Name: Lokalisatie van de Locus Coeruleus in de hersenen van de muis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Leer de locus coeruleus lokaliseren in muizenhersenen voor neurowetenschappelijk onderzoek. Deze methode maakt analyse van eiwitexpressie en metaalhomeostase mogelijk om neurologische aandoeningen beter te begrijpen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken Abigael Muchenditsi voor het onderhoud van de kolonie van de muis. Gebruik van de geavanceerde Photon bron bij het Argonne National Laboratory werd gesteund door de Amerikaanse Department of Energy, Office of Science, Office van energie basiswetenschappen, onder contractnummer: DE-AC02-06CH11357. Wij danken Olga Antipova en Dr. Stefan Vogt voor gebruikersondersteuning en assistentie bij de geavanceerde Photon bron. Dit werk werd gefinancierd door het National Institute of Health subsidie 2R01GM101502 aan SL.

Studies van dieren werd goedgekeurd door de Johns Hopkins Universiteit Animal Care en gebruik (ACUC) protocolnummer M017M385.
1. brain snijden
<ol><li>Anesthetize om te immobiliseren, muizen door toepassing van 3% Isofluraan.<ol>
<li>Doordrenk een katoenen bal met druppels Isofluraan en plaats deze in een tube van 15 mL microcentrifuge. Plaats de neus van het dier in de buis en laat ze de Isofluraan inademt. Controleer of de diepte van de verdoving door het ontbreken van reactie op Teen-snuifje.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Plaats het dier op zijn rug en immobiliseren het door haar ledematen pinning neer met een speld T terwijl het hebben van toegang tot haar buik.</li>
	<li>Snijd het dier met een chirurgische schaar doordat een knipsel van de buikhuid, en snijd via de huid in de regio van de thorax. PIN de huid naar beneden met behulp van T pinnen. Dan breken de peritoneale membraan tot de thorax. Het hart bloot door het kraken van de borstholte en snijden van het middenrif.</li>
	<li>Snijd de juiste atrium zodat het bloed stromen uit het dier. Invoegen van een 10 mL spuit met de naald van een 25-meter in het linkerventrikel en perfuse met 10 mL-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). Opmerking: Dit maakt het mogelijk de oplossing voor het doorstromen van de systemische circulatie en afsluiten door middel van de juiste atrium.</li>
	<li>Verwijder de 10 mL spuit en invoegen van een naald van de 25-meter aangesloten op de injectiespuit 60 mL. Perfuse via de linker ventrikel met 50 mL ijs koud 4% paraformaldehyde (PFA).<ol>
<li>Bereid ijs koud 4% PFA oplossing door verdunnen van 10%-oplossing van de PFA in H2O en het koelen van de eindoplossing van de PFA 4% bij 4 ° C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Isoleren van het hoofd van de muis en verwijder de hersenen van de schedel.<ol>
<li>Snij de huid van de nek en vervolgens gesneden naar de ogen te bloot van de schedel. De schedel van de nek tot de neus, en vervolgens van een oogbol naar de andere spleet. Schil de schedel uit en accijnzen van de hele hersenen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Incubeer de hersenen in 4% PFA gedurende 24 uur bij 4 ° C.</li>
	<li>Pipetteer de hersenen met pincet in een conische tube van 50 mL, gevuld met 25 mL van 30% sacharoseoplossing. Houd het bij 4 ° C gedurende 48-72 uur totdat de hersenen naar de bodem van de buis zinkt.</li>
	<li>Snijd de hersenen met een volwassen muis hersenen slicer matrix coronale via de veroorzaakt (~ 3 mm posterior van bregma). Houd het gedeelte van de hersenen met de hersenstam. Opmerking: Dit zal resulteren in twee delen van de hersenen-één met allermeest cortex (voorste van de snede) en één met de hersenstam/cerebellum (posterior van de snede). De hersenstam sectie gebruiken voor de volgende stappen.</li>
	<li>De hersenstam sectie insluiten met het snijvlak geplaatst op de bodem van een insluiten schimmel, omringd door optimale scherpe temperatuur samengestelde (OCT); de ingesloten hersenen naar een vriezer-80 ° C en voor ten minste 12 h – bevriezen tot verder gebruik.</li>
	<li>Snijden op de cryostaat: plaats de inbedding schimmel die bevat van de hersenen in LGO in de cryostaat; Incubeer het in de cryostaat gedurende enkele uren aan te passen van de temperatuur van het blok van de hersenen met die van de cryostaat.</li>
	<li>Schil weg de insluiten mal om het blok van de OCT bevat de hersenen bloot te stellen.</li>
	<li>Gebruik scheermesjes overmaat van LGO uit het oppervlak van het blok verwijderen zonder het aanraken van de hersenen.</li>
	<li>Monteer de OCT-blok op de chuck van de cryostaat, bloot het snijvlak van de hersenen naar de voorkant.</li>
	<li>Het snijvlak van de hersenen zodanig aanpassen dat het parallel aan de Scheermesjes van de cryostaat is gericht.</li>
	<li>Trim de hersenen beginnen bij de medulla, rostrally 100 µm secties snijden.</li>
	<li>Trim rostrally totdat de kleine hersenen en hersenstam als één continu segment knippen. Beginnen met het verzamelen van segmenten bij 50 µm dikte. Opmerking: Als een trims rostrally uit de medulla, de hersenstam en kleine hersenen zal snijden als twee aparte secties. In rostraal secties, worden de hersenstam en kleine hersenen uiteindelijk samengevoegd op het niveau van de 4th ventrikel. Zodra de laterale rand van de 4th ventrikel goed gevormde, zijn dan de kleine hersenen en hersenstam als een continu segment komen zal.<ol>
<li>Verzamelen van OCT-omringd hersenen segment met een tang en plaats deze in een put van een 24-well plaat gevuld met PBS (Figuur 2a). De LC zal zijn meest prominente wanneer het cerebellum en de colliculus inferior elkaar bij ~-5.52 mm posterieure van bregma (Figuur 1b ontmoeten). Opmerking: Het meest voorste deel van de LC zal verdwijnen zodra het cerebellum heeft volledig zijn gesegmenteerd en niet langer de inferieure colliculus bij ~-5.34 mm posterieure van bregma (Figuur 1 c omringt).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Immunohistochemistry voor Dopamine β-Hydroxylase of Tyrosine Hydroxylase (figuur 2)
<ol><li>Dag 1<ol>
<li>De geselecteerde segmenten drie keer, gedurende 5 minuten wassen in PBS.</li>
		<li>Permeabilize gedurende 24 uur in een 0,5% fosfaat gebufferde zoutoplossing met wasmiddel (Socialdemokrati) bij 4 ° C.<ol>
<li>Verdun 125 µL van wasmiddel in 25 mL PBS.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dag 2<ol>
<li>Segmenten drie keer, gedurende 5 minuten wassen in 0,5% Socialdemokrati.</li>
		<li>Het primaire antilichaam, anti-DBH of anti-TH voor 18u toevoegen bij een verdunning 1:500 in 0,5% Socialdemokrati bij 4 ° C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dag 3<ol>
<li>Wassen segmenten driemaal voor 10 min 0,5% Socialdemokrati.</li>
		<li>Voeg de gewenste secundair antilichaam (488 ezel anti-konijn voor groene fluorescentie) bij een verdunning 1:1000 in 0,5% Socialdemokrati voor 16 h.</li>
		<li>Wikkel de 24 goed plaat in aluminium en plaats bij 4 ° C.</li>
		<li>Segmenten drie keer, gedurende 5 minuten wassen in 0,5% Socialdemokrati.</li>
		<li>Wassen gedurende 5 min. in PBS.</li>
		<li>Pipetteer segmenten met een potlood borstel in een watercontainer.</li>
		<li>Mount segmenten drijvend in het water op geladen dia's.</li>
		<li>Dekglaasje aan secties met hard-set montage media (zonder DAPI).</li>
		<li>De secties van de gemonteerde hersenen gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur drogen.</li>
		<li>Afbeeldingssegmenten hersenen op een confocal of fluorescente microscoop met instellingen te detecteren signaal van passende secundair antilichaam fluorophore golflengte.</li>
		<li>Aanpassen van de Microscoop het brandvlak van het segment van de hersenen en het nemen van één afbeelding op 10 X vergroting.</li>
		<li>Gebruik om te vinden een mogelijke LC-regio in het segment van de hersenen, de 4th ventrikel voor oriëntatie; het cerebellum is gelegen boven het ventrikel, pons en hersenstam zijn te vinden onder de30.</li>
		<li>Voor het opzoeken van de LC, concentreren op de laterale rand van de 4th ventrikel; de LC is afkomstig van de randen van de 4th ventrikel en wijst naar de pons / regio van de hersenstam (Figuur 2b, 2 c).</li>
		<li>Volgende beeldvorming en lokalisatie van de LC in bepaalde segmenten van de hersenen, opslaan van dia's met segmenten van de hersenen bij 4 ° C.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. opsporing van de LC in hersenen plakjes
<ol><li>Ga naar de sectie van de hersenen met de LC, snijd de muis hersenen zoals hierboven beschreven en verzamelen van secties in PBS gevuld 24 goed gerechten, zoals weergegeven in Figuur 2a.<ol>
<li>Een deel van de hersenen plaats per putje te voorzien van de juiste lokalisatie van de LC.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Een totaal van 48 segmenten van de hersenen die immunostained per hersenen zullen verzamelen. Opmerking: Alle putjes van de twee gerechten weergegeven in Figuur 2a bevatten hersenen segmenten van het ene dier.</li>
	<li>Immunokleuring elke derde tot en met vijfde segment voor DBH of TH. Bij voorkeur, het uitvoeren van immunohistochemistry van de hersenen segmenten die grenzen aan die zijn vehiculumcontrolegroep verdere (via Röntgen fluorescentie microscopie, XFM). Opmerking: Deze procedure maakt het mogelijk voor exacte lokalisatie van de LC in de definitieve bepaling plakjes (Figuur 2a; label met getallen tussen de putten).</li>
	<li>Pas het aantal segmenten van de hersenen die immunostained afhankelijk van de toepassing, bijvoorbeeldof zij de exacte locatie van het centrum en de rand van de LC, of enkel een ruwe benadering vereist.</li>
	<li>Naar aanleiding van immunohistochemistry, detecteren hersenen segmenten met LC via een karakteristiek patroon van meningsuiting aan beide zijden van de 4th ventrikel (Figuur 2b, 2 c). Vergroting van het signaal van de DBH in de LC van opeenvolgende hersenen segmenten wordt weergegeven in figuur 2d, 2e; het vergrote beeld van de LC dat is gekleurd voor TH wordt weergegeven in figuur 2f.
</li>
	<li>De secties gebruiken grenzend aan die met LC voor verdere studies - in dit geval voor XFM te kwantificeren metalen niveaus (Figuur 3).</li>
	<li>Voor het uitvoeren van XFM, verzamelen van 10-30 µm (afhankelijk van de instelling) dunne coronale hersenen plakjes op dunne polymeer film waarmee ze kunnen worden gemonteerd op monster houders en beeld op het synchrotron.</li>
	<li>Opslaan van hersenen segmenten die zijn voorbereid op dunne polymeer film XFM bij kamertemperatuur en XFM uit te voeren.</li>
</ol>4. metalen Imaging in de LC via XFM
<ol><li>In het volgende voorbeeld muis hersenen slice zoals hierboven beschreven, bepalen LC, en metalen meten via XFM van deze segmenten van de hersenen met de LC.</li>
	<li>Afbeelding elemental distributies op beamline 2-ID-E bij de geavanceerde Photon bron (Argonne National Laboratory, Argonne IL).</li>
	<li>Registreren van gegevens 'on the fly' zoals eerder beschreven31.</li>
	<li>Elemental concentraties in plakjes van de hersenen met de LC met behulp van het programma kaarten32,33te bepalen.</li>
</ol>

<ol><li>Robertson, S. D., Plummer, N. W., de Marchena, J., Jensen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+origins+of+central+norepinephrine+neuron+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Developmental origins of central norepinephrine neuron diversity.</a> Nature neuroscience. 16, 1016-1023 (2013).</li>
<li>Kobayashi, R. M., Palkovits, M., Jacobowitz, D. M., Kopin, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+mapping+of+the+noradrenergic+projection+from+the+locus+coeruleus.+A+model+for+studies+of+brain+neuronal+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Biochemical mapping of the noradrenergic projection from the locus coeruleus. A model for studies of brain neuronal pathways.</a> Neurology. 25, 223-233 (1975).</li>
<li>Olson, L., Fuxe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+projections+from+the+locus+coeruleus+noradrealine+neurons%3A+the+cerebellar+innervation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">On the projections from the locus coeruleus noradrealine neurons: the cerebellar innervation.</a> Brain research. 28, 165-171 (1971).</li>
<li>Costa, A., Castro-Zaballa, S., Lagos, P., Chase, M. H., Torterolo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+MCH-containing+fibers+in+the+feline+brainstem%3A+Relevance+for+REM+sleep+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Distribution of MCH-containing fibers in the feline brainstem: Relevance for REM sleep regulation.</a> Peptides. , 50-61 (2018).</li>
<li>Semba, J., Toru, M., Mataga, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twenty-four+hour+rhythms+of+norepinephrine+and+serotonin+in+nucleus+suprachiasmaticus%2C+raphe+nuclei%2C+and+locus+coeruleus+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Twenty-four hour rhythms of norepinephrine and serotonin in nucleus suprachiasmaticus, raphe nuclei, and locus coeruleus in the rat.</a> Sleep. 7, 211-218 (1984).</li>
<li>Takeuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locus+coeruleus+and+dopaminergic+consolidation+of+everyday+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Locus coeruleus and dopaminergic consolidation of everyday memory.</a> Nature. 537, 357-362 (2016).</li>
<li>Korf, J., Aghajanian, G. K., Roth, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+turnover+of+norepinephrine+in+the+rat+cerebral+cortex+during+stress%3A+role+of+the+locus+coeruleus%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Increased turnover of norepinephrine in the rat cerebral cortex during stress: role of the locus coeruleus.</a> Neuropharmacology. 12, 933-938 (1973).</li>
<li>Sara, S. J., Segal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+of+sensory+responses+of+locus+coeruleus+neurons+in+the+behaving+rat%3A+implications+for+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+brain+research%22%5BJournal%5D)">Plasticity of sensory responses of locus coeruleus neurons in the behaving rat: implications for cognition.</a> Progress in brain research. 88, 571-585 (1991).</li>
<li>Markevich, V. A., Voronin, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+reactions+of+sensomotor+cortex+neurons+to+stimulation+of+emotionally+significant+brain+structures%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhurnal+vysshei+nervnoi+deiatelnosti+imeni+I+P+Pavlova%22%5BJournal%5D)">Synaptic reactions of sensomotor cortex neurons to stimulation of emotionally significant brain structures].</a> Zhurnal vysshei nervnoi deiatelnosti imeni I P Pavlova. 29, 1248-1257 (1979).</li>
<li>File, S. E., Deakin, J. F., Longden, A., Crow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+investigation+of+the+role+of+the+locus+coeruleus+in+anxiety+and+agonistic+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">An investigation of the role of the locus coeruleus in anxiety and agonistic behaviour.</a> Brain research. 169, 411-420 (1979).</li>
<li>Pamphlett, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake+of+environmental+toxicants+by+the+locus+ceruleus%3A+a+potential+trigger+for+neurodegenerative%2C+demyelinating+and+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+hypotheses%22%5BJournal%5D)">Uptake of environmental toxicants by the locus ceruleus: a potential trigger for neurodegenerative, demyelinating and psychiatric disorders.</a> Medical hypotheses. 82, 97-104 (2014).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromelanin-sensitive+magnetic+resonance+imaging+features+of+the+substantia+nigra+and+locus+coeruleus+in+de+novo+Parkinson%27s+disease+and+its+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+neurology%22%5BJournal%5D)">Neuromelanin-sensitive magnetic resonance imaging features of the substantia nigra and locus coeruleus in de novo Parkinson's disease and its phenotypes.</a> European journal of neurology. 25, 949-973 (2018).</li>
<li>Oliveira, L. M., Tuppy, M., Moreira, T. S., Takakura, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+locus+coeruleus+catecholaminergic+neurons+in+the+chemosensory+control+of+breathing+in+a+Parkinson%27s+disease+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">Role of the locus coeruleus catecholaminergic neurons in the chemosensory control of breathing in a Parkinson's disease model.</a> Experimental neurology. , 172-180 (2017).</li>
<li>Zarow, C., Lyness, S. A., Mortimer, J. A., Chui, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+loss+is+greater+in+the+locus+coeruleus+than+nucleus+basalis+and+substantia+nigra+in+Alzheimer+and+Parkinson+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+neurology%22%5BJournal%5D)">Neuronal loss is greater in the locus coeruleus than nucleus basalis and substantia nigra in Alzheimer and Parkinson diseases.</a> Archives of neurology. 60, 337-341 (2003).</li>
<li>Chandley, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+deficits+in+pontine+locus+coeruleus+astrocytes+in+men+with+major+depressive+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+psychiatry+%26+neuroscience+%3A+JPN%22%5BJournal%5D)">Gene expression deficits in pontine locus coeruleus astrocytes in men with major depressive disorder.</a> Journal of psychiatry & neuroscience : JPN. 38, 276-284 (2013).</li>
<li>Bernard, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+expression+of+glutamate+signaling%2C+growth+factor%2C+and+glia+genes+in+the+locus+coeruleus+of+patients+with+major+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+psychiatry%22%5BJournal%5D)">Altered expression of glutamate signaling, growth factor, and glia genes in the locus coeruleus of patients with major depression.</a> Molecular psychiatry. 16, 634-646 (2011).</li>
<li>Gos, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tyrosine+hydroxylase+immunoreactivity+in+the+locus+coeruleus+is+elevated+in+violent+suicidal+depressive+patients%5BTitle%5D)+AND+%22European+archives+of+psychiatry+and+clinical+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tyrosine hydroxylase immunoreactivity in the locus coeruleus is elevated in violent suicidal depressive patients.</a> European archives of psychiatry and clinical neuroscience. 258, 513-520 (2008).</li>
<li>Bielau, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+evidence+for+impaired+nitric+oxide+signaling+of+the+locus+coeruleus+in+bipolar+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical evidence for impaired nitric oxide signaling of the locus coeruleus in bipolar disorder.</a> Brain research. 1459, 91-99 (2012).</li>
<li>Wiste, A. K., Arango, V., Ellis, S. P., Mann, J. J., Underwood, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Norepinephrine+and+serotonin+imbalance+in+the+locus+coeruleus+in+bipolar+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Bipolar+disorders%22%5BJournal%5D)">Norepinephrine and serotonin imbalance in the locus coeruleus in bipolar disorder.</a> Bipolar disorders. 10, 349-359 (2008).</li>
<li>Borodovitsyna, O., Flamini, M. D., Chandler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Stress+Persistently+Alters+Locus+Coeruleus+Function+and+Anxiety-like+Behavior+in+Adolescent+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Acute Stress Persistently Alters Locus Coeruleus Function and Anxiety-like Behavior in Adolescent Rats.</a> Neuroscience. 373, 7-19 (2018).</li>
<li>Hirschberg, S., Li, Y., Randall, A., Kremer, E. J., Pickering, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+dichotomy+in+spinal-+vs+prefrontal-projecting+locus+coeruleus+modules+splits+descending+noradrenergic+analgesia+from+ascending+aversion+and+anxiety+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Functional dichotomy in spinal- vs prefrontal-projecting locus coeruleus modules splits descending noradrenergic analgesia from ascending aversion and anxiety in rats.</a> eLife. 6, (2017).</li>
<li>McCall, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRH+Engagement+of+the+Locus+Coeruleus+Noradrenergic+System+Mediates+Stress-Induced+Anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">CRH Engagement of the Locus Coeruleus Noradrenergic System Mediates Stress-Induced Anxiety.</a> Neuron. 87, 605-620 (2015).</li>
<li>Borges, G. P., Mico, J. A., Neto, F. L., Berrocoso, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corticotropin-Releasing+Factor+Mediates+Pain-Induced+Anxiety+through+the+ERK1%2F2+Signaling+Cascade+in+Locus+Coeruleus+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22The+international+journal+of+neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Corticotropin-Releasing Factor Mediates Pain-Induced Anxiety through the ERK1/2 Signaling Cascade in Locus Coeruleus Neurons.</a> The international journal of neuropsychopharmacology. 18, (2015).</li>
<li>Simone, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethinyl+estradiol+and+levonorgestrel+alter+cognition+and+anxiety+in+rats+concurrent+with+a+decrease+in+tyrosine+hydroxylase+expression+in+the+locus+coeruleus+and+brain-derived+neurotrophic+factor+expression+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Psychoneuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Ethinyl estradiol and levonorgestrel alter cognition and anxiety in rats concurrent with a decrease in tyrosine hydroxylase expression in the locus coeruleus and brain-derived neurotrophic factor expression in the hippocampus.</a> Psychoneuroendocrinology. 62, 265-278 (2015).</li>
<li>Carter, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+arousal+with+optogenetic+modulation+of+locus+coeruleus+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tuning arousal with optogenetic modulation of locus coeruleus neurons.</a> Nature. 13, 1526-1533 (2010).</li>
<li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corticosterone+administration+up-regulated+expression+of+norepinephrine+transporter+and+dopamine+beta-hydroxylase+in+rat+locus+coeruleus+and+its+terminal+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Corticosterone administration up-regulated expression of norepinephrine transporter and dopamine beta-hydroxylase in rat locus coeruleus and its terminal regions.</a> Journal of neurochemistry. 128, 445-458 (2014).</li>
<li>Xiao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+regulates+rest-activity+cycles+through+the+locus+coeruleus-norepinephrine+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+chemical+biology%22%5BJournal%5D)">Copper regulates rest-activity cycles through the locus coeruleus-norepinephrine system.</a> Nature chemical biology. 14, 655-663 (2018).</li>
<li>Amaral, D. G., Sinnamon, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+locus+coeruleus%3A+neurobiology+of+a+central+noradrenergic+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+neurobiology%22%5BJournal%5D)">The locus coeruleus: neurobiology of a central noradrenergic nucleus.</a> Progress in neurobiology. 9, 147-196 (1977).</li>
<li>Ralle, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disease+at+a+Single+Cell+Level%3A+intracellular+copper+trafficking+activates+compartment-specific+responses+in+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Disease at a Single Cell Level: intracellular copper trafficking activates compartment-specific responses in hepatocytes.</a> The Journal of Biological Chemistry. 285, 30875-30883 (2010).</li>
<li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. Franklin, K. B. J. , Boston, Amsterdam. (2013).</li>
<li>Bonnemaison, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper%2C+zinc+and+calcium%3A+imaging+and+quantification+in+anterior+pituitary+secretory+granules%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics+%3A+integrated+biometal+science%22%5BJournal%5D)">Copper, zinc and calcium: imaging and quantification in anterior pituitary secretory granules.</a> Metallomics : integrated biometal science. 8, 1012-1022 (2016).</li>
<li>Nietzold, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+X-Ray+Fluorescence+Data+Using+MAPS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2018).</li>
<li>Vogt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAPS%3A+A+set+of+software+tools+for+analysis+and+visualization+of+3D+X-ray+fluorescence+data+sets%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+IV+France%22%5BJournal%5D)">MAPS: A set of software tools for analysis and visualization of 3D X-ray fluorescence data sets.</a> J. Phys. IV France. 104, 635-638 (2003).</li>
<li>Davies, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+pathology+in+vulnerable+brain+regions+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+aging%22%5BJournal%5D)">Copper pathology in vulnerable brain regions in Parkinson's disease.</a> Neurobiology of aging. 35, 858-866 (2014).</li>
<li>Davies, K. M., Mercer, J. F., Chen, N., Double, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+dyshomoeostasis+in+Parkinson%27s+disease%3A+implications+for+pathogenesis+and+indications+for+novel+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+science%22%5BJournal%5D)">Copper dyshomoeostasis in Parkinson's disease: implications for pathogenesis and indications for novel therapeutics.</a> Clinical science. 130, London, England. 565-574 (2016).</li>
<li>James, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+comparison+of+preparation+methodologies+for+X-ray+fluorescence+microscopy+of+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+bioanalytical+chemistry%22%5BJournal%5D)">Quantitative comparison of preparation methodologies for X-ray fluorescence microscopy of brain tissue.</a> Analytical and bioanalytical chemistry. , 853-864 (2011).</li>
</ol>

Goed kunt u het model is een cruciale stap in dit protocol. Omdat we zijn met behulp van anatomische eigenschappen van de dorsale oppervlak van de hersenen te vinden LC (grens tussen het cerebellum en de colliculus inferior), is het belangrijk dat de gedeelten correct zijn uitgelijnd. Dit vereist zorg bij het correct vaststellen van de hersenen naar de muis hersenen slicer matrix. Het is raadzaam snijden ~ 500 μm meer weefsel anterior en posterior naar LC om te voorkomen dat de celkern ontbreekt. De meest voorkomende fou...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58652/localization-of-the-locus-coeruleus-in-the-mouse-brain">Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain</a>.&#160; An author affiliation&#160;was updated.
The affiliation for Evan Maxey was updated from:
Department of Neuroscience, Johns Hopkins University
to:
X-ray science division, Advanced Photon Source, Argonne National Laboratory

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58652/localization-of-the-locus-coeruleus-in-the-mouse-brain">Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain</a>.&#160; An author affiliation&#160;was updated.

Erratum: Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain

De locus coeruleus (LC) is een belangrijk gebied in de hersenstam en een grote site van noradrenaline (NE) productie1. De LC projecties in de hersenen2 naar de cortex, de hippocampus en de kleine hersenen3 stuurt en reguleert belangrijke fysiologische processen, met inbegrip van circadiane ritme4,5, aandacht en geheugen6, benadrukken7, cognitieve processen8en emotie9,10. Dysfunctie van LC heeft betrokken bij neurologische en neuropsychiatrische aandoeningen11, met inbegrip van Parkinson ziekte12,13,14,14van de ziekte van Alzheimer, depressie15 ,16,17, bipolaire wanorde18,19, en angst20,21,22,23, 24. gezien deze rollen, analyse van LC is cruciaal voor het bestuderen van zijn functie en dysfunctie.
Muizen worden veel gebruikt voor het onderzoek van fysiologische en pathofysiologische processen. Vanwege hun kleine omvang heeft de muis LC een gemiddelde diameter van ~ 300 μm, wat leidt tot problemen lokaliseren van de structuur. Tijdens de hersenen afdelen, kan de LC gemakkelijk worden gemist in een coronale of Sagittaal secties. Beschikbare studies beschrijven identificatie van LC in dieren bieden niet een stapsgewijze protocol dat een niet-deskundige,1,25 volgen kan. Dus, als u wilt bieden begeleiding voor de lokalisatie van LC, beschrijven we een protocol die we ontwikkeld om te zoeken van deze regio in de hersenen van de muis voor verschillende toepassingen (Figuur 1, Figuur 2, , Figuur 3). Het protocol geldt zorgvuldig gecontroleerde hersenen afdelen en immunohistochemische detectie van DBH26,27, of als alternatief TH24, beide enzymen hoogverrijkt in de LC-28. Zodra LC door immunohistochemistry ligt, kunnen aangrenzende hersenen segmenten worden gebruikt voor verdere studies, met inbegrip van morfologische en metabole analyses, evenals metalen imaging studies via Röntgen fluorescentie microscopie (XFM)29. We beschrijven XFM als voorbeeld in dit protocol (Figuur 3).

<table><tbody><tr><td>Adult mouse brain slicer matrix</td><td>Zivic Instruments</td><td>BSMAS001-1</td><td></td></tr><tr><td>Anti-rabbit secundair antilichaam, Alexa Fluor 488 (bron - ezel)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21206</td><td></td></tr><tr><td>Gelaaide glasplaten</td><td>Genesee</td><td>29-107</td><td></td></tr><tr><td>Confocale microscoop</td><td>Zeiss</td><td>LSM 800</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Microm GmbH</td><td>HM 505E</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat snijbladen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MX35</td><td></td></tr><tr><td>Schaar Mini, 9,5 cm</td><td>Antech Diagnostcs</td><td>503241</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-diamino-2-fenylindole)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542-10MG</td><td></td></tr><tr><td>Dopamine &beta;-hydroxylase (DBH) antilichaam - inhouse productie (bron - konijn)</td><td>B. Eipper</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Dopamine &beta;-hydroxylase (DBH) antilichaam - commercieel verkrijgbaar (bron - konijn)</td><td>Cell Signaling</td><td>8586</td><td></td></tr><tr><td>Falcon buizen, 50 ml</td><td>USA Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>Forane (isofluoraan)</td><td>Baxter</td><td>NDC 1019-360-60</td><td></td></tr><tr><td>Forceps Micro Adson</td><td>Antech Diagnostcs</td><td>501245</td><td></td></tr><tr><td>Hardset montage media</td><td>EM sciences</td><td>17984-24</td><td></td></tr><tr><td>Microscoop</td><td>Pascal</td><td>LSM 5</td><td></td></tr><tr><td>Meervoudige welborden, 24 welkom</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>930186</td><td></td></tr><tr><td>Optimaal snijtemperatuur compound (OCT)</td><td>VWR/ tissue tech</td><td>102094-106</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (PFA)/ formaline 10%</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF98-4</td><td></td></tr><tr><td>Peel-A-Way wegwerp inbeddingsvormen</td><td>Polysciences Inc.</td><td>18646A</td><td></td></tr><tr><td>Potlood borstel</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td>Life Tech</td><td>14190250</td><td></td></tr><tr><td>Scheermessen</td><td>Amazon</td><td>ASIN: B000CMFJZ2</td><td></td></tr><tr><td>Spatels</td><td>Antech Diagnostcs</td><td>14374</td><td></td></tr><tr><td>T pins</td><td>Office Depot</td><td>344615</td><td></td></tr><tr><td>The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates, Paxinos en Franklin, 3e editie</td><td>Amazon</td><td>ISBN: 978-0123694607</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100 (om PBSD te bereiden)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7949-500ml</td><td></td></tr><tr><td>Tyrosine hydroxylase (TH) antilichaam (bron - konijn)</td><td>EMD Millipore</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr><td>Ultralene dunne film voor XRF</td><td>SPEX Sample Prep</td><td>3525</td><td></td></tr><tr><td>Breedveld fluorescerende microscoop</td><td>Zeiss</td><td>Axio Zoom.V16</td><td></td></tr></tbody></table>

lokalisatie van de locus coeruleus in de hersenen van de muis

Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain

De locus coeruleus (LC) is een belangrijke zendmast voor noradrenaline produceren neuronen die moduleren van een aantal fysiologische functies. Structurele of functionele afwijkingen van LC gevolgen voor verschillende hersengebieden, waaronder cortex, hippocampus en kleine hersenen en kunnen bijdragen aan depressie, bipolaire stoornis, angst, evenals ziekte van Parkinson en de ziekte van Alzheimer. Deze aandoeningen worden vaak geassocieerd met metalen misbalance, maar de rol van metalen in LC is slechts ten dele begrepen. Morfologische en functionele studies van LC nodig zijn om de menselijke pathologieën en de bijdrage van metalen beter te begrijpen. Muizen zijn een gebruikte experimentele model, maar de muis LC is klein (~0.3 mm doorsnede) en moeilijk om te bepalen voor een niet-deskundige. Hier beschrijven we een stapsgewijze immunohistochemistry-gebaseerd protocol om te lokaliseren van de LC in het muis hersenen. Dopamine-β-hydroxylase (DBH), en anderzijds tyrosine hydroxylase (TH), beide enzymen sterk uitgedrukt in de LC, worden gebruikt als immunohistochemische markeringen in plakjes van de hersenen. Secties grenzend aan LC-bevattende secties bruikbaar zijn voor verdere analyse, met inbegrip van histologie voor morfologische studies, metabole testen, alsook metalen imaging X-ray fluorescentie microscopie (XFM).

Veranderingen in de homeostase van de metalen (bijvoorbeeld Cu, Fe, Zn en Mn) worden vaak waargenomen in neurologische aandoeningen, met inbegrip van wijzigingen in de LC34,35. Metalen besturingsniveaus in de hersenen is dus nodig voor begrip van de mechanismen van de ziekte. De secties van de hersenen die zijn gegenereerd met het beschreven protocol kunnen worden gebruikt om te kwantificeren van de niveaus van Cu en andere metale...

De locus coeruleus is een kleine cluster van neuronen betrokken bij allerlei fysiologische processen. Hier beschrijven we een protocol ter voorbereiding van muis hersenen secties voor studies van eiwitten en metalen in deze kern.

Lokalisatie van de Locus Coeruleus in de hersenen van de muis

The locus coeruleus (LC) is a major hub of norepinephrine producing neurons that modulate a number of physiological functions. Structural or functional ...

Disfunctie van locus coeruleus is betrokken bij neurologische en neuropsychiatrische aandoeningen, waaronder de ziekte van Parkinson, de ziekte van Alzheimer, depressie, bipolaire stoornis, en angst. Gezien deze rollen is analyse van locus coeruleus cruciaal voor het bestuderen van de functie en disfunctie. Tijdens de doorsnede van de hersenen van de muis kan de locuscoeruleus gemakkelijk worden gemist in coronale of sagittale secties vanwege zijn kleine omvang.Om zo richtlijnen te bieden voor de lokalisatie van locus coeruleus, beschrijven we een protocol dat we hebben ontwikkeld om dit gebied in het muizenbrein te lokaliseren voor verschillende toepassingen. Begin met het plaatsen van vers geïsoleerde hersenen van een verdoofde en vervolgens geperfundeerde muis in 4%PFA in een 50-milliliter buis. De hersenen 24 uur uitbroeden bij vier graden Celsius.Gebruik tangen om de hersenen over te brengen in een 50-milliliter conische buis gevuld met 25 milliliter van 30% sacharose oplossing. Broed het op vier graden Celsius gedurende 48 tot 72 uur tot de hersenen zinkt naar de bodem van de buis. Om de hersenstam sectie insluiten, plaats de gesneden oppervlak op de bodem van een inbedding schimmel, en voeg optimale snijtemperatuur verbinding om de hersenstam te omringen.Bevries de ingebedde hersenen in een min 80 graden Celsius vriezer voor ten minste 12 uur tot verder gebruik. Plaats de mal met de hersenen in de cryostat en broed het enkele uren uit om de temperatuur aan te passen aan die van de cryostat. Om de OCT blok met de hersenen bloot te stellen, gebruik een scheermesje om de vier randen van de mal helemaal naar de bodem te snijden, en dan schil weg de inbedding schimmel uit.Gebruik scheermesjes om overtollige OCT van het oppervlak van het blok te verwijderen, om ervoor te zorgen dat de hersenen niet worden aangeraakt. Monteer vervolgens het OCT-blok op de klem van de cryostat, waardoor het snijoppervlak van de hersenen naar voren wordt blootgesteld. Om de hersenen aan te passen, oriënteert u het snijoppervlak parallel aan de scheermesjes van de cryostat.Het goed oriënteren van het exemplaar is een cruciale stap in dit protocol. Omdat we anatomische kenmerken van het dorsale oppervlak van de hersenen gebruiken om LC te lokaliseren, zoals de grens tussen cerebellum en inferieure colliculus, is het belangrijk dat de secties goed worden uitgelijnd. Dit vereist zorg bij het goed instellen van de hersenen in de muis hersenen slicer matrix.Trim de hersenen vanaf de medulla, snijden 100-micrometer secties rostrally. Zodra de cerebellum en hersenstam beginnen te snijden als een continue plak op het niveau van de vierde ventrikel, beginnen met het verzamelen van plakjes op 50-micrometer dikte. Gebruik tangen om elke hersenen slice te verzamelen en plaats het in een put van een 24-goed plaat gevuld met PBS.De locus coeruleus zal het meest merkbaar zijn in een segment waar het cerebellum en de inferieure colliculus elkaar ontmoeten op ongeveer 5,52 millimeter achterste van bregma. Op de eerste dag, was de hersenen plakjes in de 24-well plaat drie keer gedurende vijf minuten elk in PBS. Voeg vervolgens 0,5% PBS toe met wasmiddel en doordringt ze gedurende 24 uur bij vier graden Celsius.Op de volgende dag, was de plakjes drie keer gedurende vijf minuten elk met 0,5% PBSD. Voeg vervolgens het primaire antilichaam toe bij een verdunning van één tot 500 in 0,5%PBSD en broed gedurende 18 uur bij vier graden Celsius. Op de derde dag, was de plakjes drie keer gedurende 10 minuten elk met 0,5%PBSD, voeg vervolgens het secundaire antilichaam bij een verdunning van een tot 1000 in 0,5%PBSD.Wikkel de plaat met aluminiumfolie en broed 16 uur lang op vier graden Celsius. Na incubatie, was de plakjes drie keer gedurende vijf minuten elk met 0,5%PBSD, en vervolgens gedurende vijf minuten in PBS. Bedek de secties met behulp van hard-set montagemedium zonder DAPI.Dek af met een glazen deksel en droog gedurende 30 minuten op kamertemperatuur. Gebruik vervolgens een confocale microscoop met instellingen om signaal van de juiste fluorescentiegolflengte naar beeld hersenen plakjes te detecteren. Na het aanpassen van de microscoop aan het brandpuntsvlak van de hersenen slice, gebruik 10 keer vergroting om een enkel beeld te nemen.Gebruik de vierde ventrikel gelegen onder het cerebellum en boven pons en hersenstam om een mogelijke LC-regio in de hersenen slice lokaliseren. Focus op de laterale randen van de vierde ventrikel en de LC zal worden gevestigd vanaf de randen van de vierde ventrikel en wijzen naar de pons hersenstam regio. Intracellulaire verdeling van dopamine bèta-hydroxylase, een eiwit uitgedrukt in de LC, werd beoordeeld met behulp van dit protocol om LC-morfologie en neuronale dichtheid te bestuderen.Een ander eiwit uitgedrukt in de LC, tyrosine hydroxylase, toonde ook een sterk groen fluorescerend signaal in de hersenen plakjes met de LC.Veranderingen in metaal homeostase worden vaak waargenomen bij neurologische aandoeningen, met inbegrip van veranderingen in de LC.In dit voorbeeld, wanneer een hersenen slice gesneden door de LC werd gemeten voor fosfaat, kalium, zink en koper, alleen koper toonde een specifieke toename van het signaal. We raden aan om ongeveer 500 micron meer weefselvoorste en achterste naar LC te snijden om te voorkomen dat de kern ontbreekt en meer secties te snijden dan nodig is, vooral als de eerste keer dit protocol uitvoert. Zorgvuldige studie van de hersenen atlas beelden voorafgaand aan vlekken is zeer nuttig.Zodra LC is gelegen door immunohistochemie, aangrenzende hersenen plakjes kunnen worden gebruikt voor verdere studies, met inbegrip van morfologische en metabole analyse, evenals metalen imaging studies via x-ray fluorescentie microscopie. De hersensecties die worden gegenereerd met behulp van het beschreven protocol kunnen worden gebruikt om de niveaus van koper en andere metalen in de LC te kwantificeren en te vergelijken met de niveaus in regio's buiten de LC, wat nodig is voor het begrijpen van het ziektemechanisme. Verdere mogelijke toepassingen van dit protocol zijn de detectie van overvloed en intracellulaire verdeling van dopamine bèta-hydroxylase, tyrosine hydroxylase, en andere eiwitten uitgedrukt in de LC individueel, of in de co-kleuring testen, studies van LC morfologie en neuronale dichtheid.

localization-of-the-locus-coeruleus-in-the-mouse-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Wij beschrijven een protocol voor transcardiale perfusie van muizen, het verwijderen en doorsnijden van de hersenen, evenals immunoperoxidasekleuring, inbedding in hars en ultradunne doorsneden van de hersencoupjes. Na voltooiing van deze procedures is het immuungekleurde materiaal klaar voor onderzoek met transmissie-elektronenmicroscopie.

Voorbereiding van de muis hersenweefsel voor Immunoelectron Microscopie

Source: Xavier, A. L. R., et al. Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the procedure for implanting a cannula into the cisterna magna of an anesthetized mouse. The technique involves guiding a needle-mounted cannula through the dura into the inverted triangular cisterna magna and securing it for targeted delivery into the cerebrospinal fluid.

Cannula Implantation into the Cisterna Magna in a Mouse Model

This video demonstrates in vivo recording of local field potential (LFP) from bilateral M2 areas of the mouse brain. An anesthetized mouse is secured and prepared for the procedure. To record LFPs, insert microelectrodes into the target coordinates of the bilateral M2 areas, which are responsible for complex motor movements.

Recording of Local Field Potential from Both Hemispheres of the Mouse Brain

This protocol outlines the use of immunohistochemistry to identify locus coeruleus regions in mouse brain sections. By targeting dopamine β-hydroxylase with green fluorophore-labeled antibodies, norepinephrine-producing neurons are visualized as green fluorescence under a microscope.

Immunohistochemistry for Identifying the Locus Coeruleus Region in Mouse Brain Sections

This video demonstrates the immunohistochemical staining of cholinergic fibers in the nucleus basalis of the Meynert region of mouse brain sections. Sections are blocked and treated with primary against choline acetyltransferase, followed by biotinylated secondary antibodies. Avidin-biotin-peroxidase complexes are added, which bind to secondary antibodies, followed by the chromogenic substrate. Sections are then dehydrated and mounted before visualizing under the microscope.

Immunohistochemical Staining of Nerve Fibers in the Nucleus Basalis of Meyner of the Mouse Brain

Hier beschrijven we een procedure voor het weefsel wissen, fluorescerende benoemen, en grootschalige beeldvorming van muis hersenweefsel, waardoor, zodat, visualisatie van de driedimensionale organisatie van celtypes in de neocortex.

Grootschalige driedimensionale beeldvorming van cellulaire organisatie in de Neocortex muis

We presenteren in vivo elektrofysiologische opname van het lokale veld potentieel (LFP) in bilaterale secundaire motor cortex (m2) van muizen, die kan worden toegepast om de halfrond lateralisatie te evalueren. De studie onthulde veranderde niveaus van synchronisatie tussen de linker en rechter m2 in APP/PS1 muizen in vergelijking met WT besturingselementen.

Evaluatie van halfrond lateralisatie met bilaterale lokale veld potentiële opname in de secundaire motorische cortex van muizen

Om te controleren of trigeminus effecten op de cognitieve prestaties betrekken Locus coeruleus activiteit, twee protocollen worden gepresenteerd die gericht zijn op mogelijke correlatie tussen de prestaties en taak-gerelateerde pupilgrootte veranderingen geïnduceerd door kauwen evalueren. Deze protocollen kunnen worden toegepast op omstandigheden waarin de bijdrage van Locus coeruleus wordt vermoed.

Beoordeling van Leerlinggebonden veranderingen in Locus coeruleus-gemedieerde opwinding opgewekt door trigeminus stimulatie

Met optogenetische manipulatie van specifieke neuronale populaties of hersengebieden kan gedrag worden gewijzigd met een hoge temporele en ruimtelijke resolutie bij vrij bewegende dieren. Door het gebruik van verschillende optogenetische tools in combinatie met chronisch geïmplanteerde optische vezels, kan een verscheidenheid aan neuronale modulaties en gedragstesten worden uitgevoerd.

Optogenetische manipulatie van neuronale activiteit om gedrag te moduleren in vrij bewegende muizen

Stereotaxische chirurgie om hersenlocaties bij muizen te targeten, omvat vaak toegang via de schedelbotten en wordt geleid door schedeloriëntatiepunten. Hier schetsen we een alternatieve stereotaxische benadering om de caudale hersenstam en het bovenste cervicale ruggenmerg te richten via de cisterna magna die afhankelijk is van directe visualisatie van hersenstamoriëntatiepunten.

Stereotaxische chirurgische benadering van micro-injecteren van de caudale hersenstam en het bovenste cervicale ruggenmerg via de Cisterna Magna bij muizen

Dit protocol beschrijft de procedure voor het in beeld brengen van calciumresponsen in de superieure colliculus (SC) van wakkere muizen, inclusief het in beeld brengen van de activiteit van één neuron met twee fotonen met behulp van twee-fotonmicroscopie terwijl de cortex intact blijft bij wild-type muizen, en het in beeld brengen van de gehele SC met breedveldmicroscopie bij mutante muizen met gedeeltelijke cortex.

Calciumbeeldvorming bij superieure colliculus bij muizen

Leer de locus coeruleus lokaliseren in muizenhersenen voor neurowetenschappelijk onderzoek. Deze methode maakt analyse van eiwitexpressie en metaalhomeostase mogelijk om neurologische aandoeningen beter te begrijpen.

Lokalisatie van de Locus Coeruleus in de hersenen van de muis

Meer video's verkennen