Name: Verrijken en uit te breiden van zeldzame Antigen-specifieke T-cellen met magnetische nanodeeltjes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: Leer de E plus E-techniek om zeldzame antigeen-specifieke T-cellen te verrijken en uit te breiden met magnetische nanodeeltjes. Deze methode verbetert onderzoek naar immunotherapie en kankerbehandeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Jwh bedankt de NIH kanker nanotechnologie Training Center in het Johns Hopkins Instituut voor nanobiotechnologie, National Science Foundation Graduate Research Fellowship (DGE-1232825) en de bogen foundation voor de ondersteuning van de fellowship. Dit werk werd gefinancierd door de steun van de National Institutes of Health (P01-AI072677, R01-CA108835, R21-CA185819), TEDCO/Maryland innovatie-initiatief en de Coulter Foundation (JPS).

<ol><li>Prasad, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((immunotherapy%3A+Tisagenlecleucel-the+first+approved+Car-t-cell+therapy%3A+implications+for+payers+and+policy+makers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">immunotherapy: Tisagenlecleucel-the first approved Car-t-cell therapy: implications for payers and policy makers.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (1), 11(2018).</li>
<li>Jenkins, M. K., Moon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+naive+T+cell+precursor+frequency+and+recruitment+in+dictating+immune+response+magnitude%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">The role of naive T cell precursor frequency and recruitment in dictating immune response magnitude.</a> The Journal of Immunology. 188 (9), 4135-4140 (2012).</li>
<li>Rizzuto, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-antigen-specific+CD8%2B+T+cell+precursor+frequency+determines+the+quality+of+the+antitumor+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Self-antigen-specific CD8+ T cell precursor frequency determines the quality of the antitumor immune response.</a> Journal of Experimental Medicine. 206 (4), 849-866 (2009).</li>
<li>Newell, E. W., Davis, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+model+antigens%3A+high-dimensional+methods+for+the+analysis+of+antigen-specific+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Beyond model antigens: high-dimensional methods for the analysis of antigen-specific T cells.</a> Nature biotechnology. 32 (2), 149(2014).</li>
<li>Perica, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+and+expansion+with+nanoscale+artificial+antigen+presenting+cells+for+adoptive+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+nano%22%5BJournal%5D)">Enrichment and expansion with nanoscale artificial antigen presenting cells for adoptive immunotherapy.</a> ACS nano. 9 (7), 6861-6871 (2015).</li>
<li>Kosmides, A. K., Necochea, K., Hickey, J. W., Schneck, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separating+T+Cell+Targeting+Components+onto+Magnetically+Clustered+Nanoparticles+Boosts+Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Separating T Cell Targeting Components onto Magnetically Clustered Nanoparticles Boosts Activation.</a> Nano Letters. , (2018).</li>
<li>Hickey, J. W., Vicente, F. P., Howard, G. P., Mao, H. Q., Schneck, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biologically+Inspired+Design+of+Nanoparticle+Artificial+Antigen-Presenting+Cells+for+Immunomodulation%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Biologically Inspired Design of Nanoparticle Artificial Antigen-Presenting Cells for Immunomodulation.</a> Nano Letters. 17 (11), (2017).</li>
<li>,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+magnetic+enrichment+of+antigen-specific+T+cells+by+engineering+particle+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Efficient magnetic enrichment of antigen-specific T cells by engineering particle properties.</a> Biomaterials. , (2018).</li>
<li>Oelke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+purification+of+CD8%2B+melan-A-specific+cytotoxic+T+lymphocytes+for+adoptive+transfer+in+tumor+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Generation and purification of CD8+ melan-A-specific cytotoxic T lymphocytes for adoptive transfer in tumor immunotherapy.</a> Clinical Cancer Research. 6 (5), 1997-2005 (2000).</li>
<li>Riccione, K., Suryadevara, C. M., Snyder, D., Cui, X., Sampson, J. H., Sanchez-Perez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+CAR+T+cells+for+adoptive+therapy+in+the+context+of+glioblastoma+standard+of+care%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Generation of CAR T cells for adoptive therapy in the context of glioblastoma standard of care.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. (96), (2015).</li>
<li>Ho, W. Y., Nguyen, H. N., Wolfl, M., Kuball, J., Greenberg, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+methods+for+generating+CD8%2B+T-cell+clones+for+immunotherapy+from+the+naive+repertoire%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunological+methods%22%5BJournal%5D)">In vitro methods for generating CD8+ T-cell clones for immunotherapy from the naive repertoire.</a> Journal of immunological methods. 310 (1-2), 40-52 (2006).</li>
<li>Rudolf, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+costimulation+of+human+CD8+T+cells+by+anti-4-1BB+and+anti-CD28+on+synthetic+artificial+antigen+presenting+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+immunology%2C+immunotherapy+%3A+CII%22%5BJournal%5D)">Potent costimulation of human CD8 T cells by anti-4-1BB and anti-CD28 on synthetic artificial antigen presenting cells.</a> Cancer immunology, immunotherapy : CII. 57 (2), 175-183 (2008).</li>
<li>Gulukota, K., Sidney, J., Sette, A., DeLisi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+complementary+methods+for+predicting+peptides+binding+major+histocompatibility+complex+molecules1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Two complementary methods for predicting peptides binding major histocompatibility complex molecules1.</a> Journal of molecular biology. 267 (5), 1258-1267 (1997).</li>
<li>Castle, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+mutanome+for+tumor+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Exploiting the mutanome for tumor vaccination.</a> Cancer research. 72 (5), 1081-1091 (2012).</li>
<li>Duan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+and+bioinformatic+profiling+of+mutational+neoepitopes+reveals+new+rules+to+predict+anticancer+immunogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Genomic and bioinformatic profiling of mutational neoepitopes reveals new rules to predict anticancer immunogenicity.</a> Journal of Experimental Medicine. 211 (11), 2231-2248 (2014).</li>
<li>Srivastava, P. K., Duan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+the+antigenic+fingerprint+of+each+individual+cancer+for+immunotherapy+of+human+cancer%3A+genomics+shows+a+new+way+and+its+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology%2C+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Harnessing the antigenic fingerprint of each individual cancer for immunotherapy of human cancer: genomics shows a new way and its challenges.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 62 (5), 967-974 (2013).</li>
<li>Yadav, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+immunogenic+tumour+mutations+by+combining+mass+spectrometry+and+exome+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Predicting immunogenic tumour mutations by combining mass spectrometry and exome sequencing.</a> Nature. 515 (7528), 572(2014).</li>
<li>Gros, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+neoantigen-specific+lymphocytes+in+the+peripheral+blood+of+melanoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of neoantigen-specific lymphocytes in the peripheral blood of melanoma patients.</a> Nature medicine. 22 (4), 433(2016).</li>
</ol>

De auteurs verklaren de volgende concurrerende financiële interesseren: onder een licentieovereenkomst tussen NexImmune en The Johns Hopkins University, Jonathan Schneck is recht op een aandeel in de royalty's, ontvangen door de Universiteit op de verkoop van producten die worden beschreven in dit artikel. Hij was ook oprichter van NexImmune en bezit van aandelen in het bedrijf. Hij fungeert als een lid van de Raad van bestuur en de wetenschappelijke adviesraad van het NexImmune. De bepalingen van deze regelingen zijn herzien en goedgekeurd door The Johns Hopkins University overeenkomstig haar beleid van belangenverstrengeling.

Hebben we een nieuwe antigeen-specifieke T celtechnologie van de isolatie op basis van kunstmatige antigeen nanoparticle presenteren cellen (aAPCs). Nanoparticle-aAPCs peptide-geladen MHC op het oppervlak waarmee antigeen-specifieke T cel bindende en activering naast co-stimulatory activeren. aAPCs zijn ook paramagnetisch, en dus kan worden gebruikt voor het verrijken van zeldzame antigeen-specifieke T-cellen met behulp van een magnetisch veld. Wij hebben geoptimaliseerd en studeerde van belangrijke nanoparticle eigensch...

Met de opkomst van de vele immuuntherapie is er een behoefte om te kunnen karakteriseren en beheren van de immuunrespons. Met name is de adaptieve immuunrespons van belang vanwege de specificiteit en de duurzaamheid van de cellen. Onlangs, chimeer-antigeen-receptor T celtherapieën zijn goedgekeurd voor kankertherapie; echter zijn de antigeen-receptoren gebaseerd uit het gemeenschappelijk cel surface antigeen CD19, in plaats van de antigenen die specifiek zijn voor de kanker-1. Buiten de specificiteit, kunnen immuuntherapie ook lijden aan het gebrek aan controle en beperkte begrip van de dynamische immuunrespons binnen kanker of autoimmuniteit.
Een van de uitdagingen van het bestuderen van antigeen-specifieke reacties is hun extreem lage frequentie, bijv., antigeen-specifieke T-cellen zijn 1 van elke 104 naar 106 T cellen2,3. Dus, om te onderzoeken welke T cellen aanwezig zijn of reageert, de cellen moeten ofwel worden verrijkt en uitgebreid, of hun signaal kan worden versterkt. Het is duur en moeilijk te handhaven van de cellen van de feeder met behulp van huidige technieken die gericht zijn op de uitbreiding van antigeen-specifieke cellen. Huidige technieken die gericht zijn op het versterken van het signaal van antigeen-specifieke T-cellen, zoals de immunospot van enzyme-linked (ELISPOT) assay, beperken het hergebruik van die T cellen4. Tot slot vanwege lage gevoeligheid moeten deze twee technieken vaak worden gecombineerd voor antigeen-specifieke opsomming.
Om deze kwesties te behandelen, hebben we de magnetische nanoparticle gebaseerde kunstmatige antigeen voorstellende cel (aAPC)5,6,7,8. De aAPC kan worden matiemaatschappij en een antigeen-specifieke signaal-peptide geladen grote histocompatibility complex (pMHC) - co-stimulatory moleculen -bv., een anti-CD28 antilichaam-zowel het verrijken van antigeen-specifieke T-cellen en dan vervolgens stimuleren hun expansie (Figuur 1). De deeltjes kunnen dus een kosteneffectieve off-the-shelf product dat kan worden zowel aangepast aan antigeen-specifieke stimulaties nog gestandaardiseerd over experimenten en patiënten. Uitvoeren van de verrijking en uitbreiding verwerken van resultaten in honderden tot duizenden-voudige expansie van antigeen-specifieke CD8 + T cellen en kan leiden tot frequenties tot 60 procent na één week, waardoor de karakterisering of het therapeutische gebruik van de grote aantal cellen. Hierin, we beschrijven hoe maak je nanoparticle aAPCs, sommige kritische overwegingen bij het kiezen van de nanoparticle eigenschappen, en enkele typische resultaten tonen met behulp van deze deeltjes in isoleren en zeldzame antigeen-specifieke CD8 + T cellen uit te breiden.

<table><tbody><tr><td>DimerX I: Recombinant Soluble Dimeric Human HLA-A2:Ig Fusion Protein</td><td>BD Biosciences</td><td>551263</td><td></td></tr><tr><td>DimerX I: Recombinant Soluble Dimeric Mouse H-2D[b]:Ig</td><td>BD Biosciences</td><td>551323</td><td></td></tr><tr><td>DimerX I: Recombinant Soluble Dimeric Mouse H-2K[b]:Ig Fusion Protein</td><td>BD Biosciences</td><td>550750</td><td></td></tr><tr><td>Vivaspin 20 MWCO 50 000</td><td>GE Life Sciences</td><td>28932362</td><td></td></tr><tr><td>Vivaspin 2 MWCO 50 000</td><td>GE Life Sciences</td><td>28932257</td><td></td></tr><tr><td>Purified Human Beta 2 Microglobulin</td><td>Bio-Rad</td><td>PHP135</td><td></td></tr><tr><td>nanomag-D-spio, NH2, 100 nm nanoparticles</td><td>Micromod</td><td>79-01-102</td><td></td></tr><tr><td>Super Mag NHS Activated Beads, 0.2 &micro;m</td><td>Ocean Nanotech</td><td>SN0200&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Biotin MicroBeads UltraPure</td><td>Miltenyi</td><td>130-105-637</td><td></td></tr><tr><td>EZ-Link NHS-Biotin</td><td>ThermoFisher</td><td>20217</td><td></td></tr><tr><td>Sulfo-SMCC Crosslinker&nbsp;</td><td>ProteoChem</td><td>c1109-100mg</td><td></td></tr><tr><td>2-Iminothiolane hydrochloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6256 Sigma&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>96 Well Half-Area Microplate, black polystyrene</td><td>Corning</td><td>3875</td><td></td></tr><tr><td>FITC Rat Anti-Mouse Ig, &lambda;1, &lambda;2, &amp; &lambda;3 Light Chain&nbsp; Clone &nbsp;R26-46&nbsp;&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>553434</td><td></td></tr><tr><td>FITC Mouse Anti-Armenian and Syrian Hamster IgG&nbsp; Clone &nbsp;G192-1</td><td>BD Biosciences</td><td>554026</td><td></td></tr><tr><td>B6.Cg-Thy1a/Cy Tg(TcraTcrb)8Rest/J (transgenic PMEL) mice</td><td>Jackson Laboratory</td><td>005023</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J (B6 wildtype) mice</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>CD8a+ T Cell Isolation Kit, Mouse</td><td>Miltenyi</td><td>130-104-075</td><td></td></tr><tr><td>MS Columns</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>LS Columns</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin-Phycoerythrin, SAv-PE</td><td>Biolegend</td><td>405203</td><td></td></tr><tr><td>N52 disk magnets of 0.75 inches&nbsp;</td><td>K&amp;J Magnetics</td><td>DX8C-N52</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-mouse CD8a Antibody, clone 53-6.7</td><td>Biolegend</td><td>100711</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Fixable Green Dead Cell Stain Kit, for 488 nm excitation&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>L-34969</td><td></td></tr></tbody></table>

verrijken en uit te breiden van zeldzame antigen-specifieke t-cellen met magnetische nanodeeltjes

Enrich and Expand Rare Antigen-specific T Cells with Magnetic Nanoparticles

We hebben een tool om zowel verrijken en uit te breiden van antigeen-specifieke T-cellen ontwikkeld. Dit kan handig zijn in gevallen zoals zijn naar A) detecteren van de aanwezigheid van antigeen-specifieke T-cellen, B) sonde de dynamiek van antigeen-specifieke reacties, C) begrijpen de invloed van antigeen-specifieke reacties op ziekte staat zoals autoimmuniteit, D) demystificeren heterogene Responsie voor antigeen-specifieke T-cellen, of E) gebruik maken van antigeen-specifieke cellen voor therapie. De tool is gebaseerd op een magnetische deeltje dat we conjugaat antigeen-specifieke en T-cel co-stimulatory signalen, en dat we noemen als kunstmatige antigeen presentatie van cellen (aAPCs). Bijgevolg, aangezien de technologie eenvoudig te produceren, het kan gemakkelijk worden aangenomen door andere laboratoria; dus is ons doel hier om te beschrijven in detail de fabricage en het latere gebruik van de aAPCs. We uitleggen hoe u koppelt van antigeen-specifieke en co-stimulatory signalen aan de aAPCs, hoe om ze te verrijken voor antigeen-specifieke T-cellen te gebruiken, en hoe uit te breiden van antigeen-specifieke T-cellen. Bovendien zullen we benadrukken technisch ontwerp overwegingen gebaseerd op experimentele en biologische informatie van onze ervaring met het karakteriseren van antigeen-specifieke T-cellen.

Om een succesvolle verrijking en uitbreiding van antigeen-specifieke T-cellen, moeten de peptide-geladen MHC-Ig en co-stimulatory moleculen worden met succes gekoppeld aan het aAPC deeltje. Op basis van de 3 methoden van deeltje bijlage, bieden wij enkele representatieve gegevens voor een succesvolle vervoeging procedure resultaat (figuur 5a). Inderdaad, als het ligand-dichtheid te laag is, dan zal niet er effectieve stimulatie van antigeen-specifieke CD8 + T...

Antigeen-specifieke T-cellen zijn moeilijk te karakteriseren of frametechnieken gebruiken in therapieën vanwege hun extreem lage frequentie. Hierin bieden we een protocol voor de ontwikkeling van een magnetische deeltjes die aan antigeen-specifieke T-cellen binden kan te verrijken van deze cellen en vervolgens uit te breiden ze verschillende keer voor zowel de karakterisering en de therapie.

Verrijken en uit te breiden van zeldzame Antigen-specifieke T-cellen met magnetische nanodeeltjes

We have developed a tool to both enrich and expand antigen-specific T cells. This can be helpful in cases such as to A) detect the existence of ...

Het belangrijkste voordeel van onze nieuwe techniek, we noemen het E plus E, wat staat voor verrijking plus expansie, is dat we deze cellen, zeldzame antigeenspecifieke cellen, tegelijkertijd kunnen verrijken en uitbreiden. Dit stelt ons in staat om voldoende aantal cellen te ontwikkelen die we kunnen gebruiken om hun rol in verschillende instellingen en in verschillende klinische omgevingen te onderzoeken of zelfs ons in staat stelt om nu een groot aantal cellen te ontwikkelen die we kunnen gebruiken voor immunotherapie op een manier die we voorheen niet konden. De methode die we hebben ontwikkeld, deze E plus E, kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in de basisimmunologie over de aanwezigheid van neoepitopen.Wat zijn neoepitopes? Dat zijn de gepersonaliseerde epitopen waarvan we weten dat ze nu erg belangrijk zijn in termen van kankerimmunotherapie en ook antigeenspecifieke dynamiek en hoe deze factoren ziektetoestanden beïnvloeden en voor effectieve cellulaire therapie. De implicaties van deze techniek breiden zich uit tot immunotherapie, omdat de nanodeeltjes kunstmatige antigeen-presenterende cel een kant-en-klaar product zou kunnen zijn dat gemakkelijk is afg

enrich-expand-rare-antigen-specific-t-cells-with-magnetic

Research

JoVE Journal

Engineering

Techniek

Hier beschrijven we een werkwijze voor het activeren en uitbreiden menselijke NKT cellen van bulk T-celpopulaties met kunstmatige antigen presenterende cellen (AAPC). Het gebruik van CD1d gebaseerde AAPC een gestandaardiseerde werkwijze voor het genereren van grote aantallen functionele NKT cellen.

Kunstmatige antigeen presenterende cel (AAPC) gemedieerde activering en uitbreiding van Natural Killer T-cellen

Dit protocol beschrijft het gebruik van peptide: MHC tetrameren en magnetische microbolletjes voor laagfrequente populaties van epitoop-specifieke T-cellen isoleren en analyseren door flowcytometrie. Deze methode maakt de directe bestudering van endogene T-celpopulaties plaats...

Peptide: MHC tetrameer-gebaseerde verrijking van epitoop-specifieke T-cellen

This video describes T-cells enrichment from the spleen of a mouse by negative selection using a magnetic separator. The technique involves targeting the other cells in the sample for depletion using antibodies or ligands directed against specific cell surface antigens.

T-Cell Enrichment: A Technique to Isolate T-Cells from Mixed Cell Population by Magnetic Separation

This video describes a protocol for isolating rare-antigen-specific CD8+ T cells using magnetic nanoparticle-based artificial antigen-presenting cells (aAPCs) functionalized with antigenic peptide-loaded MHC-Igs and anti-CD28 antibodies. Interaction of the aAPCs with CD8+ T cells specifically expressing the antigenic peptide-targeting T cell receptors, followed by their expansion in vitro, results in the enrichment and expansion of this CD8+ T cell population.

Nanoparticle-Based Enrichment and Expansion of Antigen-Specific CD8+ T Cells

Hier beschrijven we een protocol voor de synthese van magneto-plasmon nanodeeltjes met een sterk magnetisch moment en een sterke nabij-infrarood (NIR) absorptie. Het protocol omvat ook antilichaam conjugatie aan de nanodeeltjes door de Fc eenheid voor diverse biomedische toepassingen die moleculaire specifieke targeting vereisen.

Synthese van Immunotargeted Magneto-plasmonische Nanoclusters

Hier presenteren we een aangepast protocol dat kan worden gebruikt om een groot aantal muisinvariante natuurlijke killer-T-cellen uit de muizenmilt te genereren. Het protocol schetst een benadering waarmee splenkachtige iNKT-cellen kunnen worden verrijkt, geïsoleerd en in vitro uitgebreid met behulp van een beperkt aantal dieren en reagentia.

Een geoptimaliseerde werkwijze voor het isoleren en Expanding Invariant Natural Killer T-cellen van Mouse Spleen

Er wordt een protocol voor de synthese en kationisatie van kobalt-gedopeerd magnetoferritine gepresenteerd, evenals een methode om stamcellen snel te magnetiseren met gekationiseerd magnetoferritine.

Synthese van gekationiseerde Magnetoferritin voor ultrasnelle magnetisatie van Cells

Een eenvoudige maar effectieve methode die magnetische nanodeeltjes in dienst aan antigeen-reactieve B-cellen voor functionele en fenotypische analyse op te sporen en te verrijken wordt beschreven.

Detectie en Verrijking van zeldzame antigeen-specifieke B-cellen voor analyse van fenotype en functie

We beschrijven een snel en robuust protocol om invariante natural killer T (iNKT) cellen uit muizen milt te verrijken en in vitro uit te breiden tot geschikte aantallen voor in vitro en in vivo studies.

Zuivering en uitbreiding van muisinvariante Natural Killer T-cellen voor in vitro en in vivo studies

We bieden een gedetailleerd protocol voor het isoleren en identificeren van zeldzame antigeenspecifieke T-celpopulaties in muizenlongen door middel van T-celverrijking op basis van magnetische kralen en peptide:major histocompatibility complex (MHC)-tetrameren.

Identificatie van zeldzame antigeenspecifieke T-cellen uit muizenlongen met peptide: belangrijke histocompatibiliteitscomplextetrameren

Leer de E plus E-techniek om zeldzame antigeen-specifieke T-cellen te verrijken en uit te breiden met magnetische nanodeeltjes. Deze methode verbetert onderzoek naar immunotherapie en kankerbehandeling.

Verrijken en uit te breiden van zeldzame Antigen-specifieke T-cellen met magnetische nanodeeltjes

Meer video's verkennen