Met behulp van Robotic systemen te verwerken en Embed Colon lymfkliertest monsters voor histologisch Analyses

Dit geautomatiseerde protocol maakt het mogelijk de histopathologische voorbereiding van murineweefsels met robotsystemen die routinematig worden gebruikt voor de verwerking en inbedding van menselijke monsters, waardoor de kwaliteit van de monsters sterk toeneemt. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het aantal methodologische variabelen vermindert en de standaardisatie van procedurele stappen verbetert. Het demonstreren van de procedure, zal Francesca Boggio.

Francesca Boggio is een patholoog die in mijn laboratorium werkt. Begin met het gebruik van kleine pincet om de vaste murine dikke darm weefsel monsters van de neutrale gebufferde formaline, over te dragen op een sectioning werkplaat in een petrischaal. Gebruik een steriele scalpel om de dikke darm te snijden in 0,2 tot 0,3 centimeter fragmenten, en gebruik de pincet om een segment plaats in elk van de drie niet-aangrenzende plastic uitstekende tips van een georiënteerde paraffine-inbedding cassette.

Druk voorzichtig op de vier randen om de cassette te sluiten en steek het rooster in een kunststof steunframe. Label vervolgens het draagframe om het monster te identificeren en breng de cassette over naar het raster. Schakel een uur voor de verwerking de geautomatiseerde processor in.

Wanneer het instrument aangeeft dat de paraffine gesmolten is, steek dan handmatig de metalen mand in de geautomatiseerde processor. Wanneer alle cassettes zijn geplaatst, sluit u de mand en opent u het deksel van de retort. Steek de mand in de speciale behuizing van de processor en sluit het retortdeksel.

Gebruik het touchscreen op de instrumentencomputer om het werkprotocol te definiëren en de volgorde van oplossingen, timing en temperatuur te selecteren die volgens het schema in de tabel moeten worden geïmplementeerd. Klik op het speciale computerpictogram om het protocol toe te wijzen aan de retort met de cassettemand en klik op de startknop. Wanneer het instrument het einde van het protocol bevestigt met een speciaal pictogram en een alarmtoon, opent u het retortdeksel en verwijdert u de mand uit de processor.

Een uur voor de inbedding van het weefsel, zet de geautomatiseerde inbedding en wacht tot de paraffine volledig is gesmolten, zoals aangegeven door de paraffine bad thermometer op het instrument. Breng tot 32 verwerkte cassettes handmatig over van de processormand naar het invenrek en open het hoofdbedekkende deksel. Gebruik het touchscreen om aan het robotsysteem te signaleren dat een rek wordt geplaatst en open het deksel van de inlaatbehuizing.

Steek maximaal vier rekken in de inlaatbehuizing en sluit het deksel van de inlaatbehuizing. Gebruik vervolgens het aanraakscherm om de inbeddingsprocedure te starten zoals aangegeven in de tabel. Wanneer het instrument het einde van het protocol bevestigt met het speciale pictogram, verwijdert u het uitlaatrek en sluit u het hoofdbedekkende deksel.

Breng vervolgens de ingesloten blokken van het rack over in een opbergdoos. Colon verkorting, en colonische expressie van pro inflammatoire genen, worden veel gebruikt parameters voor het scoren van de aanwezigheid van dextranaalsulfaat of DSS geïnduceerde ontsteking. De infiltratie van ontstekingscellen in de darmlamina propria wordt ook sterk verbeterd door DSS behandeling.

H&E kleuring van onbehandelde monsters verwerkt door automatisering zoals aangetoond, onthult minder infiltreren ontstekingscellen, epitheliale veranderingen, en veranderingen in de mucosale architectuur in vergelijking met monsters van DSS behandelde dieren. De kwaliteit van de murine weefselvoorbereiding en inbedding uitgevoerd door de geautomatiseerde instrumenten kan bovendien worden bevestigd door immunohistochemische kleuring voor CD20 en Mallory Trichrome Kleuring. Met name geautomatiseerde monsterverwerking maakt het consequent mogelijk om een groter deel van de histologische parameters te evalueren dan monsters die volgens de handmatige methode worden verwerkt.

Zorg ervoor dat u het weefsel correct in het raster plaatst om te wachten tot de geautomatiseerde processor klaar is en wacht tot de paraffine volledig is gesmolten. Deze methode kan worden gebruikt om histologische analyse van een murine weefsel uit te voeren, met de kwalificatie van menselijke histologische monsters die zullen worden gebruikt in murine modellen van menselijke pathologen. Deze techniek is al succesvol studie voor het bestuderen van ontstekingsweefsel ontsteking, en zal nuttig zijn voor het bestuderen van modellen van colorectale murine kanker.

Aangezien sommige reagentia gebruikt in dit protocol zijn gevaarlijk, vergeet niet om altijd dragen beschermende handschoenen, bril en een lab jas bij het uitvoeren van deze procedure.