Name: Fabricage van Decellularized kraakbeen afkomstige Matrix steigers (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Leer hoe je gedecellulariseerde kraakbeenafgeleide matrixsteigers maakt voor kraakbeenregeneratie en weefselherstel. Deze methode behoudt native matrixcomponenten voor verbeterde in vitro en in vivo toepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs wil erkennen van W. Boot voor hulp bij de productie van de steigers. K.E.M. Benders wordt ondersteund door de Alexandre Suerman Stipendium van het universitair medisch centrum. R. Levato en J. Malda worden ondersteund door de Stichting van de artritis (subsidieovereenkomsten CO-14-1-001 en LLP-12, respectievelijk).

Voor dit protocol, is paarden verstikken kraakbeen verkregen uit paarden die was overleden aan andere oorzaken dan artrose. Weefsel werd verkregen met toestemming van de eigenaars, in overeenstemming met de institutionele ethische regels.
Opmerking: Dit protocol beschrijft de fabricage van steigers van decellularized paarden kraakbeen, die kan worden gebruikt voor toepassingen zoals in vitro weefselkweek platforms of voor in vivo inplanting in de regeneratieve geneeskunde strategieën. De enzymatische behandeling stappen moeten worden uitgevoerd in de beschreven volgorde.
1. verzamelen van articulair kraakbeen van Donor (dode foetussen) gewrichten
<ol><li>Komende van de oogsten stap, bereiden 1 L van kraakbeen wassen oplossing, bestaande uit steriele-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), aangevuld met 100 U/mL penicilline, 100 µg/mL streptomycine, en 1% (v/v) amfotericine-B.</li>
	<li>Draag handschoenen en een laboratoriumjas gedurende de gehele oogst procedure, aangezien de donor kan ziekteverwekkers dragen.</li>
	<li>Het verkrijgen van een intact (dode foetussen) gezamenlijke voor kraakbeen isolatie. Opmerking: Op dit punt, is de huid rond het gewricht nog steeds intact. Paarden verstikken kraakbeen verkregen paard werd gebruikt in dit protocol, maar andere gewrichten van andere diersoorten kunnen ook worden gebruikt.</li>
	<li>Verwijder de huid die met behulp van een scalpel en een chirurgische pincetten is gelegen rond het gemeenschappelijke gebied van belang. Daarnaast overmatig vet en spiermassa weefsel, indien nodig, te verwijderen zonder beschadiging van het onderliggende gewricht. Optioneel, het bereid stoffelijk overschot naar een biologische veiligheidskast overbrengen.</li>
	<li>Voor het uitvoeren van een arthrotomy, dat wil zeggen, een scheiding van het gewricht, eerst definiëren de locatie waar het gewricht articuleert door het uitvoeren van extensie en flexie van het gewricht.</li>
	<li>Verwijder voorzichtig meer lagen van vet, spieren en pezen met een scalpel en chirurgische pincetten openstelling van de gemeenschappelijke ruimte.</li>
	<li>Het maken van een sneetje te bereiken van de gezamenlijke holte. Opmerking: De gezamenlijke holte gevuld met gewrichtsvocht, die uit de holte druppelen kan bij het uitvoeren van een juiste snede.</li>
	<li>Blijven openstellen van het gewricht volledig door doorsnijden de pezen die het gewricht bij elkaar houden.</li>
	<li>Inspecteer het kraakbeen voor macroscopische schade. Opmerking: Als het articulaire kraakbeen geen een glanzend en glad uiterlijk heeft of als duidelijk blaren, kloven, of gebreken aanwezig zijn, gooi het kraakbeen.</li>
	<li>Gebruik een steriel scalpel te verwijderen van het kraakbeen van het subchondrale bot. Snijden helemaal tot in het subchondrale bot ook verwijderen van de diepe zone van het kraakbeen (Figuur 1). Om te verhinderen dat het kraakbeen uitdrogen, regelmatig druppelen kraakbeen wassen oplossing op het kraakbeen. Opmerking: Op dit moment, de grootte van de segmenten van het kraakbeen maakt niet uit.</li>
	<li>Het verzamelen van de segmenten van het kraakbeen in 50 mL tubes met eerder bereid kraakbeen wassen oplossing (figuur 2A).</li>
	<li>Na het verzamelen van het kraakbeen van alle gebieden van belang, bevriezen module plakjes van het kraakbeen in vloeibare stikstof gedurende 5 minuten.</li>
	<li>Breng de segmenten van het kraakbeen in 50 mL tubes en onmiddellijk lyophilize de plakjes kraakbeen gedurende 24 uur in een bevriezing van de droger. Stel de bevriezing droger op ongeveer 0.090 mbar, terwijl de ijs-condensor-51 ° C (figuur 2B is).</li>
	<li>De segmenten van het kraakbeen bewaren op een droge plaats bij kamertemperatuur tot verder gebruik. Opmerking: Tot aan het punt van de formatie van de steiger, de oplossingen en kraakbeen hoeven niet te worden voorbereid en behandeld in een steriele manier.</li>
</ol>2. het creëren van Decellularized kraakbeen deeltjes
<ol><li>Borrelend gelyofiliseerd kraakbeen segmenten van vloeibare stikstof.</li>
	<li>Direct slijpen de monsters, hetzij handmatig, hetzij door een freesmachine. Wanneer het kraakbeen segmenten met de hand slijpen, gebruik een mortier en een stamper en slijpen van de segmenten voor ongeveer 45 min totdat zij verpulverde (figuur 2C en 2D). Wanneer automatisch slijpen, gebruik een freesmachine op de vooraf ingestelde snelheid voor een paar seconden tot een minuut, totdat de module-bevroren kraakbeen segmenten zijn verpulverd. Opmerking: Cool vooraf de mortel of het slijpen compartiment van de freesmachine door toevoeging van vloeibare stikstof. Bij het gebruik van een freesmachine, zorg ervoor dat alle deeltjes zijn grond, en dat geen deeltjes blijven in de bodem van het slijpen compartiment.</li>
	<li>Zeef het kraakbeen deeltjes om zich te ontdoen van grotere delen met behulp van een zeef met een maaswijdte van 0.71 mm.</li>
	<li>De deeltjes op een droge plaats bij kamertemperatuur worden opgeslagen.</li>
</ol>3. enzymatische Decellularization met trypsine 0.25%-EDTA
<ol><li>Bereid de oplossing van de spijsvertering, bestaande uit 0,25% trypsine met EDTA aangevuld met 100 U/mL penicilline, 100 μg/mL streptomycine, en 1% (v/v) amfotericine B. winkel de oplossing bij 4 ° C. Opmerking: Trypin is een protease die degradeert eiwitten die woonachtig zijn in het weefsel kraakbeen. Deze enzymatische stap zal openstellen de dichte kraakbeen structuur.</li>
	<li>Vul de 50 mL tubes met de verpulverde kraakbeen deeltjes tot een volume van ongeveer 7,5 mL per buis.</li>
	<li>
Incubeer de kraakbeen deeltjes met de oplossing bereid spijsvertering bij 37 ° C gedurende 24 uur in totaal, terwijl de spijsvertering oplossing elke 4 uur vernieuwd.
	<ol>
<li>Voeg eerst 30 mL van de oplossing van de spijsvertering aan elke 50 mL-buis die kraakbeen deeltjes bevat.</li>
		<li>Vervolgens resuspendeer de deeltjes met een vortex of Pipetteer zodat alle particles worden blootgesteld aan de enzymatische oplossing.</li>
		<li>Incubeer de monsters gedurende 4 uur bij 37 ° C op een roller.</li>
		<li>Centrifugeer als wilt vernieuwen de oplossing van de spijsvertering, de buizen voor 20 min bij 3113 x g tot de bezinking van de deeltjes van het kraakbeen. Verwijder het supernatant. Opmerking: De bovendrijvende vloeistof zal duidelijker zijn met elke trypsine incubatietijd.</li>
		<li>Herhaal stap 3.3.1–3.3.4 tot de deeltjes hebben zijn geïncubeerd met de spijsvertering-oplossing voor 6 cycli van 4 h.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Na de laatste cyclus, verwijder het supernatant na centrifugeren en wassen van de deeltjes in 30 mL oplossing twee keer wassen kraakbeen. Centrifugeer de deeltjes gedurende 20 minuten bij 3113 x g tussen elk van de wast.</li>
</ol>4. enzymatische Decellularization met Nuclease behandeling
<ol><li>Voorbereiden van een 10 mM Tris-HCl-oplossing bij een pH 7.5 in gedeïoniseerd water.</li>
	<li>Voeg 50 U/mL deoxyribonuclease en 1 U/mL ribonuclease A aan de Tris-HCl-buffer, voor de oplossing van de nuclease. Opmerking: Deze stap wordt uitgevoerd om te degraderen specifiek deoxyribonucleases en ribonucleasen.</li>
	<li>Centrifugeer gedurende 20 min op 3,113 x gals wilt verwijderen van het kraakbeen wassen oplossing van het kraakbeen deeltjes (stap 3.4), en verwijder het supernatant.</li>
	<li>Voeg 30 mL van de oplossing van de nuclease aan het kraakbeen deeltjes en roer de deeltjes door de oplossing, om ervoor te zorgen dat alle deeltjes worden blootgesteld aan de oplossing van de nuclease.</li>
	<li>Incubeer de monsters op een roller voor 4 uur bij 37 ° C.</li>
	<li>Verwijder de nuclease oplossing door centrifugatie van het kraakbeen deeltjes gedurende 20 minuten bij 3,113 x g en verwijder het supernatant.</li>
	<li>Het wassen van de monsters door 30 mL van 10 mM Tris-HCl-oplossing zonder de deoxyribonuclease en ribonuclease A toe te voegen aan het kraakbeen deeltjes. Resuspendeer de deeltjes en laat de monsters op een roller voor 20u bij kamertemperatuur.</li>
</ol>5. detergenten Decellularization
<ol><li>Het schoonmaakmiddel maken door ontbinding van 1% (v/v) octoxynol-1 in PBS.</li>
	<li>De Tris-HCl-oplossing verwijderen door het kraakbeen deeltjes door gedurende 20 minuten bij 3,113 x g centrifugeren en het supernatant te verwijderen.</li>
	<li>Voeg 30 mL van de bereid wasmiddel 1%-oplossing aan het kraakbeen deeltjes. Resuspendeer de kraakbeen deeltjes voorzichtig en voorkom schuimvorming van de oplossing. Opmerking: Deze stap is breekt van cellulaire membranen.</li>
	<li>Incubeer de monsters op een roller gedurende 24 uur bij kamertemperatuur op een roller.</li>
	<li>Het reinigingsmiddel te verwijderen door middel van centrifugeren voor 20 min op 3,113 x g en verwijder het supernatant.</li>
	<li>
Om alle te verwijderen van de overblijfselen van de oplossingen van de decellularization, de deeltjes kraakbeen in 6 cycli van 8u in 30 mL kraakbeen wassen oplossing te wassen. Wassen op een roller bij kamertemperatuur uitvoeren.
	<ol>
<li>Ga naar de volgende wassen, centrifugeren van de suspensie voor 20 min op 3,113 x g, verwijder het supernatant en toevoegen van verse kraakbeen wassen oplossing.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Laat de laatste wasbeurt in de buizen en slaan de decellularized kraakbeen deeltjes bij-80 ° C.</li>
</ol>6. het maken van steigers van de Decellularized deeltjes
<ol><li>Als de deeltjes zijn opgeslagen bij-80 ° C, Ontdooi de gesloten buizen die de deeltjes kraakbeen in warm water bevatten voordat u maakt de steigers.</li>
	<li>Het kraakbeen deeltjes met een kleine pollepel overbrengen in een cilindrische mal, bijvoorbeeld een plastic flesje met een diameter van 8 mm en een hoogte van 2 cm.</li>
	<li>Bij het plaatsen van de deeltjes van het kraakbeen in de plastic mal, druk op alle de-luchtbellen uit om te voorkomen dat de holten in de steiger en de mal vullen tot de rand. Opmerking: Het zal moeilijker te nemen van de steigers uit een metalen mal na steiger formatie, die tot scheuren in de steiger leiden kan.</li>
	<li>Bevriezen van de mallen met kraakbeen deeltjes gedurende 10 minuten bij-20 ° C.</li>
	<li>Lyophilize de steigers van kraakbeen binnen hun mallen gedurende 24 uur in een bevriezing van de droger.</li>
	<li>Na lyofilisatie, nemen de steiger uit de mal (Figuur 3) en cross-link hen met ultraviolet (UV) licht op 30 cm afstand en 365 nm's nachts.</li>
	<li>Om te kunnen gebruiken de steigers voor cultuur van de cel in vitro of in vivo implantatie, steriliseren de steigers met, bijvoorbeeld, ethyleen oxide (EtO) gas. Opmerking: EtO-sterilisatie wordt uitgevoerd door een externe partij.</li>
</ol>7. de karakterisering van de Decellularized steigers met histologische technieken
Opmerking: Om ervoor te zorgen volledige decellularization en visualiseren van het resterende natuurlijke karakter van het kraakbeen, verschillende histologische technieken uitvoeren voordat u de steigers in een experiment, met inbegrip van de haematoxyline en eosine (H & E) vlekken om ervoor te zorgen decellularization, Safranine-O vlekken om te visualiseren residuele GAG aanwezigheid, collageen type ik immunohistochemistry om te differentiëren tussen collageen inhoud en collageen type II immunohistochemistry onderscheid maken tussen inhoud van collageen.
<ol><li>Snijd de steigers in dunne plakjes van ongeveer 3 mm met een scalpel. Opmerking: Als de steigers worden gesneden in grotere of kleinere maten, de totale duur van de uitdroging cycli moeten worden aangepast.</li>
	<li>De steigers insluiten in een daling van 4% (m/v) alginaat en veroorzaken cross-linking door toevoeging van een vergelijkbaar volume van 3,7% niet-gebufferde formaline waarin 20 mM CaCl2. Opmerking: Alginaat insluiten, maakt de steiger segmenten meer rigide in vergelijking met de stappen wassen vóór paraffine insluiten. In geval die de steigers hebben zijn cel geplaatste of in vivo geïmplanteerd, is alginaat insluiten niet nodig, zoals de samenstelling van de steigers bestendig genoeg als gevolg van ECM opneming van informatie door de cellen zullen.</li>
	<li>Uitdrogen van de monsters door de plaatsing ervan in een gesorteerde ethanol-serie, beginnen met één uur cycli van 70%, 96%, 96%, 100% en 100% ethanol, gevolgd door twee 1 h cycli van xyleen, en eindigend met twee 1 h cycli van paraffine bij 60 ° C.</li>
	<li>Na uitdroging, paraffine-insluiten de monsters in een mal en de monsters afkoelen.</li>
	<li>De monsters met een microtoom in plakjes van 5 μm dik gesneden.</li>
	<li>Voordat de kleuring, hydrateren de monsters door ze te plaatsen in een reeks van geretourneerde graded ethanol. Begin met twee wasbeurten xyleen gedurende 5 minuten, gevolgd door 2 wasbeurten van 100%, 95% en 70% ethanol voor 3 min per wasbeurt. Tot slot wassen de monsters 3 keer in water gedurende 2 min. Opmerking: In het geval van het alginaat gebruikt voor het verwerken van monsters voor paraffine insluiten, zorg ervoor dat het alginaat met 10 mM citroenzuur vóór rehydratatie van de paraffine secties afwassen.</li>
	<li>Vlekken van de monsters met haematoxyline en eosine, Safranine-O, collageen I, en collageen II als vorige beschreven11.</li>
</ol>8. karakterisering van de Decellularized steigers met kwantitatieve Analyses
<ol><li>Papaïne digests van de steigers zoals eerder beschreven11te verkrijgen.</li>
	<li>Het uitvoeren van een test met een fluorescentie-gebaseerde DNA kwantificering kit voor het meten van de inhoud van de DNA dubbele-onderdeel van de steigers te waarborgen van volledige decellularization. Volg het protocol geleverd door de fabrikant. Express de hoeveelheid DNA per drooggewicht van de steiger.</li>
	<li>Een dimethylmethylene blauw-test om te kwantificeren van de rest van de GAGs binnen de steiger, zoals eerder beschreven11uitvoeren Het bedrag in GAG per DNA Express.</li>
</ol>9. het zaaien van de Decellularized steigers
<ol><li>Gesneden gesteriliseerde steigers uit stap 6.7 in 3 mm dikke sneden.</li>
	<li>Overdracht van de steigers in aparte putjes van de plaat van een 6-well.</li>
	<li>Steigers met cel kweekmedium door pipetting 1 mL medium op de top van de steiger te hydrateren en laat het weken voor 30 min. chondrocyten of mesenchymale stamcellen (MSC) uitbreiding medium gebruiken. Opmerking: Gebruik hetzelfde medium voor steiger rehydratie voor cultuur van de cel voor de cellen die zal worden ontpit. Chondrocyten uitbreiding medium bestaat uit Dulbecco van gemodificeerde media (DMEM) met 10% warmte-geïnactiveerd foetale runderserum (FBS), 100 U/mL penicilline, 100 μg/mL streptomycine en 10 ng/mL fibroblast groeifactor-2 (FGF-2). MSC uitbreiding medium bestaat uit minimum essentiële middellange alpha (a-MEM) met 10% warmte-geïnactiveerd FBS, 0,2 mM L-ascorbinezuur zuur 2-fosfaat, 100 U/mL penicilline, 100 μg/mL streptomycine en 10 ng/mL FGF-2.</li>
	<li>3 x 106 cellen in 100 μl van medium, dat is het vereiste volume voor elke steiger met een diameter van 8 mm en een hoogte van 3 mm voor te bereiden. Opmerking: Meerdere celtypen van verschillende soorten kunnen worden gebruikt voor het zaaien. Wanneer u chondrocyten of mesenchymale stromale cellen, isoleren de cellen als eerder beschreven11. Bij het gebruik van chondrocyten, ervoor te zorgen dat ze niet uitgebreid langs de passage van de P1 om te minimaliseren van het aantal dedifferentiated chondrocyten. Bij het gebruik van mesenchymale stromale cellen, moeten ze worden getest op hun vermogen voor multi lineage differentiatie, als eerder beschreven14.</li>
	<li>Pipetteer 50 μL van celsuspensie bovenop de vooraf doorweekt steiger voorbereid en Incubeer het schavot gedurende 1 uur bij 37 ° C.</li>
	<li>Zorgvuldig de steiger ondersteboven neer, Pipetteer de resterende 50 μl van celsuspensie draai aan deze kant van de steiger en incubeer gedurende 1 uur bij 37 ° C.</li>
	<li>Na incubatie, voeg 3 mL medium in de putjes en cultuur van de cel-geplaatste steigers bij 37 ° C. Omgaan met de cultuur plaat zachtjes Voorkom detachement van de cellen.</li>
	<li>Cultuur van de steigers voor de periode die nodig is voor het experiment en wijzig het medium 2 tot 3 keer per week. Pipetteer langzaam en zo ver weg van de steiger mogelijk.</li>
	<li>Na het kweken van de cel-geplaatste steiger, de steigers gesneden in de helft en verwerken voor zowel histologie en biochemische analysen.</li>
</ol>

<ol><li>Dunlop, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+for+functional+decline+in+older+adults+with+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+rheumatism%22%5BJournal%5D)">Risk factors for functional decline in older adults with arthritis.</a> Arthritis and rheumatism. 52 (4), 1274-1282 (2005).</li>
<li>Fitzpatrick, K., Tokish, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+military+perspective+to+articular+cartilage+defects%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+knee+surgery%22%5BJournal%5D)">A military perspective to articular cartilage defects.</a> The journal of knee surgery. 24 (3), 159-166 (2011).</li>
<li>Flanigan, D. C., Harris, J. D., Trinh, T. Q., Siston, R. A., Brophy, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+chondral+defects+in+athletes%27+knees%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+and+science+in+sports+and+exercise%22%5BJournal%5D)">Prevalence of chondral defects in athletes' knees: a systematic review.</a> Medicine and science in sports and exercise. 42 (10), 1795-1801 (2010).</li>
<li>Martel-Pelletier, J., Boileau, C., Pelletier, J. P., Roughley, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+in+normal+and+osteoarthritis+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Best+practice+%26+research.+Clinical+rheumatology%22%5BJournal%5D)">Cartilage in normal and osteoarthritis conditions.</a> Best practice & research. Clinical rheumatology. 22 (2), 351-384 (2008).</li>
<li>Vinatier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+tissue+engineering%3A+towards+a+biomaterial-assisted+mesenchymal+stem+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Current+stem+cell+research+%26+therapy%22%5BJournal%5D)">Cartilage tissue engineering: towards a biomaterial-assisted mesenchymal stem cell therapy.</a> Current stem cell research & therapy. 4 (4), 318-329 (2009).</li>
<li>Taylor, D. A., Sampaio, L. C., Ferdous, Z., Gobin, A. S., Taite, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+matrices+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Decellularized matrices in regenerative medicine.</a> Acta biomaterialia. 74, 74-89 (2018).</li>
<li>Vashi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Outcomes+for+Breast+Cancer+Patients+Undergoing+Mastectomy+and+Reconstruction+with+Use+of+DermACELL%2C+a+Sterile%2C+Room+Temperature+Acellular+Dermal+Matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+Surgery+International%22%5BJournal%5D)">Clinical Outcomes for Breast Cancer Patients Undergoing Mastectomy and Reconstruction with Use of DermACELL, a Sterile, Room Temperature Acellular Dermal Matrix.</a> Plastic Surgery International. 2014 (704323), 1-7 (2014).</li>
<li>Satterwhite, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+wall+reconstruction+with+dual+layer+cross-linked+porcine+dermal+xenograft%3A+the+%26%2334%3BPork+Sandwich%26%2334%3B+herniorraphy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+plastic%2C+reconstructive+%26+aesthetic+surgery+%3A+JPRAS%22%5BJournal%5D)">Abdominal wall reconstruction with dual layer cross-linked porcine dermal xenograft: the &#34;Pork Sandwich&#34; herniorraphy.</a> Journal of plastic, reconstructive & aesthetic surgery : JPRAS. 65 (3), 333-341 (2012).</li>
<li>Martinello, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+recellularization+of+human+tendon+scaffolds+using+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+and+collagen+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+tissue+engineering+and+regenerative+medicine%22%5BJournal%5D)">Successful recellularization of human tendon scaffolds using adipose-derived mesenchymal stem cells and collagen gel.</a> Journal of tissue engineering and regenerative medicine. 8 (8), 612-619 (2014).</li>
<li>Benders, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+scaffolds+for+cartilage+and+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration.</a> Trends in biotechnology. 31 (3), 169-176 (2013).</li>
<li>Benders, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+Stromal+Cells+Outperform+Chondrocytes+on+Cartilage-Derived+Matrix+Scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Cartilage%22%5BJournal%5D)">Multipotent Stromal Cells Outperform Chondrocytes on Cartilage-Derived Matrix Scaffolds.</a> Cartilage. 5 (4), 221-230 (2014).</li>
<li>Gawlitta, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+cartilage-derived+matrix+as+substrate+for+endochondral+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Decellularized cartilage-derived matrix as substrate for endochondral bone regeneration.</a> Tissue engineering. Part A. 21 (3-4), 694-703 (2015).</li>
<li>Yang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+and+repair+of+cartilage+defects+with+a+novel+acellular+cartilage+matrix+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Fabrication and repair of cartilage defects with a novel acellular cartilage matrix scaffold.</a> Tissue engineering. Part C, Methods. 16 (5), 865-876 (2010).</li>
<li>Pittenger, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilineage+potential+of+adult+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells.</a> Science. 284 (5411), 143-147 (1999).</li>
<li>Meyer, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+reduces+the+immune+response+to+aortic+valve+allografts+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+thoracic+and+cardiovascular+surgery%22%5BJournal%5D)">Decellularization reduces the immune response to aortic valve allografts in the rat.</a> The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 130 (2), 469-476 (2005).</li>
<li>Brown, B. N., Valentin, J. E., Stewart-Akers, A. M., McCabe, G. P., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+phenotype+and+remodeling+outcomes+in+response+to+biologic+scaffolds+with+and+without+a+cellular+component%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Macrophage phenotype and remodeling outcomes in response to biologic scaffolds with and without a cellular component.</a> Biomaterials. 30 (8), 1482-1491 (2009).</li>
<li>Keane, T. J., Londono, R., Turner, N. J., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consequences+of+ineffective+decellularization+of+biologic+scaffolds+on+the+host+response%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Consequences of ineffective decellularization of biologic scaffolds on the host response.</a> Biomaterials. 33 (6), 1771-1781 (2012).</li>
<li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An overview of tissue and whole organ decellularization.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li>
<li>Malda, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice%2C+men+and+elephants%3A+the+relation+between+articular+cartilage+thickness+and+body+mass%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Of mice, men and elephants: the relation between articular cartilage thickness and body mass.</a> PloS One. 8 (2), e57683(2013).</li>
<li>Malda, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+depth-dependent+characteristics+of+equine+and+human+osteochondral+tissue+from+the+medial+and+lateral+femoral+condyles%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Comparative study of depth-dependent characteristics of equine and human osteochondral tissue from the medial and lateral femoral condyles.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 20 (10), 1147-1151 (2012).</li>
<li>Londono, R., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biologic+scaffolds+for+regenerative+medicine%3A+mechanisms+of+in+vivo+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+biomedical+engineering%22%5BJournal%5D)">Biologic scaffolds for regenerative medicine: mechanisms of in vivo remodeling.</a> Annals of biomedical engineering. 43 (3), 577-592 (2015).</li>
<li>Gilbert, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+tissue+and+organ+decellularization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cellular+biochemistry%22%5BJournal%5D)">Strategies for tissue and organ decellularization.</a> Journal of cellular biochemistry. 113 (7), 2217-2222 (2012).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

De ECM voor articulair kraakbeen is zeer dicht en heel veerkrachtig voor verschillende enzymatische behandelingen. Het multi-step decellularization-protocol in dit artikel beschreven adressen van dergelijke weerstand en met succes genereert decellularized matrices. Om dat te bereiken, omvat het proces over meerdere dagen. Veel decellularization processen zijn voorgesteld voor verschillende soorten weefsels18, en dit artikel beschrijft een protocol geschikt voor de decellularization van kraakbeen. ...

Defecten van de articulaire kraakbeen in de knie veroorzaakt door traumatische gebeurtenissen kunnen leiden tot ongemak, en vooral een grote invloed kunnen hebben op het leven van de jonge en actieve bevolking1,2,3. Bovendien kan kraakbeenletsels op jonge leeftijd leiden tot een snellere begin van artrose verderop in leven4. Momenteel is de enige berging therapie voor veralgemeende artrose van de knie gewrichtsprothese chirurgie. Kraakbeen is een hypocellular, aneuraal en avasculaire weefsel, is haar regeneratief vermogen zeer beperkt. Daarom, regeneratieve geneeskunde benaderingen zijn gewild om te helpen en stimuleren van het regeneratieve vermogen van het oorspronkelijke weefsel. Voor dit doel, worden steigers ontworpen en gebruikt als ofwel een cel-carrier of als een inductieve materiaal dat aanzet differentiatie en regeneratie van weefsels tot door5inheemse cellen van het lichaam.
Decellularized steigers zijn binnen de regeneratieve geneeskunde6algemeen bestudeerd. Het heeft enig succes, bijvoorbeeld in de hulp aan het herstel van de huid7, abdominale structuren8en9van de pezen. Het voordeel van het gebruik van decellularized steigers is hun natuurlijke oorsprong en hun capaciteit voor het behouden van bioactieve signalen die zowel aantrekken en induceren van celdifferentiatie in de juiste geslacht nodig voor weefsel reparatie6,10. Bovendien, aangezien extracellulaire matrix (ECM) een natuurlijke biomaterial is, en decellularization wordt voorkomen een potentiële immuunrespons dat door het verwijderen van cellulaire of genetische inhoud, kwesties met betrekking tot de biocompatibiliteit en biologische afbreekbaarheid worden overwonnen.
Kraakbeen afkomstige matrix (CDM) steigers hebben aangetoond grote chondrogenic potentieel in in vitro experimenten wanneer met mesenchymale stromale cellen11agarvoedingsbodem. Bovendien, deze steigers is gebleken de potentie om vorm botweefsel via endochondral ossificatie op ectopische locaties in in vivo instellingen12. CDM steigers begeleiden de vorming van zowel bot en kraakbeen weefsel, deze steigers kunnen houden potentiële voor osteochondraal defect reparatie naast kraakbeen reparatie.
Dit artikel beschrijft een protocol aangepast vanaf Yang et al. (2010),13 voor de productie van decellularized CDM steigers van paarden verstikken kraakbeen. Deze steigers zijn rijk in collageen type II en verstoken van cellen, en bevatten geen elke glycosaminoglycanen (GAGs) na decellularization. Zowel in vitro en in vivo experimenten op (osteo) chondrale gebrek reparatie kunnen plaatsvinden met behulp van deze steigers.

<table><tbody><tr><td>Cadaveric joint</td><td></td><td></td><td>Dit kan worden verkregen als restmateriaal bij de plaatselijke slager of het dierenartsencentrum.</td></tr><tr><td>Steriele fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penicilline-Streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>Amfotericine B</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>15290026</td><td></td></tr><tr><td>Vloeibare stikstof</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA (0,25%), fenolrood</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl pH 7,5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Deoxyribonuclease I uit bovien pancreas</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>Ribonuclease A uit bovien pancreas</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R6513</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100 (octoxynol-1)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>Papaïne</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3125</td><td></td></tr><tr><td>Trinatriumcitraatdihydraat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4641</td><td></td></tr><tr><td>Alginaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>180947</td><td></td></tr><tr><td>Formaline</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>XYleen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraffine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethyleenoxide sterilisatie</td><td>Synergy Health, Venlo, Nederland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multipotente stromale cellen/chondrocyten uit paardendonoren</td><td></td><td></td><td>MSC's en chondrocyten kunnen worden geïsoleerd uit donorgewrichten die restmateriaal zijn, afkomstig van de plaatselijke slager of het dierenartsencentrum.</td></tr><tr><td>MEM alfa</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>22561</td><td></td></tr><tr><td>L-ascorbinezuur 2-fosfaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8960</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>41965</td><td></td></tr><tr><td>In hitte geïnactiveerd bovien serumalbumine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10735086001</td><td></td></tr><tr><td>Fibroblasten groeifactor-2 (FGF-2)</td><td>R &amp; D Systems</td><td>233-FB</td><td></td></tr><tr><td>DNA-kwantificeringskit (Quant-iT PicoGreen dsDNA Reagent)</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>P7581</td><td></td></tr><tr><td>1,9-Dimethyl-methyleenblauw zinkchloride dubbelzout</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>341088</td><td></td></tr><tr><td>Vriesdroger</td><td>SALMENKIPP</td><td>ALPHA 1-2 LD plus</td><td></td></tr><tr><td>Analytische molen</td><td>IKA</td><td>A 11 basic</td><td></td></tr><tr><td>mortel/stamper</td><td>Haldenwanger 55/0A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Roller plate</td><td>CAT</td><td>RM5</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge (voor 50 mL buizen)</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>Capsule (cilindrische mal)</td><td>TAAB</td><td>8 mm vlak</td><td></td></tr><tr><td>Superlite S UV</td><td>Lumatec</td><td>2001AV</td><td></td></tr><tr><td>Incubator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microtoom</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zeef (maasmaat 0,71 mm)</td><td>VWR</td><td>34111229</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scalpelhouder</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kleine lepel</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fabricage van decellularized kraakbeen afkomstige matrix steigers

Fabrication of Decellularized Cartilage-derived Matrix Scaffolds

Osteochondrale gebreken gebrek aan voldoende intrinsieke reparatie capaciteit om te regenereren functioneel gezonde been en kraakbeen weefsel. In zoverre heeft kraakbeen onderzoek gericht op de ontwikkeling van regeneratieve steigers. Dit artikel beschrijft de ontwikkeling van steigers die volledig zijn afgeleid van de extracellulaire matrix natuurlijke kraakbeen, afkomstig uit een paarden donor. Mogelijke toepassingen van de steigers omvatten allografts voor kraakbeen reparatie, bijeenkomen van een steiger voor osteochondraal weefsel engineering en het bieden van in vitro modellen om te bestuderen van de vorming van het weefsel te produceren. Decellularizing van het weefsel, de donor cellen worden verwijderd, maar veel van de natuurlijke bioactieve signalen zijn gedacht te worden bewaard. Het belangrijkste voordeel van het gebruik van dergelijke een natuurlijke steiger in vergelijking met een synthetisch geproduceerde steiger is dat geen verdere functionalization van polymeren nodig om de schijf osteochondraal weefselregeneratie is. De steigers kraakbeen afkomstige matrix kunnen worden gebruikt voor de botten en het kraakbeen weefselregeneratie in zowel in vivo en in vitro-instellingen.

Decellularization van CDM steigers moet altijd worden bevestigd met behulp van histologische technieken, alsmede met behulp van DNA kwantificering te meten van de hoeveelheid DNA-resten. Onvoldoende decellularization kan leiden tot ongewenste immunologische reacties die invloed hebben op de resultaten van in vivo instellingen15,16,17. Voor deze specifieke decellularization methode, DNA was onder ...

Decellularized kraakbeen afkomstige steigers kunnen worden gebruikt als een steiger aan gids kraakbeen reparatie en als een middel om te regenereren osteochondraal weefsel. Deze paper beschrijft het proces van de decellularization in detail en biedt suggesties voor deze steigers in in vitro-instellingen.

Fabricage van Decellularized kraakbeen afkomstige Matrix steigers

Osteochondral defects lack sufficient intrinsic repair capacity to regenerate functionally sound bone and cartilage tissue. To this extent, cartilage ...

Deze methode biedt een manier om steigers afgeleid van inheemse weefsel die kunnen worden gebruikt voor kraakbeen regeneratie te creëren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat componenten van inheemse kraakbeen worden bewaard in de steigers die kraakbeenvorming en regeneratie in vitro en in vivo kunnen bevorderen. Hoewel deze methode maakt gebruik van kraakbeen van paarden verstikken gewrichten, kraakbeen uit andere gewrichten kan ook worden gebruikt.Om te beginnen, het verkrijgen van een intacte kadaverische gewricht voor kraakbeen isolatie en verwijder de huid overtollig vet en spierweefsel zoals beschreven in de begeleidende tekst protocol. Definieer vervolgens de locatie waar de voeg articuleert door uitbreidingsbuiging van het gewricht uit te voeren. Maak een horizontale incisie om de gewrichtsholte te bereiken.Maak vervolgens een verticale incisie om het gezamenlijke gebied te openen. De gewrichtsholte is gevuld met synoviale vloeistof die waarschijnlijk zal druppelen uit de holte bij het uitvoeren van de juiste incisie. Blijven openen van het gewricht volledig door het verwijderen van overmatig vet, spieren en pezen, en door het snijden door de pezen die het gewricht bij elkaar te houden.Controleer het kraakbeen zorgvuldig op eventuele macroscopische schade. Als het gewrichtskraakbeen geen glanzender gladde uitstraling heeft of als er bewijs, blaren, kloven of defecten aanwezig zijn, gooi het kraakbeen weg en begin opnieuw. Gebruik een steriele scalpel om het kraakbeen uit het bot te verwijderen.Snijd helemaal naar beneden naar het subchondrale bot om het diepe zone kraakbeen te verwijderen. Verzamel de verwijderde kraakbeenplakjes in 50 milliliter buizen met eerder voorbereide kraakbeenwasoplossing. Druppel tijdens het verwerken regelmatig kraakbeenwasoplossing op het kraakbeen om te voorkomen dat het kraakbeen uitdroogt.Na het verzamelen van het kraakbeen uit alle gebieden van belang, snap bevriezen van het kraakbeen plakjes in vloeibare stikstof gedurende vijf minuten. Breng vervolgens de plakjes kraakbeen over in buizen van 50 milliliter en plaats onmiddellijk de bevroren plakjes in een vriesdroger. Lyophilize de kraakbeen plakjes voor 24 uur met de vriesdroger.Bewaar de gevriesdroogde kraakbeenschijfjes op een droge plaats bij kamertemperatuur. Voor handmatige verwerking, pre chill een mortel en stamper met vloeibare stikstof, plaats dan de lyophilized kraakbeen plakjes in de mortel en dompel ze en vloeibare stikstof. Maal de monsters direct met de hand gedurende ongeveer 45 minuten totdat ze voldoende verpulverd zijn.Als alternatief, om de monsters automatisch te malen met behulp van een freesmachine, beginnen met het voorkoelen van het slijpvak van de freesmachine door toevoeging van vloeibare stikstof. Voeg vervolgens de lyophilized kraakbeenplakjes toe en maal het monster op de vooraf ingestelde snelheid gedurende een paar seconden tot een minuut. Zorg ervoor dat alle deeltjes worden gemalen en dat er geen deeltjes in de bodem van het slijpvak blijven.Tot slot, volg samen met de decellularisatie techniek beschreven in de begeleidende tekst protocol voorafgaand aan de vorming van steigers. Breng de kraakbeendeeltjes met een klein etiket over op een cilindrische kunststof mal. Druk op alle luchtbellen uit om gaatjes in de steiger te voorkomen en vul de mal volledig.Om holtes in de steigers te voorkomen, moet u ervoor zorgen dat luchtbellen worden geperst tijdens het vullen van de mal met kraakbeendeeltjes. Na de vorming, bevriezen van de mal gedurende 10 minuten bij min 20 graden Celsius. Vervolgens lyophilize het kraakbeen steigers binnen de mal voor 24 uur in een vriesdroger.Verwijder na lyofilie voorzichtig het schavot uit de mal. Plaats de steiger onder een 365 nanometer golflengte UV-licht en kruis link het 's nachts. Vorm steigerschijven door gesteriliseerde steigers in drie millimeter dikke plakjes te snijden.Breng vervolgens de steigers in aparte putten van een zes putplaat. Voeg een milliliter Chondrocyte Expansion Medium toe aan de steigers en laat ze 30 minuten hydrateren. Terwijl de steigers rehydrateren, bereiden de cellen en pipet 50 microliter van de voorbereide cel suspensie op de top van de pre gedrenktste steiger.Dan broeden de steiger voor een uur op 37 graden Celsius. Bij het gebruik van chondrocyten, zorg ervoor dat ze niet zijn uitgebreid voorbij de eerste passage om het aantal van de gedifferentieerde cellen te minimaliseren. Na een uur breng je de plaat terug naar de kweekkap en draai je het schavot voorzichtig om.Pipette de resterende 50 microliters van celopschorting op de steiger en incuberen voor nog een uur op 37 graden Celsius. Voeg na incubatie drie milliliter medium toe aan de putten met steigers. Vermijd pipetten van het medium direct op de steigers en behandel de kweekplaat voorzichtig om loslating van de cellen te voorkomen.Breng de plaat terug naar de couveuse en kweekcel afgestaan steigers bij 37 graden Celsius. Een combinatie van historologische kleuring en DNA kwantificering zijn gebruikt om aan te tonen dat de methoden in dit artikel resulteren in voldoende kraakbeen steigerdecellularisatie. De resulterende steigers bleken geen cellen te bevatten, samen met niet-detecteerbare niveaus van DNA.Ze missen ook glycosaminoglycanen en zijn rijk aan collageen II.Hier wordt neo matrixvorming waargenomen op steigers afgestaan met mesenchymale stamcellen die vier weken lang werden gekweekt. De vorming van glycosaminoglycanen is overvloedig na vier weken. Na het proberen van deze procedure, is het belangrijk om te onderzoeken of decellularisatie succesvol is geweest, alvorens het in om het even welke toepassing te gebruiken.Na deze procedure kan aanvullende biochemische analyse zoals Western blot analyzer worden uitgevoerd om specifieke vragen te beantwoorden over de aanwezigheid van andere componenten zoals groeifactoren. Deze techniek maakte de weg vrij voor onderzoekers op het gebied van weefseltechniek om strategieën voor kraakbeenregeneratie te onderzoeken met behulp van gedecellulariseerd weefsel uit allogene en syngeneïsche bronnen. Voorzorgsmaatregelen zoals het dragen van een labjas en handschoenen moeten altijd worden genomen.

fabrication-of-decellularized-cartilage-derived-matrix-scaffolds

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

This video demonstrates the procedure of extracellular matrix-derived microcarrier fabrication by electrospraying. These microcarriers simulate the native tissue-specific microenvironment and are stable in long-term 3D in vitro cell culture models.

Bioscaffold Fabrication by Electrospraying: A Technique to Generate Microcarrier Scaffolds Derived from Extracellular Matrix of Decellularized Tissue

Kraakbeenherstel vormt een onopgeloste medische uitdaging en cel-gebaseerde benaderingen om menselijk articulair kraakbeen te ontwikkelen zijn een veelbelovende oplossing. Hier beschrijven we driedimensionale (3D) biomimetische hydrogels als een ideaal hulpmiddel voor de uitbreiding en rijping van menselijke articulaire kraakbeencellen.

3D Hydrogel Stellingen voor Articulaire Chondrocyte Cultuur en Kraakbeen Generation

Chondrogenese uit stamcellen vereist fine tuning van de kweekomstandigheden. Hier presenteren we een magnetische aanpak voor het condenseren van cellen, een essentiële stap om chondrogenese te initiëren. Bovendien tonen wij aan dat dynamische rijping in een bioreactor zijn mechanische stimulatie van de cellulaire constructen en verbetert kraakbeenachtige extracellulaire matrix productie.

3D Magnetic Stem Cell Samenvoeging en Bioreactor rijping voor het herstel van kraakbeen

Het weefsel-specifieke extracellulaire matrix (ECM) is een sleutelmediator van celfunctie. Dit artikel beschrijft werkwijzen voor het synthetiseren van zuiver ECM afgeleide schuimen en microdragers die stabiel in cultuur zonder de noodzaak voor chemische verknoping voor toepassingen in geavanceerde 3D in vitro celkweekmodellen of pro-regeneratieve bioscaffolds.

Fabricage van extracellulaire matrix-afgeleide schuimen en microdragers Weefsel-specifieke Cell Cultuur en Delivery Platforms

Hier presenteren we en contrast twee protocollen gebruikt om te decellularize van plantaardige weefsels: een wasmiddel gebaseerde aanpak en een wasmiddel-vrije benadering. Beide methoden zijn achterlaten van de extracellulaire matrix van de weefsels van de plant gebruikt, die vervolgens kan worden gebruikt als steigers voor weefsel waterbouwkundige toepassingen.

Twee methoden voor Decellularization van plantaardige weefsels voor Tissue Engineering toepassingen

Dit protocol beschrijft de productie van polycaprolactone (PCL) gloeidraad met ingesloten polylactic acid (PLA) microsferen waarin decellularized matrices (DM) voor afdrukken in 3D van structurele weefsel engineering constructies.

Nieuwe proces voor afdrukken in 3D Decellularized Matrices

Het doel van dit protocol is productie van hele extracellulaire matrix vezels die voor reparatie van de wond wordt gericht die geschikt voor preklinische evaluatie als onderdeel van een regeneratieve steiger implantaat zijn. Deze vezels worden geproduceerd door de cultuur van fibroblasten op holle vezel membranen en geëxtraheerd door ontbinding van de membranen.

Productie van extracellulaire Matrix vezels via cultuur van de cel van de membraan van opofferende holle vezel

Dit protocol beschrijft de assemblage van een laag-voor-laag Janus base nano-matrix (JBNm) scaffold door janus base nanotubes (JBNts), matrilin-3 en Transforming Growth Factor Beta-1 (TGF-β1) sequentieel toe te voegen. De JBNm werd gefabriceerd en gekarakteriseerd; bovendien vertoonde het een uitstekende bioactiviteit, waardoor celfuncties zoals adhesie, proliferatie en differentiatie werden aangemoedigd.

Fabricage en karakterisering van laag-voor-laag Janus Base Nano-Matrix om kraakbeenregeneratie te bevorderen

Dit artikel introduceert een nieuwe methode voor de synthese van gedecellulariseerde kraakbeen extracellulaire matrix (DC-ECM) hydrogels. DC-ECM-hydrogels hebben een uitstekende biocompatibiliteit en bieden een superieure micro-omgeving voor celgroei. Daarom kunnen ze ideale celsteigers en biologische afgiftesystemen zijn.

Synthese van gedecellulariseerde kraakbeen extracellulaire matrix hydrogels

De gedecellulariseerde miltmatrix (DSM) bevat veelbelovende toepassingen op het gebied van leverweefselmanipulatie. Dit protocol schetst de procedure voor het bereiden van DSM bij ratten, waaronder het oogsten van milten van ratten, het decellulariseren ervan door middel van perfusie en het evalueren van de resulterende DSM om de kenmerken ervan te bevestigen.

Fabricage van gedecellulariseerde miltmatrix afgeleid van ratten

Dit protocol beschrijft de fabricage van 3D-botconstructies met behulp van menselijke osteocyten die zijn ingebed in methacrylgelatine (GelMA) hydrogels, aangevuld met gedecellulariseerde extracellulaire matrix. De methode is goedkoop, schaalbaar en compatibel met basislaboratoriumapparatuur, en biedt een translationeel platform voor het bestuderen van processen van musculoskeletale ziekten.

Een 3D-botkweekplatform met menselijke osteocyten en gedecellulariseerde extracellulaire matrix voor het modelleren van musculoskeletale aandoeningen

Leer hoe je gedecellulariseerde kraakbeenafgeleide matrixsteigers maakt voor kraakbeenregeneratie en weefselherstel. Deze methode behoudt native matrixcomponenten voor verbeterde in vitro en in vivo toepassingen.

Fabricage van Decellularized kraakbeen afkomstige Matrix steigers

Meer video's verkennen