Name: Boviene melkklier biopsie technieken (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 53 s
Description: Leer biopsietechnieken voor het bovine melkklierweefsel met behulp van kern- en naaldbiopsie-instrumenten. Deze methode ondersteunt onderzoek naar fysiologie, metabolisme en celkweek in melkvee.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek werd gesteund door de nationale Animal Nutrition Program en Virginia Tech. De technische bijstand van Ms. Tara Pilonero, Dr. Julie Settlage en Dr. Izabelle Teixeira dankbaar zijn erkend.

Alle methoden die worden beschreven zijn door de Virginia Tech institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) goedgekeurd.
1. personeel
<ol><li>Ten minste twee assistenten met chirurgische en koe aangestuurde ervaring heb.</li>
	<li>Train alle assistenten ten minste driemaal, indien mogelijk met behulp van dode foetussen materiaal, vóór het uitvoeren van de procedures die verband houden met dit protocol op levende dieren. Opmerking: Opleiding moet plaatsvinden door een instructeur die al eerder getraind en uitgevoerd van de techniek.</li>
	<li>Hebben een grote dierlijke dierenarts voor u klaar voor de FDA en in het geval dat dringende medische verzorging tijdens de procedure noodzakelijk wordt. Noodsituaties die zich tijdens deze procedure voordoen kunnen omvatten maar zijn niet beperkt tot: bloeding, α-2 agonist overdosis en longoedeem, regurgitatie en aspiratie van voedsel materiaal, pijn en patiënt verzet waarvoor verdere sedatie.</li>
</ol>2. voorbereiding van de chirurgische instrumenten, leveringen en faciliteit
<ol><li>Inventaris en aankoop alle materiaal en voorraden (Zie Tabel van materialen).</li>
	<li>Schoon en autoclaaf afdeklakens, biopsie instrumenten, scalpel houders, chirurgische handdoeken en pincet.</li>
	<li>Hebben een juiste afmeting squeeze parachute en hoofd gate te bedwingen van de koeien.</li>
	<li>Vast een werkplek met een tabel in de buurt van de parachute squeeze.</li>
	<li>Zorg ervoor dat het werkgebied schoon is en een koe door-verkeer beperkte heeft.</li>
	<li>Organiseren en benodigdheden in de werkruimte voor gemakkelijke toegang.</li>
	<li>Juiste verlichting binnenin het werkruimte heb.</li>
</ol>3. voorbereiding van de dieren
<ol><li>Één dag vóór de geplande biopsie, wassen en schrobben van het dier, met name de uier om mest en verontreinigde materialen te verwijderen.</li>
	<li>Volgt u de procedures voor veilige en humane terughoudendheid van vee.</li>
	<li>Vóór de biopsie en opnieuw ten tijde van de biopsie, beoordelen de gezondheid, de fysieke conditie en het gedrag van het dier. Opmerking: Een minimumeisen voor het examen bevat temperatuur, pols, en respiratoire tarieven, alsmede onderzoek naar dermatitis ten opzichte van de voorgestelde chirurgische site of andere gebieden van een bacteriële infectie. Verzamelen van melkmonsters van elk kwartaal en controleer op mastitis.</li>
	<li>Gebruik alleen gezonde koeien.</li>
	<li>Volledig melk de koe.</li>
	<li>Verplaats het dier naar de squeeze parachute, idealiter binnen 2 uur na het melken om te minimaliseren van melk aanwezig in de klieren.</li>
	<li>Beperken van het dier met een hoofd-gate.</li>
</ol>4. analgesie en sedatie
<ol><li>Plaats een halster touw op het hoofd van de koe te voorkomen achteruit en doorsturen beweging.</li>
	<li>Trek van het dier hoofd aan de ene kant, en bind het touw aan de parachute van de squeeze een knoop snelsluiter met het hoofd op zijn plaats houden.</li>
	<li>Reinig het gebied van injectie met een 70% isopropyl alcohol doekje en flunixin meglumine (1.1-2.2 mg/kg lichaamsgewicht) intraveneus beheren via de halsslagader 15-20 min voorafgaande aan de biopsie. Opmerking: In sommige protocollen, steroïdale anti-inflammatoire geneesmiddelen worden toegediend na de biopsie als anti-inflammatoire geneesmiddelen zal niet van invloed op de resultaten van het onderzoek.<ol>
<li>Zoek de halsslagader.</li>
		<li>De halsslagader verhogen door toepassing van druk aan de voet van de jugular groef.</li>
		<li>Controleren om ervoor te zorgen dat er geen luchtbellen in de spuit.</li>
		<li>De naald in de verhoogde halsslagader, invoegen en 0,5 mL bloed te trekken in de spuit tweemaal en meng met de inhoud. Als geen bloed in de spuit toont, verplaatsen de naald. Als de naald woonachtig in de ader is, injecteren de inhoud.</li>
		<li>Verwijder voorzichtig de naald.</li>
		<li>Gaas met zachte druk van toepassing op de injectieplaats te voorkomen bloeden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Xylazine hydrochloride intraveneus beheren (0.01 aan 0,05 mg/kg lichaamsgewicht) in het coccygeal schip ongeveer 5-10 min vóór de biopsie aan om voldoende tijd voor de oprichting van sedatie. Let op: Controleer het dier voor tekenen van longoedeem. Klinische symptomen van longoedeem omvatten respiratoire nood, ernstige kortademigheid, ademhalingsproblemen, hoesten, schuimend sputum en blauwe tong. Symptomen van longoedeem zijn waargenomen, wordt het aanbevolen om als tolazine (2 tot 4 mg/kg lichaamsgewicht) gebruikt om te keren van de effecten van de xylazine.
	<ol>
<li>Hef de staart en reinig het gebied van injectie met een 70% isopropyl alcohol doekje.</li>
		<li>Controleren om ervoor te zorgen dat er geen luchtbellen in de spuit.</li>
		<li>Plaats de naald in het schip van de staart, 0.2 mL bloed te trekken in de spuit en meng met de inhoud om ervoor te zorgen dat de naald is woonachtig in het schip. Als de naald woonachtig in het schip is, injecteren de inhoud van de spuit.</li>
		<li>Verwijder voorzichtig de naald.</li>
		<li>Gaas met zachte druk van toepassing op de injectieplaats.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. bereiding van de biopsie site
<ol><li>Hebt een assistent vastbinden aan de staart voor de procedure.</li>
	<li>Selecteer de site van de biopsie op de uier (meestal in een bovenste gedeelte om te minimaliseren van de collectie van bindweefsel en om te voorkomen dat penetratie in de klier cisterne, Figuur 1) en bevuilde materiaal of mest uit de geselecteerde biopsie-site verwijderen.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig1v2.jpg"> Figuur 1 . Afbeelding van de boviene uier ter illustratie van de biopsie site. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a> 
<ol start="3"><li>Observeren en palperen van de huid met speciale aandacht voor het identificeren van een grote onderhuidse bloedvaten om te voorkomen dat deze schepen tijdens de biopsie.</li>
	<li>Knippen van het haar van een gebied van 15 x 15 cm rond de biopsie-site.</li>
	<li>Het gebied van de biopsie met Povidon-jodium (0,75% beschikbare jodium) of chloorhexidine gluconaat scrub voor te bereiden. Afgewisseld met 70% isopropyl alcohol ten minste driemaal te verwijderen van alle zichtbare en onzichtbare puin. De aseptische scrub oplossing en isopropyl alcohol in een draaiende beweging met behulp van binnenstebuiten aanpak toepassen. Ervoor zorgen dat de antiseptische scrub oplossing in contact met de huid voor minstens 5 min blijft.</li>
	<li>Gebruik een infusie van de vlinder instellen met een naald 18 G 6 mL 2% lidocaïne hydrochloride subcutaan storten op de site van de snede te maken van een lijn-blok. Niet doordringen in de diepere weefsels. Opmerking: Dosering van lidocaïne varieert tussen de 3 en 8 mL.</li>
	<li>De plaatselijke verdoving te verspreiden voor 3 tot 5 min. uitvoeren een andere herhaling van scrub oplossing en alcohol voorafgaand aan incisie toestaan. Terwijl we wachten, bereiden de biopsie instrumenten.</li>
</ol>6. biopsie procedure
<ol><li>Gebruik aseptische technieken bij het verwerken van de biopsie gereedschappen en voor de incisie.</li>
	<li>Het wassen van handen verwijderen alle zichtbare verontreiniging en steriele chirurgische handschoenen toe te passen.</li>
	<li>Schik de chirurgische instrumenten in een steriele omgeving in volgorde van gebruik. Hebben een nummer 10 scalpel, steriel gaas, een instrument van de geassembleerde biopsie en een steriele handdoek voor hemostase. Opmerking: Volg 1 van de Procedure voor het uitvoeren van een Core biopsie of Procedure 2 voor het uitvoeren van een naald biopsie.
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig2.jpg"> Figuur 2 . Schematische weergave van montage en installatie van het basisprogramma van de biopsie beschreven door V. C. Farr, et al. 9 schaal bar is 1 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<ol start="4"><li>Belangrijkste biopsie Instrument (Farr et al.9)<ol>
<li>Monteren het kern biopsie instrument met behulp van steriele handschoenen (Figuur 2).<ol>
<li>Leg de 7 steriele stukjes op een steriele gordijn (figuur 2A).</li>
			<li>Het mes (1 stuk) invoegen in de dokkende systeem op stuk 2 (figuur 2B ). Let op: Plaats geen vingers rechtstreeks in de blade-lijn.
</li>
			<li>Invoegen stuk 3 op de top van stuk 2 (figuur 2C) ervoor te zorgen dat het docking station wordt uitgelijnd. Opmerking: Observeren een dokkende systeem in het interieur wand van stuk 4 (figuur 2D).</li>
			<li>De definitieve rand van het blad (1 stuk) betrekken in het dokkende systeem van stuk 4 (figuur 2D).</li>
			<li>Duw voorwaarts stuk 4 en observeren als stuk 4 naast stuk 3 (figuur 2E is).</li>
			<li>Invoegen stuk 5 op het apparaat (mes + stuk 2) (figuur 2F).</li>
			<li>Zorgen dat het docking station wordt uitgelijnd (Figuur 2 g).</li>
			<li>Stuk 6 invoegen boven aan stuk 2 (tegenover kant van het blad) (Figuur 2 H)</li>
			<li>Zorgen dat het docking station wordt uitgelijnd (Figuur 2 H).</li>
			<li>Plaats de vergrendeling schroef (stuk 7) in het docking station (figuur 2I).</li>
			<li>Duw voorwaarts stuk 3 (zwart) ter dekking van de vergrendeling schroef. Let op: Plaats geen vingers op de afrit blade.
</li>
			<li>Activeren van het gereedschap duwen voorwaarts stuk 4 en observeren van het blad buiten het gereedschap.</li>
			<li>Pull stuk 4 terug naar het intrekken van het mes in het hulpprogramma (klaar voor gebruik). Opmerking: Het mes moet worden alleen geactiveerd wanneer het hulpprogramma doorgedrongen de gewenste afstand in het weefsel tot is worden biopsied.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Ervoor zorgen dat de koe is voldoende verdoofd en de biopsie site voldoende is verdoofd. Het knijpen van de huid om ervoor te zorgen geen reactie.</li>
		<li>Het maken van een verticale incisie van 2 tot 3 cm door de huid en de subcutane weefsels van proximaal naar DISTAAL met behulp van een scalpel nummer 10.</li>
		<li>De biopsie instrument hechten aan een draadloze boormachine met behulp van steriele techniek.</li>
		<li>Plaats de boor tegen de biopsie tool en gecontroleerd als het hulpprogramma stevig is aangesloten op de boor.</li>
		<li>Zorgen voor voldoende terughoudendheid door het hebben van een individu de staart verheffen tijdens alle procedure.</li>
		<li>Inschakelen van de boor met rechtsom draaien en een lage snelheid. Opmerking: De boor is niet steriel, en de exploitant blijft niet steriele bij het gebruik van de boor.</li>
		<li>Verder het hele biopsie gereedschap (ongeveer 7,5 cm) in de uier door middel van de incisie, terwijl de boor is de tol draaien.</li>
		<li>Uitschakelen van de boor en stuk 4 van het hulpprogramma handmatig uit te breiden.</li>
		<li>Inschakelen van de boor met rechtsom draaien en lage snelheid.</li>
		<li>Verwijder het instrument met de kern van het weefsel van de uier.</li>
		<li>Onmiddellijk van toepassing zijn sterke druk op de wond met een steriele handdoek voor minstens 20 min. Opmerking: Hebt een assistent die uitvoeren met behulp van hun vuist om ervoor te zorgen dat voldoende druk wordt toegepast.</li>
		<li>Verwijder het weefsel van biopsie tool met pincet.</li>
		<li>Houden van het monster in 1 x fosfaatgebufferde zoutoplossing en evalueren van de hoeveelheid weefsel.</li>
		<li>Neem de koemelk vital signs elke 10 min na de biopsie voor minstens 30 min.</li>
		<li>Selectievakje voor bloeden na 20 min van druk op de site van de biopsie. Als er druppels bloed blijven toe te passen druk voor een extra 5-10 min.</li>
		<li>Sluit de insnijdingen RVS nietjes met tussenpozen van 5 mm immers bloeden is gestopt. Gebruik tussen 5 en 8 nietjes.</li>
		<li>Toepassing een aërosol pleister op het gebied van de biopsie.</li>
		<li>Observeer het dier gedurende 50 minuten na de ingreep.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Naald biopsie Instrument
	<ol>
<li>Volg de instructies van de fabrikant voor het apparaat.</li>
		<li>Verwijder de naald biopsie uit het pakket met behulp van steriele technieken.</li>
		<li>Gooi de naald als schade wordt waargenomen.</li>
		<li>De naald wordt aan het apparaat koppelen.</li>
		<li>Sluit de klep en pik van het apparaat.</li>
		<li>Ervoor zorgen dat de koe is voldoende verdoofd en de biopsie site voldoende is verdoofd. Het knijpen van de huid om ervoor te zorgen geen reactie.</li>
		<li>Het maken van een 1 tot 2 cm verticale incisie door de huid en de subcutane weefsels van proximaal naar DISTAAL met behulp van een scalpel nummer 10. Opmerking: De incisie voor het instrument van de naald biopsie kunnen kleinere (1-2 cm) dan die voor het instrument van de biopsie kern.</li>
		<li>Zet de naald biopsie op de site van de incisie (ongeveer 10 tot en met 13 cm van de huid).</li>
		<li>Activeren het apparaat naald biopsie voor het verzamelen van het weefsel.</li>
		<li>Verwijder de naald uit de uier.</li>
		<li>Onmiddellijke en sterke druk uitoefenen op de wond met een steriele handdoek voor minstens 20 min.</li>
		<li>Verwijder het weefsel van de naald van de biopsie met pincet.</li>
		<li>Houden van het monster in 1 x fosfaatgebufferde zoutoplossing en evalueren van de hoeveelheid weefsel.</li>
		<li>Neem vital signs elke 10 min na de biopsie voor minstens 30 min.</li>
		<li>Selectievakje voor bloeden na 20 min van druk op de site van de biopsie.</li>
		<li>Sluit de insnijdingen met RVS nietjes immers bloeden is gestopt.</li>
		<li>Toepassing een aërosol pleister op het gebied van de biopsie.</li>
		<li>Observeer het dier gedurende 50 minuten na de ingreep.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. Na biopsie dierenverzorgers
<ol><li>Documenteer alle drugs toegediend aan dieren. Opmerking: Melk werd verwijderd tijdens een periode van 36 uur na de ingreep; vlees terugtrekking was 4 d. wachttijden voor melk en vlees kunnen variëren afhankelijk van het land of jurisdictie en de drugs gebruikt. Controleer de lokale wet- en regelgeving.</li>
	<li>Controleren op de aanwezigheid van bloed in de melk voor 7 tot en met 10 d na de biopsie.</li>
	<li>Hand van bloedstolsels strip van de biopsied wijk in latere melkingen en ervoor te zorgen dat volledige melk verwijdering plaatsvindt. Opmerking: De aanwezigheid van bloedstolsels van de biopsied kwart voor 1-3 melkingen na de procedure wordt verwacht. Bloed in de melk kan worden waargenomen voor 1 tot en met 6 d na de biopsie.</li>
	<li>Observeren van melk opleveren, en indien mogelijk de individuele dagelijkse voederopname totdat chirurgische nietjes zijn verwijderd.</li>
	<li>Toezicht op het dier twee keer per dag voor lichaamstemperatuur, ademhaling en hartslag en houding totdat chirurgische nietjes zijn verwijderd.</li>
	<li>Controleer de biopsie site tweemaal daags voor zwelling, tederheid, en geen symptomen van drainage totdat de chirurgische nietjes zijn verwijderd. Als deze worden waargenomen, Raadpleeg een dierenarts. Opmerking: De biopsie site schoon te houden en opnieuw het aërosol verband elke één tot drie dagen indien nodig.</li>
	<li>Verwijder de nietjes van de incisie site 10 tot en met 14 d na de biopsie, afhankelijk van de genezing tarief.</li>
	<li>Raadpleeg een dierenarts indien symptomen van lokale of systemische infectie worden waargenomen.</li>
</ol>

<ol><li>Khatun, M., Sorensen, P., Ingvartsen, K. L., Bjerring, M., Rontved, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+combined+liver+and+udder+biopsying+on+the+acute+phase+response+of+dairy+cows+with+experimentally+induced+E.+coli+mastitis%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">Effects of combined liver and udder biopsying on the acute phase response of dairy cows with experimentally induced E. coli mastitis.</a> Animal. 7 (10), 1721-1730 (2013).</li>
<li>Buitenhuis, B., Rontved, C. M., Edwards, S. M., Ingvartsen, K. L., Sorensen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+depth+analysis+of+genes+and+pathways+of+the+mammary+gland+involved+in+the+pathogenesis+of+bovine+Escherichia+coli-mastitis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">In depth analysis of genes and pathways of the mammary gland involved in the pathogenesis of bovine Escherichia coli-mastitis.</a> BMC Genomics. 12, 130(2011).</li>
<li>Nickerson, S. C., Akers, R. M. Mammary Gland | Anatomy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNickerson%2C+SC+%22Fuquay+JW%2C+Fox+PF+and+McSweeney+PLH+%28eds.%29%2C+Encyclopedia+of+Dairy+Sciences%2C+Second+Edition%22">Fuquay JW, Fox PF and McSweeney PLH (eds.), Encyclopedia of Dairy Sciences, Second Edition</a>. 3, Academic Press. San Diego. 328-337 (2011).</li>
<li>Akers, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+100-Year+Review%3A+Mammary+development+and+lactation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">A 100-Year Review: Mammary development and lactation.</a> Journal of Dairy Science. 100 (12), 10332-10352 (2017).</li>
<li>Ruegg, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+100-Year+Review%3A+Mastitis+detection%2C+management%2C+and+prevention1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">A 100-Year Review: Mastitis detection, management, and prevention1.</a> Journal of Dairy Science. 100 (12), 10381-10397 (2017).</li>
<li>Zhao, X., Lacasse, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammary+tissue+damage+during+bovine+mastitis%3A+Causes+and+control%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Mammary tissue damage during bovine mastitis: Causes and control.</a> Journal of Animal Science. 86 (13), 57-65 (2008).</li>
<li>Knight, C. H., Hillerton, J. E., Teverson, R. M., Winter, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biopsy+of+the+bovine+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22British+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Biopsy of the bovine mammary gland.</a> British Veterinary Journal. 148 (2), 129-132 (1992).</li>
<li>Lima, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+bovine+mammary+gland+biopsy+and+increased+milking+frequency+on+post-procedure+udder+health%2C+histology%2C+and+milk+yield%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">Effects of bovine mammary gland biopsy and increased milking frequency on post-procedure udder health, histology, and milk yield.</a> Animal. 10 (5), 838-846 (2016).</li>
<li>Farr, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+the+routine+biopsy+of+bovine+mammary+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">An improved method for the routine biopsy of bovine mammary tissue.</a> Journal of Dairy Science. 79 (4), 543-549 (1996).</li>
<li>Weng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+communication%3A+Repeated+mammary+tissue+collections+during+lactation+do+not+alter+subsequent+milk+yield+or+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">Short communication: Repeated mammary tissue collections during lactation do not alter subsequent milk yield or composition.</a> Journal of Dairy Science. 100 (10), 8422-8425 (2017).</li>
<li>Peterson, D. G., Matitashvili, E. A., Bauman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet-induced+milk+fat+depression+in+dairy+cows+results+in+increased+trans-10%2C+cis-12+CLA+in+milk+fat+and+coordinate+suppression+of+mRNA+abundance+for+mammary+enzymes+involved+in+milk+fat+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Diet-induced milk fat depression in dairy cows results in increased trans-10, cis-12 CLA in milk fat and coordinate suppression of mRNA abundance for mammary enzymes involved in milk fat synthesis.</a> Journal of Nutrition. 133 (10), 3098-3102 (2003).</li>
<li>Baumgard, L. H., Matitashvili, E., Corl, B. A., Dwyer, D. A., Bauman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((trans-10%2C+cis-12+conjugated+linoleic+acid+decreases+lipogenic+rates+and+expression+of+genes+involved+in+milk+lipid+synthesis+in+dairy+cows%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">trans-10, cis-12 conjugated linoleic acid decreases lipogenic rates and expression of genes involved in milk lipid synthesis in dairy cows.</a> Journal of Dairy Science. 85 (9), 2155-2163 (2002).</li>
<li>Kasraeian, S., Allison, D. C., Ahlmann, E. R., Fedenko, A. N., Menendez, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+fine-needle+aspiration%2C+core+biopsy%2C+and+surgical+biopsy+in+the+diagnosis+of+extremity+soft+tissue+masses%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Orthopaedics+and+Related+Research%22%5BJournal%5D)">A comparison of fine-needle aspiration, core biopsy, and surgical biopsy in the diagnosis of extremity soft tissue masses.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 468 (11), 2992-3002 (2010).</li>
<li>de Lima, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+repeated+biopsies+of+the+mammary+gland+in+dairy+cows+allotted+to+Latin-square+design+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Veterinary+Research-Revue+Canadienne+De+Recherche+Veterinaire%22%5BJournal%5D)">A new technique for repeated biopsies of the mammary gland in dairy cows allotted to Latin-square design studies.</a> Canadian Journal of Veterinary Research-Revue Canadienne De Recherche Veterinaire. 80 (3), 225-229 (2016).</li>
<li>Ollier, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+intact+rapeseeds+or+sunflower+oil+in+high-forage+or+high-concentrate+diets+affects+milk+yield%2C+milk+composition%2C+and+mammary+gene+expression+profile+in+goats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">Whole intact rapeseeds or sunflower oil in high-forage or high-concentrate diets affects milk yield, milk composition, and mammary gene expression profile in goats.</a> Journal of Dairy Science. 92 (11), 5544-5560 (2009).</li>
<li>Soberon, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+increased+milking+frequency+on+metabolism+and+mammary+cell+proliferation+in+Holstein+dairy+cows%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of increased milking frequency on metabolism and mammary cell proliferation in Holstein dairy cows.</a> Journal of Dairy Science. 93 (2), 565-573 (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Kern en naald biopsie methoden werden beschreven in dit protocol9,16. Een gedetailleerde evaluatie van de diergezondheid en de incidentie van mastitis14 vóór de biopsie is vereist voor beide procedures. Voor onderzoeksdoeleinden, moet uitvoeren van de techniek in dieren met duidelijke tekenen van ontsteking of besmettelijke ziekten worden vermeden. Dit zal het risico van complicaties tijdens en na een biopsie. Alle biopsie instrumenten en apparaten moet schoon, ontsmet en gesteriliseerd om verontreiniging van de biopsie site te voorkomen. Voordat de procedure is het noodzakelijk om te minimaliseren van de chirurgische site infecties (SSI). In het algemeen, wordt SSI geassocieerd met dierlijke morbiditeit, verloren prestaties en hogere productiekosten in melkkoeien. Studies gerapporteerd eerder methoden ter voorkoming van SSI als gevolg van de biopsie inclusief knippen van de haren rond de site van de incisie, wassen van de biopsie gebied als u wilt verwijderen van verontreiniging9,14, en het gebruik van antiseptische agenten (70% alcohol, jodium chirurgische schrobben9, 2% chloorhexidine acetaat oplossing14, 10% Povidon-jodium8) voor de voorbereiding van de huid. In sommige studies, werd toediening van antibiotica aangenomen tijdens de7 of onmiddellijk na de biopsie9; echter antibiotica profylaxe werd niet gebruikt in het huidige werk, en geen infecties van de biopsie site werden waargenomen. Om te voorkomen dat besmetting van de biopsie wond, moet de staart worden beveiligd om te voorkomen dat contact met de biopsie site totdat de aërosol bandage is vereffend. In dit protocol worden nietjes ongeveer 10 tot en met 14 d verwijderd na de biopsie.
Voorafgaand aan een biopsie van de kern is het belangrijk om goed de tool instellen en deze koppelen aan de boor; kiezen van een langzame rotatiesnelheid, de voorwaartse rotatie en gebruik niet de omgekeerde modus van de boor. Tijdens de procedure is het belangrijk met digitale druk aan beide zijden van de snede te houden de huid randen apart en hebben een lang genoeg incisie voor het gereedschap invoeren zonder het contact met de huid of bindweefsel. Als deze procedure niet wordt gedaan, kan een belemmering voor de randen van de incisie tijdens rotatie van het instrument van de biopsie kern optreden en veroorzaken extra huid weefseltrauma die vergroot het risico van infectie en kan onmiddellijk wondgenezing. De huidige biopsie procedures beschreven in dit protocol werden uitgevoerd door een board-gecertificeerde grote dierlijke chirurg. De procedures werden met succes uitgevoerd (Figuur 5). Beide technieken zijn relatief gemakkelijk en snel uit te voeren ten opzichte van de chirurgische excisie procedure.
Bloeden uit de biopsie site gelden na MG biopsie in melkkoeien8,9,10,14. In het huidige protocol, bloeden waargenomen was minimaal (Figuur 4), die kan worden veroorzaakt door de toepassing van adequate (sterk) druk op de wond onmiddellijk na de ingreep. Sterke druk gedurende ten minste 20 minuten is vereist, en het nodig kan zijn voor meer dan 30 min in sommige gevallen. Matige tot ernstige bloeding wordt waargenomen na toepassing van druk op de site van de biopsie, wordt het aanbevolen om als blijven druk, en onmiddellijk contact op met een dierenarts.
Zoals hemostase een belangrijke factor is voor de vermindering van de morbiditeit van de koe, verpakt een studie hemostatische pads in de site van de biopsie bepalen bloeden9. Gebruik voor hemostatische pads op zodanige wijze heeft echter een hoog potentieel risico voor de microbiologische verontreiniging in de omgeving van de melkveehouderij. Een andere studie14 handmatige druk toegepast op de site van de biopsie tussen herhaalde biopsieën en na biopsie en huid kunnen worden afgesloten, en ijs op de site gedurende minstens 2 uur na de biopsie toegepast. In het huidige protocol was sterke druk uitgeoefend op de site van de biopsie voor 20 tot 25 min voldoende om te controleren bloeden.
Minimale bloed in de melk die langer voor een korte periode na de ingreep aanhoudt moet leiden tot een succesvolle biopsie techniek. Om te voorkomen dat een onderbreking van de secretie van melk tijdens melk teleurstelling en mastitis infecties, moeten intramammaire bloedklonters worden verwijderd met de hand strippen van de biopsied kwartaal10,14. In het huidige protocol, werd bloed waargenomen in de melk tot 48 uur na de biopsie. Echter, in een studie waarmee een groter aantal dieren, bloed in de melk werd waargenomen in de meerderheid van de koeien minder dan 6 dagen. Enkele dieren bleek bloed in de melk na 6 dagen8. Om deze reden is dagelijkse observatie van melk verschijning noodzakelijk voor 6 d na de ingreep. Dieren deed niet vertonen tekenen van mastitis infectie wanneer een grote weefsel monster14was verkregen. Echter vond vorige onderzoek dat herhaalde biopsieën uitgevoerd op hetzelfde dier met behulp van een naald dat die mastitis infectie incidentie was ongeveer 12% na de procedure8. In het huidige protocol had noch dier visuele tekenen van klinische mastitis infectie na de ingreep. Er is ook een kleine kans dat de insnijding site na de biopsie besmet kan raken.
Tolazoline hydrochloride, een drug die de effecten van sedatie keert, moet beschikbaar zijn in het geval van een overdosis van xylazine. Een hoge dosis xylazine kan longoedeem veroorzaken. Klinische symptomen van longoedeem omvatten respiratoire nood, ernstige kortademigheid, ademhalingsproblemen, hoesten en schuimend sputum. Symptomen van longoedeem zijn waargenomen, wordt het aanbevolen om als tolazine (2 tot 4 mg/kg lichaamsgewicht) gebruikt om te keren van de effecten van de xylazine.
Dit protocol beschrijft de techniek voor het uitvoeren van zowel een naald biopsie en core biopsie. Het voordeel van een biopsie van de kern ten opzichte van de naald biopsie is in het algemeen, de grotere weefsel monster (0,75 tot 1 g)9 met minimale negatief effect op de gezondheid van de uier. De naald biopsie is een minder invasieve methode dan de belangrijkste biopsie instrument. Echter meerdere biopsie geprobeerd te verkrijgen van een grotere hoeveelheid weefsel met behulp van die een naald biopsie procedure het risico verhogen kan van grote bloeden na de procedure, alsmede de bloedstolsels in de melk. Beide technieken minimale koe morbiditeit veroorzaakt en waren gemakkelijk bereikt met minimale opleiding van chirurgische personeel. Een korte termijn verandering in dagelijkse melkopbrengst (8 tot 10% afname) en haar samenstelling9 en voeropname vermindering van14 naar verwachting na de kern en naald biopsieën, respectievelijk. Beperkingen van de naald biopsie procedure zijn het kleine volume van weefsel verwijderd met de naald. Het instrument moet worden geactiveerd, alleen wanneer de naald binnen het weefsel is als biopsied en vaak meerdere pogingen nodig zijn om voldoende hoeveelheden weefsel, dat het risico van bloed in de melk en mastitis na de ingreep verhoogt. Beperkingen van de kern biopsie omvatten een hoger risico van bloeden na de ingreep als een grote hoeveelheid weefsel (> 200 mg) wordt verkregen. Bovendien, is de biopsie tool moeilijker te monteren vereisen adequate opleiding vóór gebruik.

Een biopsie is een procedure om de oogst een deel van de kern van weefsel van de onderwerpen voor medische of onderzoeksdoeleinden. Het is een minimaal invasieve en meest gebruikte techniek om het verzamelen van weefsel als alternatief voor euthanasie1 zodat de analyse van weefsel reacties op behandeling of andere factoren van belang. Monsters van weefsels van runderen melkklier (MG) zijn essentieel voor zuivel onderzoek te bestuderen van de gen- en eiwit expressie, histologie, de organisatie van cellulaire organellen, signaalroutes en metabole processen in reactie op veranderingen in het beheer of de milieu. Bovendien is MG weefsel nodig voor het opsporen en onderzoeken van bepaalde besmettelijke ziekten, zoals boviene mastitis veroorzaakt door bacteriële infecties2.
De uier van vee bevat vier afzonderlijke klieren en elke klier bevat een onafhankelijke melk secretoire systeem collectief genaamd parenchym. De longblaasjes, buizen en bindweefsel zijn aanwezig in de borstklier parenchym. De longblaasjes zijn microscopische sferische holle structuren die zijn samengesteld uit epitheliale cellen in de binnenkant (luminal) en gespecialiseerde myoepithelial cellen op het buitenoppervlak (basale). De longblaasjes zijn verantwoordelijk voor de synthese en secretie van melk. De vezelig verbindende weefsel aanwezig in de parenchym kan een groep van longblaasjes scheiden van andere groepen van de longblaasjes en elke groep heet een lobule3. Verschillende factoren kunnen invloed op de ontwikkeling en de functie van de met inbegrip van dierlijke fysiologie, voeding, beheer, genetica en de milieu-4MG. Mastitis is ook een kritieke factor die negatief MG functie en melk kwaliteit5 beïnvloedt. De toxinen die zijn vrijgegeven door mastitic pathogenen kunnen leiden tot schade aan de longblaasjes en necrose resulterend in biochemische en histologische veranderingen in het weefsel MG6veroorzaken. Dus, de histologie en metabole processen van elke longblaasjes of lobule in de MG mogelijk beduidend verschillend van anderen. Als zodanig, zijn biopten dat representatieve monsters van de gehele melkklier wenselijk. Kleine biopten kunnen alleen een enkele lobule of individuele alveolus, beperking van de resulterende wetenschappelijke of diagnostische gegevens vastleggen. Voor onderzoeksdoeleinden, is het noodzakelijk zich bewust zijn dat een borstklier biopsie beschikt over een 'momentopname' van weefsel kenmerken maar een biopsie kan niet adequaat borstklier functie bij gebrek aan schattingen van de totale melkklier totaal karakteriseren massa.
Verschillende biopsie gereedschappen zijn ontwikkeld in de afgelopen 30 jaar voor menselijk gebruik. Aanpassingen van deze instrumenten zijn momenteel beschikbaar voor gebruik met dieren. Voor melkvee, zijn monsters van MG weefsel verkregen met behulp van verschillende technieken en chirurgische excisie (botte dissectie)7, biopsie naalden1,8, core biopsie instrumenten9,10. Dus, MG biopsie technieken in zogende melkkoeien zijn overgestapt van procedures ligfiets sedatie met chirurgische dissectie gebruiken elektrocauterisatie hemostase in 1992,7 aan collectie van core biopsieën onder staande sedatie9, 10,11,12. Chirurgische biopsie is een invasieve methode, die kan worden duur en hebben een hogere incidentie van complicaties zoals hematoom, wond problemen en tumor verspreid13. Op dit moment zijn kern biopsie en naald biopsie (ook bekend als een tru-cut biopsie) wijd goedgekeurd als alternatieven voor chirurgische biopsie. De voordelen van core en naald biopsieën vergeleken met chirurgische biopsie omvatten: de procedure is minimaal invasieve; grote complicaties zijn zeldzaam; narcose is niet vereist; de procedure is verwant snelle; de hersteltijd is kort; Er is minimale negatieve effecten op de gezondheid van de uier en alleen op korte termijn gevolgen voor melk opbrengst en samenstelling8,9,10; en de kosten is minder dan chirurgische biopsie13.
Een core biopsie beschreven procedure in 1996 gebruikt een steriele, RVS canule met een verwisselbare intrekbaar mes om een representatieve hoeveelheid weefsel van de boviene MG zonder narcose9,10,11 ,12. Tijdens de procedure, werd het instrument vastgemaakt aan een cordless drill maken een lage snelheid, de roterende beweging die netjes een kern van weefsel, gesneden zoals het hulpprogramma was gevorderd in het weefsel. Het voordeel was een grotere weefsel proeven (70 mm x 4 mm diameter, ongeveer 0,75 tot 1 g) 9. Een recente studie10 toonde aan dat de procedure van de biopsie beschreven door V. C. Farret al. 9 kan worden gebruikt voor het uitvoeren van herhaalde MG weefsel collecties zonder negatieve impact op de gezondheid van de prestaties en uier van zogende melkkoeien. Onlangs werd een studie14 uitgevoerd in melkkoeien te beoordelen van herhaalde Biopten van de MG gebruiken een grotere trocar (31 cm lange, buitenste diameter van 9.5 mm, binnendiameter van 8 mm) met vacuüm toegepast op een canule interne roestvrij staal voor het verzamelen van de biopsie . Deze methode gebruikt sedatie (xylazine) en plaatselijke verdoving (2% lidocaïne hydrochloride).
De naald biopsie is een andere techniek voor het verzamelen van de borstklier weefsel. Verschillende studies hebben deze techniek aangenomen. Één studie1 sedatie (detomidine) en plaatselijke verdoving (lidocaïne 1%) in de procedure worden gebruikt. Na de biopsie ontving de koeien een profylactische behandeling met antibiotica. De melkklier was handmatig gemasseerd vóór en na het melken. Bloed in de melk werd waargenomen voor maximaal 84 h na de biopsie. De hoeveelheid en de samenstelling van de melk werden getroffen voor een korte periode van tijd. Onlangs, een studie gebruikt een naald biopsie uit te voeren van herhaalde MG biopsieën in melkkoeien8. Sedatie (1% acepromazine, intramusculaire) en plaatselijke verdoving (2% lidocaïne hydrochloride, subcutaan) werden toegediend aan de dieren. De dieren niet ontving intramammaire drugs of antibiotica vóór of na de ingreep, en er waren geen tekenen van infectie op de site van de biopsie na chirurgische deperiode. In deze studie had herhaalde boviene MG biopsieën met behulp van een naald een klein negatief effect op melk productie en uier gezondheid van melkkoeien. In het algemeen, lijkt de naald biopsie een minder invasieve methode dan de belangrijkste biopsie instrument. Zoals eerder opgemerkt, is het echter essentieel voor de biopsie techniek om te oogsten van een representatieve steekproef van de MG-weefsel. De beperking van een naald biopsie is dat een kleine hoeveelheid boviene MG weefsel wordt verkregen (ongeveer 20 tot 25 mg)8,15.
Bijna alle studies gebruikt een combinatie van α-2 agonist sedatie en plaatselijke verdoving8,9,10, of de biopsie via een naald of een grotere kern was. In de boviene MG worden de meeste zenuwuiteinden geassocieerd met de huid. Innervatie van de arm aan het parenchymal weefsel is grotendeels via stretch receptoren met sparse Type een zenuwvezels te detecteren scherpe chirurgische pijn. Dientengevolge is de fysiologische mechanismen van pijn als gevolg van chirurgische manipulatie van de MG via huid en subcutane weefsels3 en niet diepe weefsels zoals parenchymal weefsel. Daarom voor biopsie procedures is het alleen nodig om lokaal anesthetize van de huid en de subcutane weefsels, zoals infiltratie van lokale verdoving in de diepere weefsels chirurgische pijn niet aanzienlijk vermindert. Na een passende voorbereiding van de biopsie gebied, dierlijke ongemak is, voornamelijk, terughoudendheid is gekoppeld.
Grotere kern monsters kan verhogen hematoom vorming en verhogen het risico van besmetting binnen het parenchym MG. Peri-operatieve protocollen bevatten daarom vaak toediening van parenterale antibiotica7, hoewel dat niet Universalia8. Het bereiken van hemostase is ook een belangrijke factor voor de vermindering van de morbiditeit van de koe. In de bovengenoemde studie met behulp van een grote kern biopsie instrument14, manuele druk werd toegepast op de site van de biopsie en een koe beha werd gebruikt om het ijs op de wonden voor ten minste 2 uur volgens de procedure van toepassing. Ondanks de grote hoeveelheid weefsel geoogst, slechts in geringe mate reducties in diervoeders inname en melk opbrengst werden waargenomen, en de procedure elke drie weken zonder negatieve effecten op de gezondheid van de koeien werd herhaald.
Onderzoekers MG biopsie uitvoeren in melkkoeien moeten nadenken over de diagnostische of analytische kwaliteit van de resulterende biopsie, gemak van techniek en koe morbiditeit. Nauwkeurige en vooraf geplande chirurgische technieken zijn noodzakelijk om deze doelen te bereiken. Tot op heden MG biopsie studies hebben gericht op het beschrijven van de resultaten van de biopsie, in tegenstelling tot het beschrijven van de techniek van de biopsie zelf, en beschrijvingen voor zogende melkkoeien gebrek aan voldoende gedetailleerd zijn om replicatie mogelijk te. Dus, het doel van dit werk was zowel naald biopsie en grotere kern biopsie technieken voldoende gedetailleerd zijn om veilige en humane replicatie van MG biopsie van vee mogelijk te beschrijven.

<table><tbody><tr><td>70% Isopropyl alcohol&nbsp;</td><td>Walmart&nbsp;</td><td>565106257</td><td>1 L</td></tr><tr><td>Aerosol spray om vliegen te doden en af te stoten</td><td>MWI</td><td>14339</td><td>1 fles (indien nodig)</td></tr><tr><td>Biopsienaalden, 12 G &times; 16 cm</td><td>C. R. Bard</td><td>MN1216</td><td>2</td></tr><tr><td>Butterfly infuusset (18 G naald)</td><td>Fisher</td><td>22-258087</td><td>1</td></tr><tr><td>Cellcultuur schotels</td><td>Fisher</td><td>08-772E</td><td>4</td></tr><tr><td>Snoerloze boormachine (lage snelheid)</td><td>Hitachi&nbsp;</td><td>&nbsp;DS10DFL&nbsp;</td><td>1</td></tr><tr><td>Kernbiopsie-instrument, Farr et al. (1996)</td><td></td><td></td><td>2, op maat gemaakte metaalbewerking. Neem contact op met de auteurs voor het aanvragen van het gereedschap.</td></tr><tr><td>Koeien</td><td></td><td></td><td>gezonde runderen</td></tr><tr><td>Flunixine meglumine</td><td>MWI/VetOne</td><td>501018</td><td>1,1 tot 2,2 mg/kg lichaamsgewicht</td></tr><tr><td>Klaptafel&nbsp;&nbsp;</td><td>Amazon</td><td></td><td>1</td></tr><tr><td>Pincet</td><td>Fisher</td><td>09-753-50</td><td>1</td></tr><tr><td>Handschoenen niet-sterieel&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>17-200-845</td><td>9, afhankelijk van de maat</td></tr><tr><td>Harde borstel&nbsp;</td><td>Sullivan Supply</td><td>18270</td><td>1, om de koeien te wassen</td></tr><tr><td>Kooppje&nbsp;</td><td></td><td></td><td>1, aangepast voor melkkoeien</td></tr><tr><td>Lidocaine hydrochloride 2% injecteerbaar&nbsp;</td><td>MWI/VetOne</td><td>510212</td><td>6 mL werd gebruikt,&nbsp; van 3 tot 8 mL</td></tr><tr><td>Vee lichaamswas</td><td>eZall Technologies</td><td>39384</td><td>1, om de koeien te wassen</td></tr><tr><td>Naald 18 G&nbsp; (1 tot 1/5&ldquo;)</td><td>Fisher</td><td>14-821-15A</td><td>6</td></tr><tr><td>Naald 20 G (1 tot 1/5&ldquo;)</td><td>Fisher</td><td>14-815-526</td><td>6</td></tr><tr><td>Fosfaat gebufferd zoutoplossing (0,9%)</td><td>Fisher</td><td>20-012-043</td><td>1 L</td></tr><tr><td>Povidonjodium zalf</td><td>Jeffers</td><td>#VED1A</td><td>500 g (indien nodig)</td></tr><tr><td>Povidonjodium scruboplossing (0,75% jodium)</td><td>MWI/VetOne</td><td>510094</td><td>1 L</td></tr><tr><td>Herbruikbaar biopsie-instrument&nbsp;</td><td>C. R. Bard</td><td>MG1522</td><td>1</td></tr><tr><td>Touw halster</td><td>Nasco farm and ranch</td><td>C10852</td><td>2, koe-maat</td></tr><tr><td>Scalpelmesjes (#10)</td><td>MWI</td><td>033870</td><td>2</td></tr><tr><td>Scalpelhouders (#3)</td><td>MWI</td><td>602008</td><td>1</td></tr><tr><td>Zelfsluitende autoclaafzak 10 x 5,5 inch.</td><td>Fisher</td><td>19-130-0038</td><td>1 doos van 800</td></tr><tr><td>Steriele katoenen gaasjes</td><td>Fisher</td><td>22-037-986</td><td>4</td></tr><tr><td>Steriele gaasjes</td><td>Fisher</td><td>19-090-735</td><td>4</td></tr><tr><td>Steriele chirurgische handschoenen&nbsp;</td><td>Chirurgische handschoenen</td><td>19-166-679</td><td>3,&nbsp; afhankelijk van de maat</td></tr><tr><td>Steriele chirurgische handdoeken</td><td>Fisher</td><td>50-118-0339</td><td>6</td></tr><tr><td>Stethoscoop</td><td>Littmann Master Classic II</td><td>1392</td><td>1</td></tr><tr><td>Chirurgische haarschaar</td><td>Oster A5</td><td>078005-010-003</td><td>1, voorbereiding van het dier voor biopsie</td></tr><tr><td>Chirurgische schaarmesjes (#40 )</td><td>Oster&nbsp;</td><td>78919-016</td><td>1, voorbereiding van het dier voor biopsie</td></tr><tr><td>Chirurgische hechtdraadverwijderaar</td><td>MWI</td><td>541</td><td>1</td></tr><tr><td>Chirurgische hechtdraadapparaat vooraf geladen</td><td>MWI</td><td>17713</td><td>5</td></tr><tr><td>Spuiten van 10 mL</td><td>Fisher</td><td>14-823-224</td><td>3</td></tr><tr><td>Spuiten van 2 mL</td><td>Fisher</td><td>22-028854</td><td>3</td></tr><tr><td>Spuiten van 20 mL</td><td>Fisher</td><td>22-034507</td><td>3</td></tr><tr><td>Spuiten van 5 mL</td><td>Fisher</td><td>22-028855</td><td>3</td></tr><tr><td>Thermometer</td><td>Agri-Pro Enterprises Inc</td><td>72000</td><td>1</td></tr><tr><td>Tolazine hydrochloride</td><td>Akorn Animal Health</td><td>61311-486-10</td><td>2 tot 4 mg/kg lichaamsgewicht (indien nodig)</td></tr><tr><td>Pincet&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>14-955-025</td><td>1, voor het hanteren van het weefselmonster</td></tr><tr><td>Waterslang</td><td>Miracle-Gro, Walmart</td><td>554990501</td><td>1, om de koeien te wassen</td></tr><tr><td>Waterbestendige aerosolpleister (aluminiumpoeder 40 mg)</td><td>MWI</td><td>010728</td><td>1 fles&nbsp;</td></tr><tr><td>Xylazin hydrochloride</td><td>MWI/VetOne</td><td>510650</td><td>0,01 tot 0,05 mg/kg lichaamsgewicht</td></tr></tbody></table>

boviene melkklier biopsie technieken

Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques

Boviene melkklier biopten kunnen onderzoekers weefselmonsters om te bestuderen van de celbiologie met inbegrip van genexpressie, histologisch analyse, signalering trajecten en eiwit vertaling te verzamelen. Dit artikel beschrijft twee technieken voor biopsie van de boviene melkklier (MG). Drie gezonde Holstein melkkoeien waren de onderwerpen. Voordat biopsieën, waren de koeien gemolken en vervolgens op een vee-parachute gefixeerd. Pijnstiller (flunixin meglumine, 1.1 tot 2,2 mg/kg lichaamsgewicht) werd toegediend via jugular intraveneuze [IV] injectie 15-20 min voorafgaande aan biopsie. Voor staande sedatie, xylazine hydrochloride (0.01-0,05 mg/kg lichaamsgewicht) werd geïnjecteerd via de coccygeal schepen 5-10 min voordat de procedure. Zodra voldoende verdoofd, was de biopsie site aseptisch bereid en lokaal verdoofd met 6 mL 2% lidocaïne hydrochloride via subcutane injectie. Met behulp van aseptische techniek, werd een verticale incisie van 2 tot 3 cm gemaakt met behulp van een scalpel nummer 10. Kern en naald biopsie hulpmiddelen werden gebruikt. Het basisprogramma voor biopsie was gekoppeld aan een cordless drill en ingevoegd in het weefsel van de MG via de incisie met een Clockwise boor-actie. De naald biopsie tool is handmatig ingevoegd in de plaats van de incisie. Onmiddellijk na de ingreep, een assistent toegepast druk op de site van de incisie voor 20 tot 25 min met behulp van een steriele handdoek om hemostase. RVS chirurgische nietjes dienden zich te verzetten tegen de huid incisie. De nietjes waren verwijderd 10 dagen na procedure. De belangrijkste voordelen van core en naald biopsieën is dat beide benaderingen zijn minimaal invasieve procedures die veilig kunnen worden uitgevoerd bij gezonde koeien. Melkopbrengst na de biopsie was onaangetast. Deze procedures vereisen een korte hersteltijd en leiden tot minder risico van complicaties. Specifieke beperkingen kunnen waaronder: bloeden na de biopsie en van besmetting op de site van de biopsie. Toepassingen van deze technieken omvatten weefsel-collectie voor de klinische diagnose en onderzoeksdoeleinden, zoals primaire celculturen.

In het huidige protocol, de kern biopsie techniek geproduceerd weefsel monster van 200 tot 600 mg, terwijl de naald biopsie geproduceerd monsters van 10 tot 30 mg per biopsie. De dieren werden twee keer per dag voor 10 d waargenomen na de ingreep. Geen complicaties heeft plaatsgevonden tijdens de procedure of in de postoperatieve periode, met vitale parameters van de koeien blijven binnen normale grenzen (respiratoire gemiddelde 31.4 ± 7.04 (SD) = ademhalingen per min, gemiddelde hartslag = 75,9 ± 8,9 slagen per min, en gemiddelde rectale temperatuur = 38.2 ± 0.68 GC, Figuur 3).
Na manuele druk op het gebied van de biopsie om hemostase (ongeveer 25 min), toonde de open wond minimale bloeden (Figuur 4). De koeien werden gevoed ad libitum hetzelfde dieet en de dieren werden gehouden in de zelfde faciliteit van de huisvesting in de postoperatieve periode. De dieren vertonen geen tekenen van infectie op de site van de biopsie; Er was geen pijn, bloeden, zwelling, drainage, of verhoogde temperatuur (Figuur 5). De wond genezen binnen 8 tot 10 d van de biopsie (figuur 5C).
Één dier ontwikkeld kleine huidirritatie verschuldigd om de wond wrijven op dag 8 na de ingreep. Die koe werd behandeld door het reinigen van de site van de biopsie met Povidon-jodium oplossing en 70% isopropylalcohol. De RVS nietjes werden verwijderd zodat drainage en Povidon jodium zalf (1%) werd tweemaal per dag toegepast op de site van de biopsie voor 2 tot 3 d. De irritatie van de huid 2 d verdwenen na het toepassen van Povidon-Jood zalf en de wond genezen met geen verdere complicaties.
Bloedstolsels zijn verwijderd met de hand strippen van melk van de biopsied kwartaal voorafgaand aan machine melken. In het huidige protocol, werd de aanwezigheid van bloedstolsels in de melk waargenomen voor maximaal drie melkingen (ongeveer 36 h) na de biopsie. Bloed verontreiniging van de melk werd waargenomen gedurende maximaal 48 uur na de biopsie. Er waren geen visuele verschillen waargenomen tussen kern en naald biopsieën ten opzichte van de hoeveelheid bloed in de melk. De dieren vertonen geen een significante afname van de melkproductie na de ingreep (Figuur 6). Gemiddelde melk compositie was 4.37% vet, 3,34% eiwit en 4,64% lactose. De gemiddelde melk celgetal (SCC) is minder dan 200.000 cellen per mL.
De MG-weefsel dat verkregen kan worden gebruikt voor verschillende onderzoeksdoeleinden zoals primaire celculturen (Figuur 7).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig3.jpg"> Figuur 3 . Evaluatie van dierlijke gezondheidsindicatoren na de biopsie boviene melkklier. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a> 
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig4v2.jpg"> Figuur 4 . Biopsie site uiterlijk na manuele druk werd toegepast op het gebied van de biopsie om hemostase. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig5.jpg"> Figuur 5 . Foto van de site's biopsie. (A) biopsie site 3 d na de ingreep. (B) biopsie site 6 d na de ingreep. (C) biopsie site 10 d na de ingreep illustreren dat de wond voldoende genezen was. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig5large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig6.jpg"> Figuur 6 . Dagelijkse productie van de melk vóór en na de biopsie boviene melkklier (n = 3 koeien). Een lineair model geschat dat tien dagen vóór de biopsie de dieren geproduceerd 23.35 kg melk per dag. De melkgift veranderde niet significant (P > 0,05) vanaf 10 dagen voor tot 10 dagen na de biopsie hoewel een lichte stijging melkopbrengst werd waargenomen (toename van 0.0005 kg/d van melk voor elke dag vanaf 10 dagen voor de biopsie). Drie dieren werden gebruikt in dit protocol; één dier werd tweemaal biopsied (dier 1: kern biopsie aan de linkerzijde van de uier en naald biopsie aan de rechterkant van de uier) en twee dieren vroeger biopsied (dier 2 en 3: alleen aan de rechterkant van de uier met de kern of naald). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig6large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig7.jpg"> Figuur 7 . Representatieve beelden van primaire boviene borstklier epitheliale cellen cultuur. De bar van de schaal is 100 µm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig7large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>

Dit artikel presenteert een biopsie van de boviene melkklier hulpprogramma's core en naald biopsie. Geoogste weefsel kan worden gebruikt voor celkweek of borstklier fysiologie en metabolisme met inbegrip van genexpressie, eiwit expressie, eiwit wijzigingen, immunohistochemistry en metaboliet concentraties te beoordelen.

Boviene melkklier biopsie technieken

Bovine mammary gland biopsies allow researchers to collect tissue samples to study cell biology including gene expression, histological analysis, ...

Een biopsie, zoals ik denk dat de meesten van jullie weten, is het verwijderen van een beetje weefsel uit het orgaan van belang en in dit geval is het de borstklier. De biopsie monster is zeer nuttig als je gaat om dingen te doen zoals genexpressie analyse, als je gaat om dingen te doen zoals om een deel van het weefsel te nemen en een histologische analyse te doen, om te kijken naar de structuur op het microscopisch niveau van de borstklier, ook zeer nuttig om dingen te bepalen zoals signalering trajecten in verband met hormoon actie, bijvoorbeeld , dus een van de waarschuwingen die je nodig hebt om zich bewust te zijn van wanneer je een soort van borstweefsel bemonstering, is heb je een monster dat is echt representatief? Omdat, u een lobule vangen, die als een cluster van druiven zou zijn, of u sommige individuele longblaasjes vangen die werkelijk niet normaal vertegenwoordigen, zodat, de hoop die u hebt wanneer u uw borstbiopsie doet is dat u parenchymal weefsel verzamelt, dat enkel een mooi woord is om het functionele weefsel te zeggen dat voor de productie van melk verantwoordelijk is , een monster dat representatief is.De meeste zintuiglijke zenuwuiteinden in de borstklier worden geassocieerd met de huid, en dus is het belangrijk om te beseffen en te waarderen dat, als je eenmaal de juiste voorbereiding van het gebied waar je gaat om de eerste incisie te maken, om de huid te verdoven, dan is er heel weinig in de weg van een zintuiglijke zenuwuiteinden in verband met de parenmalchy weefsel zelf , en dus het ongemak dat het dier zou voelen wordt meestal geassocieerd met de huid. Er zijn verschillende dingen die met dit weefsel kunnen worden gedaan, en het maakt het mogelijk om meer informatie te verzamelen over hoe dat dier werkt, in vergelijking met wat kan worden verkregen door simpelweg te observeren wat er aan het dier werd gevoerd en de reacties in de productie van melkeiwit of de productie van melkcomponenten. Alle beschreven methoden werden goedgekeurd door de Virginia Tech Institutional Animal Care and Use Committee.Een dag voor de geplande biopsie, wassen en schrobben van het dier, met name de uier, om mest en vervuild materiaal te verwijderen. Beoordeel de gezondheid, fysieke conditie en het gedrag van het dier. Gebruik alleen gezonde koeien.Melk de koe volledig. Verplaats het dier in de knijpkoker, idealiter binnen twee uur na het melken om de aanwezigheid van melk in de klieren te minimaliseren. Bedwing het dier met een hoofdpoort.Plaats een touw halter op de kop van de koe om heen en voorwaartse beweging te voorkomen. Trek het hoofd van het dier aan de ene kant en bind het touw aan de knijpkoker met behulp van een snelle release knoop om het hoofd op zijn plaats te houden. Reinig het injectiegebied met een uitstrijkje van 70% isopropylalcohol en toedien flunixine meglumine 1,1 tot 2,2 milligram per kilogram lichaamsgewicht intraveneus, via de halsader, 15 tot 20 minuten voor de biopsie.Zoek de halsader. Verhoog de halsader door het aanbrengen van druk aan de basis van de halsslagader. Controleer of er geen bubbels in de spuit zitten.Steek de naald in de verhoogde halsader en trek twee maal 0,5 milliliter bloed in de spuit en meng met de inhoud. Als er geen bloed in de spuit verschijnt, verplaats de naald. Als de naald in de ader zit, injecteer dan de inhoud.Verwijder voorzichtig de naald, breng gaas met zachte druk op de injectieplaats om bloedingen te voorkomen. Toleer xylazine hydrochloride intraveneus, 0,01 tot 0,05 milligram per kilogram lichaamsgewicht in het stuitbeenvat ongeveer vijf tot tien minuten vóór de biopsie om voldoende tijd voor het vaststellen van sedatie mogelijk te maken. Verhoog de staart en maak het gebied van injectie schoon met een 70%isopropyl alcohol wattenstaafje.Controleer of er geen bubbels in de spuit zitten. Steek de naald in het staartvat, trek 0,2 milliliter bloed in de spuit en meng met de inhoud om ervoor te zorgen dat de naald in het vat zit. Als de naald wordt ingezeten, injecteer de spuitinhoud.Verwijder de naald voorzichtig. Breng gaas met zachte druk aan op de injectieplaats. Het is echt belangrijk om een alfa-omkering bij de hand te hebben, zoals tolazoline, dit komt omdat melkkoeien gevoelig zijn voor de effecten van xylazine, en een overdosis xylazine longoedeem kan veroorzaken, wat mogelijk fataal kan zijn voor de melkkoe, dus let op uw koe voor tekenen van oversedatie en als deze zich voordoen, dan kan de juiste hoeveelheid tolazoline worden gegeven.We willen dat onze koeien staan tijdens een procedure. Te veel xylazine kan ertoe leiden dat ze gaan zitten. Laat een assistent de staart voor de procedure vastbinden, selecteer de biopsieplaats op de uier, meestal in een hoger gebied om de verzameling van bindweefsel te minimaliseren en penetratie in de klierput te voorkomen.Observeer en palpat de huid met speciale aandacht om grote onderhuidse bloedvaten te identificeren om deze bloedvaten tijdens de biopsie te voorkomen. Clip het haar van een 15 bij 15 centimeter vierkante gebied rond de biopsie site, bereiden de biopsie gebied met een povidone-jodium, 0,75 procent beschikbaar jodium, of chloorhexidine gluconaat scrub. Wissel de 70% isopropylalcohol minstens drie keer af om al het zichtbare en onzichtbare vuil te verwijderen.Breng de aseptische scrub oplossing en isopropyl alcohol in een cirkelvormige beweging, met behulp van inside-out aanpak. Zorg ervoor dat de antiseptische scruboplossing minstens vijf minuten in contact blijft met de huid. Gebruik een vlinderinfusieset met een naald van 18 G om zes milliliter van twee procent lidocaïnehydrochloride onderhuids te deponeren op de incisieplaats om een lijnblok te creëren.Niet doordringen in de diepere weefsels. Laat de plaatselijke verdoving drie tot vijf minuten diffuus, voer nog een herhaling van scruboplossing en alcohol uit voorafgaand aan incisie. Bereid tijdens het wachten de biopsie-instrumenten voor.Wat u wilt doen in termen van het verstrekken van analgesie is desensibiliseren van de huid. Dat komt omdat we meer neurale innervatie hebben aan de huid en onderhuidse weefsels, en in de parenchyma hebben we het eigenlijk alleen maar over stretchreceptoren, en deze voelen geen chirurgische pijn zoals de huid en de onderhuidse weefsels. In feite, als je uiteindelijk zetten lokale verdoving door in de parenchyma, u uw risico op bloeden tijdens de procedure.Gebruik aseptische technieken bij het hanteren van de biopsie tools en voor de incisie. Was de handen om alle zichtbare verontreiniging te verwijderen en steriele chirurgische handschoenen aan te brengen. Schik de chirurgische instrumenten in een steriel gebied in volgorde van gebruik.Hebben een nummer 10 scalpel, steriel gaas, en monteren van de biopsie instrument en een steriele handdoek voor homeostase. Procedure één, kernbiopsie-instrument. Monteer de kern biopsie instrument met behulp van chirurgische handschoenen.Leg de zeven steriele stukken op een steriel laken. Plaats het mes in het dockingsysteem op stuk twee. Steek stuk drie op de top van stuk twee, ervoor te zorgen dat de docking station zal uitlijnen.Schakel de laatste rand van het blad in het dockingsysteem van stuk vier. Duw naar voren stuk vier en observeren als stuk vier is naast stuk drie. Plaats stuk vijf op het apparaat.Zorg ervoor dat het dockingstation is uitgelijnd. Steek stuk zes in de bovenkant van stuk twee. Zorg ervoor dat het dockingstation is uitgelijnd.Steek de vergrendelingsschroef in het dockingstation. Duw naar voren stuk drie om de vergrendelingsschroef te dekken. Activeer het gereedschap, duw naar voren stuk vier en observeer het blad buiten het gereedschap.Trek stuk vier naar achteren om het mes in het gereedschap te trekken. Zorg ervoor dat de koe voldoende verdoofd is en dat de biopsieplaats voldoende verdoofd is, knijp de huid om geen reactie te garanderen. Maak een twee tot drie centimeter verticale incisie door de huid en onderhuidse weefsels van proximale tot distaal met behulp van een nummer 10 scalpel.Bevestig het biopsie-instrument aan een draadloze boor met behulp van steriele technieken. Plaats de boor tegen het biopsiegereedschap en controleer of het gereedschap stevig aan de boor is bevestigd. Zorg voor voldoende terughoudendheid door dat een individu de staart tijdens alle procedures verheft.Zet de boor met de klok mee rotatie en een lage snelheid. Ga het hele biopsiegereedschap ongeveer 7,5 centimeter in de uier door de incisie terwijl het gereedschap draait. Schakel de boor uit en breid stuk vier van het gereedschap handmatig uit, zet de boor aan met de rotatie met de klok mee en een lage snelheid, verwijder het instrument met de weefselkern uit de uier.Breng onmiddellijk sterke druk op de wond met behulp van een steriele handdoek gedurende ten minste 20 minuten. Steek de canule in het weefsel. Duw het stuk naar voren om het gereedschap te activeren.Draai in een langzame rotatie met de klok mee. Weefselmonster is nu binnenkant van de canule. Verwijder het weefsel uit het biopsiegereedschap met een pincet.Bewaar het monster in een fosfaatbufferde zoutoplossing van één X en evalueer de hoeveelheid weefsel. Neem de vitale functies van de koe elke 10 minuten na de biopsie gedurende ten minste 30 minuten. Controleer op bloeden na 20 minuten druk op de biopsieplaats.Als er druppels bloed zijn, blijf dan nog vijf tot tien minuten druk uitoefenen. Sluit de insnijdingen met behulp van roestvrijstalen nietjes met vijf millimeter intervallen na alle bloeden is gestopt. Breng een spuitbusverband aan op het biopsiegebied.Observeer het dier gedurende 50 minuten na de procedure. Procedure twee, naaldbiopsie-instrument. Volg de instructies van de fabrikant voor het apparaat.Verwijder de biopsienaald uit de verpakking met behulp van steriele technieken. Gooi de naald weg als er schade wordt waargenomen. Bevestig de naald aan het apparaat.Sluit de cover en pik het apparaat. Zorg ervoor dat de koe voldoende verdoofd is en dat de biopsieplaats voldoende verdoofd is, knijp de huid om geen reactie te garanderen. Maak een een tot twee centimeter verticale incisie door de huid en onderhuidse weefsels van proximale tot distaal met behulp van een nummer 10 scalpel.Steek de biopsienaald in de incisieplaats, ongeveer 10 tot 13 centimeter van de huid. Activeer de biopsie naald apparaat om het weefsel te verzamelen. Haal de naald uit de uier.Breng onmiddellijk sterke druk op de wond met behulp van een steriele handdoek gedurende ten minste 20 minuten. Na het verwijderen van het weefsel uit de naald, volg de procedure die eerder is beschreven om de incisie te sluiten. De hele procedure duurt ongeveer 45 minuten om te voltooien, per dier.Bloedstolsels moeten worden ontdaan van de kwart biopt. Ook is het noodzakelijk om de melkopbrengst en de voedselinname te observeren, indien mogelijk. Zorg altijd voor de gezondheid en het welzijn van het dier voor, tijdens en na de procedure.Documenteer alle drugs die aan de dieren worden toegediend. Controleer op de aanwezigheid van bloed in de melk gedurende zeven tot 10 dagen na de biopsie. Hand-strip bloedstolsels uit de biopt kwartaal bij de daaropvolgende melkingen en ervoor te zorgen dat volledige melkverwijdering optreedt.Observeer de melkopbrengst en indien mogelijk de individuele dagelijkse voerinname totdat chirurgische nietjes zijn verwijderd. Controleer het dier twee keer per dag op lichaamstemperatuur, ademhaling en hartslag, en houding, totdat chirurgische nietjes zijn verwijderd. Controleer de biopsie site twee keer per dag voor zwelling, gevoeligheid, en eventuele tekenen van drainage totdat de chirurgische nietjes zijn verwijderd.Als deze worden waargenomen, raadpleeg dan een dierenarts. Verwijder de nietjes van de incisieplaats 10 tot 14 dagen na de biopsie, afhankelijk van de genezingssnelheid. Raadpleeg een dierenarts als er tekenen van lokale of systemische infectie worden waargenomen.Dus, zodra de biopsie is genomen, heb je het bloed onderbroken en dus de voedingsstof en zuurstoftoevoer naar dat weefsel, en dus als je niet erg snel bent in het verwijderen van die weefselkern, en op de een of andere manier de weefselactiviteit stopt, kunnen de concentraties die je op een later moment in het laboratorium zou kunnen meten, misschien niet echt een afspiegeling zijn van wat er in dat dier gebeurde op het moment van de biopsie. Typisch, zouden we snel verwijderen van het weefsel, en flash bevriezen in vloeibare stikstof om te proberen om die activiteit te behouden. Het andere ding dat men kan doen met dat weefsel, en dit is eigenlijk iets dat we deden met het weefsel dat we verzamelden, was men kan isoleren en groeien de cellen die aanwezig zijn in dat weefsel in een cultuursysteem.In ons geval zijn we geïnteresseerd in de epitheelcellen die zich in dat weefsel bevinden, want dat zijn de cellen die de melkcomponenten synthetiseren en afscheiden, en dus werden die cellen uit die weefselstukken in cultuur geplaatst, en eigenlijk groeien ze nog steeds. De dieren werden twee keer per dag gedurende 10 dagen na de ingreep geobserveerd. Er traden geen complicaties op tijdens de procedure of in de postoperatieve periode, waarbij vitale parameters van de koeien binnen de normale grenzen bleven.De lineaire modellen tonen aan dat de dieren 10 dagen voor de biopsie 23,35 kilogram melk per dag produceerden. De dieren lieten geen significante veranderingen in de melkopbrengst zien van 10 dagen voor tot 10 dagen na de biopsie. De boviene borstklierbiopsie is een minimaal invasieve procedure, waardoor het dier een korte hersteltijd heeft.Daarom kan deze biopsieprocedure worden gebruikt in vele voedingsproeven en andere soorten proeven waarbij we herhaalde maatregelen op de dieren kunnen gebruiken, dus bijvoorbeeld, als we vier periodes hebben met vier verschillende voedingsbehandelingen, kunnen we deze koeien gemakkelijk vier verschillende keren biopsieen aan het einde van elke periode, waardoor we misschien een week rusttijd tussen elke periode mogelijk maken. , om ervoor te zorgen dat de dieren terugkeren naar hun normale productie.

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Ons protocol wordt beschreven hoe u de rat buik borstklier ontleden en hoe de borstklier hele mounts voor te bereiden. Het beschrijft ook hoe borstklier morfologie met behulp van drie eindpunten (aantal terminale einde knoppen, epitheliale rek en differentiatie) te analyseren en om deze resultaten te gebruiken om borstkanker het risico te voorspellen bij ratten die werden blootgesteld aan de voeding...

Veranderingen in de borstklier Morfologie en het risico op borstkanker bij ratten

Time-lapse imaging wordt gebruikt om het gedrag van primaire preneoplastische mammaire epitheelcellen afkomstig van genetisch gemanipuleerde muizen met borstkanker te bepalen of er correlaties tussen specifieke gedragsparameters en verschillende genetische laesies beoordelen.

Time-lapse imaging of Primary preneoplastische uier epitheelcellen afkomstig van de genetisch gemanipuleerde muis modellen van borstkanker

Dit artikel beschrijft bronchoscopic technieken in de runder-long onder experimentele omstandigheden, dat wil zeggen een bronchoscoop begeleide inenting, bronchoalveolaire lavage, bronchiale borstelen en transbronchiale long biopsie.

De Bovine Lung in het biomedisch onderzoek: visueel geleide Bronchoscopie, intrabronchiale Enten en<em&gt; In Vivo</em&gt; Sampling Technieken

Hier beschrijven we een techniek voor de gelokaliseerde toediening van reagentia aan de borstklier van konijnen via een intraductale injectie. Daarnaast beschrijven we een protocol voor visualisatie en bevestiging van de toediening door middel van hoogwaardige echografie met contrastmiddelen.

Intraductale Levering aan de Rabbit borstklier

Dit protocol beschrijft methoden voor het zuiveren, kwantificeren en karakteriseren van extracellulaire vesicles (EVs) / exosomen van niet-aanhechtende / mesenchymale mammary epitheelcellen en voor het gebruik ervan om het vermogen van de borstkanker te overdragen naar luminale mammary epitheelcellen. EV's / exosomen afgeleid van stamachtige mammale epitheelcellen kunnen deze celeigenschap overbrengen aan cellen die de EV's / exosomen innemen.

Overdracht van Mammary Gland-vormende Vermogen Tussen Mammary Basal Epithelial Cellen en Mammary Luminale Cellen via Extracellulaire Vesicles / Exosomen

Ontwikkeling van de mammageklier in het knaagdier is typisch geëvalueerd met behulp van beschrijvende beoordelingen of door het meten van basis fysieke attributen. Vertakingsdichtheid is een indicator van de ontwikkeling van de moeders die moeilijk is om objectief te kwantificeren. Dit protocol beschrijft een betrouwbare methode voor de kwantitatieve beoordeling van de vertakkingseigenschappen van de borstklier.

Kwantificerende vertakkingsdichtheid in Rat Mammary Gland Whole-mounts Met behulp van de Sholl Analyse Methode

We ontwikkelden een methode om succesvol te verwijderen, verwerken, delen en vlek voor histopathologische evaluatie, mammariumweefsel dat oorspronkelijk op glijbanen was vastgezet als gehele mounts. Deze methode kan de verzameling en evaluatie van de hele membraan van de borstklier bevorderen in onderzoeken voor reproductieve en ontwikkelingstest.

Sectie Mammary Gland Whole Mounts voor Lesion Identificatie

Hier presenteren we een protocol voor de isolatie van geheel, intact muis borstklieren om te onderzoeken van de extracellulaire matrix (ECM) expressie en ductaal morfologie. Muis #4 abdominale klieren werden gehaald uit de 8-10 week oude vrouwelijke nullipaar muizen, vast in neutraal gebufferde formaline, gesegmenteerd en gekleurd met behulp van immunohistochemistry voor ECM eiwitten.

Isolatie van Intact, hele muis borstklieren p.a. van extracellulaire Matrix expressie en klier morfologie

We delen hier, methoden voor het meten van mitochondriale zuurstofverbruik, een bepalende concept van nutritionele energetics en proton lek, de primaire oorzaak van inefficiëntie in mitochondriale generatie van ATP. Deze resultaten kunnen goed voor 30% van de energie verloren in nutriënten gebruik om te helpen evalueren van mitochondriale functie.

Meten lever mitochondriale zuurstofverbruik en Proton lek kinetiek te schatten van mitochondriale ademhaling in Holstein melkvee

Dit protocol beschrijft een nieuw mammabeeldvormingsvenster met een vervangbaar deksel (R.MIW). Intravitale microscopie na implantatie van de R.MIW maakt longitudinale en meerdaagse beeldvorming van de gezonde en zieke borstklier mogelijk met een cellulaire resolutie tijdens de verschillende ontwikkelingsstadia.

Longitudinale intravitale microscopie met behulp van een mammabeeldvormingsvenster met vervangbaar deksel

Het huidige protocol beschrijft een eenvoudige techniek voor de intravitale beeldvorming van de borstklier van de zogende muis door middel van laserscanning, confocale en multifotonenmicroscopie.

Intravitale subcellulaire microscopie van de borstklier

Leer biopsietechnieken voor het bovine melkklierweefsel met behulp van kern- en naaldbiopsie-instrumenten. Deze methode ondersteunt onderzoek naar fysiologie, metabolisme en celkweek in melkvee.

Boviene melkklier biopsie technieken

Meer video's verkennen