Name: Een plaat competitie Assay als een snelle voorafgaande beoordeling van de onderdrukking van de ziekte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 23 s
Description: Leer een plaat competitie assay voor biologische bestrijding van bodemgebonden ziekten met Rhizoctonia solani. Deze snelle methode evalueert compost in twee tot drie dagen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De Vermont landbouw Experiment Station concurrerende Hatch programma VT-HO1609 gefinancierde onderzoek. Lynn Fang gebruikt de methode als onderdeel van haar M.S. proefschrift aan de Universiteit van Vermont6.

1. voorbereiden op voorhand
<ol><li>Master schimmel cultuur (testorganisme)<ol>
<li>Bestellen bij de American Type Culture Collection, microbiologie collectie9, door zijn teleomorph Thanatephorus cucumeris (Frank) (ATCC 10154) of MYA 4031.</li>
		<li>Alternatief: Verzamelen lokale isolaten, zoals gedaan door de auteurs. Zaailingen van rode radijs (Raphanus sativus) goed werken als een aas plant; bodem van een locatie die bekend is dat hebben een geschiedenis van demping-off of wortel rot veroorzaakt door R. solaniverzamelen. Zaaien van zaden in de bodem en isoleren van wortel laesies wanneer zaailingen 3 tot 4 weken oud zijn.<ol>
<li>Verwijderen van zaailingen uit bodem en spoel met leidingwater. Kijk voor bruine weefsel in het gebied van de hypocotyl tussen de bladeren en de wortel (Figuur 1).</li>
			<li>Gebruik een enkele scherpe scheermesje te snijden 1 cm segmenten van de hypocotyl of de hoofdmap die een bruine kleur hebben. Het gebruik van vlam-gesteriliseerde pincet dip van de segmenten in de 10%-oplossing van huishoudelijk bleekmiddel voor 1 min, gevolgd door een 10 s spoeling in steriel water. Opmerking: De boven- en onderkant van een steriele petrischaal zijn bruikbaar recipiënten voor deze stap.</li>
			<li>Gebruik vlam-gesteriliseerde pincet te dragen van de plant stukken aan de binnenkant van een keukenrol om pat droog en plaats op het oppervlak van een petrischaal met water agar (15 g in 1 L).</li>
			<li>Plaats de petrischaal in een plastic container met een deksel en Incubeer bij kamertemperatuur (ongeveer 20 ° C). Veeg de binnenkant van de container met 10% bleekwater of 75% ethanol en laat het droge lucht voordat u de schotel.</li>
			<li>Houd de isolaten in langdurige opslag op een minimale media maïsmeel agar (17 g in 1 L) schuin (bij 5 ° C).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58767/58767fig1.jpg"> Figuur 1: ziekte symptomen. Bodem met R. solani resulteert in fragmentarisch kieming en vestiging (links). Symptomen op radijs zaailingen optreden als bruine laesies op de hypocotyl (rechts). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58767/58767fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<ol start="2"><li>Aardappel dextrose agar platen (39 g in 1 L) voor entmateriaal voor deze plaat assay gebruiken.<ol>
<li>Stellen van een cultuur van de dochter van Rhizoctonia cultuur op aardappel dextrose agar een of twee dagen voor de bepaling, om te verzekeren het is reeds lang gevestigd op de plaat van de cultuur voor de bepaling. Start de dochter cultuur door overdracht van een klein stukje R. solani (10 mm doorsnede) van de master cultuur naar het midden van een verse plaat aardappel dextrose agar (Figuur 2). Opmerking: Werken in een laminaire flow-kap of veeg naar beneden een laboratorium bankje met 10% bleekwater of 75% ethanol om risico van besmetting te minimaliseren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Autoclaaf 25 mL reageerbuisjes met 10 mL aliquots gedestilleerd water (2 x aantal monsters).</li>
</ol>2. bereiding van de monsters op proef
<ol><li>Twee onafhankelijke 0,5 g monsters van elk monster compost aan 10 mL gesteriliseerde met autoclaaf water in proefbuizen 25 mL toevoegen. Schud de reageerbuisjes 's nachts.<ol>
<li>Label de reageerbuisjes met unieke sample nummers, en elk lid van het paar als een (verwijzing) of B (voorbeeld).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Toevoegen na 24 h, 1.5 g van gewone agar aan 90 mL gedestilleerd water in twee 125 mLconical kolven.</li>
	<li>Autoclaaf beide erlenmeyers met agar en het A monster van elk paar voor 20 min met de instelling van een langzame uitlaat.</li>
	<li>Na de autoclaaf, plaatst u de erlenmeyers met agar in een waterbad van 45 ° C totdat ze evenwicht (ongeveer 30 min bereiken). Zet elke steekproef slurries niet in het waterbad, totdat het is afgekoeld tot 45 ° C.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58767/58767fig2.jpg"> Figuur 2: illustratie van protocol. Stekkers van R. solani worden geplaatst op de petrischaaltjes met compost water extract. De diameter van de mycelial groei wordt gemeten na 1-2 dagen met de hulp van een stereo microscoop aan de resolutie en het contrast verbeteren. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58767/58767fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<ol start="5"><li>Giet de A monster (gesteriliseerde met autoclaaf referentie) compost drijfmest in de gesmolten agar van de A agar kolf. Swirl het verspreiden van compost in de agar.</li>
	<li>Giet de B monster (levende voorbeeld) compost drijfmest in de gesmolten agar van de B agar kolf. Swirl het verspreiden van compost in de agar.</li>
	<li>Giet het mengsel van elke kolf in vijf plastic petrischaaltjes die 100 mm diameter.</li>
	<li>Laat de platen koel 's nachts zodat de agar verhardt.</li>
</ol>3. Voeg de Rhizoctonia -uitdaging
<ol><li>Stukken van gelijke grootte van R. solani overbrengen met behulp van aseptische techniek in elk paar monster agar platen (3 tot 5 mm corkborer werkt goed om gelijke grootte stukken). Neem stukjes van de kolonie van de buitenmarge van de kolonie te verzekeren mycelium groeit actief. Opmerking: Werken in een laminaire flow-kap of veeg naar beneden een laboratorium bankje met 10% bleekwater of 70% ethanol.</li>
	<li>Incubeer de platen bij kamertemperatuur gedurende 1-2 dagen totdat de kolonie groei ongeveer halverwege aan de rand van de A-platen bereikt.</li>
</ol>4. meten van R. solani groei
<ol><li>Het meten van de straal van het mycelium in elke plaat tot de dichtstbijzijnde 1 mm met een duidelijk platte liniaal met behulp van een stereo microscoop met doorvallend verlichting. Opmerking: Schuine of donker veld verlichting zal gemakkelijker te zien en te meten van de transparante schimmeldraden. Zones van remming zijn op dit moment zichtbaar rond compost fragmenten in de B-plaat als de compost onderdrukkende is.</li>
	<li>Opnemen van de straal op drie plaatsen per plaat en berekenen van een gemiddelde van de drie om te dienen als een representatieve maatregel.</li>
	<li>Het gemiddelde van de B-platen aan de platen A aftrekken. Als B < A dan er zijn microben in de B-platen die onderdrukkende aan de R. solani pathogeen zijn.</li>
	<li>Verdeel de gemiddelde straal door het aantal dagen van de uitdaging om de maateenheden van relatieve onderdrukking als een percentage, mm mycelium per dag.</li>
</ol>

<ol><li>Gonzalez Garcia, G., Onco, M. A. P., Susan, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review.+Biology+and+systematics+of+the+form+genus+Rhizoctonia%5BTitle%5D)+AND+%22Spanish+Journal+of+Agricultural+Research%22%5BJournal%5D)">Review. Biology and systematics of the form genus Rhizoctonia.</a> Spanish Journal of Agricultural Research. 4 (1), 55-79 (2006).</li>
<li>Bonanomi, G., Antignani, V., Pane, C., Scala, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+soilborne+fungal+diseases+with+organic+amendments%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Suppression of soilborne fungal diseases with organic amendments.</a> Journal of Plant Pathology. 89, 311-324 (2007).</li>
<li>Noble, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+and+benefits+of+soil+amendment+with+composts+in+relation+to+plant+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Australasian+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Risks and benefits of soil amendment with composts in relation to plant pathogens.</a> Australasian Plant Pathology. 40, 157-167 (2011).</li>
<li>Wichuk, K. M., McCartney, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compost+stability+and+maturity+evaluation+-+a+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Civil+Engineering%22%5BJournal%5D)">Compost stability and maturity evaluation - a literature review.</a> Canadian Journal of Civil Engineering. 37, 1505-1523 (2010).</li>
<li>Alfano, G., Lustrato, G., Lima, G., Vitullo, D., Ranalli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+composted+olive+mill+wastes+to+predict+potential+plant+disease+suppressiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Control%22%5BJournal%5D)">Characterization of composted olive mill wastes to predict potential plant disease suppressiveness.</a> Biological Control. 3, 199-207 (2011).</li>
<li>Fang, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biological+indicators+of+compost-mediated+disease+suppression+against+the+soilborne+plant+pathogen+Rhizoctonia+solani%22">Biological indicators of compost-mediated disease suppression against the soilborne plant pathogen Rhizoctonia solani</a>. , University of Vermont. M.S. Thesis (2015).</li>
<li>Bonanomi, G., Antignani, V., Capodilupo, M., Scala, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+the+characteristics+of+organic+soil+amendments+that+suppress+soilborne+plant+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Biology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Identifying the characteristics of organic soil amendments that suppress soilborne plant diseases.</a> Soil Biology and Biochemistry. 42, 136-144 (2010).</li>
<li>Neher, D. A., Fang, L., Weicht, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecoenzymes+as+indicators+of+compost+to+suppress+Rhizoctonia+solani%5BTitle%5D)+AND+%22Compost+Science+and+Utilization%22%5BJournal%5D)">Ecoenzymes as indicators of compost to suppress Rhizoctonia solani.</a> Compost Science and Utilization. 25 (4), 251-261 (2017).</li>
<li>American Type Culture Collection. ATCC® Mycology Culture Guide. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.atcc.org/~/media/PDFs/Culture%20Guides/Mycology_Guide.ashx">https://www.atcc.org/~/media/PDFs/Culture%20Guides/Mycology_Guide.ashx</a> (2018).</li>
<li>Berns, A. E., Phillip, H., Narres, H. -D., Burauel, P., Vereecken, H., Tappe, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+gamma-sterilization+and+autoclaving+on+soil+organic+matter+structure+as+studied+by+solid+state+NMR%2C+UV+and+fluorescence+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Soil+Science%22%5BJournal%5D)">Effect of gamma-sterilization and autoclaving on soil organic matter structure as studied by solid state NMR, UV and fluorescence spectroscopy.</a> European Journal of Soil Science. 59, (2008).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

We weten uit eerder onderzoek, dat bepaalde compost zijn effectief in het onderdrukken van R. solani en dat de onderdrukkende effecten zijn te wijten aan de microben leven in de compost, niet de abiotische eigenschappen van compost6,8. Het gebruik van autoclaaf als een middel om te 'doden' microbiota is bekritiseerd, omdat het van invloed is op de koolstof-chemie van de media-10. Wij vergeleken het gebruik van de autoclaaf te vacu...

Rhizoctonia vertegenwoordigt een brede complex van schimmels, van welke Thanatephorus cucumeris (Frank) Donk (anamorph = Rhizoctonia solani Kühn) is de verwekker veroorzaken wortelrot en demping-off1. Rhizoctonia solani is een agressieve pathogenen en een saprophyte dat als sclerotia onder ongunstige milieu omstandigheden1 overleven kan. Dientengevolge, het heeft een wereldwijde distributie en ziekte kan veroorzaken op breed scala van plant gastheren met inbegrip van Solanaceae, Fabaceae, Asteraceae en Brassicaceae tot ernstige economische verliezen.
Compost heeft de capaciteit om de haven biocontrol agenten voor bepaalde fabriek ziekteverwekkers2. Echter niet alle compost zijn gelijk, noch zijn zij van invloed op alle ziekteverwekkers op dezelfde manier3. Hout gebaseerde koolstof heeft hogere lignine cellulose verhouding dan hooi of stro-koolstof compost gebaseerde. R. solani verkiest beschikbaar koolstof gevonden in stro. Biologische bestrijding schimmels, zoals Trichoderma spp., zijn daarentegen effectiever wanneer koolstof minder gemakkelijk beschikbaar is. Heilzaam schimmels en bacteriën tot compost kunnen onderdrukken plantenziekten door middel van competitie, antagonisme of het reguleren van de plant groei3. De voorgestelde bepaling detecteert voornamelijk antagonisme gemaakt door productie van antibiotica, ecoenzymes of chelatoren die schadelijk voor het pathogene agens oplevert zijn.
Plant bioassays zijn een goudstandaard te bepalen of de compost gunst of plant groei4afschrikken. Plant bioassays zijn echter tijdrovend (weken tot maanden) om uit te voeren die mogelijk langer dan gewenst en meer arbeid vereist te uittreksel van planten met wortels te kwantificeren van de ernst van het wortelstelsel. Relatief robuust, maar sneller (dagen) testen zou ideaal zijn voor kwaliteitscontrole-programma's. Het doel van deze paper is om aan te tonen van een relatief snelle en nauwkeurige test om te voorspellen onderdrukkende potentieel van compost. De methode was patroon na Alfano et al. 5 twee uitzonderingen na, compost extracten werden verdund en water agar werd gebruikt in plaats van aardappel dextrose agar (PDA). R. solani groeit snel op eenvoudige water agarmedia overwegende dat PDA bevorderd de groei van bacteriën en andere schimmels die de cultuur6besmet.
Deze test van de plaat dient als indicator voor onderdrukking die geldt voor een aantal plant ziekteverwekkers die overleven in de bodem als saprofyten met inbegrip van R. solani7, Alternaria vroege vergalt verwelken Fusarium, Phytophthora wortelrot en Pythium wortelrot. De plaat concurrentie bepaling is nuttig om een aantal van de compost producten bevatten gemeenschappen van microben die als biologische bestrijders van ziekteverwekkers van de bodem dienen van het scherm. De test was een van de meest consistente indicatoren van ziekte onderdrukking in commerciële compost producten6,8. Producten werden gekozen voor hun variatie in recept, vervaldatum en productieproces.

<table><tbody><tr><td>autoclavable narrow-neck glass conical flask</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-040D</td><td>125-mL</td></tr><tr><td>autoclavable glass testtubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-925J</td><td>25-mL</td></tr><tr><td>dehydrated granulated agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0145-17-0</td><td>500 g hoeveelheid</td></tr><tr><td>hittebestendige handschoenen</td><td>Fisher Scientific</td><td>MEMGG1314WL</td><td>meerdere merken beschikbaar</td></tr><tr><td>Parafilm (stroken van 2-3 cm breed)</td><td>Fisher Scientific</td><td>PM992 13-374-16</td><td>5 of 10 cm breedtes werken</td></tr><tr><td>wegwerpbare polystyreen petrischalen</td><td>Fisher Scientific</td><td>R80116</td><td>komt in sleeves van 20/st of dozen van 500</td></tr><tr><td>gedehydreerd aardappeldextrose-agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0013-15-8</td><td>komt in hoeveelheden van 100, 500 en 2000 gram</td></tr><tr><td>tafeltop reciprocal shaker</td><td>Thomas Scientific</td><td>1227Y31</td><td>andere modellen zullen werken</td></tr><tr><td>waterbad</td><td>ThermoScientific</td><td>S37363</td><td>5L algemeen doel</td></tr><tr><td>heldere liniaal, plat, minimaal 10 cm</td><td>Elk</td><td></td><td>gebruik metrische regel</td></tr><tr><td>ATCC-cultuur</td><td>American Type Culture Collection</td><td>ATCC 10154</td><td>teleomorf Thanatephorus cucumeris (Frank) (ATCC 10154) of MYA 4031;</td></tr><tr><td>lab tape</td><td>Fisher Scientific</td><td>15935</td><td>autoclaveerbaar en verwijderbaar, 1" breed bij voorkeur</td></tr><tr><td>waterbestendige marker</td><td>kantoor of wetenschappelijke leverancier</td><td>Sharpie fine tip</td><td>schrijf monstersnummer op tape</td></tr></tbody></table>

een plaat competitie assay als een snelle voorafgaande beoordeling van de onderdrukking van de ziekte

A Plate Competition Assay As a Quick Preliminary Assessment of Disease Suppression

Het doel was om te ontwikkelen en optimaliseren van een eenvoudige, betaalbare en effectieve bioassay op te sporen ziekte onderdrukkende capaciteit van een specifieke compost tegen soilborne schimmel Rhizoctonia solani. R. solani is een ziekteverwekker van een breed scala van plant hosts wereldwijd. De schimmel in de bodem als een saprophyte overleeft en groeit snel op eenvoudige water agarmedia. De bepaling van de plaat is een snelle methode om te vergelijken compost voor hun vermogen om te vertragen de groei van R. solani. De assay correleert ook goed met onderdrukking van andere soilborne schimmel ziekteverwekkers die als saprofyten in de bodem zoals Alternaria vroege vergalt, verwelken Fusarium, Phytophthora wortelrot en Pythium wortelrot overleven.

Resulterende compost moet stabiel en volwassen, twee termen die vaak uitwisselbaar zijn, dus het kan veilig worden verpakt en vervoerd, en niet oorzaak bijwerkingen tijdens haar eindgebruik4. Stabiliteit is een weerstand tegen afbraak en wordt meestal bepaald met behulp van indexcijfers van de microbiële activiteit. Algemene maatregelen van microbiële ademhaling kunnen compost stabiliteit maar niet noodzakelijkerwijs ziekte onderdrukking van een agressieve...

Gepresenteerd is een protocol voor een plaat competitie test om te bepalen of een specifieke compost is waarschijnlijk bevatten bacteriën en schimmels die onderdrukken van de groei van Rhizoctonia solani.

Een plaat competitie Assay als een snelle voorafgaande beoordeling van de onderdrukking van de ziekte

The goal was to develop and optimize a simple, affordable, and effective bioassay to detect disease suppressive ability of a specific compost against ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen met betrekking tot de biologische bestrijding van bodemgevoede plantenpathogenen. De gouden standaard voor het testen van materialen zoals compost is om een plant bioassay om te testen of het giftig is voor de planten. Dat duurt echter drie weken.Deze methode kan worden gedaan in ongeveer twee tot drie dagen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het eenvoudig, betaalbaar en effectief is. Deze test is een snelle screening van specifieke compost om de groei van Rhizoctonia solani te onderdrukken.Echter, deze test kan ook worden gebruikt tegen andere bodemgedragen plant pathogenen, zoals Fusariums, Pythiums, en Phytophthoras. Visuele demonstratie van deze methode is van cruciaal belang omdat het zorgt voor het isoleren en onderhouden van een zuivere cultuur van een schimmel, terwijl het vermijden van besmetting. Het aantonen van de isolatieprocedure zal Taylor Readyhough zijn, een afgestudeerde student van mijn laboratorium.Emma Wright, een studente van mijn laboratorium, zal de wedstrijdtest demonstreren. Om te beginnen zaaien rode radijszaden in de bodem waarvan bekend is dat ze een voorgeschiedenis van ziekte hebben veroorzaakt door R.solani. Na drie tot vier weken, verwijder de zaailingen uit de grond, en spoel ze met kraanwater.Met behulp van een scheermesje, snijd een centimeter segmenten van de hypocotyl en wortel die een bruine kleur hebben. Gebruik vervolgens vlamgesteriliseerde tangen om de segmenten gedurende een minuut in 10% bleekmiddeloplossing te dompelen. Spoel hierna de segmenten in steriel water.Gebruik vervolgens vlamgesteriliseerde tangen om de segmenten over te brengen naar een papieren handdoek. Dep de segmenten droog, en breng ze naar een petrischaaltje met water agar. Plaats de petrischaal in een container met een deksel en broed de segmenten op kamertemperatuur uit.Om een dochter cultuur vast te stellen, overdracht een van de segmenten naar het centrum van een verse plaat van aardappel dextrose agar. Daarna, autoclave 25-milliliter reageerbuizen met 10 milliliter water. Voeg twee monsters van 0,5 gram van elk testmonster toe aan een paar automatisch geschud testbuizen met 10 milliliter steriel water en schud de reageerbuizen 's nachts.Voeg na 24 uur 1,5 gram gewone agar en 90 milliliter gedestilleerd water toe aan een paar conische kolven. Na het autoclaven van de kolven, plaats ze in een 45-graden Celsius waterbad gedurende 30 minuten. Giet vervolgens het automatisch gelavende referentiemonster en het levende monster in de gesmolten agar.Giet de mengsels van elke fles in vijf petrischaaltjes. Om de inheemse microben te beschermen, is het belangrijk om de compost niet toe te voegen terwijl de agar te heet is. Laat de agar daarom afkoelen tot 45 graden Celsius voordat u de compost toevoegt.Met behulp van aseptische techniek, breng stukken van R.solani naar elk paar monster platen. Vervolgens, incubeer de platen op kamertemperatuur voor een tot twee dagen. Gebruik ten slotte een heldere, platte liniaal en een stereomicroscoop om de straal van het mycelium in elke plaat tot op de dichtstbijzijnde millimeter te meten.In dit protocol, extracten uit levende compost onderdrukt R.solani groei aanzienlijk meer dan autoclaved monsters, waaruit blijkt dat het effect was microbiële en niet op voedingsstoffen gebaseerd. Suppressiveness wordt gemeten als een vermindering van de groei in vergelijking met de autoclaved controle. De groei werd niet beïnvloed door de duur van de rijping of uitharding van de compost.Groei werd aanzienlijk beïnvloed door compost methode en recept ingrediënten, met name met vermicompost, windrow processen, en recepten met hardhout schors. Na de ontwikkeling ervan kan deze techniek een kandidaat zijn voor commerciële certificering van compost voor ziekte-onderdrukkende eigenschappen.

a-plate-competition-assay-as-quick-preliminary-assessment-disease

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Tregs zijn krachtige onderdrukkers van het immuunsysteem. Er is een gebrek van unieke oppervlakte markers om ze te definiëren, dus, de definities van Tregs zijn vooral functioneel. Hier beschrijven we een...

Menselijk In Vitro Onderdrukking als Screening Tool voor de erkenning van een vroege staat van Immune Imbalance

In this video, we describe a flow cytometry-based competitive binding assay to detect the interactions between the CXC Chemokine Receptor 4 (CXCR4) and its fluorescently-labeled natural ligand CXC Chemokine Ligand 12 (CXCL12), in the presence of a CXCR4-targeting small molecule. Incubating CXCR4-expressing cells with lower small molecule concentrations allows CXCR4-CXCL12 binding to some extent, which progressively declines upon a gradual increase in small molecule concentrations.

Competitive Binding Assay to Identify Compounds Disrupting Receptor-Ligand Interactions

This video demonstrates an assay for screening antimicrobial compounds that efficiently eliminate biofilms using a peg-plate. The methodology monitors the biofilm's metabolic state after treatment with antimicrobial compounds, facilitating the determination of the minimum biofilm eradication concentration.

A Peg Plate Biofilm Assay for Screening Antibacterial Agents

We beschrijven een kwalitatieve test voor bacteriële concurrentie gemedieerd door de...

Een Visual Assay om T6SS-gemedieerde Bacteriële Concurrentie Monitor

Hier beschrijven we cellulaire cytotoxiciteit en ronde infectiviteitsassays die zorgen voor een snelle en nauwkeurige screening van verbindingen om hun cellulaire cytotoxiciteit (CC50) bepalen en IC 50-waarden tegen WT en resistente HIV-1.

Snelle screening van HIV reverse transcriptase en integrase-remmers

Geneesmiddelresistentie voor gerichte therapeutica is wijdverbreid en de noodzaak om resistentiemechanismen te identificeren - voor of na de eerste klinische verschijnselen - is essentieel voor het geleiden alternatieve klinische strategieën. Hier presenteren we een protocol te koppelen afleiding van resistente lijnen in vitro sequentiebepaling ontdekking van deze mechanismen te bespoedigen.

Invoer van<em&gt; In Vitro</em&gt; Drug Resistance Testen: maximaliseren van het potentieel voor het blootleggen van klinisch relevante resistentiemechanismen

Dit manuscript wordt een geclusterde regelmatig Interspaced korte palindromische herhaalt (CRISPR) CRISPR-Cas9-gebaseerde methode voor eenvoudige en snelle onderzoek van de rol van meerdere kandidaat-genen in Acute myeloïde leukemie (AML) celproliferatie in beschreven parallel. Deze techniek is schaalbaar en kan worden toegepast in andere kanker cel beeldlijnen.

Onderzoek naar genetische afhankelijkheden met behulp van CRISPR-Cas9-concurrentie op basis van testen

Deze opsonophagocytic doden test wordt gebruikt om te vergelijken het vermogen van fagocytische immuuncellen reageren op en doden van de bacteriën op basis van verschillende behandelingen en/of voorwaarden. Klassiek, dient deze bepaling als de gouden standaard voor het beoordelen van effector functies van antilichamen tegen een bacterie als opsonin aan de orde gesteld.

Opsonophagocytic doden Assay te beoordelen van de immunologische reacties tegen bacteriële pathogenen

Aangezien GPCRs aantrekkelijke geneesmiddelendoelstellingen zijn, is GPCR ligandscreening dus onmisbaar voor de identificatie van loodverbindingen en voor deorphanisatiestudies. In de richting van deze inspanningen beschrijven we PRESTO-Tango, een open-source resource platform dat wordt gebruikt voor gelijktijdige profilering van voorbijgaande β-arrestin2 werving bij ongeveer 300 GPCRs met behulp van een TEV-gebaseerde reporter test.

Parallelle ondervraging van β-Arrestin2 Recruitment for Ligand Screening op een GPCR-Brede Schaal met presto-Tango Assay

Een stroomanalysesysteem voor op kralen gebaseerde multiplexed-assays dat een twee-reporter-uitlezing biedt, werd gebruikt voor de ontwikkeling van multiplex serologische en antilichaamneutralisatietests die tegelijkertijd neutraliserende IgG- en IgM-antilichamen voor SARS-CoV-2 kunnen meten.

Een Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG en IgM SARS-CoV-2 Neutralisatie assay voor een Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

Leer een plaat competitie assay voor biologische bestrijding van bodemgebonden ziekten met Rhizoctonia solani. Deze snelle methode evalueert compost in twee tot drie dagen.

Een plaat competitie Assay als een snelle voorafgaande beoordeling van de onderdrukking van de ziekte

Meer video's verkennen