Name: Ijzeroxide Polyethyleneimine-gecoate nanodeeltjes als een voertuig voor de levering van kleine Mengend RNA aan macrofagen In Vitro en In Vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: Leer hoe je PEI-gecoate ijzeroxide nanodeeltjes gebruikt voor siRNA-afgifte aan macrofagen in vitro en in vivo. Deze methode maakt efficiënte gen-silencing mogelijk voor therapeutische toepassingen bij chronische ontstekingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door de nationale Natural Science Foundation van China (81772308) en de nationale sleutel onderzoek en ontwikkeling programma van China (nr. 2017YFA0205502).

Alle methoden waarbij levende dieren werden uitgevoerd overeenkomstig het dier zorg en gebruiken van richtsnoeren voor het zuidoosten Universiteit, China.
1. bereiding van PEI-SPIONs
<ol><li>
Voorbereiding van oliezuur gemodificeerde SPIONs
	<ol>
<li>Los FeCl3•6H2O en FeSO4•7H2O in water onder de bescherming van N2.<ol>
<li>Voeg 28 g FeCl3•6H2O en 20 g FeSO4•7H,2O in 80 mL gedeïoniseerd water in een bekerglas. N2 introduceren in het water door een glazen buis en roer tot de vaste stof is opgelost.</li>
			<li>Verwarm het reactiemengsel tot 72 ° C in een opzwepende tempo van 800 rpm, gevolgd door toevoeging van 40 mL ammonia water (28%). Roer gedurende 5 min.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Voeg 9 mL oliezuur ontkleuring in de bovengenoemde oplossing en roer het bij 72 ° C gedurende 3 uur.</li>
		<li>Koel de oplossing op kamertemperatuur (RT). Het neerslaan van de oplossing via magnetische scheiding.</li>
		<li>Was het neerslag met SPIONs 3 x met absolute ethylalcohol en, vervolgens, het verspreiden van het precipitaat op in 100 mL N-hexaan.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Voorbereiding van dimercaptosuccinic zuur gemodificeerde SPIONs
	<ol>
<li>Toevoegen van 800 mg oliezuur (OA)-gewijzigd SPIONs verspreid in 200 mL N-hexaan en 400 mg dimercaptosuccinic zuur (DMSA), gedispergeerd in 200 mL aceton, in een drie-nek maatkolf in een waterbad bij 60 ° C. Opmerking: Om te bepalen van de concentratie van OA gemodificeerde SPION verkregen uit de vorige stap, neem een klein volume (b.v. 1 mL) van de SPION dispersie, vormen de N-hexaan en weegt het resulterende poeder.</li>
		<li>Voeg 200 µL van triethylamine ontkleuring in de bovengenoemde oplossing met roeren bij 1000 omwentelingen per minuut en maagzuur.</li>
		<li>Na 5 h van roeren en maagzuur, krijgt u een zwarte neerslag door magnetische scheiding.</li>
		<li>De hydrofiele SPIONs in gedeïoniseerd water homogeen verspreiden door de pH van de oplossing met behulp van tetramethylammoniumhydroxide aan te passen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Voorbereiding van PEI-SPIONs
	<ol>
<li>Toevoegen van de SPION DMSA-bewerkt colloïdale oplossing ontkleuring in PEI oplossing (10 kDa) in een maatkolf van 500 mL drie-nek onder mechanische roeren bij 1000 omwentelingen per minuut gedurende 2 uur (WFe: WPEI = 1:3). Opmerking: De kosten en de grootte van PEI-SPIONs afhankelijk van de verhouding van WFe naar WPEI. De W-Fe: WPEI verhouding van 1:3 kan een goed uitgangspunt voor de synthese van PEI-SPIONs geschikt voor siRNA levering.</li>
		<li>Toevoegen van de resulterende oplossing in een buis van de ultrafiltratie met een molecuulgewicht cutoff van 100 kDa en een inhoud van 15 mL; vervolgens, centrifuge op 5400 x g gedurende 10 minuten totdat de resterende oplossing 1 mL is. Voeg gedeïoniseerd water toe aan de oplossing voor het maken van het volume 15 mL opnieuw en herhaal het bovenstaande proces 10 x te verkrijgen van het eindproduct. Vervolgens, filtreer de oplossing door een filter van 0.22-μm en slaan het eindproduct bij 4 ° C.</li>
		<li>Bepaal de concentratie van de Fe van PEI-SPIONs door de colorimetrische methode met behulp van phenanthroline17. PEI-SPIONs met gedeïoniseerd steriel water tot een concentratie van 1 mg Fe/mL verdund en op te slaan bij 4 ° C.</li>
		<li>Verdun 10 μL van de PEI-SPION oplossing (1 mg Fe/mL) tot 1 mL met gedeïoniseerd water; vervolgens test de hydrodynamische grootte en zeta potentiële door een dynamische licht-verstrooiing apparaat. Opmerking: Bereiden PEI-SPIONs in het bereik van ongeveer 30-50 nm. In deze grootte lijkt het effect van de NP-grootte op siRNA bindende en cellulaire opname niet significant te zijn. PEI-SPIONs rekening houdend met een gemiddelde zeta potentieel meer dan +37 mV kan giftige in het dosisinterval voor transfectie, en een bepaling van de cytotoxiciteit moet worden uitgevoerd om veiligheid te garanderen. De oppervlakte lading en hydrodynamische grootte van de nanodeeltjes kunnen een gewenste bereik worden bestuurd door de PEI-inhoud aan te passen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. voorbereiding en Agarose de Elektroforese van het Gel van PEI-SPION/siRNA NPs
<ol><li>Verdunde siRNA met RNase-gratis water tot het opleveren van een eindconcentratie van 20 μM (0,26 μg/l).</li>
	<li>Vijf RNase-vrije microcentrifuge buizen label 0, 1, 2, 4 en 8 voorbereiden. De etiketten vertegenwoordigen verschillende Fe: siRNA gewicht ratio's. Pipetteer 3 μL van siRNA oplossing voor alle buizen (~0.8 μg van siRNA/buis).</li>
	<li>0, 0.8, 1.6, 3.2 en 6,4 μg Fe in de vorm van PEI-SPIONs aan de buizen met 0, 1, 2, 4 en 8, respectievelijk het label toevoegen. Houd het volume van de totale steekproef voor elke buis minder dan 20 μL. Meng door zachtjes op en neer pipetteren.</li>
	<li>Incubeer de mengsels op RT gedurende 30 minuten om PEI-SPION/siRNA complexvorming. Tijdens deze periode, maken een 3% agarose gel met hoge zuiverheid agarose. Opmerking: Extra PEI-SPION/siRNA complexen met andere Fe: siRNA ratio's (b.v.5 of 6) kunnen worden voorbereid en getest.</li>
	<li>Voeg 1 μl van 6 x DNA-laden buffer per 5-μL monster en meng voorzichtig. Laden van alle monsters en draaien van elektroforese op 5 V/cm totdat het bromophenol blauw zoveel tweederde van de lengte van de gel migreert. Vlek de gel met ethidiumbromide (EB) voor 15-20 min. Opmerking: Vers bereide elektroforese buffer en EB oplossing moeten worden gebruikt.</li>
	<li>Visualiseren van siRNA banden onder een UV-imaging systeem. Controle van de Fe: siRNA verhoudingen op welke siRNA vormen complexen met PEI-SPIONs en, dientengevolge, de bands vertegenwoordigen gratis siRNA zijn achtergebleven of niet aantoonbaar.</li>
</ol>3. de transfectie van RAW264.7 macrofagen In Vitro
<ol><li>Cultuur muis macrofaag-achtige RAW264.7 cellen in een 10-cm schotel met behulp van DMEM voltooien gemiddeld met 10% foetale runderserum (FBS) per 100 U/mL penicilline per 100 μg/mL streptomycine bij 37 ° C in een 5% CO2 incubator.</li>
	<li>Een dag voorafgaand aan de transfectie, gecombineerd worden overgedragen door de cellen en spoel ze af met fosfaat gebufferde zoutoplossing (pH 7.4). Voeg 1 mL trypsine van 0,25% naar de 10-cm schotel. Trypsinize RAW264.7 cellen voor ongeveer 5-10 minuten bij 37 ° C in een 5% CO2 incubator.</li>
	<li>Wanneer de meerderheid van de cellen hebben losgekoppeld (na 5-10 min), voeg 5 mL van DMEM compleet medium naar de schotel naar de inactivering van de trypsine. Pipetteer omhoog en omlaag te verspreiden van cel clusters in afzonderlijke cellen.</li>
	<li>De celsuspensie overbrengen in een steriele 15 mL conische buis. Centrifugeer het bij 300 x g gedurende 3 minuten op RT. Verwijder de bovendrijvende substantie.</li>
	<li>Resuspendeer de cellen met 5 mL verse DMEM volledige voedingsbodem en cellen tellen.</li>
	<li>Plaat 9 x 104 cellen per goed in een 6-well plaat met 2 mL van volledige DMEM medium en Incubeer bij 37 ° C in een 5% CO2 incubator gedurende ongeveer 24 uur. Opmerking: Als een plaat van een verschillende grootte, de vergulde celdichtheid in verhouding tot de relatieve oppervlakte zodanig aanpassen dat de cellen 80% confluentie ten tijde van de transfectie bereiken.</li>
	<li>Als cel confluentie is 80%, het medium van de cellen verwijderen en vervangen door 1 mL van de volledige medium DMEM per putje. Terug de plaat naar de incubator totdat PEI-SPION/siRNA complexen zijn opgesteld en klaar voor gebruik (ongeveer 30 min zijn).</li>
	<li>Bereiden van PEI-SPION/siRNA complexen: berekent het bedrag van PEI-SPION/siRNA complexen die nodig zijn voor een experiment van de transfectie. Meng in een 1.5-mL RNase-vrije microcentrifuge buis, een passend bedrag van PEI-SPIONs met siRNA bij een bepaalde Fe: siRNA verhouding. Bijvoorbeeld, ter voorbereiding van PEI-SPION/siRNA NPs met 100 µg Fe bij een Fe: siRNA-verhouding van 4, voeg 100 µL (1 mg Fe/mL) van PEI-SPIONs tot 96 μL van siRNA (0,26 μg/l), gevolgd door het mengen zachtjes met een micropipet. Incubeer gedurende 30 min op RT. Opmerking: Bereiden een volume van PEI-SPION/siRNA complex dat is 10% meer dan de totale definitieve massa aan account voor eventuele incidentele verliezen. Maak PEI-SPION/siRNA complexen op lage Fe: siRNA ratio's, waaronder siRNA moleculen zijn volledig geladen op PEI-SPIONs en, vandaar, kleine hoeveelheden PEI-SPIONs kunnen worden gebruikt om te minimaliseren van potentiële cytotoxiciteit. Proefprojecten (gel retardatie assay) voor de optimalisatie van de Fe: siRNA verhouding zijn noodzakelijk.</li>
	<li>Nemen de 6-well plaat boven de incubator (stap 3.7). Een vereiste volume van PEI-SPION/siRNA complex ontkleuring toevoegen aan elk putje en swirl van de plaat voorzichtig zodat een gelijkmatige verdeling. Terug de plaat naar de incubator tot de beoordeling van de cellulaire opname of gene vechtpartij efficiëntie (1-3 d). Opmerking: Transfecting macrofagen met PEI-SPION/siRNA bij een concentratie van ~ 15 μg Fe/mL kunnen transfectie efficiëntie maximaliseren terwijl het minimaliseren van potentiële cytotoxiciteit.</li>
</ol>4. systemische levering van siRNA aan macrofagen in ratten met experimentele artritis
<ol><li>Het verkrijgen van specifieke pathogenen vrije mannelijke Wistar ratten die 7 oud weken. Koeien de rats voor 7 d vóór gebruik en hen te voorzien van voldoende voedsel en water. Induceren adjuvans artritis (AA) in de rats als eerder beschreven18.</li>
	<li>PEI-SPION/siRNA complexen zoals beschreven in stap 3.8 voor te bereiden.</li>
	<li>Injecteren de PEI-SPION/siRNA NPs (0.3 mg van siRNA/kg) in de AA ratten via de ader van de staart. Beoordelen de cellulaire opname via, bijvoorbeeld stroom cytometry weefsel ook via, bijvoorbeeld, een real-time fluorescentie imaging systeem, of therapeutische effecten op basis van, bijvoorbeeld, radiografische, klinische en histologische analyses op gewenste tijdstip punten18. Opmerking: Voor cellulaire en weefsel ook studies, behandelen de ratten met een enkele injectie van de gewenste NPs; voor therapeutische studies, de ratten te injecteren met de NPs geteste 1 x per week gedurende drie opeenvolgende weken.</li>
</ol>

<ol><li>Murray, P. J., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+and+pathogenic+functions+of+macrophage+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Protective and pathogenic functions of macrophage subsets.</a> Nature Reviews Immunology. 11 (11), 723(2011).</li>
<li>Maeß, M. B., Wittig, B., Lorkowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+transfection+of+human+THP-1+macrophages+by+nucleofection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Highly efficient transfection of human THP-1 macrophages by nucleofection.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51960(2014).</li>
<li>Zhang, X., Edwards, J. P., Mosser, D. M. The Expression of Exogenous Genes in Macrophages: Obstacles and Opportunities. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+X+%22Macrophages+and+Dendritic+Cells%22">Macrophages and Dendritic Cells</a>. , Springer. 123-143 (2009).</li>
<li>Zhang, M., Gao, Y., Caja, K., Zhao, B., Kim, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-viral+nanoparticle+delivers+small+interfering+RNA+to+macrophages+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Non-viral nanoparticle delivers small interfering RNA to macrophages in vitro and in vivo.</a> PLoS ONE. 10 (3), e0118472(2015).</li>
<li>Davignon, J. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+monocytes%2Fmacrophages+in+the+treatment+of+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Targeting monocytes/macrophages in the treatment of rheumatoid arthritis.</a> Rheumatology. 52 (4), 590-598 (2012).</li>
<li>Brown, J. M., Recht, L., Strober, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+promise+of+targeting+macrophages+in+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The promise of targeting macrophages in cancer therapy.</a> Clinical Cancer Research. 23 (13), 3241-3250 (2017).</li>
<li>Karunakaran, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+macrophage+necroptosis+for+therapeutic+and+diagnostic+interventions+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Targeting macrophage necroptosis for therapeutic and diagnostic interventions in atherosclerosis.</a> Science Advances. 2 (7), e1600224(2016).</li>
<li>Prosperi, D., Colombo, M., Zanoni, I., Granucci, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+nanocarriers+to+treat+autoimmunity+and+chronis+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Drug nanocarriers to treat autoimmunity and chronis inflammatory diseases.</a> Seminars in Immunology. 34, 61-67 (2017).</li>
<li>Höbel, S., Aigner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyethylenimines+for+siRNA+and+miRNA+delivery+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdisciplinary+Reviews%3A+Nanomedicine+and+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Polyethylenimines for siRNA and miRNA delivery in vivo.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: Nanomedicine and Nanobiotechnology. 5 (5), 484-501 (2013).</li>
<li>Whitehead, K. A., Langer, R., Anderson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knocking+down+barriers%3A+advances+in+siRNA+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Knocking down barriers: advances in siRNA delivery.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 8 (2), 129(2009).</li>
<li>Liu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Alkyl-PEI-functionalized+iron+oxide+nanoclusters+for+efficient+siRNA+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">N-Alkyl-PEI-functionalized iron oxide nanoclusters for efficient siRNA delivery.</a> Small. 7 (19), 2742-2749 (2011).</li>
<li>Weissleder, R., Nahrendorf, M., Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+macrophages+with+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Materials%22%5BJournal%5D)">Imaging macrophages with nanoparticles.</a> Nature Materials. 13 (2), 125(2014).</li>
<li>Magro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Covalently+bound+DNA+on+naked+iron+oxide+nanoparticles%3A+Intelligent+colloidal+nano-vector+for+cell+transfection%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29-General+Subjects%22%5BJournal%5D)">Covalently bound DNA on naked iron oxide nanoparticles: Intelligent colloidal nano-vector for cell transfection.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-General Subjects. 1861 (11), 2802-2810 (2017).</li>
<li>Abdelrahman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((siRNA+delivery+system+based+on+magnetic+nanovectors%3A+Characterization+and+stability+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">siRNA delivery system based on magnetic nanovectors: Characterization and stability evaluation.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 106, 287-293 (2017).</li>
<li>Zhang, H., Lee, M. -Y., Hogg, M. G., Dordick, J. S., Sharfstein, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+in+three-dimensional+cell+cultures+by+superparamagnetic+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Gene delivery in three-dimensional cell cultures by superparamagnetic nanoparticles.</a> ACS Nano. 4 (8), 4733-4743 (2010).</li>
<li>Moghimi, S. M., Hunter, A. C., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-circulating+and+target-specific+nanoparticles%3A+theory+to+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice.</a> Pharmacological Reviews. 53 (2), 283-318 (2001).</li>
<li>Harvey, A. E. Jr, Smart, J. A., Amis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+spectrophotometric+determination+of+iron+%28II%29+and+total+iron+with+1%2C+10-phenanthroline%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Simultaneous spectrophotometric determination of iron (II) and total iron with 1, 10-phenanthroline.</a> Analytical Chemistry. 27 (1), 26-29 (1955).</li>
<li>Duan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyethyleneimine-functionalized+iron+oxide+nanoparticles+for+systemic+siRNA+delivery+in+experimental+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Polyethyleneimine-functionalized iron oxide nanoparticles for systemic siRNA delivery in experimental arthritis.</a> Nanomedicine. 9 (6), 789-801 (2014).</li>
<li>Fröhlich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+surface+charge+in+cellular+uptake+and+cytotoxicity+of+medical+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">The role of surface charge in cellular uptake and cytotoxicity of medical nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 7, 5577(2012).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-small+particles+of+iron+oxide+as+peroxidase+for+immunohistochemical+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Ultra-small particles of iron oxide as peroxidase for immunohistochemical detection.</a> Nanotechnology. 22 (22), 225703(2011).</li>
<li>Xia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyethyleneimine+coating+enhances+the+cellular+uptake+of+mesoporous+silica+nanoparticles+and+allows+safe+delivery+of+siRNA+and+DNA+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Polyethyleneimine coating enhances the cellular uptake of mesoporous silica nanoparticles and allows safe delivery of siRNA and DNA constructs.</a> ACS Nano. 3 (10), 3273-3286 (2009).</li>
<li>Mocellin, S., Provenzano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference%3A+learning+gene+knock-down+from+cell+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">RNA interference: learning gene knock-down from cell physiology.</a> Journal of Translational Medicine. 2 (1), 39(2004).</li>
<li>Courties, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((et+al.In+vivo+RNAi-mediated+silencing+of+TAK1+decreases+inflammatory+Th1+and+Th17+cells+through+targeting+of+myeloid+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">et al.In vivo RNAi-mediated silencing of TAK1 decreases inflammatory Th1 and Th17 cells through targeting of myeloid cells.</a> Blood. 116 (18), 3505-3516 (2010).</li>
<li>Zolnik, B. S., Gonzalez-Fernandez, A., Sadrieh, N., Dobrovolskaia, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minireview%3A+nanoparticles+and+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Minireview: nanoparticles and the immune system.</a> Endocrinology. 151 (2), 458-465 (2010).</li>
<li>Mulens-Arias, V., Rojas, J. M., Pérez-Yagüe, S., Morales, M. P., Barber, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyethylenimine-coated+SPIONs+trigger+macrophage+activation+through+TLR-4+signaling+and+ROS+production+and+modulate+podosome+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Polyethylenimine-coated SPIONs trigger macrophage activation through TLR-4 signaling and ROS production and modulate podosome dynamics.</a> Biomaterials. 52, 494-506 (2015).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Macrofagen zijn vuurvast tot transfect door veelgebruikte nonviral benaderingen, zoals electroporation, kationische liposomen, en lipide-soorten. Hier beschreven we een betrouwbare en efficiënte methode om transfect van macrofagen met siRNA. Met behulp van het huidige protocol, kunnen meer dan 90% van macrofaag-achtige RAW 264.7 cellen (figuur 2B) en rat peritoneale macrofagen18 zijn transfected met siRNA zonder aanzienlijke waardevermindering van de levensvatbaarheid...

Macrofagen zijn een soort aangeboren immuun cellen verdeeld in alle weefsels van het lichaam, zij het in verschillende hoeveelheden. Door overlegging van een verscheidenheid van cytokines en andere bemiddelaars, zij een kritische rol spelen in de verdediging van de gastheer tegen invasie microbiële ziekteverwekkers, weefselherstel na verwonding en bij het handhaven van de weefsel homeostase1. Macrofagen zijn vanwege hun belang, voortdurend het onderwerp van intensief onderzoek. Ondanks de prevalentie in genregulatie en functie studies, siRNA-gemedieerde gene zwijgen is echter minder kans om te slagen in macrofagen, omdat deze cellen — met name primaire macrofagen — zijn vaak moeilijk te transfect. Dit kan worden toegeschreven aan een relatief hoge mate van toxiciteit meest gevestigde transfectie benaderingen waarin het celmembraan chemisch is is gekoppeld (bijvoorbeeldmet polymeren en lipiden) of fysiek (bijvoorbeelddoor electroporation en Gene geweren) verstoord te laten siRNA moleculen Kruis het membraan, daardoor drastisch verminderen van2,3van de levensvatbaarheid van de macrofagen. Macrofagen zijn bovendien speciale fagocyten rijk aan afbraakroutes enzymen. Deze enzymen kunnen schade aan de integriteit van siRNA, verzwakken haar silencing efficiëntie zelfs als gen-specifieke siRNA is afgeleverd in de cel3,4. Daarom moet een effectieve macrofaag-gerichte siRNA delivery systeem ter bescherming van de integriteit en stabiliteit van siRNA tijdens levering4.
Het wordt steeds duidelijker dat disfunctionele macrofagen zijn betrokken bij het opzetten en de progressie van bepaalde gemeenschappelijke klinische stoornissen zoals auto-immune ziekten, kanker en atherosclerose. Om deze reden, modulerende macrofaag functie met, bijvoorbeeld, siRNA, is ontstaan als een aantrekkelijke methode voor de behandeling van deze stoornissen5,6,7. Hoewel veel vooruitgang is geboekt, is een grote uitdaging van siRNA gebaseerde behandeling strategie de specificiteit van de arme cel van systemisch toegediende siRNA en de onvoldoende siRNA ICT door macrofagen, die bijgevolg tot ongewenste bijwerkingen leiden. In vergelijking met gratis nucleïnezuur therapeutics die meestal geen optimale cel selectiviteit en leiden vaak tot uit-target bijwerkingen, drug-geladen nanodeeltjes (NPs), vanwege hun spontane neiging van worden gevangen door het reticuloendotheliaal systeem, kan worden ontworpen voor passieve targeting macrofagen in vivo, waardoor verbeterde therapeutische effectiviteit met minimale bijwerkingen8. Huidige NPs onderzocht voor de levering van molecules van RNA omvatten anorganische nanocarriers en verschillende liposomen polymeren9. Onder hen toont polyethyleneimine (PEI), een type van kationische polymeren staat bindend en nucleïnezuren condenserend in gestabiliseerde NPs, de hoogste RNA capaciteit9,10te leveren. PEI nucleïnezuren beschermt tegen aantasting van het enzymatische en nonenzymatic hun overdracht bemiddelt tussen de celmembranen en bevordert hun intracellulaire vrijlating. Hoewel aanvankelijk geïntroduceerd als een DNA levering reagens, PEI bleek later een aantrekkelijk platform voor in vivo siRNA levering, hetzij lokaal of systemisch9,10.
Superparamagnetische ijzeroxide nanodeeltjes (SPIONs) hebben aangetoond grote belofte in de medische biologie, vanwege hun magnetische eigenschappen, biocompatibiliteit, vergelijkbare grootte op biologisch belangrijke objecten, hoge oppervlakte-gebied-te-volumeverhouding, en gemakkelijk aan te passen oppervlak voor bioagent bijlage11. Bijvoorbeeld, vanwege hun potentiële nut als contrast agent en snelle opname door macrofagen, zijn SPIONs ontstaan als een favoriete klinische instrument om beeld weefsel macrofagen12. Terwijl de SPIONs zijn ook uitvoerig bestudeerd als nucleïnezuur levering voertuigen11,13,14,15, om onze kennis, bevat de literatuur weinig rapporten van SPIONs als een drager voor macrofaag-gerichte siRNA levering. Voor de levering van het gen door SPIONs, is hun oppervlak meestal bekleed met een laag van hydrofiel kationische polymeren waarop negatief geladen nucleic zuren kunnen worden via een elektrostatisch proces aangetrokken en vastgebonden. Hier presenteren we een methode voor de synthese van SPIONs waarvan oppervlak wordt gewijzigd met laag-moleculair-gewicht (10 kDa), vertakte PEI (PEI-SPIONs). Deze magnetische nanoplatforms zijn dan aangewend om te condenseren siRNA, vorming van PEI-SPION/siRNA complexen waarmee siRNA vervoer in de cel. We reden dat spontane fagocytose van SPIONs door de cellen van de reticuloendotheliaal systeem16, in combinatie met het sterke vermogen van bindende en PEI-SPIONs geschikt voor het efficiënte vervoer van siRNA in condenserend nucleic zuren door PEI, maakt macrofagen. De hier gepresenteerde gegevens ondersteunen de haalbaarheid PEI-SPION/siRNA-gemedieerde gene monddood maken in macrofagen in cultuur, alsmede in vivo.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>Verwarm in 37&deg;C waterbad voor gebruik</td></tr><tr><td>Fetaal bovien serum</td><td>Gibco</td><td>A31608-02</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline/streptomycine (1,5 ml)</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Tetrazolium-gebaseerde MTS-testkit</td><td>Promega</td><td>G3582</td><td>Voor cytotoxiciteitsanalyse</td></tr><tr><td>RAW 264.7-cellijn</td><td>Cell Bank of Chinese Academy of Sciences, Shanghai, China</td><td>TCM13</td><td></td></tr><tr><td>Weefselkweekplaten (6-well)</td><td>Corning</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Weefselkweekschotels (10 cm)</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>RNase-vrije buizen (1,5 ml)</td><td>AXYGEN</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugatubes (15 ml)</td><td>Corning</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Wistar-ratten</td><td>Shanghai Experimental Animal Center of Chinese Academy of Sciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bacillus Calmette&ndash;Gu&eacute;rin gevriesdroogd poeder</td><td>National Institutes for Food and Drug Control, China</td><td></td><td>voor het induceren van adjuvant artritis bij ratten</td></tr><tr><td>siRNA</td><td>GenePharma (Shanghai, China)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cy3-siRNA</td><td>RiboBio (Guangzhou, China)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polyethyleenimidee (10 kDa)</td><td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>E107079</td><td></td></tr><tr><td>Ammoniakwater</td><td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>A112077</td><td></td></tr><tr><td>Oleaanzuur</td><td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>O108484</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxide</td><td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>D103272</td><td></td></tr><tr><td>FeSO4&bull;7H2O</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>10012118</td><td></td></tr><tr><td>FeCl3&bull;6H2O</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>10011918</td><td></td></tr><tr><td>Dimercapto-succininezuur</td><td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>D107254</td><td></td></tr><tr><td>Ultrafiltratiebuis</td><td>Millipore</td><td>UFC910096</td><td></td></tr><tr><td>Tetramethylammoniumhydroxideoplossing</td><td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td><td>T100882</td><td></td></tr><tr><td>Deeltjesgrootte en zetapotentiaal analyzer</td><td>Malvern, Engeland</td><td>Nano ZS90</td><td></td></tr></tbody></table>

ijzeroxide polyethyleneimine-gecoate nanodeeltjes als een voertuig voor de levering van kleine mengend rna aan macrofagen in vitro en in vivo

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

Vanwege hun cruciale rol bij het reguleren van de immuunrespons, macrofagen hebben voortdurend onderwerp geweest van intensief onderzoek en vertegenwoordigen een veelbelovend therapeutisch doel in vele aandoeningen, zoals kanker, auto-immune ziekten en atherosclerose. RNAi-gemedieerde gene zwijgen is een waardevolle benadering van keuze sonde te manipuleren macrofaag functie; echter de transfectie van macrofagen met siRNA wordt vaak beschouwd als worden technisch uitdagende en paar methodologieën gewijd aan de overdracht van siRNA aan macrofagen zijn momenteel beschikbaar. Hier presenteren we een protocol superparamagnetische ijzeroxide polyethyleneimine-gecoate nanodeeltjes (PEI-SPIONs) te gebruiken als een voertuig voor de beoogde levering van siRNA aan macrofagen. PEI-SPIONs zijn in staat van bindende en volledig condenserend siRNA wanneer de gewichtsverhouding Fe: siRNA 4 bereikt en hoger. In vitro, deze nanodeeltjes kan efficiënt leveren siRNA in primaire macrofagen, alsmede in de macrofaag-achtige RAW 264.7 cellijn, zonder afbreuk te doen aan levensvatbaarheid van de cellen in de optimale dosis voor transfectie, en, uiteindelijk, ze veroorzaken siRNA-gemedieerde doel gene zwijgen. Naast wordt gebruikt voor in vitro siRNA transfectie, vormen PEI-SPIONs ook een veelbelovende instrument voor het leveren van siRNA macrofagen in vivo. Met het oog op de gecombineerde functies van magnetische eigenschap en het gen-zwijgen vermogen, worden systemisch toegediende PEI-SPION/siRNA deeltjes verwacht niet alleen te moduleren macrofaag functie, maar ook om macrofagen image gemaakt en bijgehouden worden. Kortom, PEI-SPIONs een eenvoudige, veilige en effectieve nonviral platform voor siRNA levering aan macrofagen vertegenwoordigen zowel in vitro als in vivo.

De grootte en de zeta potentieel van PEI-SPIONs bereid met dit protocol werden in het bereik van 29-48 nm (polydispersiteit index: 0.12 - 0.23) en 30-48 mV, respectievelijk. Ze waren stabiel in water bij 4 ° C voor meer dan 12 maanden zonder duidelijk aggregatie. Om te beoordelen hun siRNA bindend vermogen, waren PEI-SPIONs gemengd met siRNA op verschillende Fe: siRNA gewicht verhoudingen. Figuur 1 laat zien dat wanneer de gewichtsverhouding Fe: siRNA bereikt...

Beschrijven we een methode van het gebruik van polyethyleneimine (PEI)-gecoat superparamagnetische ijzeroxide nanodeeltjes voor transfecting macrofagen met siRNA. Deze nanodeeltjes kan efficiënt siRNA leveren aan macrofagen in vitro en in vivo en stilte doel genexpressie.

Ijzeroxide Polyethyleneimine-gecoate nanodeeltjes als een voertuig voor de levering van kleine Mengend RNA aan macrofagen In Vitro en In Vivo

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a ...

Deze maatregel kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen. Op het gebied van humanologie. Dat antwoord in de functie van macrofagen onder fysiologische eind aan pathologische voorwaarden.Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat polyethyleenimine gecoat efficiënt en vitro kan zonder in te leveren op cel. Onder optimale doses. De implicaties van deze techniek breiden zich uit tot therapie en diagnose van vele chronische ontstekingsstoornissen en kankers.Waar macrofagen een essentiële rol spelen bij de pathogenese. Het aantonen van de procedure zal Na Jia zijn. Een afgestudeerde student van mijn lab.En Kaixuan Wang een afgestudeerde student van Dr. Xiaohua's lab. Om 300 gram gemodificeerd superparamagnetic iron oxide nanodeeltjes of SPION's eerst te bereiden voeg 28 gram pharas chloride hexahydraat toe. En 20 gram pharas selfate heptahydraat tot een beker met 80 milliliter gedeïsized water.En gebruik een glazen leiding om stikstof in de oplossing te introduceren. Roeren tot de vaste stof is opgelost. Verwarm het reactiemengsel tot 72 graden Celsius met roeren bij 800 rotaties per minuut.En voeg 40 milliliter van 28% ammoniakwater toe aan het bekerglas. Na vijf minuten voeg negen milliliter van allylic zuur daling verstandig. En houd het mengsel op 72 graden Celsius gedurende drie uur met continu roeren.Aan het einde van de incubatie koel de resulterende oplossing voor kamertemperatuur. En neerslaan het mengsel via magnetische scheiding volgens standaard protocollen. Was vervolgens de SPION met neerslag drie keer met absolute ethylalcohol.En asperse het neerslag in 100 milliliter n-hexaan. Ter voorbereiding van dimercapto acrylzuur gemodificeerde SPION's voeg 800 milligram van de bondgenootzuur gemodificeerde SPION's. Verspreid in 200 milliliter n-hexaan en 400 milligram dimercapto acrylzuur verspreid in 200 milliliter aceton in een driehalskolf in een waterbad bij 60 graden Celsius.Voeg vervolgens 200 microliter triethylamine drop verstandig aan de kolf met roeren op 1000 rotaties per minuut en refluxing. Een zwart neerslag kan worden verkregen door magnetische scheiding na vijf uur. Gebruik vervolgens tetramethylammoniumhydroxide om de pH van de oplossing aan te passen voor homogene dispersie's van de hydrofiele SPION's in gedeïmiseerd water.Gedegenereerde polyethyleeneimine gecoate SPION's voegen de dimercapto acrylzuur gemodificeerde SPION's colloïdale oplossing drop verstandig in een 10 kilodalton polyethyleenimine oplossing. In een 500 milliliter drie hals kolf onder mechanische roeren bij 1000 rotaties per minuut gedurende twee uur. Voeg aan het einde van de incubatie de resulterende oplossing toe aan een ultrafiltratiebuis met een moleculair gewicht van 100 kilodalton en een inhoud van 15 milliliter.Het monster moet worden gebruikt totdat de resterende oplossing een volume van één milliliter bereikt. Voeg gedeïsized water toe aan de oplossing om het volume terug te brengen tot 15 milliliter. En centrafuse en rehydraat de oplossing nog tien keer zoals net aangetoond.Vervolgens filter de oplossing door een 22 micron filter voor opslag op vier graden Celsius. Om de siRNA nanodeeltjes voor te bereiden, voeg je eerst drie microliters vers bereide 20 micromolar siRNA-oplossingen toe aan vijf gelabelde RNA's gratis microcentroafused buizen. En voeg 0, 8, 1.6, 3.2, en 6.4 microgram van polyethyleenimine SPION's toe aan buizen die nul, één, twee, vier, en acht respectievelijk etiketteerden.Na het mengen met zachte pipetting, incubeer de monsters gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur om de polyethyleenimine SPION siRNA complexen te vormen. En bereid een drie procent agarose gel met ik zuiverheid agarose. Voeg aan het einde van de incubatie één microliter 6X DNA-laadbuffer per vijf microliter monster aan elke buis toe en meng zorgvuldig.Laad vervolgens alle monsters op de gel. En elektroforese uitvoeren met vijf volt per centimeter. Totdat de bromofenol blauwe kleurstof migreert twee derde van de lengte op de gel.Een dag voorafgaand aan de transfectie wassen een muis microfaag als RAW264.7 cel cultuur met PBS. En behandel de cellen met een milliliter van 25% trypsine gedurende vijf tot tien minuten bij 37 graden Celsius in een vijf procent koolstofdioxide incubator. Wanneer de meerderheid van de cellen zijn losgemaakt.Activeer de trypsine met vijf milliliter complete DMEN. Dan pippete de oplossing meerdere malen om eventuele celclusters te verspreiden. Breng de celsuspensie over naar een steriele conackelbuis van 15 milliliter voor centrifugatie.Dan opnieuw schorsen de cellen in vijf milliliter van verse volledige DMEN voor het tellen. Verdun de cellen tot een 4,5 keer tien tot de vierde cellen per milliliter van volledige DMEN-concentratie. En voeg twee milliliter medium toe aan elke put van een zes putplaat voor een 24-uurs incubatie in de couveuse van de celcultuur.De volgende dag de juiste verhouding van polyethyleenimine SPION siRNA nanodeeltjes in een 1,5 milliliter RNA stream microcentrifuge buis met zachte mengen zoals net aangetoond. En voeg het juiste volume van polyethyleenimine SPION siRNA nanodeeltjes complex aan elke put die is vervangen door een milliliter vers medium. Bereid polyethyleenimine SPION si complexen.in dit geval veel meer maanden polyethyleenimine SPION kan worden gebruikt Dus het minimaliseren van hun potentiële toxiciteit. Draai vervolgens de plaat voorzichtig om een gelijkmatige verdeling van de nanodeeltjes over de putbodems te bereiken. Breng de plaat terug naar de celcultuur incubator tot latere cellulaire update of gen knockdown deficiëntie analyse.Polyethyleenimine SPION's met een zeta potentieel van 30,5 en 37 millivolt vertonen geen schijnbare cytotoxiciteit bij concentraties tot 30 microgram ijzer per milliliter. Dat is ongeveer twee keer huren dan de concentratie die normaal wordt gebruikt voor celtransfectie. Polyethyleenimine SPION's zeta potentieel van 48 millivolt zijn echter giftig.Zelfs bij de laagste onderzochte dosis. Zoals geanalyseerd door flow cytometrie, meer dan 90% van de cellen kunnen worden doorgesneden met fluorescerend gelabeld polyethyleen SPION siRNA complexen op 15 microgram ijzer per milliliter. Beoordeling van de effecten van polyethyleenimine SPION siRNA concentraties op cellulaire internalisatie door het verpletteren van blauwe vlekken blijkt minimaal detecteerbare vlekken op 7,5 microgram ijzer per milliliter.Maar duidelijk zichtbare vlekken op 15 microgram ijzer per milliliter die niet toenemen bij hogere concentraties ijzer waarschijnlijk als gevolg van polyethyleenimine SPION siRNA opname verzadiging. Peritoneale macrofagen die zijn verwisseld met polyethyleenimine SPION's herbergen specifieke siRNA vertonen een aanzienlijke daling van de targe mRNA niveaus in vergelijking met niet-specifieke siRNA. Wat suggereert dat siRNA kan ontsnappen uit endocytische vlokjes in het cytoplasma om de RNA interferentie machines te bereiken.Verder na intraveneuze injectie van een enkele dosis polyethyleenimine SPION siRNA nanodeelicle complexen flocentimetrische analyse van CD11b positieve en CD3 positieve cellen blijkt een efficiëntere opname van de nanodeeltjes door CD11b uitdrukken macrofagen dan door CD3 positieve cellen op elk moment punt in alle van de onderzochte organen. Tijdens een poging tot deze procedure is het belangrijk om te onthouden om de polyethyleenimine SPION's voor te bereiden met een gemiddeld datapotentieel dat niet hoger is dan 37 millivolt en om de polyethyleenimine SPION siRNA-complexen op de lage ijzer-tot siRNA-ratio's voor te bereiden. Deze techniek vergelijkt de noodzaak voor onderzoekers om therapeutisch potentieel van het richten van macrofaag in dierlijke motoren van menselijke ziekten zoals en kanker te onderzoeken.

polyethyleneimine-coated-iron-oxide-nanoparticles-as-vehicle-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Herhaalde retro-orbitale injectie van kationische complexen liposomes/siRNA/ITSN-1s in muizen, elke 72 uur gedurende 24 dagen, efficiënt siRNA duplex leveren aan de muizenlong microvasculatuur verminderen ITSN 1s-mRNA en eiwitexpressie met 75%. Deze techniek is zeer reproduceerbaar in een dierlijk model, heeft geen bijwerkingen en sterfgevallen voorkomt.

Langdurige zwijgen van Intersectin-1s in Muis Longen door Herhaalde levering van een specifiek siRNA via kationische liposomen. Evaluatie van Knockdown Effects van Electron Microscopy

In dit protocol beschrijven we methoden om efficiënt muis macrofaag cellijnen te transfecteren met siRNA's met behulp van het Amaxa Nucleofector 96-well Shuttle Systeem, de macrofagen te stimuleren met lipopolysaccharide, en de effecten op de productie van inflammatoire cytokinen te monitoren.

Met behulp van RNA-interferentie te onderzoeken de aangeboren immuunrespons in muizenmacrofagen

Levering blijft de belangrijkste uitdaging voor de therapeutische toepassing van kleine interfererende RNA (siRNA). Dit protocol omvat het gebruik van een multifunctionele en biocompatibele siRNA afleverplateau, bestaande uit arginine en polyethyleenimine geënte poreuze silicium microdeeltjes.

Poreuze Silicon Micropartikels voor Levering van siRNA Therapeutics

Dit manuscript beschrijft de efficiënte, niet-virale aflevering van miR aan endotheelcellen door een PEI / MNP vector en de magnetisatie. Dus behalve genetische modificatie, deze benadering voor magnetische cellen leiding en MRI detecteerbaarheid. De techniek kan worden gebruikt om de kenmerken van de therapeutische cel producten te verbeteren.

voorbereiding en<em&gt; In Vitro</em&gt; Karakterisering van Magnetische miR-gemodificeerde endotheelcellen

Dit manuscript toont de uitputting van de genexpressie in de middendarm van de Duitse kakkerlak via orale inname van double-stranded RNA ingekapseld in liposomen.

Praktisch gebruik van RNA-interferentie: mondelinge levering van Double-stranded RNA in liposomen dragers voor kakkerlakken

Dit protocol illustreert een veilige en efficiënte procedure voor het wijzigen van de CD133+ hematopoietische stamcellen. De voorgestelde niet-virale, magnetische polyplex gebaseerde benadering verschaffen een basis voor de optimalisatie van de cel van de stam van de therapeutische effecten ook monitoring van het product door de overheid gereguleerde cel via magnetische resonantie beeldvorming.

Protocol voor MicroRNA overdracht naar volwassen beenmerg-afgeleide hematopoietische stamcellen om cel Engineering gecombineerd met magnetische Targeting

Weefsel-specifieke microRNA remming is een technologie die in het veld microRNA onderontwikkeld is. Hierin beschrijven we een protocol om met succes het remmen van de familie van de miR-181 microRNA in myoblast cellen uit het hart. Nanovector technologie wordt gebruikt voor het leveren van een microRNA spons die significante in vivo cardio-specifieke miR-181 familie remming toont.

In Vivo Nanovector levering van een hart-specifieke MicroRNA-spons

Hier beschrijven we een protocol voor het genereren van kationische nanoliposomes, die is gebaseerd op de methode van de droge-film en kan worden gebruikt voor de veilige en efficiënte levering van in vitro getranscribeerd boodschapper-RNA.

Generatie van kationische Nanoliposomes voor de efficiënte levering van In Vitro getranscribeerd Messenger RNA

Hier leveren we exogene kunstmatig gesynthetiseerde miRNA-nabootsingen aan de nier via staartaderinjectie van een niet-virale vector en polyethylenimine nanodeeltjes in verschillende nierziektemuismodellen. Dit leidde tot significante overexpressie van doelmiRNA in de nier, wat resulteerde in geremde progressie van nierziekte in verschillende muismodellen.

Levering van exogene kunstmatig gesynthetiseerde miRNA-nabootsing aan de nier met behulp van polyethylenimine nanodeeltjes in verschillende nierziektemuismodellen

Hier beschrijven we het protocol voor in vivo toediening van magnetische ijzeroxide nanodeeltjes die RNA-oligomeren vervoeren naar uitgezaaide borstkanker in diermodellen, waardoor een klinisch haalbare benadering wordt geboden voor de therapeutische uitschakeling van oncogene nucleïnezuren.

Monitoring van de accumulatie van nanodrugs bij borstkankermetastasen bij muizen

De bloed-hersenbarrière is een belangrijke hindernis bij het toedienen van therapieën voor glioblastoom, een ziekte waarvoor geen genezing bestaat. Hier rapporteren we een in vivo beeldgeleid therapeutisch nanoplatform voor ijzeroxide dat deze fysiologische barrière kan omzeilen op grond van de grootte en zich kan ophopen in de tumor.

Levering van nanodeeltjes van een oligonucleotidelading in een glioblastoom multiforme diermodel

Leer hoe je PEI-gecoate ijzeroxide nanodeeltjes gebruikt voor siRNA-afgifte aan macrofagen in vitro en in vivo. Deze methode maakt efficiënte gen-silencing mogelijk voor therapeutische toepassingen bij chronische ontstekingen.

Ijzeroxide Polyethyleneimine-gecoate nanodeeltjes als een voertuig voor de levering van kleine Mengend RNA aan macrofagen In Vitro en In Vivo (Video) | JoVE Journal

Ijzeroxide Polyethyleneimine-gecoate nanodeeltjes als een voertuig voor de levering van kleine Mengend RNA aan macrofagen In Vitro en In Vivo

Meer video's verkennen