Name: Mesenchymale stamcellen isolatie uit Pulp weefsel en co cultuur met kankercellen te bestuderen van hun interacties (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: Leer mesenchymale stamcellen isoleren uit pulpgeweefsel en co-kweken met prostaatkankercellen om hun interacties te bestuderen. Deze methode helpt onderzoekers kankergedrag in vitro te analyseren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Deze studie werd ondersteund door Yeditepe Universiteit. Alle gegevens en cijfers gebruikt in dit artikel werden eerder gepubliceerde34.

Schriftelijke toestemming van de patiënten werd verkregen na de goedkeuring van de institutionele ethiek Commissie.
1. DPSC isolatie en cultuur
<ol><li>Overdracht van verstandskiezen verkregen jongvolwassenen tussen 17 en 20 tot en met 15 mL tubes met de volledige Dulbecco bewerkt Eagle Medium (DMEM) [lage glucose DMEM media, aangevuld met 10% foetale runderserum (FBS) en 1% penicilline/streptomycine / Amfotericine (PSA) oplossing], binnen 8 uur na resectie. Houd het weefsel materiaal koud (4 ° C) tijdens de overdracht naar het voorkomen van potentiële celdood.</li>
	<li>Verwijderen van de pulp weefsel door steriele extractie pincet vanuit het midden van de tand zorgvuldig, plaatst u het pulp weefsel in het koude volledige DMEM medium in 10 cm weefselkweek gerechten, en gehakt ze in kleine stukjes (2-3 mm) door scalpel. Opmerking: Alle experimentele procedures moeten worden uitgevoerd onder steriele omstandigheden laminaire flow Hood. Deze niet-enzymatische techniek al eerder gebruikte21,22,23.</li>
	<li>Plaats kleine pulp weefsels binnen de Weefselkweek behandeld 6-Wells-platen en voeg 200 µL van volledige DMEM media ter dekking van elke kleine pulp weefsel stukken.</li>
	<li>Incubeer de weefselkweek putten bij 37 ° C in een atmosfeer van bevochtigde lucht (80% vocht) met 5% CO2 gedurende 2 uur om weefsel bijlage. Opmerking: Deze stap kan worden verlengd tot en met 3-4 h door het beheersen van de verdamping van de media.</li>
	<li>Voeg passende omvang (2-2,5 mL) van volledige DMEM medium de putjes en Incubeer bij 37 ° C in een atmosfeer van bevochtigde lucht met 5% CO2 voor cellen te verspreiden van het weefsel. Opmerking: De cellen worden zichtbaar na ongeveer 4 dagen en confluentie bereiken na 8-9 dagen.</li>
	<li>Wanneer cellen 80% confluentie bereiken, media verwijderen uit 6-Wells-platen, wassen met 2 mL fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en voeg toe 2 mL trypsine. Incubeer gedurende 2 min in een incubator bij 37 ° C met bevochtigde lucht sfeer en 5% CO2. Klik Voeg toe 2 mL van volledige DMEM medium gevolgd door 2 min incubatie voor de remming van de trypsine. Centrifugeer cellen bij 300 x g gedurende 5 min naar pellet cellen.</li>
	<li>De cellen van de passage naar de kolven in volledige DMEM media en winkel voor verdere experimenten. Voeg toe 15 mL volledige DMEM media aan de T-75 kolven en overdracht cellen van twee putjes van de plaat van de 6-well aan één T-75 kolven en Incubeer bij 37 ° C met bevochtigde lucht sfeer en 5% CO2.</li>
</ol>2. karakterisering van DPSCs
<ol><li>Morfologische analyses uitvoeren.<ol>
<li>Zaad-cellen (stap 1.6) in weefselkweek bekleed kolven (of 6-Wells-platen) in volledige DMEM medium voor ten minste 8 doorgangen naar het observeren van de morfologie van de cel.</li>
		<li>Visualiseer cellen door lichte Microscoop en morfologie van de fibroblast-achtige cel definiëren. Cellen moeten hechten aan de cultuur-gerechten en morfologie van de spindel-achtige cel. Opmerking: U kunt ook cellen kunnen worden gekweekt als afzonderlijke cellen voor maximaal 14 dagen in goed-platen te observeren van de kolonie vorming capaciteit die is een specifiek kenmerk van fibroblasten en MSCs.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Oppervlakte marker-analyses uitvoeren.<ol>
<li>Trypsinize van de cellen vanaf stap 1.7. Media verwijderen uit de T-75 weefselkweek kolf, wassen met PBS 2 mL en voeg toe 2 mL trypsine. Incubeer gedurende 2 min in een incubator bij 37 ° C met bevochtigde lucht sfeer en 5% CO2. Klik Voeg toe 2 mL van volledige DMEM medium gevolgd door 2 min incubatie voor de remming van de trypsine. Centrifugeer cellen bij 300 x g gedurende 5 min naar pellet cellen.</li>
		<li>Herstellen van de cellen met de 4% paraformaldehyde gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur in 1,5 mL buizen en daarna wassen hen met 500 µL van PBS 3 keer paraformaldehyde verwijderen.</li>
		<li>Incubeer vaste cellen met de antilichamen tegen CD29, CD34, CD14, CD45, CD90, CD105, CD166 en CD73 gedurende 1 uur bij 4 ° C in 100 µL van PBS. Opmerking: De concentratie van antilichaam gebruikt is 0,5 µg/mL. CD34, CD14 en CD45 worden gebruikt als negatieve markeringen, terwijl CD29, CD90, CD105, CD166 en CD73 worden gebruikt als positieve cel oppervlakte markeringen voor MSCs.</li>
		<li>Wassen van cellen 3 keer met PBS en gebruik van de respectieve secundaire antilichamen zoals fluoresceïne-isothiocyanaat (FITC), phycoerythrin (PE), etc. voor etikettering. Incubeer de cellen met de secundaire antilichamen 1:500 verdund in 100 µL van PBS gedurende 30 minuten bij 4 ° C en wassen 3 keer met PBS.</li>
		<li>Monsters in het donker voor stroom cytometry analyse houden en detecteren van positieve en negatieve kleuring door stroom cytometry. Opmerking: Gebruik onbevlekt cellen te regelen van de voorwaartse en zijdelingse scatter. Regelen populaties gating van positief gekleurd door met uitzondering van dode cellen, puin en un-gekleurde bevolking. Gebruik van 100 µm-mondstuk met 45 psi schede druk en 10.000 gebeurtenissen om positieve DPSCs vast door het organiseren van kanalen te verzamelen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Differentiatie van DPSCs uit te voeren.<ol>
<li>Zaad 1 × 104 cellen op 24-Wells-platen in DMEM media voltooien en incubeer gedurende 24 uur bij 37 ° C in een atmosfeer van bevochtigde lucht met 5% CO2.</li>
		<li>Formuleren van differentiatie media met behulp van concurreren DMEM medium als base media. Bereid osteogenic media door het mengen van 100 nM dexamethason, 10 mM β-glycerophosphate en 0,2 mM ascorbinezuur. Bereid chondrogenic media door het mengen van 1 × insuline-transferrine-selenium (ITS-G), 100 nM dexamethason 100 ng/mL transformerende groeifactor bèta (TGF-β), 14 μg/mL ascorbinezuur en 1 mg/mL bovien serumalbumine (BSA). Bereid adipogenic media door het mengen van 100 nM dexamethason, 5 μg/mL insuline, 0.5 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX) en 60 μM indomethacin. Opmerking: Differentiatie media kan bij 4 ° C gedurende ten minste één week worden bewaard.</li>
		<li>Wijzigen groei media osteo-, chondro-of adipo-genenreservoir differentiatie media en vernieuwen tweemaal per week gedurende twee weken.</li>
		<li>Bevestigen van differentiatie door von Kossa en Alcian blauw kleuring, enzymactiviteit (alkalische fosfatase activiteit), immunocytochemie en kwantitatieve polymerase kettingreactie (qPCR) analyses volgens de protocollen beschreven21.<ol>
<li>Uitvoeren van von Kossa en Alcian blauwe technieken op cellen die worden opgelost met 4% paraformaldehyde bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten wassen de vaste cellen met PBS en vlekken hen met de vonKossa kit volgens de aanbevelingen van de fabrikant te observeren van kalkaanslag .</li>
			<li>De Alcian blauwe kleurstofoplossing door het oplossen van 1.00 g Alcian blauwe kleurstof in 100 mL azijnzuur 3% (v/v) voor verdere kleuring voor te bereiden. Wassen van de vaste cellen met PBS en vlek cellen voor 30 min met Alcian blauwe oplossing. Visualiseer de gebeitst monsters door een lichte Microscoop.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. bereiding van voorwaarde Medium (CM)
<ol><li>Media van cellen uit stap 1.7 vervangen door verse volledige DMEM 24 h vóór CM collectie. Opmerking: Passage 2-4 is aanbevolen.</li>
	<li>Verzamelen voorwaarde medium (CM) van gekweekte DPSCs wanneer cellen 80% confluentie bereiken. Centrifugeer verzamelde media bij 300 x g gedurende 5 min te verwijderen afval weefsel materiaal en cel puin. Opmerking: Gebruik als alternatief, 0,2 µm spuit filters om puin verwijderen uit het medium van de voorwaarde.</li>
	<li>Supernatant verzamelen en opslaan bij-20 ° C voor verdere experimenten. Opmerking: Houd het supernatant bij-80 ° C voor langdurige opslag.</li>
</ol>4. behandeling van kanker cellen met CM
<ol><li>Cel levensvatbaarheid analyses uitvoeren.<ol>
<li>Zaad PC-3 cellen (menselijke prostaat kankercellen) op 96-wells-platen op een celdichtheid van 5 × 103 cellen per putje in DMEM voltooien en broeden in een bevochtigde ruimte bij 37 ° C en 5% CO2 gedurende 24 uur.</li>
		<li>Cellen met 10, 20, 30, 40 en 50% van de CM (v/v) gemengd met volledige DMEM gedurende 24 uur behandelen.</li>
		<li>Meten van de levensvatbaarheid van de cellen met behulp van 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxy-phenyl)-2-(4-sulfo-phenyl)-2H-tetrazolium (MTS)-assay zoals eerder beschreven24.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick einde labeling (TUNEL) analyses uitvoeren<ol>
<li>Zaad PC-3 cellen op 6-well celkweek platen op een celdichtheid van 2 × 105 cellen/goed en na een nacht bebroeden in een bevochtigde ruimte bij 37 ° C en 5% CO2 .</li>
		<li>Meng 20% CM (v/v) met volledige DMEM medium en toepassen op de cellen gedurende 24 uur.</li>
		<li>Trypsinize cellen en schorten in 50 μl van TUNEL reactiemengsel (labeling oplossing + enzym solution, voorzien van de kit) en Incubeer bij 37 ° C gedurende 60 minuten in een bevochtigde en 5% CO2 -sfeer. Opmerking: Voor trypsinebehandeling, Verwijder media van 6-well cel cultuur platen, wassen met 1 mL PBS en voeg 500 µL van trypsine. Incubeer gedurende 2 min in een incubator bij 37 ° C met bevochtigde lucht sfeer en 5% CO2. Voeg vervolgens 1 mL van volledige DMEM medium gevolgd door 2 min incubatie voor de remming van de trypsine. Centrifugeer cellen bij 300 x g gedurende 5 min naar pellet cellen.</li>
		<li>Spoelen met PBS en analyseren van cellen in PBS met behulp van stroom cytometry.</li>
	</ol>
</li>
	<li>QPCR-analyses uitvoeren.<ol>
<li>Zaad PC-3 cellen op 6-well celkweek platen op een celdichtheid van 2 × 105 cellen/goed en na een nacht bebroeden in een bevochtigde incubator bij 37 ° C en 5% CO2 .</li>
		<li>Meng 20% CM (v/v) met volledige DMEM medium en toepassen op de cellen gedurende 24 uur.</li>
		<li>Trypsinize cellen en cel pellet voor isolatie en cDNA synthese van RNA te verzamelen. Opmerking: Verwijder medium van 6-well cel cultuur platen, wassen met 1 mL PBS en voeg 500 µL van trypsine. Incubeer 2 min in een incubator bij 37 ° C met bevochtigde lucht sfeer en 5% CO2. Voeg vervolgens 1 mL van volledige DMEM medium gevolgd door 2 min incubatie voor de remming van de trypsine. Centrifugeer cellen bij 300 x g gedurende 5 min naar pellet cellen.</li>
		<li>QPCR volgens de eerder beschreven protocol25experimenten uitvoeren</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cel migratie van kankercellen uit te voeren.<ol>
<li>Zaad 1 × 105 PC-3 cellen op 12-Wells-platen en broeden in een bevochtigde incubator's nachts bij 37 ° C en 5% CO2.</li>
		<li>Kladcellen met een steriele 200 μl tip en wijzigen van middellange onmiddellijk met het verse medium met verschillende concentraties van CM [bijvoorbeeld10, 20, 30, 40 en 50% van de CM (v/v) gemengd met volledige DMEM].</li>
		<li>Observeren van krassen onder een omgekeerde Microscoop en foto's nemen op verschillende tijdsintervallen (0 en 24 h).</li>
		<li>Het meten van de kras sluiting met behulp van Image J software met behulp van de formule: <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/58825/58825eq1.jpg"> Opmerking: Open de kras afbeelding met Image J software. Teken een lijn die heeft dezelfde grootte als de balk van de schaal die al in de afbeelding bestaat. Klik op analyseren, stel schaal en observeren van de afstand in pixels als de vergroting van de getekende lijn. Schrijven van de grootte van de bar van de schaal naar het bekende afstand deel regelen eenheid (cm, pixels, enz.) en klik op ok. Ga naar de sectie analyseren opnieuw en klik op metingen. Dit zal eerst de grootte van de schaal-bar als de geselecteerde eenheid geven. Klik op een van de randen van kras en sleep tot het bereiken van het andere uiteinde van de kras. Noteer de waarde voor elk punt van de tijd (0 uur en 24 uur). Steek deze waarden in bovenstaande formule en bereken de kras sluiting.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. cel migratie door Indirect Contact van kankercellen en DPSCs
<ol><li>Zaad 3 × 104 DPSCs op 24-well plaat inzetstukken met 0.4 μm porie en broeden in een bevochtigde incubator's nachts bij 37 ° C.</li>
	<li>Zaad PC-3 cellen op 24-well op een celdichtheid van 5 × 10-4 platen en broeden in een bevochtigde incubator's nachts bij 37 ° C en 5% CO2.</li>
	<li>Kladcellen PC-3 met een steriele 200 μl tip, medium met verse medium wijzigen en inzetstukken uitvoering DPSCs naar PC-3 cellen te plaatsen.</li>
	<li>Observeren van cellen onder een omgekeerde Microscoop en foto's nemen op verschillende tijdsintervallen (0 en 24 h) voor het analyseren van cel migratie.</li>
</ol>6. samen cultuur Assay en Stroom Cytometry analyse
<ol><li>Label PC-3 cellen en DPSCs met behulp van PKH67 (groen) en PKH26 (rood) TL cel linker kleurstoffen, respectievelijk26.</li>
	<li>Trypsinize PC-3 en DPSCs cellen, respectievelijk. Media verwijderen uit T-75 weefselkweek kolf, wassen met PBS 2 mL en voeg toe 2 mL trypsine. Incubeer gedurende 2 min in een incubator bij 37 ° C met bevochtigde lucht sfeer en 5% CO2. Voeg toe 2 mL van volledige DMEM medium gevolgd door 2 min incubatie voor de remming van de trypsine.</li>
	<li>Centrifugeer cellen bij 300 x g gedurende 5 min, verwijder supernatant en resuspendeer cel pellets in de oplossing van de kleurstof bereid in verdunningsmiddel-C buffer geleverd door de kit (Zie Tabel van materialen).</li>
	<li>Incubeer de cellen in de oplossing van de kleurstof voor 10 min en beëindigen van de kleuring reactie door 100 µL van FBS toe te voegen. Centrifugeer cellen bij 300 x g gedurende 5 minuten, verwijder het supernatant en wassen van de cellen met volledige groeimedium voor co kweken.</li>
	<li>Plaat met het label cellen (5 × 10-4/goed) naar 6-Wells-platen op 1:1 verhouding (DPSCs: PC3). Handhaven mede gekweekte cellen in volledige DMEM.</li>
	<li>Verzamelen cellen na 24 uur of 48 uur incubatie periodes door centrifugeren van cellen bij 300 x g gedurende 5 min en wassen met PBS.</li>
	<li>Resuspendeer de cellen in 300 µL van fluorescentie-activated cell sorting (FACS) buffer in 5 mL ronde onder stroom cytometry buizen. Vortex te verspreiden van cel aggregaten vlak voor de analyse van het monster.</li>
	<li>Gebruik een spuitmond 100 µm met 45 psi schede druk. Opmerking: Zeer hoog stroomtarief kan verlagen de gevoeligheid van de fluorescentie detectie.</li>
	<li>Gebruik onbevlekt controle cellen en afzonderlijke gekleurde cellen om te passen passende vooruit en scatter laser gelijkspanning voor celtypes en compensatie zoals eerder vermeld27. Opmerking: Gebruik gating voor levende cellen uitsluiten cel puin, dode cellen, of aggregaten.</li>
	<li>10.000 gebeurtenissen (100.000 is beter) verzamelen om te bepalen percentage positieve groene DPSCs en rode PC-3 cellen door het organiseren van FL-1 (groen) en FL-2 (rood) kanalen.</li>
</ol>

<ol><li>Camberlain, G., Fox, J., Ashton, B., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells%3A+their+phenotype%2C+differentiation+capacity%2C+immunological+features%2C+and+potential+for+homing%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing.</a> Stem Cells. 25 (11), 2739-2749 (2007).</li>
<li>Demirci, S., Doğan, A., Şahin, F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDemirci%2C+S+%22Dental+Stem+Cells%22">Dental Stem Cells</a>. , Springer. 109-124 (2016).</li>
<li>Fox, J. M., Chamberlain, G., Ashton, B. A., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+into+the+understanding+of+mesenchymal+stem+cell+trafficking%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+haematology%22%5BJournal%5D)">Recent advances into the understanding of mesenchymal stem cell trafficking.</a> British journal of haematology. 137 (6), 491-502 (2007).</li>
<li>Chang, A. I., Schwertschkow, A. H., Nolta, J. A., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+mesenchymal+stem+cells+in+cancer+progression+and+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Current+cancer+drug+targets%22%5BJournal%5D)">Involvement of mesenchymal stem cells in cancer progression and metastases.</a> Current cancer drug targets. 15 (2), 88-98 (2015).</li>
<li>Dvorak, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumors%3A+wounds+that+do+not+heal%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tumors: wounds that do not heal.</a> New England Journal of Medicine. 315 (26), 1650-1659 (1986).</li>
<li>Lu, Y. -r, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+growth+inhibitory+effect+of+mesenchymal+stem+cells+on+tumor+cells+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+biology+%26+therapy%22%5BJournal%5D)">The growth inhibitory effect of mesenchymal stem cells on tumor cells in vitro and in vivo.</a> Cancer biology & therapy. 7 (2), 245-251 (2008).</li>
<li>Secchiero, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+display+anti-cancer+activity+in+SCID+mice+bearing+disseminated+non-Hodgkin%27s+lymphoma+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Human bone marrow mesenchymal stem cells display anti-cancer activity in SCID mice bearing disseminated non-Hodgkin's lymphoma xenografts.</a> PloS one. 5 (6), e11140(2010).</li>
<li>Hong, I. -S., Lee, H. -Y., Kang, K. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+and+cancer%3A+friends+or+enemies%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Mutation+Research%2FFundamental+and+Molecular+Mechanisms+of+Mutagenesis%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells and cancer: friends or enemies?</a> Mutation Research/Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. 768, 98-106 (2014).</li>
<li>Brennen, W. N., Chen, S., Denmeade, S. R., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+Mesenchymal+Stem+Cells+%28MSCs%29+at+sites+of+human+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Quantification of Mesenchymal Stem Cells (MSCs) at sites of human prostate cancer.</a> Oncotarget. 4 (1), 106(2013).</li>
<li>Klopp, A. H., Gupta, A., Spaeth, E., Andreeff, M., Marini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+dissecting+a+discrepancy+in+the+literature%3A+do+mesenchymal+stem+cells+support+or+suppress+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: dissecting a discrepancy in the literature: do mesenchymal stem cells support or suppress tumor growth.</a> Stem cells. 29 (1), 11-19 (2011).</li>
<li>Albini, A., Sporn, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumour+microenvironment+as+a+target+for+chemoprevention%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">The tumour microenvironment as a target for chemoprevention.</a> Nature Reviews Cancer. 7 (2), 139(2007).</li>
<li>Quante, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow-derived+myofibroblasts+contribute+to+the+mesenchymal+stem+cell+niche+and+promote+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">Bone marrow-derived myofibroblasts contribute to the mesenchymal stem cell niche and promote tumor growth.</a> Cancer cell. 19 (2), 257-272 (2011).</li>
<li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li>
<li>Mori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+osteogenic+differentiation+and+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+new+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: osteogenic differentiation and gene expression.</a> Annals of the new York Academy of Sciences. 1237 (1), 47-52 (2011).</li>
<li>Mori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenic+properties+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+biological+regulators+and+homeostatic+agents%22%5BJournal%5D)">Osteogenic properties of human dental pulp stem cells.</a> Journal of biological regulators and homeostatic agents. 24 (2), 167-175 (2010).</li>
<li>Kerkis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+a+population+of+immature+dental+pulp+stem+cells+expressing+OCT-4+and+other+embryonic+stem+cell+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of a population of immature dental pulp stem cells expressing OCT-4 and other embryonic stem cell markers.</a> Cells Tissues Organs. 184 (3-4), 105-116 (2006).</li>
<li>Potdar, P. D., Jethmalani, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dental+pulp+stem+cells%3A+applications+in+future+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22World+journal+of+stem+cells%22%5BJournal%5D)">Human dental pulp stem cells: applications in future regenerative medicine.</a> World journal of stem cells. 7 (5), 839(2015).</li>
<li>Ahmed, N. E. -M. B., Murakami, M., Hirose, Y., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+dental+pulp+stem+cell+secretome+for+Alzheimer%27s+disease+treatment%3A+an+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cells+international%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of dental pulp stem cell secretome for Alzheimer's disease treatment: an in vitro study.</a> Stem cells international. 2016, (2016).</li>
<li>Gorin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priming+dental+pulp+stem+cells+with+fibroblast+growth+factor-2+increases+angiogenesis+of+implanted+tissue-engineered+constructs+through+hepatocyte+growth+factor+and+vascular+endothelial+growth+factor+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cells+translational+medicine%22%5BJournal%5D)">Priming dental pulp stem cells with fibroblast growth factor-2 increases angiogenesis of implanted tissue-engineered constructs through hepatocyte growth factor and vascular endothelial growth factor secretion.</a> Stem cells translational medicine. 5 (3), 392-404 (2016).</li>
<li>Wakayama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+secreted+from+dental+pulp+stem+cells+show+multifaceted+benefits+for+treating+acute+lung+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Factors secreted from dental pulp stem cells show multifaceted benefits for treating acute lung injury in mice.</a> Cytotherapy. 17 (8), 1119-1129 (2015).</li>
<li>Doğan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+human+stem+cells+is+promoted+by+amphiphilic+pluronic+block+copolymers%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Differentiation of human stem cells is promoted by amphiphilic pluronic block copolymers.</a> International Journal of Nanomedicine. 7, 4849(2012).</li>
<li>Taşlı, P. N., Doğan, A., Demirci, S., Şahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boron+enhances+odontogenic+and+osteogenic+differentiation+of+human+tooth+germ+stem+cells+%28hTGSCs%29+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+trace+element+research%22%5BJournal%5D)">Boron enhances odontogenic and osteogenic differentiation of human tooth germ stem cells (hTGSCs) in vitro.</a> Biological trace element research. 153 (1-3), 419-427 (2013).</li>
<li>Yalvac, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+stem+cells+derived+from+human+third+molar+tooth+germs+of+young+adults%3A+implications+in+neo-vascularization%2C+osteo-%2C+adipo-and+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22The+pharmacogenomics+journal%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of stem cells derived from human third molar tooth germs of young adults: implications in neo-vascularization, osteo-, adipo-and neurogenesis.</a> The pharmacogenomics journal. 10 (2), 105(2010).</li>
<li>Doğan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sodium+pentaborate+pentahydrate+and+pluronic+containing+hydrogel+increases+cutaneous+wound+healing+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+trace+element+research%22%5BJournal%5D)">Sodium pentaborate pentahydrate and pluronic containing hydrogel increases cutaneous wound healing in vitro and in vivo.</a> Biological trace element research. 162 (1-3), 72-79 (2014).</li>
<li>Doğan, A., Yalvaç, M. E., Yılmaz, A., Rizvanov, A., Şahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+F68+on+cryopreservation+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+human+tooth+germ%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+biochemistry+and+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Effect of F68 on cryopreservation of mesenchymal stem cells derived from human tooth germ.</a> Applied biochemistry and biotechnology. 171 (7), 1819-1831 (2013).</li>
<li>Rizvanov, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+and+self-organization+of+human+mesenchymal+stem+cells+and+neuro-blastoma+SH-SY5Y+cells+under+co-culture+conditions%3A+A+novel+system+for+modeling+cancer+cell+micro-environment%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Interaction and self-organization of human mesenchymal stem cells and neuro-blastoma SH-SY5Y cells under co-culture conditions: A novel system for modeling cancer cell micro-environment.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 76 (2), 253-259 (2010).</li>
<li>Troiano, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiparametric+analysis+of+cells+with+different+mitochondrial+membrane+potential+during+apoptosis+by+polychromatic+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">Multiparametric analysis of cells with different mitochondrial membrane potential during apoptosis by polychromatic flow cytometry.</a> Nature protocols. 2 (11), 2719(2007).</li>
<li>Melzer, C., von der Ohe, J., Lehnert, H., Ungefroren, H., Hass, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cell+niche+models+and+contribution+by+mesenchymal+stroma%2Fstem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cell niche models and contribution by mesenchymal stroma/stem cells.</a> Molecular cancer. 16 (1), 28(2017).</li>
<li>Aguirre, A., Planell, J., Engel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cell%2Fmesenchymal+stem+cell+interaction+in+co-culture+and+its+implications+in+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+biophysical+research+communications%22%5BJournal%5D)">Dynamics of bone marrow-derived endothelial progenitor cell/mesenchymal stem cell interaction in co-culture and its implications in angiogenesis.</a> Biochemical and biophysical research communications. 400 (2), 284-291 (2010).</li>
<li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBogdanowicz%2C+DR+%22Biomimetics+and+Stem+Cells%22">Biomimetics and Stem Cells</a>. , Springer. 29-36 (2013).</li>
<li>Plotnikov, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-to-cell+cross-talk+between+mesenchymal+stem+cells+and+cardiomyocytes+in+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cellular+and+molecular%22%5BJournal%5D)">Cell-to-cell cross-talk between mesenchymal stem cells and cardiomyocytes in co-culture.</a> Journal of cellular and molecular. 12 (5a), 1622-1631 (2008).</li>
<li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+cell-cell+communication+in+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+journal%22%5BJournal%5D)">Studying cell-cell communication in co-culture.</a> Biotechnology journal. 8 (4), 395-396 (2013).</li>
<li>Brunetti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+expression+of+TRAIL+by+osteoblastic+differentiated+dental+pulp+stem+cells+affects+myeloma+cell+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+reports%22%5BJournal%5D)">High expression of TRAIL by osteoblastic differentiated dental pulp stem cells affects myeloma cell viability.</a> Oncology reports. 39 (4), 2031-2039 (2018).</li>
<li>Doğan, A., Demirci, S., Apdik, H., Apdik, E. A., Şahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+increase+prostate+cancer+cell+proliferation+and+migration+under+in+vitro+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+and+Cell%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells (DPSCs) increase prostate cancer cell proliferation and migration under in vitro conditions.</a> Tissue and Cell. 49 (6), 711-718 (2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Bijdrage van MSCs tumor milieu wordt geregeld door verschillende interacties met inbegrip van hybride cel generatie via cel fusies, entosis of cytokine en chemokinereceptoren activiteiten tussen stamcellen en kanker cellen28. Structurele organisatie, cel-cel interacties en secreted factoren bepalen kanker cel gedrag op het gebied van de bevordering van de tumor, progressie en metastase aan het omliggende weefsel. Goede ex vivo modelsystemen te onderzoeken van de mechanismen achte...

Mesenchymale stamcellen (MSCs), met de mogelijkheid van differentiatie en bijdrage aan de regeneratie van mesenchymale weefsels zoals botten, kraakbeen, spier, ligament, pees en adipeus, werden geïsoleerd van bijna alle weefsels in het volwassen lichaam1 , 2. dan ter verstrekking van weefsel homeostase door overlegging van de resident cellen in het geval van chronische ontsteking of een letsel, produceren ze vitaal cytokines en groeifactoren te orkestreren angiogenese, immuunsysteem en weefsel remodeling3. De interactie van MSCs met kanker weefsel is niet goed begrepen, maar accumuleren bewijs suggereert dat MSCs tumor initiatie, progressie en metastase4kunnen bevorderen.
Het homing vermogen van MSCs naar de gewonde of chronisch ontstoken gebied maakt hen een waardevolle kandidaat voor stamcel gebaseerde therapieën. Kanker weefsels, "nooit helende wonden", laat echter ook ontsteking cytokinen, pro-angiogenic moleculen en vitale groeifactoren, die MSCs naar de cancerogenous gebied5 aantrekken. Hoewel er beperkte rapporten waarop remmende effecten van MSCs kanker groei6,7, hun progressie van kanker en metastase bevorderende effecten uitgebreid zijn gemeld8. MSCs direct of indirect van invloed zijn op carcinogenese op verschillende manieren met inbegrip van onderdrukken van immune cellen, afscheidende groeifactoren/cytokines die ondersteuning bieden voor kanker celproliferatie en migratie, verbetering van de angiogenic activiteit en regulering epitheliale-mesenchymale overgang (EMT)9,10. Omgeving van de tumor bestaat uit verschillende celtypen, met inbegrip van kanker-geassocieerde fibroblasten (IGFA) en/of myofibroblasts, endotheliale cellen, adipocytes en immuuncellen11. Voor degenen zijn IGFA het meest voorkomende celtype in het gebied van de tumor die verschillende chemokines bevordering van groei en uitzaaiing van de kanker8afscheiden. Het is aangetoond dat het beenmerg-afgeleide MSCs in IGFA in het stroma tumor12 onderscheiden kunnen.
Tandmerg stamcellen (DPSCs), als de eerste tandheelkundige weefsel afkomstige MSCs gekenmerkt door Gronthos et al. 13 in 2000 en vervolgens grote schaal onderzocht door anderen14,15, express pluripotent markeringen zoals Oct4, Sox2en Nanog16 en kan onderscheid worden gemaakt in verschillende cel linages17. Gen- en eiwit expressie analyse bleek dat DPSCs produceren vergelijkbaar niveau van groeifactoren/cytokinen met andere MSCs zoals vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), de angiogenin, de fibroblast groeifactor 2 (FGF2), interleukine-4 (IL-4), IL-6, IL-10, stamcel factor (SCF), alsmede fms-achtige tyrosine kinase-3 ligand (Flt - 3L) die mogelijk bevorderen van angiogenese, immune cellen moduleren en ondersteunen van kanker cel proliferatie en migratie18,19,20 . Hoewel de interacties van MSCs met kanker milieu goed gedocumenteerd in de literatuur geweest, is de relatie tussen DPSCs en kankercellen niet geëvalueerd nog. In de huidige studie, wij opgericht co cultuur en voorwaarde middellange behandelingsstrategieën voor een zeer uitgezaaide prostaatkanker cellijn, PC-3 en DPSCs voor te stellen van potentiële actie van mechanisme van tandheelkundige MSCs in kanker progressie en metastase.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11885084</td><td>Voor celcultuur</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>16000044</td><td>Voor celcultuur</td></tr><tr><td>PSA</td><td>Lonza</td><td>17-745E</td><td>Voor celcultuur</td></tr><tr><td>Trypsine</td><td>Invitrogen</td><td>25200056</td><td>Voor celdissociatie</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Invitrogen</td><td>10010023</td><td>Voor wasbeurten</td></tr><tr><td>Dexamethason</td><td>Sigma</td><td>D4902</td><td>Component van differentiatiemedium</td></tr><tr><td>&beta;-Glycerofosfaat</td><td>Sigma</td><td>G9422</td><td>Component van osteogeen differentiatiemedium</td></tr><tr><td>Ascorbinezuur</td><td>Sigma</td><td>A4544</td><td>Component van osteo- en chondrogene differentiatiemedium</td></tr><tr><td>Insulin-Transferrine-Selenium (ITS &minus;G)</td><td>Invitrogen</td><td>41400045</td><td>Component van chondrogene differentiatiemedium</td></tr><tr><td>TGF-&beta;</td><td>Sigma</td><td>SRP3171</td><td>Component van chondrogene differentiatiemedium</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma</td><td>I6634</td><td>Component van adipogene differentiatiemedium</td></tr><tr><td>Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)</td><td>Sigma</td><td>I7018</td><td>Component van adipogene differentiatiemedium</td></tr><tr><td>Indomethacine</td><td>Sigma</td><td>I7378</td><td>Component van adipogene differentiatiemedium</td></tr><tr><td>MTS Reagens</td><td>Promega</td><td>G3582</td><td>Cellevensvatbaarheidsanalyses</td></tr><tr><td>TUNEL Assay</td><td>Sigma</td><td>11684795910</td><td>Apoptotische analyses</td></tr><tr><td>24-well plate inserts</td><td>Corning</td><td>3396</td><td>Voor trans-well migratie assay</td></tr><tr><td>PKH67</td><td>Sigma</td><td>PKH67GL</td><td>Voor co-cultuur celkleuring</td></tr><tr><td>PKH26</td><td>Sigma</td><td>PKH26GL</td><td>Voor co-cultuur celkleuring</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td>Voor celfixatie</td></tr><tr><td>von Kossa Kit</td><td>BioOptica</td><td>04-170801.A</td><td>Voor celkleuring (differentiatie)</td></tr><tr><td>Alcian blauw</td><td>Sigma</td><td>A2899</td><td>Voor celkleuring (differentiatie)</td></tr></tbody></table>

mesenchymale stamcellen isolatie uit pulp weefsel en co cultuur met kankercellen te bestuderen van hun interacties

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Kanker als meerstaps proces en gecompliceerde ziekte is niet alleen geregeld door individuele celproliferatie en groei maar ook gecontroleerd door tumor milieu en cel interacties. Identificatie van kanker- en stamcellen interacties, met inbegrip van wijzigingen in de extracellulaire omgeving, fysieke interactie en secreted factoren, kan de ontdekking van nieuwe therapie opties inschakelen. Wij combineren de bekende co cultuur technieken om een modelsysteem voor mesenchymale stamcellen (MSCs) en kanker cel interacties maken. In de huidige studie, werden tandmerg stamcellen (DPSCs) en PC-3 prostaatkanker cel interacties onderzocht door directe en indirecte samenwerking cultuur technieken. Voorwaarde medium (CM) verkregen uit DPSCs en 0.4 µm porie formaat trans-well membranen werden gebruikt bij het bestuderen van de paracrine activiteit. Co cultuur van verschillende celtypes werd samen uitgevoerd om te bestuderen van directe cel-cel interactie. De resultaten bleek dat CM verhoogd celproliferatie en daalde van apoptosis in celculturen van prostaatkanker. Zowel CM en trans-well systeem verhoogd cel migratie capaciteit van PC-3 cellen. Cellen met verschillende membraan kleurstoffen gekleurd werden zaadjes in de dezelfde kweekvat, en DPSCs deelgenomen aan een zelf-georganiseerde structuur met PC-3 cellen onder de voorwaarde van deze directe co cultuur. Over het geheel genomen de resultaten aangegeven dat mede cultuur technieken nuttig voor kanker en MSC interacties als een modelsysteem zijn kunnen.

Figuur 1 toont de algemene kenmerken van het MSC van DPSCs onder de kweekomstandigheden. DPSCs oefenen fibroblast-achtige cel morfologie na plating (figuur 1B). MSC oppervlakte antigenen (CD29, CD73, CD90, CD105 en CD166) zijn zeer uitgesproken terwijl hematopoietische markeringen (CD34, CD45 en CD14) zijn negatieve (Figuur 1 c). Wijzigingen op de morfologische en moleculair niveau aan osteo-, gerela...

Wij bieden protocollen voor evaluatie van mesenchymale stamcellen van tandmerg geïsoleerd en prostaatkanker cel interacties op basis van directe en indirecte co kweekmethoden. Voorwaarde medium en trans-well membranen zijn geschikt voor het analyseren van indirecte paracrine activiteit. Zaaien differentieel is gekleurd cellen samen een passend model voor directe cel-cel interactie.

Mesenchymale stamcellen isolatie uit Pulp weefsel en co cultuur met kankercellen te bestuderen van hun interacties

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het stamcelveld over de rol van volwassen stamcellen in de regulatie van kankercelgedrag. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het mogelijk maakt de evaluatie van kankercel-en stamcel interacties in vitro zonder het gebruik van levende organismen. Deze techniek heeft potentieel voor kankermetastase als het modellen van de bevorderende rol van volwassen stamcellen in kanker metastase aan harde weefsels zoals bot.Demonstratie van de procedure zal worden uitgevoerd door Huseyin Apdik, een post-doctoraal in mijn laboratorium. Begin met het gebruik van steriele extractie tangen om het pulpweefsel te verwijderen uit het centrum van verstandskiezen verkregen van jonge volwassenen in de leeftijd van 17 tot 20 jaar oud. Plaats het weefsel in koude complete DMEM in 10-centimeter weefsel cultuur gerechten en gebruik een scalpel om de monsters gehakt in twee tot drie millimeter fragmenten.Breng de stukken van elk gerecht in individuele putten van een weefselkweek behandeld zes-goed plaat en bedek de weefsels in elke put met 200 microliters van volledige DMEM. Laat de weefsels hechten aan de put bodems met een

mesenchymal-stem-cell-isolation-from-pulp-tissue-co-culture-with

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

De werkwijze beschreven isolatie en karakterisering van menselijke pulpa stamcellen (hDPSCs) door...

Isolatie, karakterisering en vergelijkende differentiatie van humane Dental Pulp stamcellen uit permanente tanden met behulp van twee verschillende methoden

This video showcases a technique for establishing a co-culture of trigeminal neurons and primary dental pulp cells using a transwell filter. In this physically separated condition, mesenchymal cells obtained from dental pulp tissue secrete paracrine signaling molecules that traverse through the pores, promoting the differentiation and migration of neurons towards the mesenchymal cells establishing a co-culture system.

Establishing a Co-Culture of Dental Pulp Cells and Trigeminal Neurons for Cross-Communication

Dit artikel beschrijft de bereiding van vers verkregen melanoomweefsel in primaire celculturen en hoe verontreinigingen van erytrocyten en fibroblasten uit de tumorcellen. Tot slot beschrijven we hoe...

Patiënt Derived Cell Cultuur en isolatie van CD133<sup&gt; +</sup&gt; Vermeende Cancer Stem Cells van Melanoom

Alvleesklierstamcellen (CSC's) kunnen worden uitgebreid in vitro met behulp van de verankeringsonafhankelijke sfeercultuurtechniek, wat een krachtig hulpmiddel is om CSC-biologie te bestuderen en kan dienen als de eerste stap om nieuwe CSC-gerichte therapieën te ontwikkelen. Hier wordt de methodologie voor het uitbreiden, analyseren en targeten van pancreas-CSC's geboden.

Studeren alvleesklier- Stamcel Kenmerken voor het ontwikkelen van nieuwe behandelingsstrategieën

De immuunmodulerende eigenschappen van menselijke mesenchymale stamcellen (MSC) lijken steeds belangrijker voor klinische toepassing. Het gebruik van een co-kweeksysteem van MSCs en perifeer bloed leukocyten vooraf gekleurd met de fluorescerende kleurstof carboxyfluoresceïne succinimidylester (CFSE), beschrijven we de in vitro beoordeling van MSC immunomodulatie bij effector leukocyt proliferatie en specifieke subpopulaties.

Beoordeling van de immuno-modulerende eigenschappen van humane mesenchymale stamcellen (MSC)

Menselijk hartweefsel herbergt multipotente perivasculaire precursor celpopulaties die geschikt zijn voor myocard regeneratie kunnen zijn. De hier beschreven techniek maakt de gelijktijdige isolatie en zuivering van twee multipotente stromale cel populaties geassocieerd met natieve bloedvat, dat wil zeggen CD146 + CD34 - pericyten en CD34 + CD146 - adventitia-cellen van de menselijke hartspier.

Isolatie van Perivasculaire Multipotent Precursor Cell Populaties van de Mens Cardiac Tissue

We hebben een permeabele microporeuze membraaninzet aangepast om het tumormicro-omgeving (TME) te imiteren. Het model bestaat uit een gemengde celcultuur, maakt een vereenvoudigde generatie van sterk verrijkte individuele celpopulaties mogelijk zonder het gebruik van fluorescente markering of celsortering, en maakt het mogelijk om intercellulaire communicatie binnen het TME te bestuderen onder normale of stressomstandigheden.

Een Mimic van de tumor micro: Een eenvoudige methode voor het genereren van verrijkte celpopulaties en Onderzoeken intercellulaire communicatie

Hier presenteren we een nieuwe toepassing van de bepaling van de aorta ring waar prelabelled mesenchymale cellen zijn mede gekweekte met rat aorta afkomstige endothelial netwerken. Deze nieuwe methode kunt visualisatie van mesenchymale stromale cellen (MSCs) homing en integratie met endothelial netwerken, kwantificering van netwerkeigenschappen en evaluatie van MSC immunophenotypes en gen-expressie.

De aorta Ring mede cultuur Assay: Een handig hulpmiddel om te beoordelen van het potentieel van de Angiogenic van mesenchymale stromale cellen In Vitro

Dit artikel biedt een stapsgewijze handleiding voor het opzetten van een primaire cultuur van stamcellen van tandpulp met behulp van de explantatiecultuurmethode en karakterisering van deze cellen op basis van ICSCRT-richtlijnen. De cellen die door dit protocol worden geïsoleerd, kunnen worden beschouwd als mesenchymale stamcellen voor verdere toepassingen.

Primaire cultuur van stamcellen van tandpulpa

Dit protocol legt de nadruk op de extractie, kweek en conservering van multipotente stamcellen uit tandpulp door middel van enzymatische vergisting. Bovendien toont het hun potentieel aan om te differentiëren in osteoblasten, adipocyten en chondrocyten, wat het belang van precisie en consistentie in het proces benadrukt.

Isolatie, cultuur en karakterisering van stamcellen van tandpulp uit menselijke loof- en permanente tanden

Leer mesenchymale stamcellen isoleren uit pulpgeweefsel en co-kweken met prostaatkankercellen om hun interacties te bestuderen. Deze methode helpt onderzoekers kankergedrag in vitro te analyseren.

Mesenchymale stamcellen isolatie uit Pulp weefsel en co cultuur met kankercellen te bestuderen van hun interacties

Meer video's verkennen