlichting en een camera voor een testen gebied waarmee de opname van alle vier arenas gelijktijdig. (C) A gordijn verbergt de experimentator en computer systeem van muizen tijdens proeven. De overhead lichten zijn op voor het nemen van deze foto, maar tijdens de test, zijn alleen de vloer lampen op. Ook, een van de ecologische signalen voor deze foto van het testen gedeelte is verwijderd, maar tijdens het testen, is er een vierde richtsnoer voor de arena's, geconfronteerd met de helemaal zwart cue achter de tafel. (D) een representatieve object (en liniaal voor schaal) die is geschikt voor OLT of NORT testen met muizen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58593/58593fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<ol start="9"><li>Deze objecten worden gevalideerd.<ol>
<li>Verkrijgen van een minimum van 8 wild-type muizen in de vertegenwoordiger van het geslacht, stam, en leeftijdsgroep van de experimentele muizen die zullen worden gebruikt (bijvoorbeeld 6 tot 9 weken oude vrouwelijke en mannelijke C57Bl/6 muizen).</li>
		<li>Omgaan met alle muizen dagelijks voor 1 min in de loop van 3 tot 5 dagen vóór de test.</li>
		<li>Muizen verdelen in groepen van 4 en, als ze niet reeds afzonderlijk worden gehuisvest, verhuizen ze naar individu kooien schoon te houden.</li>
		<li>Breng hen in de test kamer en laten acclimatiseren gedurende ten minste 30 minuten. Opmerking: Aanwezigheid van de experimentator in de kamer voor deze 30 min zal vermindering van stress op de muizen tijdens de taak, met name als de experimentator mannelijke20.</li>
		<li>Nadat acclimatisering wordt gedaan en de experimentator is klaar om te beginnen, beginnen met het opnemen van de video.</li>
		<li>Plaats elke muis tegenover de wanden van een hoek van de arena (genoemd de release hoek) (figuur 2A).</li>
		<li>Laat de muizen te verkennen van de arena's vrij voor 10 min.</li>
		<li>Stop de opname van de video.</li>
		<li>Muizen terugkomen door hun kooien schoon bedrijf voor een duur van 20 min.</li>
		<li>Schoon aanbevolen alle arena's met dier faciliteit reinigingsmethoden, zoals afvegen met 70% ethanol te minimaliseren olfactorische signalen voor het volgende gebruik.</li>
		<li>Met behulp van dubbelzijdige tape, brengt 2 verschillende objecten in de buurt van 2 niet-release hoeken, zodat de objecten worden gecompenseerd in de arena, en 6 x 6 cm,2 van elke muur van die hoek (figuur 2B).</li>
		<li>Start de opname van de video.</li>
		<li>Plaats elke muis tegenover de muren in de hoek van de release.</li>
		<li>Kunnen muizen te onderzoeken van de arena en voorwerpen vrij voor 10 min.</li>
		<li>Stop de opname van de video.</li>
		<li>Plaats muizen terug in hun kooi schoon bedrijf voor een duur van 20 min.</li>
		<li>Schoon aanbevolen alle arena's en objecten met dier faciliteit reinigingsmethoden zoals afvegen met 70% ethanol te minimaliseren olfactorische signalen.</li>
		<li>Herhaal opleiding proeven met 2 nieuwe objecten die zijn aangebracht in dezelfde locaties totdat alle objecten (ten minste drie verschillende objecten als voert zowel de OLT en de NORT) zijn getest met elke muis.</li>
		<li>Uitsluiten objecten waarmee muizen om te zitten op de top van het object.</li>
		<li>Onderzoek tijd van elke muis met elk object volgens stap 4 te analyseren.</li>
		<li>Objecten die een negatieve of positieve intrinsieke waarde hebben uitsluiten.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. uitvoeren van de gedrags Test
<ol><li>Een week vóór de test: vertrouwd aan personen die met de gedragsmatige proeven<ol>
<li>Omgaan met volwassen 6 tot 9 weken oude vrouwelijke en mannelijke C57Bl/6 muizen dagelijks voor 1 min in de loop van 3 tot 5 dagen vóór de test.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dag 1: gewenning sessies<ol>
<li>Muizen verdelen in groepen van 4 en, als ze niet reeds afzonderlijk worden gehuisvest, verhuizen ze naar individu kooien schoon te houden.</li>
		<li>Brengen voor de test kamer en hen toestaan om te acclimatiseren in de test kamer voor minstens 30 min. Opmerking: aanwezigheid van de experimentator in de kamer voor deze 30 min zal de vermindering van stress op de muizen tijdens de taak, met name als de experimentator mannelijke20.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Nadat acclimatisering wordt gedaan en de experimentator is klaar om te beginnen, beginnen met het opnemen van de video.</li>
	<li>Plaats elke muis in de arena (één muis per arena) geconfronteerd met de muren van de release hoek (figuur 2A).</li>
	<li>Laat de muizen te verkennen van de arena's vrij voor 6 min.</li>
	<li>Stop de opname van de video.</li>
	<li>Muizen terugkomen door hun kooien schoon houden tijdens de Inter proef interval (ITI).</li>
	<li>Schoon aanbevolen alle arena's met dier faciliteit reinigingsmethoden zoals afvegen met 70% ethanol te minimaliseren olfactorische signalen.</li>
	<li>Herhaal stap 3.3-3.9 twee keer voor een totaal van 3 gewenning sessies voor elke muis.</li>
	<li>Alle muizen terug naar hun huis kooien.</li>
	<li>Reinig alle arena's met dier faciliteit aanbevolen reinigingsmethoden zoals afvegen met 70% ethanol te minimaliseren olfactorische signalen vóór gebruik de volgende dag.</li>
	<li>Dag 2: opleiding proces, OLT, NORT Opmerking: De NORT is een optionele test.<ol>
<li>Na 24u, breng de dezelfde groep van muizen in de test kamer en laten acclimatiseren in de test kamer voor minstens 30 min zoals gedaan vóór de gewenning-sessies op de vorige dag.</li>
		<li>Het voeren van een proces van de opleiding met behulp van 2 objecten geplaatst in de arena (figuur 2B).<ol>
<li>Met behulp van dubbelzijdige tape, brengt objecten 6 x 6 cm2 uit de buurt van 2 niet-release hoeken zodanig zijn dat zij worden gecompenseerd in de arena.</li>
			<li>Start de opname van de video.</li>
			<li>Plaats elke muis tegenover de muren van de release hoek zoals gedaan tijdens de sessies van gewenning.</li>
			<li>Kunnen muizen te onderzoeken van de arena en voorwerpen vrij voor 10 min.</li>
			<li>Stop de opname van de video.</li>
			<li>Plaats muizen terug in hun kooi schoon bedrijf voor een ITI van 20 min.</li>
			<li>Schoon aanbevolen alle arena's en objecten met dier faciliteit reinigingsmethoden zoals afvegen met 70% ethanol te minimaliseren olfactorische signalen.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Voer de OLT.<ol>
<li>Een van de volgende objecten gebruikt in de opleiding proces naar een nieuwe niet-release hoek verplaatst en brengt het object 6 cm vanaf elke muur van die hoek met dubbelzijdige tape (figuur 2C). Opmerking: Het andere object moet blijven waar het was tijdens de opleiding proces.</li>
			<li>Start de opname van de video.</li>
			<li>Plaats elke muis tegenover de muren in de hoek van de release.</li>
			<li>Kunnen muizen te onderzoeken van de objecten voor 10 min.</li>
			<li>Stop de opname van de video.</li>
			<li>Plaats muizen terug in hun kooi schoon bedrijf voor een ITI van 20 min.</li>
			<li>Schoon aanbevolen alle arena's en objecten met dier faciliteit reinigingsmethoden zoals afvegen met 70% ethanol te minimaliseren olfactorische signalen.</li>
		</ol>
</li>
		<li>De NORT uitvoeren<ol>
<li>Vervangen van het object dat niet tijdens de OLT met een roman-object verplaatst is en het nieuwe object 6 cm vanaf de twee muren van de hoek met dubbelzijdige tape (figuur 2D) brengt.</li>
			<li>Start de opname van de video.</li>
			<li>Plaats elke muis tegenover de muren in de hoek van de release.</li>
			<li>Kunnen muizen te onderzoeken van de objecten voor 10 min.</li>
			<li>Stop de opname van de video.</li>
			<li>Plaats de muizen terug in hun huis kooien.</li>
			<li>Schoon aanbevolen alle arena's en objecten met dier faciliteit reinigingsmethoden zoals afvegen met 70% ethanol te minimaliseren olfactorische signalen voor het volgende gebruik.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58593/58593fig2.jpg"> Figuur 2: Arena configuratie voor proeven. (A) Open-veld testen arena zonder objecten voor gewenning sessie. De zwarte pijl geeft de hoek van een release. Deze hoek moet dezelfde relatieve locatie in elk arena en consequent voor elke muis die wordt getest en voor elk proces. (B) voor het proces van de opleiding, twee verschillende objecten naar het open veld op 6 x 6 cm afstand van hun respectieve muren zijn beveiligd. (C) voor de OLT, één object wordt verplaatst naar een nieuwe locatie, ook 6 x 6 cm afstand van de muren en niet de versie hoek. (D) voor de NORT, het object dat werd in de OLT stationaire wordt vervangen door een nieuwe object, terwijl het verplaatste object vanaf de OLT nu het vertrouwde object is. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58593/58593fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
4. het analyseren van gedrags testgegevens
Opmerking: Analyse van video moet idealiter worden ingevuld door ten minste twee onafhankelijke, geblindeerde onderzoekers.
<ol><li>Open het video bestand.</li>
	<li>Het toepassen van een transparante cirkel die biedt een rand van 2 cm rond elk object ten opzichte van het scherm om te helpen bij het bepalen van actief onderzoek. Gebruik de afbeelding van een videobestand met een liniaal geplaatst in een arena voor het kalibreren van het raster.</li>
	<li>Muisgedrag observeren en registreren van de tijden die de muis onderzoekt actief het object, die uit zijn neus wees op het object op een maximale afstand van 2 cm van dat object bestaat.<ol>
<li>Record de tijdstempel de muis begint te onderzoeken van een object en de tijdstempel wanneer het stopt onderzoek naar dat object.</li>
		<li>Herhaal dit voor beide objecten in de arena voor de duur van de proef.</li>
		<li>Bereken de cumulatieve tijd die de muis elk object onderzocht door aftrekken van de begintijd van de stoptijd voor elk exemplaar van de object-onderzoek, en al deze waarden toe te voegen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Percentage van de totale onderzoek tijd of de discriminatie-index met de volgende formules berekenen:<ol>
<li>Procent van de totale onderzoek tijd berekenen = <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58593/58593eq1.jpg"> Opmerking: Duidt een waarde boven de 50% meer onderzoek naar de nieuwe locatie of het object.</li>
		<li>Discriminatie index berekenen = <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58593/58593eq2.jpg"> Opmerking: Bij een positieve waarde geeft meer tijd onderzoek naar het nieuwe object. Een index van de discriminatie van nul geeft aan gelijke tijd doorgebracht met beide objecten.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Grafisch vertegenwoordigen resultaten en volledige statistische analyses met behulp van een t-toets of de ANOVA-afhankelijk van het aantal groepen met elkaar worden vergeleken.</li>
</ol>

<ol><li>Krakauer, J. W., Ghazanfar, A. A., Gomez-Marin, A., Maclver, M. A., Poeppel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroscience+Needs+Behavior%3A+Correcting+a+Reductionist+Bias%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Neuroscience Needs Behavior: Correcting a Reductionist Bias.</a> Neuron. 93 (3), 480-490 (2017).</li>
<li>Lange, F., Seer, C., Kopp, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+flexibility+in+neurological+disorders%3A+Cognitive+components+and+event-related+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">Cognitive flexibility in neurological disorders: Cognitive components and event-related potentials.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 83, 496-507 (2017).</li>
<li>Barnett, J. H., Blackwell, A. D., Sahakian, B. J., Robbins, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Paired+Associates+Learning+%28PAL%29+Test%3A+30+Years+of+CANTAB+Translational+Neuroscience+from+Laboratory+to+Bedside+in+Dementia+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The Paired Associates Learning (PAL) Test: 30 Years of CANTAB Translational Neuroscience from Laboratory to Bedside in Dementia Research.</a> Current Topics in Behavioral Neuroscience. 28, 449-474 (2016).</li>
<li>Eichenbaum, H., Otto, T., Cohen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hippocampus-what+does+it+do%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+and+Neural+Biology%22%5BJournal%5D)">The hippocampus-what does it do?</a> Behavioral and Neural Biology. 57 (1), 2-36 (1992).</li>
<li>Bartsch, T., Wulff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hippocampus+in+aging+and+disease%3A+From+plasticity+to+vulnerability%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The hippocampus in aging and disease: From plasticity to vulnerability.</a> Neuroscience. 19 (309), 1-16 (2015).</li>
<li>Smith, B. M., Yao, X., Chen, K. S., Kirby, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Larger+Social+Network+Enhances+Novel+Object+Location+Memory+and+Reduces+Hippocampal+Microgliosis+in+Aged+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Aging+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A Larger Social Network Enhances Novel Object Location Memory and Reduces Hippocampal Microgliosis in Aged Mice.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 10 (142), 1-16 (2018).</li>
<li>Chieffi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+Influence+on+Hippocampal+Function%3A+Possible+Involvement+of+Orexin-A%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Exercise Influence on Hippocampal Function: Possible Involvement of Orexin-A.</a> Frontiers in Physiology. 14 (8), 85(2017).</li>
<li>Garth, A., Roeder, I., Kempermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+in+an+enriched+environment+learn+more+flexibly+because+of+adult+hippocampal+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Mice in an enriched environment learn more flexibly because of adult hippocampal neurogenesis.</a> Hippocampus. 26 (2), 261-271 (2016).</li>
<li>Brown, R. E., Stanford, L., Schellinck, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+standardized+behavioral+tests+for+knockout+and+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Institute+for+Laboratory+Animal+Research+Journal%22%5BJournal%5D)">Developing standardized behavioral tests for knockout and mutant mice.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (3), 163-174 (2000).</li>
<li>Barker, G. R., Warburton, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+is+the+hippocampus+involved+in+recognition+memory%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">When is the hippocampus involved in recognition memory?</a> Journal of Neuroscience. 31 (29), 10721-10731 (2011).</li>
<li>Savage, S., Ma, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+behavior+testing%3A+memory%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Animal behavior testing: memory.</a> British Journal of Anaesthesia. 113 (1), 6-9 (2015).</li>
<li>Fanselow, M. S., Dong, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Are+the+dorsal+and+ventral+hippocampus+functionally+distinct+structures%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures?</a> Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).</li>
<li>Vogel-Ciernia, A., Wood, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examining+object+location+and+object+recognition+memory+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Examining object location and object recognition memory in mice.</a> Current Protocols in Neuroscience. 69, 1-17 (2014).</li>
<li>Ammassari-Teule, M., Passino, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dorsal+hippocampus+is+selectively+involved+in+the+processing+of+spatial+information+even+in+mice+with+a+genetic+hippocampal+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Psychobiology%22%5BJournal%5D)">The dorsal hippocampus is selectively involved in the processing of spatial information even in mice with a genetic hippocampal dysfunction.</a> Psychobiology. 25 (2), 118-125 (1997).</li>
<li>Le Merrer, J., Rezai, X., Scherrer, G., Becker, J. A., Kieffer, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+hippocampus-dependent+and+facilitated+striatum-dependent+behaviors+in+mice+lacking+the+delta+opioid+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Impaired hippocampus-dependent and facilitated striatum-dependent behaviors in mice lacking the delta opioid receptor.</a> Neuropsychopharmacology. 38 (6), 1050-1059 (2013).</li>
<li>Hattiangady, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Object+location+and+object+recognition+memory+impairments%2C+motivation+deficits+and+depression+in+a+model+of+Gulf+War+illness%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Object location and object recognition memory impairments, motivation deficits and depression in a model of Gulf War illness.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, 78(2014).</li>
<li>Oliveira, A. M., Hawk, J. D., Abel, T., Havekes, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-training+reversible+inactivation+of+the+hippocampus+enhances+novel+object+recognition+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Post-training reversible inactivation of the hippocampus enhances novel object recognition memory.</a> Learning and Memory. 17 (3), 155-160 (2010).</li>
<li>Cohen, S. J., Stackman, R. W. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+rodent+hippocampal+involvement+in+the+novel+object+recognition+task%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Assessing rodent hippocampal involvement in the novel object recognition task.</a> Behavioral Brain Research. 285, 105-117 (2014).</li>
<li>Cohen, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Rodent+Hippocampus+Is+Essential+for+Nonspatial+Object+Memory%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">The Rodent Hippocampus Is Essential for Nonspatial Object Memory.</a> Current Biology. 23 (17), 1685-1690 (2013).</li>
<li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+exposure+to+males%2C+including+men%2C+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).</li>
<li>Ennaceur, A., Delacour, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+one-trial+test+for+neurobiological+studies+of+memory+in+rats.+1%3A+Behavioral+data%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats. 1: Behavioral data.</a> Behavioral Brain Research. 31 (1), 47-49 (1988).</li>
<li>Leger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Object+recognition+test+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Object recognition test in mice.</a> Nature Protocols. 8 (12), 2531-2537 (2013).</li>
<li>Wolf, A., Bauer, B., Abner, E. L., Ashkenazy-Frolinger, T., Hartz, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+Behavioral+Test+Battery+to+Assess+Learning+and+Memory+in+129S6%2FTg2576+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+ONE%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive Behavioral Test Battery to Assess Learning and Memory in 129S6/Tg2576 Mice.</a> Public Library of Science ONE. 11 (1), e0147733(2016).</li>
<li>Ennaceur, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-trial+object+recognition+in+rats+and+mice%3A+methodological+and+theoretical+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">One-trial object recognition in rats and mice: methodological and theoretical issues.</a> Behavioural Brain Research. 215, 244-254 (2010).</li>
<li>Lueptow, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Object+Recognition+Test+for+the+Investigation+of+Learning+and+Memory+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (126), e55718(2017).</li>
<li>Wasserstein, R. L., Lazar, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ASA%27s+Statement+on+p-Values%3A+Context%2C+Process%2C+and+Purpose%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Statistician%22%5BJournal%5D)">The ASA's Statement on p-Values: Context, Process, and Purpose.</a> The American Statistician. 70 (2), 129-133 (2016).</li>
<li>Ranstam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+the+P-value+culture+is+bad+and+confidence+intervals+a+better+alternative%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Why the P-value culture is bad and confidence intervals a better alternative.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 20 (8), 805-808 (2012).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Effectieve cognitieve tests isoleren en beoordelen van de neurale functie van specifieke hersengebieden door het bestuderen van gedrag in een gecontroleerde omgeving1. Bij de mens, zijn specifieke taken ontworpen voor het beoordelen van de prestaties van gerichte hersengebieden, zoals de Wisconsin card sorteren taak voor prefrontale functie of de gepaarde vennoten test van de Cambridge neuropsychologische testen geautomatiseerd batterij (leren CANTAB) voor hippocampal functie2,3. Deze tests zijn bedoeld om te bestuderen van de functies van specifieke hersengebieden bij de mens door de beoordeling van de gedragingen die uit de neurale activiteit van die regio's voortkomen. Het einddoel van het meest biomedisch onderzoek is de verbetering van de gezondheid van de mens; echter, vele studies van hersenfunctie in gezondheid of ziekte ethisch kunnen niet worden uitgevoerd met menselijke deelnemers. Voor studies die menselijke deelnemers niet gebruiken, zijn kleine knaagdieren zoals muizen vaak het model van keuze. Met behulp van Muismodellen zorgt voor de directe controle over experimentele manipulaties met inbegrip van de wijziging van de genexpressie, inductie van letsel of zelfs modulatie van circuit activiteit door middel van optogenetic technieken. Gedrags testen van muizen, vergelijkbaar met menselijke testen, is gericht op het beoordelen van het effect van experimentele variabelen op hersenfunctie door het meten van gedragingen die afhankelijk zijn van specifieke regio's.
De hippocampus is een essentiële structuur voor Geheugenvorming in mens en knaagdieren4. Meer in het bijzonder speelt de hippocampus een kritieke rol in declaratieve geheugen waarbij relationele vertegenwoordigingen, maar geen procedurele geheugen, dat afhankelijk is van de motorische centra van de hersenen-4. Hippocampal memory-functie is een focus van studie op vele gebieden van de neurowetenschappen omdat het is prachtig gevoelig voor verstoring. Negatieve verstoringen variërend van langdurige stress en veroudering aan vangsten en beroerte zijn gekoppeld hippocampal schade5. Daarentegen verbeteren positieve maatregelen, zoals sociale interactie, fysieke milieu verrijking of oefening hippocampal functie6,7,8. Knaagdier studies met degelijke test hippocampal geheugen kunnen onthullen inzicht in de cellulaire en moleculaire bemiddelaars van geheugen, alsmede de effecten van verschillende milieu interventies op de hippocampal functie.
Bij knaagdieren, zijn verschillende tests ontwikkeld om te bestuderen van de hippocampus-afhankelijke leren en geheugen9,10,11. Zij kunnen in grote lijnen worden onderverdeeld in taken waarvoor een prikkel met emotionele valence te verduidelijken met een verandering in gedrag, en taken die trekken op de knaagdier voorkeur te onderzoeken van nieuwe prikkels11. Contextuele angst conditionering, bijvoorbeeld paren een onaangename prikkel (schok voet) met een ecologische context en later tests geheugen voor de context door het meten van angst-geïnduceerde bevriezing gedrag9,11. De Morris water maze en zijn droge tegenhanger, de Barnes doolhof, gebruik negatieve externe versterking om te bevorderen ruimtelijke leren4,11. In elk geval trachten knaagdieren een aversieve situatie, wordt ondergedompeld in koud water of blootgesteld op een helder verlichte platform, respectievelijk te ontsnappen. De radiale arm doolhof, is daarentegen afhankelijk van positieve versterking zoals dieren natuurlijke foerageren gedrag gekoppeld aan ruimtelijke geheugen gebruiken om op te halen kleine voedsel beloningen4,11. Deze taken zijn op grote schaal gebruikt en fundamentele kennis over het hippocampal geheugen hebben opgeleverd. Echter, negatieve en positieve externe versterkingen of angst-inducerende prikkels zoals schok een emotionele component toevoegen aan deze gedrags test die in sommige gevallen wellicht ongewenst. Bijvoorbeeld, zijn de dorsale en ventrale hippocampi gekoppeld aan verschillende functies, ruimtelijke geheugen versus emotionele regulatie, respectievelijk12. Tests die afhankelijk zijn van een emotionele reactie op prikkels kunnen niet nauwkeurig overeen met verminderde ruimtelijke geheugen als ventrale hippocampal emotionele regulatie functies worden ook beïnvloed.
De OLT is een eenvoudige en effectieve test die een zekere mate van hippocampus-afhankelijke ruimtelijke geheugen13 biedt. De taak is gebaseerd op de intrinsieke voorkeur van een dier voor nieuwheid zonder extra externe versterking en Vermijd daarom meestal complicaties differentiële emotionele reacties13zijn gekoppeld. Het huidige protocol voor OLT wordt gepresenteerd voor muizen, maar het is ook effectief bij ratten als de afmetingen van de apparatuur op de juiste manier worden geschaald. Het protocol bestaat uit een muis aan een open-veldproeven arena wennen en dan het toestaan van het te onderzoeken 2 objecten ten opzichte van ruimtelijke milieu signalen. De muis wordt vervolgens verwijderd uit de arena, en tijdens een pauze (inter proef interval of ITI), een van de objecten wordt verplaatst. Na de ITI, is de muis opnieuw naar de arena en mag vrij verkennen. In het algemeen, muizen liever nieuwheid, en als ze zich de locatie van de objecten van hun eerste blootstelling herinneren, zullen zij besteden meer tijd onderzoek naar het verplaatste object. Dieren met hippocampal laesies ruimtelijke contextuele leren visueel gehandicapten en bijgevolg tonen geen voorkeur voor objecten in de nieuwe locatie14,15.
De OLT kan zelfstandig of in combinatie worden gebruikt met een extra test van het geheugen dat is gebaseerd op neurale activiteit van meerdere hersengebieden, de roman object erkenning taak (NORT). De NORT is identiek aan de OLT tot de testfase, wanneer een van de objecten wordt vervangen door een nieuw object in plaats van wordt verplaatst naar een nieuwe locatie. Zoals het geval met de OLT, zal muizen met goed geheugen van de objecten spontaan liever bij het onderzoeken van het nieuwe object. In tegenstelling tot object locatie geheugen, die op hippocampal ondergronden leunt, object erkenning geheugen lijkt te vertrouwen op een verscheidenheid van hersengebieden en de betrokkenheid van de hippocampus is onrustig. Veel studies verslag dat hippocampal laesies of inactivering niet van invloed op nieuwe object voorkeur10,13,16,17, terwijl anderen de tegenovergestelde18,-19 vinden. Het is echter nog steeds een veelgebruikte taak algemene geheugenfunctie bij knaagdieren moet worden geëvalueerd.
Het hier gepresenteerde protocol bakent de stappen betrokken bij het initiëren en uitvoeren van de OLT en NORT, zowel van die gebruik maken van een open-veldproeven arena. Verkrijgbare gedrags testapparatuur kunnen kosten-verbiedend, met name voor kleinere labs. Dit protocol omvat het ontwerp en de eenvoudige stappen te bouwen arenas in-house tegen minimale kosten en zonder gespecialiseerd gereedschap. Dit protocol gegevens bovendien de ideale gedrags testen gebied, met inbegrip van plaatsing van arenas, contextuele signalen, en video-opname-systeem dat het podium voor de uitvoering van de OLT en NORT protocollen stelt. Representatieve resultaten voor zowel succesvolle als gebrekkig studies worden gepresenteerd, wijzend op het belang van het optimaliseren van alle materialen en procedures voor elk onderzoek.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Beschrijving</td>
			<td>Optie</td>
			<td>Hoeveelheid</td>
		</tr>
<tr>
<td>Deel A: acrylplaat - dekkend wit (0.635 x 40 cm x 40.64 cm)</td>
			<td>Gerouteerde randen</td>
			<td>2</td>
		</tr>
<tr>
<td>Deel B: acrylplaat - dekkend wit (0.635 x 40 cm x 41.91 cm)</td>
			<td>Gerouteerde randen</td>
			<td>2</td>
		</tr>
<tr>
<td>Deel C: acrylplaat - dekkend wit (0.635 x 41.91 cm x 41.91 cm)</td>
			<td>Gerouteerde randen</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Acryllic Cement (1 pt.)</td>
			<td>NB</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>16 gauge Hypo Applicator</td>
			<td>NB</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Combinatie Square</td>
			<td>NB</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>HD Webcam</td>
			<td>NB</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Video Capture Software</td>
			<td>NB</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>USB 2.0 verlengkabel</td>
			<td>NB</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Kabel Conduit</td>
			<td>NB</td>
			<td>1</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: Gespecificeerde lijst van materialen en uitrusting die nodig is voor het testen van de gedragsmatige.

<table><tbody><tr><td>Sign White - 9% Translucent en Opaak Gekleurd Gegoten Acryl (Chemcast)</td><td>TAP Plastics</td><td>NA</td><td>1/4" x 15.75" x 15.75" met gefreesde randen</td></tr><tr><td>Sign White - 9% Translucent en Opaak Gekleurd Gegoten Acryl (Chemcast)</td><td>TAP Plastics</td><td>NA</td><td>1/4" x 15.75" x 16.5" met gefreesde randen</td></tr><tr><td>Sign White - 9% Translucent en Opaak Gekleurd Gegoten Acryl (Chemcast)</td><td>TAP Plastics</td><td>NA</td><td>1/4" x 16.5" x 16.5" met gefreesde randen</td></tr><tr><td>TAP Acryl Cement (1 pt.)</td><td>TAP Plastics</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>16 G Hypo Applicator</td><td>TAP Plastics</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Debut Video Capture Software Pro Edition</td><td>NCH Software</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Stanely SAE/Metric Comb Square</td><td>Grainger</td><td>6R171</td><td></td></tr><tr><td>Logitech Pro Stream Webcam C922x</td><td>CDW</td><td>4429927</td><td></td></tr><tr><td>Belkin 16' USB 2.0 Actieve Verlengkabeling</td><td>CDW</td><td>570691</td><td></td></tr><tr><td>Panduit Pan-Way LD Surface Raceway (8')</td><td>CDW</td><td>300902</td><td></td></tr><tr><td>Ruimtelijke/Omgevingssignalen</td><td>Variabel</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Objecten voor testen</td><td>Variabel</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol</td><td>Variabel</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Dubbelzijdig plakband</td><td>Variabel</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

roman objectherkenning en object locatie gedrags testen in muizen op een begroting

Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget

Ethologically eventuele gedrags proeven is een essentieel onderdeel van elke studie die gebruikmaakt van Muismodellen de cognitieve effecten van verschillende fysiologische of pathologische veranderingen te bestuderen. Het object locatie (OLT) en het nieuwe object erkenning taak (NORT) zijn twee doeltreffende gedrags taken gebruikte te onthullen van de functie en de relatieve gezondheid van specifieke hersengebieden die betrokken zijn in het geheugen. Terwijl beide van deze tests benutten de inherente voorkeur van muizen voor de nieuwigheid te onthullen geheugen voor eerder opgetreden objecten, de OLT voornamelijk evalueert ruimtelijke leren, die op hippocampal activiteit leunt. De NORT, evalueert daarentegen niet-ruimtelijke leren van object identiteit, die gebaseerd op meerdere hersengebieden is. Beide taken vereisen een open-veldproeven arena, objecten met vergelijkbare intrinsieke waarde als muizen, passende milieu signalen en video opnameapparatuur en de software. Verkrijgbare systemen, hoewel handig, kunnen duur zijn. Dit manuscript detailleert een eenvoudige, kosteneffectieve methode voor het bouwen van de arena's en het opzetten van de apparatuur nodig is voor het uitvoeren van de OLT en NORT. Het manuscript wordt bovendien een efficiënte testen protocol dat omvat zowel de OLT en de NORT en biedt typisch methoden voor data-acquisitie en analyse, alsmede representatieve resultaten beschreven. Succesvolle voltooiing van deze tests kan waardevolle inzicht geven in de geheugenfunctie van verschillende muis modelsystemen en beoordelen van de onderliggende neurale regio's die deze functies ondersteunen.

Figuur 3 geeft voorbeelden van typische positieve en negatieve resultaten verkregen met mannelijke en vrouwelijke volwassen C57Bl/6 muizen met behulp van dit protocol6. Interpretatie van OLT en NORT gegevens altijd geldt voor de statistische gegevens van een groep (zie bespreking hieronder). Onderzoek tijd voor een enkele muis niet kan worden geïnterpreteerd als geheugen of gebrek aan geheugen. Echter de prestaties van een groep van muizen (dwz., meerdere monsters) aan andere groepen of aan de vaste kans niveaus met behulp van statistische testen kunnen worden vergeleken. Tijdens een proef van de typische opleiding vertonen groepen van muizen geen een belangrijke voorkeur gemiddeld voor een van de objecten zoals ze beide even roman zijn en niet elke intrinsiek negatieve of positieve waarde de muizen (figuur 3A en 3B hoeft). Als de statistische gegevens van een groep van muizen aanzienlijke voorkeur voor één object boven de andere tijdens de training tonen, moeten deze objecten niet worden gebruikt omdat die inherent voorkeur/afkeer van resultaten in de daaropvolgende processen zal verwarren. Bovendien, de tijd van de totale onderzoek van alle de muizen moet voldoen aan een minimumnorm (traditioneel instellen op 20 seconden21) en moet worden vergeleken om ervoor te zorgen dat er is geen verschil van de basislijn aan onderzoek dat kan van invloed zijn op de volgende tests van geheugen.
Tijdens de OLT, wordt geheugen voor object locatie weerspiegeld door muizen uitgaven gemiddeld aanzienlijk meer dan 50% van totale onderzoek tijd met het verplaatste object (figuur 3A). Als de totale onderzoek-tijden van de afzonderlijke muizen sterk variëren, zijn de resultaten beter afgebeeld als een discriminatie-index voor de objecten (figuur 3B). De aanzienlijke toename van de gemiddelde discriminatie index in figuur 3B geeft aan dat de muizen meer tijd doorgebracht met het object nadat deze had verplaatst. Of gemeten door toename in percentage tijd of discriminatie-index, suggereert de toename van het onderzoek van het object nadat dit is verplaatst dat de muizen niet vergeten waar het object zich tijdens de training bevond.
De laatste proef van dit protocol beoordeelt object erkenning geheugen. Een representatief voorbeeld met één groep van muizen bevat een hoger gemiddelde percentage onderzoek tijd (Figuur 3 c) evenals positieve discriminatie index (figuur 3D) vergeleken met de controlewaarden van de vaste van 50% en 0, respectievelijk. Als met de gegevens van de OLT is als er aanzienlijke variabiliteit in totale onderzoek tijd tussen individuele muizen, de discriminatie-index waarschijnlijk de betere methode om te visualiseren van deze gegevens. De 3E figuur toont een voorbeeld van een vergelijking van de 2-groep in het NORT en sommige van de statistische complicaties die zich bij deze proeven voordoen kunnen (zie discussie). Terwijl een one-sample t-toets voor groep B toont onderzoek aanzienlijk boven 50%, testen hetzelfde voor groep A niet. Deze vaststelling betekent niet dat A en B verschillend van elkaar zijn. Om te bepalen groep verschillen, moet een aparte twee gepaarde steekproeven met niet-parametrische Mann-Whitney test vergelijken groepen B naar A worden uitgevoerd. Een twee gepaarde steekproeven met niet-parametrische Mann-Whitney-test van deze representatieve groepsgegevens blijkt geen significant verschil (p = 0,66) tussen de twee groepen in procenten van het nieuwe object onderzoek tijd.
Zowel de OLT en NORT zijn zeer gevoelig voor de intrinsieke waarde van objecten en grondig testen van object gelijkwaardigheid is noodzakelijk om ervoor te zorgen dat er geen intrinsieke bias die resultaten kan verwarren. Figuur 3F en 3 G tonen een voorbeeld van een selectie van ongeschikte objecten. In een pilot test met de grootte van een steekproef van 4, muizen toonde een tendens om uitgaven van minder dan 50% van onderzoek tijd met object A wanneer in paren gerangschikt tegen object B (figuur 3F). Toen deze objecten vervolgens in een NORT met object A als het nieuwe object en een grotere steekproefomvang van 16 gebruikt werden, bracht muizen aanzienlijk minder dan 50% van de tijd onderzoek met object A (Figuur 3 g). Deze afkeer van het nieuwe object is gemakkelijk herkenbaar hier als een technische tekortkoming van het experiment en illustreert waarom piloot testen van objecten voor inherente voorkeur/afkeer essentieel is.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58593/58593fig3.jpg"> Figuur 3: Behavioral testgegevens met wild type volwassen C57Bl/6 muizen. (A) vergelijking percentage totale onderzoek tijd van het verplaatste object tijdens het trainen trial versus de OLT toont aanzienlijke toename onderzoek, nadat het object verplaatst. p < 0,0001, gepaarde t-toets. Een aanzienlijke verhoging van weergeven de representatieve resultaten (B) voor het verplaatste object onderzoek tijdens opleiding en OLT proeven als een discriminatie-index weergegeven ook in onderzoek van het object nadat dit is verplaatst. p < 0,0001, gepaarde t-toets. (C) percentage totale onderzoek tijd van het nieuwe object in de NORT toont belangrijke voorkeur voor het onderzoeken van het nieuwe object. ** p = 0,0024, one-sample t-test vs. 50%. (D) representatieve resultaten voor roman object onderzoek in de NORT weergegeven als een discriminatie-index tonen ook de voorkeur voor het onderzoeken van het nieuwe object. ** p = 0,0024, one-sample t-test vs 0. (E) representatieve resultaten van een analyse van de NORT waarbij twee verschillende groepen van muizen. Groep B verschilt aanzienlijk van 50% door one-sample t-test (** p = 0,0024), maar niet in groep A (p = 0.5837). In een aparte analyse, om te vergelijken groepen, een twee gepaarde steekproeven Mann-Whitney-test wordt gebruikt vanwege de ongelijke groep grootte en geen significant verschil in onderzoek is gevonden (p = 0,66, ns). (F) percentage tijd met een object tijdens validatie proeven in de grootte van een kleine steekproef toont een tendens tot afkeer van het object. p = 0.2159, one-sample t-test. (G) met een grotere grootte van de steekproef en het object vanuit (F) gebruikt als een nieuw object in een NORT, een grote afkeer van het object wordt gevonden, ook al het nieuwe object is. * p = 0.0270, one-sample t-test. Dit is een voorbeeld van een technische storing in een selectie van objecten. Gegevens worden gepresenteerd zoals bedoel ± SEM. gegevens uit C-E worden aangepast van een eerdere publicatie6panelen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58593/58593fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>

Hier bieden we een protocol waarin uitgebreide instructies voor de economische vaststelling van lymfkliertest object locatie en roman object erkenning gedrags testen, met inbegrip van het ontwerp, de kosten en de bouw van de benodigde duikuitrusting, evenals uitvoering van het testen van de gedragsmatige, gegevensverzameling en analyse.

Roman Objectherkenning en Object locatie gedrags testen in muizen op een begroting

Ethologically relevant behavioral testing is a critical component of any study that uses mouse models to study the cognitive effects of various ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen over geheugenregulatie. We bepalen bijvoorbeeld de rol van specifieke eiwitten in het geheugen door transgene knock-outmuizen in deze taken te testen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een snelle en kosteneffectieve manier om geheugen testen uit te voeren in elk lab.Demonstratie van de arena constructie is van cruciaal belang, omdat het oplosmiddel lassen zal alleen sterke resultaten opleveren als uitgevoerd met zorg. Begin met het verwerven van vijf vellen acryl, acrylcement, en een 16-gauge hypo applicator. Haal de beschermpapiercoating uit de acrylvellen.Dan droog-fit alle materialen om te bevestigen dat de maten correct zijn. Monteer en laad de spuit vervolgens met acrylcement. Lijn de lange rand van een buitenmuur af met de bovenrand van de basis en zorg ervoor dat ze loodrecht op elkaar staan met behulp van een combinatie of machinistvierkant.Gebruik vervolgens de spuit om een kleine en stabiele kraal cement rechtstreeks op de hoek van de twee stukken die worden samengevoegd aan te brengen. Houd de twee stukken vijf minuten op hun plaats totdat ze in eerste instantie zijn ingesteld. Herhaal dezelfde stappen om de andere buitenmuur aan de basis te bevestigen.Bevestig vervolgens twee binnenwanden, een voor een, de basis met acrylcement. Tot slot, gebruik maken van de spuit om een kleine en gestage kraal van cement direct toe te passen op de hoek nu wordt gevormd door de buitenmuur en de binnenmuur. Begin de gewenningssessie door muizen in groepen van vier te verdelen en huis ze in individuele schone kooien.Breng vervolgens een groep muizen naar de testruimte en laat ze minstens 30 minuten acclimatiseren. Na de acclimatisatie begint u met het opnemen van de video. Plaats elke muis in de arena met uitzicht op de muren van de release hoek, en laat de muizen om de arena's vrij te verkennen voor zes minuten.Stop vervolgens met het opnemen van de video en breng muizen terug naar hun schone kooien tijdens het interprocesinterval. Reinig alle arena's met aanbevolen reinigingsmethoden voor dierenfaciliteiten, zoals afvegen met 70% ethanol om reuksignalen te minimaliseren. Tot slot, na het voltooien van een totaal van drie gewenningssessies, terug te keren alle muizen naar hun huis kooien.Breng na 24 uur dezelfde groep muizen naar de testruimte en laat ze minstens 30 minuten wennen aan de testruimte, zoals gedaan voor de gewenningssessies op de vorige dag. Voer de trainingsproef uit met behulp van twee objecten die in de arena zijn geplaatst. Breng objecten met dubbelzijdige tape zes bij zes centimeter afstand van twee niet-release hoeken, zodanig dat ze worden gecompenseerd in de arena.Laat muizen de arena en objecten gedurende 10 minuten vrij onderzoeken. Stop dan de video-opname. Plaats muizen terug in hun schone kooien voor 20 minuten, en maak de gebieden schoon met ethanol.Als u de objectlocatietaak OLT wilt uitvoeren, verplaatst u een van de objecten die in de trainingsproef worden gebruikt naar een nieuwe niet-releasehoek en brengt u het object zes centimeter van elke hoek van die hoek aan met dubbelzijdige tape. Herhaal dezelfde video-opname van de muizen in het gebied gedurende 10 minuten, zoals eerder beschreven. Ten slotte, om de nieuwe objectherkenningstaak NORT uit te voeren, vervang het object dat tijdens het OLT niet is verplaatst door een nieuw object en breng het nieuwe object zes centimeter van de twee wanden van de hoek aan door dubbelzijdige tape.Herhaal dezelfde video-opname van de muizen in het gebied gedurende 10 minuten, zoals eerder beschreven. Tijdens het OLT wordt het geheugen voor objectlocatie weerspiegeld door een groep muizen die gemiddeld aanzienlijk meer tijd met een object besteedt nadat het is verplaatst. Dit kan ook worden voorgesteld als een toename van de discriminatie-index.In de NORT wordt het geheugen voor objectlocatie weerspiegeld door een groep muizen die gemiddeld aanzienlijk meer dan 50% van de onderzoekstijd met het nieuwe object besteedt of een discriminatie-index vertoont die aanzienlijk groter is dan nul. Het kiezen van objecten waarvoor muizen geen inherente voorkeur hebben, is essentieel. In een proef met een steekproefgrootte van vier vertoonden muizen bijvoorbeeld een trend om minder dan 50% van de onderzoekstijd met object A uit te geven wanneer deze werden gekoppeld aan object B.Toen object A vervolgens werd gebruikt als het nieuwe object in een NORT, met een grotere steekproefgrootte van 16, brachten muizen aanzienlijk minder dan 50% van de onderzoekstijd door met object A.Deze gegevens suggereren inherente afkeer van object A.Tijdens deze procedure , is het belangrijk om te onthouden om alle objecten en arena's tussen het gebruik grondig schoon te maken.In deze methode kan objectonderzoek handmatig worden beoordeeld door onderzoekers of met behulp van commerciële software. Software heeft hogere upfront kosten, maar, eenmaal gekalibreerd, kan tijd en financiële middelen besparen op de lange termijn.

novel-object-recognition-object-location-behavioral-testing-mice-on

Research

JoVE Journal

Behavior

Gedrag

Volledig geautomatiseerd systeem voor het meten fysiologisch zinvolle eigenschappen van de mechanismen bemiddelende ruimtelijk lokaliseren, temporele lokalisatie, duur, snelheid en waarschijnlijkheid schatting risicobeoordeling, impulsiviteit, en de nauwkeurigheid en precisie van het geheugen, om de effecten van genetische en farmacologische manipulaties op beoordelen fundamentele mechanismen van cognitie bij muizen.

Geautomatiseerde, Kwantitatieve Cognitieve / Behavioral Screening van Muizen: Voor Genetica, Farmacologie, Animal Cognition and Undergraduate Instructie

Langdurige en uitgebreide monitoring van muizen in een home-kooi-omgeving biedt een dieper begrip van afwijkend gedrag in muismodellen van hersenziekten. Dit artikel beschrijft de Integrated Behavioral Station (INBEST) als de belangrijkste component van de hedendaagse gedragsanalyse.

Behavioral Fenotypering van Muriene Disease Modellen met de Integrated Behavioral Station (INBEST)

Gecompliceerdere, beperkte, repetitieve gedragingen (RRB's) verstoren het leven van getroffen individuen. Dit gedrag is moeilijk te modelleren bij knaagdieren, waardoor fundamenteel biomedisch onderzoek naar mogelijke behandelingen of interventies voor RRB's moeilijk wordt. Hier beschrijven we de exploratie van nieuwe objecten als een potentiële test voor complexere RRB's bij muizen.

Novel Object Exploration als een potentiële test voor hogere orde repetitief gedrag in Muizen

Hier beschreven is een gestage, gedrags screening aanpak die kan worden gebruikt om te screenen voor verbindingen die in vivo werkzaamheid vertonen op cognitief en functioneel motorisch gedrag bij transgene muismodellen van β-amyloïdose en tauopathie. Deze methoden zijn geoptimaliseerd om verbindingen te screenen voor activiteit in kort- en werkgeheugen taken.

Evaluatie van spontane alternatie, herkenning van nieuwe objecten en limb clasping in transgene muismodellen van Amyloid-B en Tau Neuropathology

De herkenningstest object (ORT) is een eenvoudige en efficiënte test voor de evaluatie van leren en geheugen in muizen. De methodologie wordt hieronder beschreven.

De herkenningstest roman-Object voor het onderzoek naar leren en geheugen in muizen

Dit protocol beschrijft een gedrags assay, op basis van de test van de doolhof Barnes, om te bestuderen hoe instinctieve defensieve acties worden gewijzigd door de kennis van de ruimtelijke omgeving.

Een gedrags Assay voor het onderzoeken van de rol van ruimtelijk geheugen tijdens instinctieve verdediging in muizen

Een uitgebreide gedrags testbatterij van motorische vaardigheden, stemming — met inbegrip van sociale interactie, depressie en angst — en cognitie is ontworpen voor de herhaalde beoordeling van neurodegeneratie-gerelateerde gedragsveranderingen bij muizen.

Een gedrags testbatterij voor de herhaalde beoordeling van motorische vaardigheden, humeur en cognitie bij muizen

We hebben één platform ontwikkeld om het gedrag van dieren te volgen tijdens twee klimmende vezelafhankelijke associatieve leertaken. Het goedkope ontwerp maakt integratie mogelijk met optogenetische of beeldvormingsexperimenten gericht op het beklimmen van vezelgerelateerde cerebellaire activiteit.

Een flexibel platform voor het monitoren van cerebellum-afhankelijk sensorisch associatief leren

We presenteren een goedkope, markerloze workflow met DeepLabCut om spontane gang en voortbeweging bij vrij bewegende muizen te kwantificeren. Dit protocol integreert single-camera video-opname, markerloze tracking van anatomische herkenningspunten en het extraheren van ruimtelijke temporale locomotorische parameters, waardoor een niet-invasief en toegankelijk kader wordt geboden voor motorische gedragsanalyse zonder gespecialiseerde apparatuur.

Een goedkope, markerloze DeepLabCut-gebaseerde workflow voor spontane loop- en bewegingsanalyse bij vrij bewegende muizen

Dit manuscript beschrijft een protocol om het reuksysteem van knaagdieren te onderzoeken. De reuk habituatie/dishabituatie test zal onderzoekers in staat stellen om te bepalen of een muis zich aanpast aan een herhaaldelijk gepresenteerde geur en of de muis dishabituatie vertoont wanneer een nieuwe geur wordt gepresenteerd.

Testen voor Geur Discriminatie en gewenning in Muizen

Leer objectlocatie- en objectherkenningstesten voor geheugenevaluatie bij muizen. Dit protocol biedt een snelle en kosteneffectieve methode voor gedragsonderzoek in neurowetenschappen.

Roman Objectherkenning en Object locatie gedrags testen in muizen op een begroting

Meer video's verkennen