Name: Mechanische micronisatie voor Lipoaspirates voor regeneratieve therapie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 2 s
Description: Leer een collageenasevrije methode voor mechanische SVF-isolatie uit lipoaspiraten voor regeneratieve geneeskunde. Dit protocol behoudt de native extracellulaire matrix en vermindert besmettingsrisico's.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door de National Nature Science Foundation uit China (81471881, 81601702, 81671931), de Stichting van de natuurwetenschappen van de provincie Guangdong (2014A030310155), en het beheerder Stichting van Nanfang ziekenhuis (2014B009, 2015Z002, 2016Z010, 2016B001).

Dit onderzoek werd goedgekeurd door de ethische Review Board in Nanfang ziekenhuis, Guangzhou, China. Adipeus weefsel werd bijeengezocht uit gezonde donoren die gaf schriftelijke geïnformeerde toestemming deel te nemen aan de studie. Alle dierproeven werden goedgekeurd door het Nanfang ziekenhuis institutionele Animal Care en gebruik Comité en uitgevoerd volgens de richtlijnen van de National Health and Medical Research Council (China).
1. ECM/SVF-gel voorbereiding
<ol><li>Oogst de vet.<ol>
<li>Liposuctie uitvoeren op een mens met een 3-mm MPS canule, waarin diverse scherpe kant gaten van 1 mm in diameter, aan de-0.75 atm voor zuigdruk.</li>
		<li>200 mL lipoaspirates in een steriele zak verzamelen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coleman vet te bereiden.<ol>
<li>Breng de lipoaspirates in vier 50 mL tubes en laat de geoogste vet zich nog steeds voor 10 min.</li>
		<li>Het vet op de bovenste laag in twee 50 mL tubes verzamelen met behulp van een pipet wide-tip over te dragen, en werp het vloeibare gedeelte op de onderste laag.</li>
		<li>Met behulp van 50 mL buizen, centrifugate de vetlaag bij 1.200 x g bij kamertemperatuur (RT) gedurende 3 minuten.</li>
		<li>De bovenste laag (ongeveer 80 mL) definiëren als Coleman vet.</li>
		<li>De bovenste 2/3 van de Coleman vet overbrengen in een tube 20 mL met behulp van een pipet wide-tip, en dit gedeelte definiëren als low-density vet.</li>
		<li>De lagere 1/3 van de Coleman vet overbrengen naar een andere tube van 20 mL met behulp van een pipet wide-tip, en dit gedeelte definiëren als high-density vet.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Het produceren van ECM/SVF-gel van low-density vet.<ol>
<li>Met behulp van twee 20 mL spuiten verbonden door een vrouw-naar-vrouw Luer-Lock connector (met een inwendige diameter van 2,4 mm), 20 mL van low-density vet intershift.</li>
		<li>Houd de verschuivende snelheid stabiel (bij 20 mL/s) en herhaal voor 6 x tot 8 x.</li>
		<li>Centrifugate het mengsel bij 2.000 x g bij RT gedurende 3 minuten.</li>
		<li>Het gedeelte van de olie bij de top in een tube 10 mL verzamelen met behulp van een pipet wide-tip op RT voor verder gebruik.</li>
		<li>Verzamelen van de kleverige substantie in de middenlaag, oftewel ECM/SVF-gel(Figuur 1),met behulp van een pipet wide-tip, en gooi de vloeistof op de onderste laag.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Het produceren van ECM/SVF-gel van high-density vet.<ol>
<li>Voeg 5 mL olie (verzameld uit stap 1.3.4) tot 15 mL high-density vet.</li>
		<li>Intershift van het gemengde vet tussen spuiten 6 x tot 8 x tot een flocculate wordt waargenomen binnen de emulsie.</li>
		<li>Centrifugate het mengsel bij 2.000 x g bij RT gedurende 3 minuten.</li>
		<li>Werp het gedeelte van de olie op de top.</li>
		<li>De kleverige substantie in de middenlaag (ECM/SVF-gel) te verzamelen door met behulp van een precisiepipet wide-tip en gooi de vloeistof op de onderste laag.</li>
		<li>Meng de ECM/SVF-gel uit stap 1.3.5 en 1.4.5.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. naakt muismodel ECM/SVF-gel Graft
<ol><li>Anesthetize van de naakte muizen (8 weken oud, vrouwelijke) met Isofluraan (1% - 3%) inademing verdoving op een dierlijke operatie kamer.</li>
	<li>De ECM/SVF-gel overbrengen in een 1 mL spuit.</li>
	<li>Sluit de 1 mL spuit met een botte infiltratie canule.</li>
	<li>Invoegen de canule subcutaan elke flank van de muis.</li>
	<li>Injecteren 0.3 mL van de ECM/SVF-gel.</li>
</ol>3. de weefsels oogsten op 3, 15 en 90 dagen na ECM/SVF-gel injectie
<ol><li>Anesthetize van de muizen met Isofluraan (1% - 3%) inademing verdoving.</li>
	<li>Offeren de muizen door de cervicale dislocatie methode.</li>
	<li>Maak een incisie op de middellijn van de muis de dorsale huid met chirurgische schaar.</li>
	<li>Ontleden en oogst de vet enten aan beide zijden van de muis. Het vet enten 's nachts in de paraformaldehyde 4% op RT insluiten.</li>
	<li>Uitdrogen van het weefsel in de toenemende concentraties van ethanol: 70% ethanol, twee wijzigingen, 1 h elke; 80% ethanol, een verandering, 1 h; 95% ethanol, een verandering, 1 h; 100% ethanol, drie wijzigingen, 1,5 h elke; xyleen, drie wijzigingen, 1,5 h elk.</li>
	<li>Het weefsel met paraffine (58-60 ° C), twee wijzigingen, elke 2U te infiltreren.</li>
	<li>Het weefsel inbedden in paraffineblokken. Secties bij een dikte van ongeveer 4 µm snijden en leg ze op dia's.</li>
</ol>4. de haematoxyline en eosine-kleuring
<ol><li>Deparaffinize de paraffine blok dia's door inweken hen in xyleen I, II en III (elke 10 min).</li>
	<li>De weefselsecties hydrateren door hen door dalende concentraties (100%, 100%, 95%, 80%, 70%) van ethanol baden voor elke 3 min.</li>
	<li>Spoel de weefselsecties in gedistilleerd water (5 min).</li>
	<li>Vlek de weefselsecties in Haematoxyline gedurende 5 minuten.</li>
	<li>Spoel de weefselsecties in stromend kraantjeswater voor 20 min. Decolorize in 1% zuur alcohol (1% HCl in 70% alcohol) voor 5 s. spoeling in stromend kraantjeswater totdat de secties zijn blauw weer.</li>
	<li>Voeg twee tot drie druppels van eosine Y kleurstof rechtstreeks op de dia's Pipetteer, en laat de kleurstof instellen voor 10 min.</li>
	<li>Het wassen van de dia's in leidingwater voor 1-5 min.</li>
	<li>Uitdrogen van de dia's in de toenemende concentraties (70%, 80%, 95%, 100%, 100%) van ethanol voor elke 3 min.</li>
	<li>Schakel de dia's in xyleen I en II voor elke 5 min.</li>
	<li>Monteer de dia's in de montage van de media.</li>
</ol>5. immunefluorescentie kleuring
<ol><li>Deparaffinize de weefselsecties in xyleen I, II en III (elke 5 min).</li>
	<li>De weefselsecties hydrateren door hen door verschillende concentraties (100%, 100%, 95%, 95%, 70%) van alcohol baden voor elke 3 min.</li>
	<li>Incubeer de secties in een 3% H2O2 oplossing in methanol op RT gedurende 10 minuten.</li>
	<li>Spoel de dia's 2 x met gedestilleerd water, 5 minuten elk.</li>
	<li>Drop de dia's in een dia mand. Voeg 300 mL 10 mM citraat buffer (pH 6.0) en de dia's bij 95-100 ° C gedurende 10 minuten uit te broeden.</li>
	<li>De dia's in RT gedurende 20 minuten afkoelen.</li>
	<li>Spoel de dia's 2 x met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS), 5 minuten elk.</li>
	<li>Voeg 100 µL van 10% foetale runderserum op de dia's, en broeden in een bevochtigde ruimte bij RT gedurende 1 uur.</li>
	<li>Incubeer de secties met primair antilichaam oplossing (cavia anti-muis Perilipin, 1:400) bij 4 ° C's nachts.</li>
	<li>Spoel de dia's met PBS 3 x, 5 minuten elk.</li>
	<li>Incubeer de secties met secundair antilichaam oplossing (geit anti-guinea pig-488 IgG) voor 2 h op RT.</li>
	<li>Spoel de dia's met PBS 3 x, 5 minuten elk.</li>
	<li>Het water rond de sectie met een schoon papieren zakdoekje vegen.</li>
	<li>4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) en Alexa Fluor 488-geconjugeerd isolectin in de cirkel ter dekking van de sectie op de dia vallen.</li>
	<li>Monteren van de coverslips en laat ze drogen in het donker.</li>
	<li>Het observeren van de dia's met een fluorescente microscoop.</li>
</ol>

<ol><li>Bateman, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Fat+to+Fight+Disease%3A+A+Systematic+Review+of+Non-Homologous+Adipose-Derived+Stromal%2FStem+Cell+Therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Using Fat to Fight Disease: A Systematic Review of Non-Homologous Adipose-Derived Stromal/Stem Cell Therapies.</a> Stem Cells. 36 (9), 1311-1328 (2018).</li>
<li>Baer, P. C., Geiger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+mesenchymal+stromal%2Fstem+cells%3A+tissue+localization%2C+characterization%2C+and+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived mesenchymal stromal/stem cells: tissue localization, characterization, and heterogeneity.</a> Stem Cells International. , 812693(2012).</li>
<li>Gimble, J. M., Katz, A. J., Bunnell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells for regenerative medicine.</a> Circulation Research. 100 (9), 1249-1260 (2017).</li>
<li>Halme, D. G., Kessler, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+regulation+of+stem-cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">FDA regulation of stem-cell-based therapies.</a> New England Journal of Medicine. 355 (16), 1730-1735 (2006).</li>
<li>Cheng, N. C., Wang, S., Young, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+spheroid+formation+of+human+adipose-derived+stem+cells+on+chitosan+films+on+stemness+and+differentiation+capabilities%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The influence of spheroid formation of human adipose-derived stem cells on chitosan films on stemness and differentiation capabilities.</a> Biomaterials. 33 (6), 1748-1758 (2012).</li>
<li>van Dongen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+intraoperative+procedures+for+isolation+of+clinical+grade+stromal+vascular+fraction+for+regenerative+purposes%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of intraoperative procedures for isolation of clinical grade stromal vascular fraction for regenerative purposes: a systematic review.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 12 (1), 261-274 (2018).</li>
<li>van Dongen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fractionation+of+adipose+tissue+procedure+to+obtain+stromal+vascular+fractions+for+regenerative+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">The fractionation of adipose tissue procedure to obtain stromal vascular fractions for regenerative purposes.</a> Wound Repair and Regeneration. 24 (6), 994-1003 (2016).</li>
<li>Mashiko, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+Micronization+of+Lipoaspirates%3A+Squeeze+and+Emulsification+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Mechanical Micronization of Lipoaspirates: Squeeze and Emulsification Techniques.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 139 (1), 79-90 (2017).</li>
<li>Feng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micronized+cellular+adipose+matrix+as+a+therapeutic+injectable+for+diabetic+ulcer%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Micronized cellular adipose matrix as a therapeutic injectable for diabetic ulcer.</a> Regenerative Medicine. 10 (6), 699-708 (2015).</li>
<li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+flap+survival+improvement+by+composition-selective+fat+grafting+with+novel+adipose+tissue+derived+product+-+stromal+vascular+fraction+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry+and+Biophysics+Research+Communication%22%5BJournal%5D)">Ischemic flap survival improvement by composition-selective fat grafting with novel adipose tissue derived product - stromal vascular fraction gel.</a> Biochemistry and Biophysics Research Communication. 495 (3), 2249-2256 (2018).</li>
<li>Tonnard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanofat+grafting%3A+basic+research+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Nanofat grafting: basic research and clinical applications.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (4), 1017-1026 (2013).</li>
<li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Extracellular+Matrix%2FStromal+Vascular+Fraction+Gel%3A+A+Novel+Adipose+Tissue-Derived+Injectable+for+Stem+Cell+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Adipose Extracellular Matrix/Stromal Vascular Fraction Gel: A Novel Adipose Tissue-Derived Injectable for Stem Cell Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 139 (4), 867-879 (2017).</li>
<li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Stromal+Vascular+Fraction+Gel+Grafting%3A+A+New+Method+for+Tissue+Volumization+and+Rejuvenation%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatologic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Adipose Stromal Vascular Fraction Gel Grafting: A New Method for Tissue Volumization and Rejuvenation.</a> Dermatologic Surgery. 44 (10), 1278-1286 (2018).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Long-Term+Volume+Retention+of+Stromal+Vascular+Fraction+Gel+Grafting+with+Enhanced+Angiogenesis+and+Adipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Improved Long-Term Volume Retention of Stromal Vascular Fraction Gel Grafting with Enhanced Angiogenesis and Adipogenesis.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 141 (5), 676-686 (2018).</li>
<li>Sun, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+stem+cell-derived+exosomes+in+tissue+engineering+and+neurological+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+the+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Applications of stem cell-derived exosomes in tissue engineering and neurological diseases.</a> Reviews in the Neurosciences. 29 (5), 531-546 (2018).</li>
<li>Allen, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grading+lipoaspirate%3A+is+there+an+optimal+density+for+fat+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Grading lipoaspirate: is there an optimal density for fat grafting.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 131 (1), 38-45 (2013).</li>
<li>Qiu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+Centrifuged+Lipoaspirate+Fractions+Suitable+for+Postgrafting+Survival%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Identification of the Centrifuged Lipoaspirate Fractions Suitable for Postgrafting Survival.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 137 (1), 67-76 (2016).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Stamcel-based regeneratieve therapie blijkt een grote potentiële voordelen in verschillende ziekten. ASC's zijn uitstekende therapeutische kandidaten omdat ze gemakkelijk te verkrijgen en de capaciteit voor weefselherstel en de regeneratie van nieuwe weefsels15. Er zijn echter beperkingen aan het uitbreiden van de klinische toepassing ervan, omdat het vereist gecompliceerde procedures om cellen en collagenase voor de verwerking van6te isoleren. Het is dus essentieel voor he...

Stamcel-therapieën bieden een paradigmaverschuiving voor weefselherstel en regeneratie zodat zij een alternatieve therapeutische regime voor verschillende ziekten1 bieden kunnen. Stamcellen (b.v., geïnduceerde pluripotente stamcellen en embryonale stamcellen) hebben een groot therapeutisch potentieel maar zijn beperkt als gevolg van cel regelgeving en ethische overwegingen. Adipeus afkomstige mesenchymale stromale/stamcellen (ASC's) zijn eenvoudig te verkrijgen van lipoaspirates en niet onderworpen aan dezelfde beperkingen; het is dus een ideale celtype voor praktische regeneratieve geneeskunde2geworden. Bovendien, ze zijn nonimmunogenic en hebben overvloedige hulpbronnen van autologe vet3.
ASC's zijn op dit moment verkregen voornamelijk door collagenase-gemedieerde vertering van het vetweefsel. De stromale vasculaire breuk (SVF) van vetweefsel bevat ASC's, Endotheel progenitor cel, pericytes en immuuncellen. Hoewel het verkrijgen van een hoge dichtheid van SVF/ASC's enzymatisch bleek te hebben gunstige effecten, regelt de wetgeving in verschillende landen strikt de klinische toepassing van cel-gebaseerde producten met behulp van collagenase4. Het vetweefsel met collagenase voor 30 min tot 1 h te verkrijgen van SVF cellen verteren verhoogt het risico van zowel exogene materiaal bij de voorbereiding en de biologische verontreiniging. De aanhangend cultuur en de zuivering van ASC's, die dagen tot weken duurt, vereisen specifieke laboratoriumapparatuur. Bovendien, in de meeste studies, SVF cellen en ASC's worden gebruikt in suspensie. Zonder de bescherming van de extracellulaire matrix (ECM) of een andere vervoerder, vrije cellen zijn kwetsbaar, veroorzaken een slechte cel bewaren na injectie en compromis de therapeutische resultaat5. Al deze redenen beperken de verdere toepassing van stamcel therapie.
Voor het verkrijgen van ASC's uit vetweefsel zonder collagenase-gemedieerde spijsvertering, verschillende mechanische processing procedures, met inbegrip van centrifugeren, mechanische hakken, versnipperen, pureren en hakken, geweest ontwikkelde6,7 , 8 , 9. deze methoden worden verondersteld te condenseren weefsel en ASC's door mechanisch verstoren volwassen adipocytes en hun olie-bevattende blaasjes. Deze preparaten, hoge concentraties van ASC's, toonde bovendien aanzienlijk therapeutisch potentieel als regeneratieve geneeskunde in dierlijke8,9,10 modellen.
In 2013 introduceerde Tonnard et al. de nanofat enten techniek, waarbij de overlegging van de geëmulgeerd lipoaspirates van intersyringe verwerking van11. De shearing kracht gemaakt door de intersyringe verschuiven kan selectief volwassen adipocytes breken. Op basis van hun bevindingen, ontwikkelde we een zuiver mechanisch verwerkingsmethode die verwijdert de meeste van de lipide en vloeistof in de lipoaspirates, verlaten alleen SVF cellen en gespreide ECM, oftewel ECM/SVF-gel12. Hierin beschrijven we de details van de mechanische proces van mens-afgeleide adipeus weefsel te produceren van de ECM/SVF-gel.

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 488-geconjugeerd isolectin GS-IB4</td><td>Molecular Probes</td><td>I21411</td><td></td></tr><tr><td>guinea pig anti-muis perilipin</td><td>Progen</td><td>GP29</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermofisher</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>pipet met brede punt</td><td>Celltreat</td><td>229211B</td><td></td></tr><tr><td>confocale microscoop&nbsp;</td><td>Leica&nbsp;</td><td>TCS SP2</td><td></td></tr><tr><td>nude muis&nbsp;</td><td>Southern Medical University</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>lichtmicroscoop&nbsp;</td><td>Olympus</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>50 mL buis</td><td>Corning</td><td>430828</td><td></td></tr><tr><td>steriele zak</td><td>Laishi</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>microtoom</td><td>Leica&nbsp;</td><td>CM1900</td><td></td></tr><tr><td>centrifuge</td><td>Heraeus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mechanische micronisatie voor lipoaspirates voor regeneratieve therapie

Mechanical Micronization of Lipoaspirates for Regenerative Therapy

Stromale vasculaire breuk (SVF) is uitgegroeid tot een regeneratieve instrument voor verschillende ziekten; wetgeving regelt echter strikt de klinische toepassing van cel-producten met behulp van collagenase. Hier presenteren we een protocol voor het genereren van een injecteerbare mengsel van SVF cellen en inheemse extracellulaire matrix uit vetweefsel langs zuiver mechanische weg. Lipoaspirates zijn een centrifuge gestoken en gesponnen op 1.200 x g gedurende 3 minuten. De middenlaag wordt verzameld en gescheiden in twee lagen (hoge dichtheid onderaan) en lage dichtheid vet op de top. De bovenste laag is direct geëmulgeerd door intersyringe verschuift, met een snelheid van 20 mL/s voor 6 x tot 8 x. Het geëmulgeerd vet wordt gecentrifugeerd bij 2.000 x g gedurende 3 minuten, en de kleverige substantie onder de olie laag is verzameld en gedefinieerd als de extracellulaire matrix (ECM) / SVF-gel. De olie in de bovenste laag wordt verzameld. Ongeveer 5 mL olie is toegevoegd aan 15 mL high-density vet en geëmulgeerde door intersyringe verschuift, met een snelheid van 20 mL/s voor 6 x tot 8 x. Het geëmulgeerd vet wordt gecentrifugeerd bij 2.000 x g gedurende 3 minuten, en de kleverige substantie is ook ECM/SVF-gel. Na de transplantatie van de ECM/SVF-gel in naakt muizen, is de prothese geoogst en beoordeeld door histologische onderzoek. Het resultaat geeft aan dat dit product heeft het potentieel om te regenereren in normale adipeus weefsel. Deze procedure is een eenvoudige, effectieve mechanische dissociatie te condenseren van de cellen van de FØROYA ingebed in hun natuurlijke ondersteunende ECM voor regeneratieve doeleinden.

Na het verwerken van het vet van de Coleman op ECM/SVF-gel, neemt het volume van de weggegooide olie 80% van het uiteindelijke volume, en slechts 20% van het vetweefsel onder de olie laag bewaard wordt beschouwd als ECM/SVF-gel(Figuur 1). ECM/SVF-gel heeft een gladde vloeistof-achtige textuur die het mogelijk maakt om te gaan via een fijne naald van 27 G; echter, Coleman vet bestaat uit een integraal obesitas structuur met grote vezels en kan...

Hier presenteren we een protocol om te verkrijgen stromale vasculaire breuk van adipeus weefsel door middel van een reeks van mechanische processen, waaronder membraanemulsificatie en meerdere centrifugations.

Mechanische micronisatie voor Lipoaspirates voor regeneratieve therapie

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of ...

Het verkrijgen van stromale vasculaire fracties, of SVF's, van lipoaspiraten vereist spijsvertering met collagenase, wat het risico op biologische besmetting verhoogt. Er moet een betere manier worden ontwikkeld om SVF te verkrijgen zonder collagenase. Deze technieken stellen ons in staat om de SVF te verkrijgen in zijn native extracellulaire matrix door middel van een eenvoudig mechanisch proces.Het aantonen van de procedure zal Xihang Chen zijn, een student van ons lab. Na het verkrijgen van de vetmonsters, breng de lipoaspiraten in een 50 milliliter buis, en laat het geoogste vet te equilibrate gedurende 10 minuten. Gebruik vervolgens een brede tip pipet om het vet uit de bovenste laag van de buis te trekken in een nieuwe 50 milliliter buis en spin vaststelling van het vet door centrifugatie.De bovenste laag in de buis is de Coleman vetfractie. Breng de bovenste 2/3 van de Coleman vet in een nieuwe 15 milliliter buis. Dit gedeelte wordt beschouwd als de lage dichtheid vet.Breng het onderste derde deel van het Coleman vet in een tweede 15 milliliter buis. Dit gedeelte wordt beschouwd als de hoge dichtheid vet. Voor de productie van een extracellulaire matrix stromale vasculaire f

mechanical-micronization-of-lipoaspirates-for-regenerative-therapy

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit protocol beschrijft de isolatie van vet-afgeleide stromale cellen van lipoaspirate en de oprichting van een 4 mm kritische grootte calvarial defect aan het skelet regeneratie te evalueren.

Reparatie van een kritische grootte Calvarial Defect Model Met behulp van Adipose-afgeleide stromale cellen geoogst uit Lipoaspirate

In 2001, onderzoekers van UCLA beschreef de isolatie van een populatie van volwassen stamcellen, genaamd vet-afgeleide stamcellen of ASC, uit vetweefsel. Dit artikel schetst de isolatie van ASC uit lipoaspirates behulp van een handleiding, enzymatische afbraak protocol met behulp van collagenase.

Handmatig Isolatie van vetweefsel-afgeleide stamcellen uit menselijke Lipoaspirates

Lymfeklieren zijn de immunologische weefsels die de immuunrespons orkestreren en een cruciaal doelwit zijn voor vaccins. Biomaterialen zijn gebruikt om lymfeklieren beter te richten en de levering van antigenen of hulpstoffen te controleren. Dit artikel beschrijft een techniek die deze ideeën combineert om biocompatibele polymeerdeeltjes in lymfeklieren te injecteren.

Intra-lymfeklierinjectie van biologisch afbreekbare polymeerdeeltjes

Hier presenteren we een protocol voor de productie van een adipeus weefsel afkomstige stromale vasculaire breuk en de toepassing ervan te verbeteren functies van de knie door het regenereren van kraakbeen-achtig weefsel in menselijke patiënten met artrose.

Protocol voor klinische adipeus weefsel afkomstige stromale vasculaire breuk oplevert potentiële regeneratie van het kraakbeen

Nauwkeurige openbaarmaking van methoden en protocollen is cruciaal voor grootschalige opname van stamceltherapieën. Hier presenteren we een protocol om van vetweefsel afgeleide regeneratieve cellen te isoleren, gebruikt voor een enkele intracaverneuze injectie als behandeling van erectiestoornissen (ED) na radicale prostatectomie (RP).

Isolatie van van vetweefsel afgeleide regeneratieve cellen voor de behandeling van erectiestoornissen na radicale prostatectomie

Hier presenteren we menselijke vetweefsel enzym-vrije micro-fragmentatie met behulp van een gesloten systeem apparaat. Deze nieuwe methode maakt het verkrijgen van sub-millimeter clusters van vetweefsel geschikt voor in vivo transplantatie, in vitro cultuur, en verdere celisolatie en karakterisering.

Menselijke vetweefsel micro-fragmentatie voor Celfenotyping en Secretome karakterisatie

Het huidige protocol beschrijft een verbeterde methodologie voor ADSC-isolatie, wat resulteert in een enorme cellulaire opbrengst met tijdwinst in vergelijking met de literatuur. Deze studie biedt ook een eenvoudige methode voor het verkrijgen van een relatief groot aantal levensvatbare cellen na cryopreservatie op lange termijn.

Techniek voor het verkrijgen van mesenchymale stamcel uit vetweefsel en stromale vasculaire fractiekarakterisering bij cryopreservatie op lange termijn

Mechanisch geïsoleerde stromale vasculaire fractie (SVF) in combinatie met een fibrine-hydrogel biedt een gemakkelijke en efficiënte drager voor levensvatbare, van vet afgeleide stromale cellen voor verschillende indicaties, waaronder weefselmanipulatie en/of wondgenezingsdoeleinden. Hier presenteren we de bereiding van een mechanisch SVF (mSVF)-fibrine hydrogelconstruct voor translationeel onderzoek en klinische toepassing.

De combinatie van mechanisch geïsoleerde stromale vasculaire fractie en fibrinehydrogel: een verwerkingsprotocol

Hier presenteren we een protocol dat autoloog vetweefsel kan transformeren in verschillende vetbestanddelen met verschillende fysisch-chemische eigenschappen en functies.

Innovatieve fractionering van vetweefsel voor het omzetten van vet in gespecialiseerde componenten

Dit protocol beschrijft de fabricage van oplosbare micronaaldpatches met α-lactalbumine nanomicellen geladen met capsaïcine. De methode biedt een reproduceerbare, minimaal invasieve benadering voor gerichte transdermale toediening van hydrofobe bioactieve stoffen aan vetweefsel, wat efficiënte lokale vetreductie faciliteert en mogelijk de toepassingen in obesitasbeheer uitbreidt.

Fabricage van oplosbare micronaaldpatches geladen met α-lactalbumine nanomicellen voor transdermale capsaïcineafgifte en vetweefselreductie

Leer een collageenasevrije methode voor mechanische SVF-isolatie uit lipoaspiraten voor regeneratieve geneeskunde. Dit protocol behoudt de native extracellulaire matrix en vermindert besmettingsrisico's.

Mechanische micronisatie voor Lipoaspirates voor regeneratieve therapie

Meer video's verkennen