Name: In Vitro Kras Assay om aan te tonen van de gevolgen van arsenicum huid cel migratie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Leer de scratch assay voor wondgenezingsonderzoek met menselijke fibroblasten. Deze methode toont aan hoe arseen celmigratie beïnvloedt en biedt waardevolle inzichten voor klinische toepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Onderzoek gemeld in deze publicatie werd gesteund door het National Institute on minderheid gezondheid en gezondheid verschillen van de National Institutes of Health onder Award nummer U54MD012388. De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijk de officiële standpunten van de National Institutes of Health.

<ol><li>Diegelmann, R., Evans, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing%3A+an+overview+of+acute%2C+fibrotic+and+delayed+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+BioScience%22%5BJournal%5D)">Wound healing: an overview of acute, fibrotic and delayed healing.</a> Frontiers in BioScience. 9, 283-289 (2004).</li>
<li>Braiman-Wiksman, L., Solomonik, I., Spira, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+insights+into+wound+healing+sequence+of+events%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Novel insights into wound healing sequence of events.</a> Toxicologic Pathology. 35, 767-779 (2007).</li>
<li>Michelson, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMichelson%2C+A+%22Platelets%22">Platelets</a>. , 3rd edition, Waltham, Massachusetts. (2013).</li>
<li>Aikawa, M., Schoenbechler, M. J., Barbaro, J. F., Sadun, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+rabbit+platelets+and+leukocytes+in+the+release+of+histamine.+Electron+microscopic+observations%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Interaction of rabbit platelets and leukocytes in the release of histamine. Electron microscopic observations.</a> American Journal of Pathology. 63 (1), 85-98 (1971).</li>
<li>Liang, C., Park, A., Guan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+scratch+assay%3A+A+convenient+and+inexpensive+method+for+analysis+of+cell+migration+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">In vitro scratch assay: A convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro.</a> Nature Protocols. , 329-333 (2007).</li>
<li>Pinto, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bench-top+in+vitro+wound+assay+to+evaluate+wound+closure.+Applied%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Toxicology%22%5BJournal%5D)">A bench-top in vitro wound assay to evaluate wound closure. Applied.</a> In Vitro Toxicology. 2 (3), 151-156 (2016).</li>
<li>Pinto, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+mitigates+the+negative+effects+of+arsenic+contamination+in+an+in+vitro+wound+model%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+In+Vitro+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Estrogen mitigates the negative effects of arsenic contamination in an in vitro wound model.</a> Applied In Vitro Toxicology. 4 (1), 24-29 (2018).</li>
<li>Roubelakis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+plasma+%28PRP%29+promotes+fetal+mesenchymal+stem%2Fstromal+cell+migration+and+wound+healing+process%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich plasma (PRP) promotes fetal mesenchymal stem/stromal cell migration and wound healing process.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 10 (3), 417-428 (2014).</li>
<li>Shibata, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adiponectin+regulates+cutaneous+wound+healing+by+promoting+keratinocyte+proliferation+and+migration+via+the+ERK+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Adiponectin regulates cutaneous wound healing by promoting keratinocyte proliferation and migration via the ERK signaling pathway.</a> Journal of Immunology. 189 (6), 3231-3241 (2012).</li>
<li>Mendonca, R. J., Coutinho-Netto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+aspects+of+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Anais+Brasileiros+de+Dermatologia%22%5BJournal%5D)">Cellular aspects of wound healing.</a> Anais Brasileiros de Dermatologia. 84 (3), 257-262 (2009).</li>
<li>Beem, E., Segal, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+stability+and+sensitivity+of+cell+fluorescent+labels+when+used+for+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fluorescence%22%5BJournal%5D)">Evaluation of stability and sensitivity of cell fluorescent labels when used for cell migration.</a> Journal of Fluorescence. 23 (5), 975-987 (2013).</li>
<li>Gentry, P. R., Clewell, H. J. III, Greene, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+recent+advances+in+research+on+arsenic+cancer+risk+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Regulatory+Toxicology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The impact of recent advances in research on arsenic cancer risk assessment.</a> Regulatory Toxicology and Pharmacology. 69, 91-104 (2014).</li>
<li>Beamer, P. I., Klimecki, W. T., Loh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+children%27s+urinary+CC16+levels+with+arsenic+concentrations+in+multiple+environmental+media%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Environmental+Research+and+Public+Health.pii%3A+E521.2016%3A13%22%5BJournal%5D)">Association of children's urinary CC16 levels with arsenic concentrations in multiple environmental media.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health.pii: E521.2016:13. , (2016).</li>
<li>Robertson, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arsenic+in+ground-water+under+oxidizing+conditions%2C+southwest+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Geochemistry+and+Health%22%5BJournal%5D)">Arsenic in ground-water under oxidizing conditions, southwest United States.</a> Environmental Geochemistry and Health. 11, 3-4 (1989).</li>
<li>Foust, R. D., Mohapatra, P., Compton-O'Brian, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Groundwater+arsenic+in+the+Verde+Valley+in+central+Arizona%2C+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Geochemistry%22%5BJournal%5D)">Groundwater arsenic in the Verde Valley in central Arizona, USA.</a> Applied Geochemistry. 19, 251-255 (2004).</li>
<li>Uhlman, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aUhlman%2C+K+%22Arsenic+in+Arizona+Ground+Water%3A+Source+and+Transport+Characteristics%22">Arsenic in Arizona Ground Water: Source and Transport Characteristics</a>. , The University of Arizona. Tucson, AZ. Arizona Cooperative Extension, AZ 1453 (2008).</li>
<li>Agusa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+exposure+to+arsenic+from+drinking+water+in+Vietnam%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Human exposure to arsenic from drinking water in Vietnam.</a> Science of the Total Environment. , 488-489, 562-569 (2014).</li>
<li>Ayotte, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+temporal+variability+of+arsenic+in+groundwater+used+for+drinking+water+supply+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Factors affecting temporal variability of arsenic in groundwater used for drinking water supply in the United States.</a> Science of the Total Environment. , (2014).</li>
<li>Dummer, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geostatistical+modeling+of+arsenic+in+drinking+water+wells+and+related+toenail+arsenic+concentrations+across+Nova+Scotia%2C+Canada%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Geostatistical modeling of arsenic in drinking water wells and related toenail arsenic concentrations across Nova Scotia, Canada.</a> Science of the Total Environment. , (2014).</li>
<li>Sorg, T. J., Chen, A. S., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arsenic+species+in+drinking+water+wells+in+the+USA+with+high+arsenic+concentrations%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Research%22%5BJournal%5D)">Arsenic species in drinking water wells in the USA with high arsenic concentrations.</a> Water Research. 48, 156-169 (2014).</li>
<li>Beamer, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+Children%27s+Urinary+CC16+Levels+with+Arsenic+Concentrations+in+Multiple+Environmental+Media%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Environmental+Research+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Association of Children's Urinary CC16 Levels with Arsenic Concentrations in Multiple Environmental Media.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 13, (2016).</li>
<li>Pomari, E., Dalla Valle, L., Pertile, P., Colombo, L., Thornton, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracrine+sex+steroid+synthesis+and+signaling+in+human+epidermal+keratinocytes+and+dermal+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Intracrine sex steroid synthesis and signaling in human epidermal keratinocytes and dermal fibroblasts.</a> The FASEB Journal. 29 (2), 508-524 (2015).</li>
<li>Gotsulyak, Y., Kosach, R., Cherednyk, V., Tykhonkova, O., Khoruzhenka, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+cell+motility+evaluation+in+scratch+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers+and+Cell%22%5BJournal%5D)">Optimization of cell motility evaluation in scratch assay.</a> Biopolymers and Cell. 30, 223-228 (2014).</li>
<li>Goetsch, K. P., Niesler, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+scratch+assay+for+in+vitro+skeletal+muscle+wound+healing+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Optimization of the scratch assay for in vitro skeletal muscle wound healing analysis.</a> Analytical Biochemistry. 411, 158-160 (2011).</li>
<li>Harishkumar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revealing+the+mechanism+of+in+vitro+wound+healing+properties+of+citrus+tamurana+extract%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Revealing the mechanism of in vitro wound healing properties of citrus tamurana extract.</a> BioMed Research International. 13, Article ID 963457, 8 pages (2013).</li>
<li>Johnston, S. T., Simpson, M. J., McElwain, D. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+much+information+can+be+obtained+from+tracking+the+position+of+the+leading+edge+in+a+scratch+assay%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+Interface%22%5BJournal%5D)">How much information can be obtained from tracking the position of the leading edge in a scratch assay?</a> Journal of the Royal Society Interface. 11, 1-9 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Toepassing van deze bepaling biedt een high-throughput en tijdige evaluatie van cellulaire migratie en kunt direct vertalen naar complexe fysiologische systemen5,6,7. Om deze reden is de voorgestelde Bank-topmodel afgestemd en geoefend om te evalueren van de gevolgen van de verschillende therapeutische agenten en milieu-toxines voor wond genezing van6. De concentraties van arseen gebruikt in de huidige studie werden geacht milieu relevante door uitgebreide literatuurstudie van bekende blootstellingsniveaus en van retroactieve herziening van verschillende gegevens baseert14,15, 16,17,18,19,20,21. Gebruik van deze kras assay in vitro aangetoond dat de blootstelling aan een concentratie arseen binnen de hoge, maar ook vanuit milieuoogpunt relevant bereik, vertraagd wond sluiting (cellulaire migratie).
Dit topmodel van bank werkte ook te isoleren en bestuderen van een afzonderlijke cellijn (fibroblast) om verder te begrijpen hoe fibroblast migratie draagt bij aan de wond genezing resultaten. Bovendien is het moeilijk om te bestuderen van de functies van een afzonderlijke cellijn in complexe in-vivo systemen met vele andere cellen en weefsels aanwezig die de analyse verstoren kunnen. Daarnaast biedt de bepaling een middel voor het bereiken van semi-kwantitatieve percentage wond sluiting gegevens die kan worden gebruikt voor het richten van specifieke cellulaire mechanismen via welke verbindingen invloed op wondgenezing hebben kunnen. Bijvoorbeeld cellen die worden gebruikt in de scratch bepaling kunnen worden verzameld en opgeslagen in een gewenste reagens en gebruikt in de expressie van genen (signaal mRNA) of eiwit expressie testen22. Deze informatie kan nuttig zijn om de onderzoeker worden als ze proberen te begrijpen wat signalen of eiwitten grotendeels aan veranderingen in de cellulaire migratie in de aanwezigheid van verschillende behandelingen (bijvoorbeeld arseen)22 bijdragen kunnen.
Menselijke neonatale dermale fibroblasten werden geselecteerd voor dit werk op basis van hun rol in de wondgenezing. Echter dit kras assay-protocol is geïmplementeerd met behulp van verschillende celtypes en voor een aantal onderzoeksdoeleinden. Bijvoorbeeld, is de kras bepaling goedgekeurd op het gebied van oncologie voor het bestuderen van de remming van de migratie van chemotherapie drugs23; voor skeletspieren cel migratie, proliferatie en diffusie24; studie van het effect van plantenextracten op cellulaire migratie25; en om te begrijpen hoe Keratinocyt migratie en proliferatie bijdragen tot wond genezing9. Een eerdere papier door Pinto et al. geëvalueerd daarnaast de effecten van uranium (U) en platelet-rich plasma (PRP) op hDFn migratie met behulp van de kras assay-6. Het doel van dit werk was om te begrijpen welke waarnaar deze bepaling kan het testen van het effect van een agent gedacht te vertragen cellulaire migratie (U), evenals een agent dacht te versnellen van cellulaire migratie (PRP). Zoals kan worden gezien in het bovengenoemde werk en onderzoek door andere onderzoekers, toepassing van de kras bepaling heeft groot potentieel voor gebruik in verschillende experimentele modellen26. Ondanks de details binnen de methoden geleverd, worden variantie tussen onderzoekers en experimenten verwacht. Cellulaire migratie tarieven zullen bijvoorbeeld waarschijnlijk op basis van de cellijn in gebruik, naast de vereiste micronutriënten die nodig zijn voor de unieke celtypes schommelen. Veel van de belangrijke opmerkingen om hulp in cel opbrengst en levensvatbaarheid staan als notities in dit protocol. Het is echter sterk aanbevolen dat onderzoekers volgen de aanbevelingen van de fabrikant voor optimale groei-omstandigheden, en gebruik deze methode als aanvullende instructie voor de algemene cel cultuur werk.
Hoewel de kras bepaling zeer veelzijdig voor studie van cellulaire activiteit is; onvoorziene vertekeningen kunnen optreden in de meettechnieken. Bijvoorbeeld, wanneer u ImageJ handmatig traceren cel migratie fronten, kan variatie bestaan tussen gebruikers, die kunnen nauwkeurigheid en verzamelen van representatieve gegevens beperken. Ook opgemerkt moet worden dat migratie fronten blind aan de behandeling tot een minimum beperken gebruiker bias moeten worden gelezen. Bovendien handmatig identificeren van migratie fronten kan leiden tot misrekening van gemiddelde afstand reisde ontstaan door de vorming van de pseudopod door de cellen en hun vermogen om vorm focal verklevingen, die visueel misleidend kunnen zijn te bereiken. Op dezelfde wijze, het gebruik van TL "cel tracker" kleurstoffen op celoppervlak of nucleaire eiwitten te detecteren migratie onbedoeld cellen resulterend in onjuistheden bij het meten van cellulaire migratie na verloop van tijd kunnen vaststellen. Het is aanbevolen dat passende positieve en/of negatieve controles in het experiment te volledig ezels worden ingeschreven het effect van behandeling op de cellijnen. Praktijk van deze bepaling moet worden ingevuld als erkenning voor zijn beperkingen. Deze bepaling garandeert niet dat cellulaire migratie resultaten uit in vitro experimenten direct naar in vivo uitkomsten. vertalen zal Wond genezing en cellulaire migratie in een complexe levende systeem omvat een veelheid van celtypes en moleculaire signalen; elk daarvan heeft het potentieel om genezing reacties beïnvloeden.
Kortom, de kras assay gebleken om high-throughput screening van cellulaire migratie in reactie op veranderende omgevingen6,25. Wij specifiek gebruikt dit protocol om met succes de opsporing van wijzigingen in cellulaire migratie als gevolg van arseen blootstelling bij verschillende milieu relevante doses. Deze gegevens hebben verstrekt rechtvaardiging voor het gebruik van de kras assay voor verdere studie en evalueren de mechanistische trajecten van de cellulaire migratie in deze test en hoe deze trajecten zijn gewijzigd door arseen blootstelling.

Wondgenezing bestaat uit een complexe reeks van stappen waarbij diverse celtypen, signalering moleculen en onderdelen van de extracellulaire matrix1overlapping. Deze componenten werken samen in concert wond resolutie of reparatie, die uiteindelijk tot de vorming van een beschermende fibrotische litteken afhankelijk van de mate van trauma1 leidtte bereiken. Om vast te leggen van de afzonderlijke processen en functies van wond is genezing in één experiment moeilijk; afzonderlijke stappen binnen de wond genezing proces moeten worden geïdentificeerd en afzonderlijk getest. Onder de vele stappen van wondgenezing, het proces van cellulaire migratie heeft geweest als kritiek beschouwd bij de beoordeling van genezing tarieven2. Cellulaire migratie in alle fasen van wondgenezing kan worden waargenomen en dus noodzakelijk verder inzicht in hoe wijzigingen in cel migratie invloed op wond sluiting hebben kunnen. Cellulaire migratie is bijvoorbeeld te zien in beide vroege en late fase ontsteking, met bloed van stolling en bloedplaatjes aggregatie aan de wond site3. Deze gebeurtenissen voorkomen overmatig bloedverlies door de vorming van een tijdelijke verstopping te vullen gewonde gebieden verstoken van weefsel3. Bloedplaatjes in omloop zullen synthetiseren en afscheiden van vasoactieve mediatoren samen met Chemotactische factoren, welke samen signaal voor inflammatoire migratie (witte bloedcellen) aan de gewonde weefsel voor reparatie4. Opnieuw epithelialization gebeurt binnen uur van weefsel schade en omvat die betrekking hebben op de site van de wond door middel van activiteit en migratie van epitheliale keratinocyten om verdere besmetting te voorkomen of invasie van lichaamsvreemde deeltjes naar de wond site2. Deze voorbeelden leggen alleen een paar van de vele cel migratie functies gekoppeld wondheling.
De kras assay is beschreven en gebruikt om beter te begrijpen cel migratie en haar vele rollen in de wond genezing van5,6. Deze test wordt beschouwd als simplistisch, biedt high-throughput en maakt van de onderzoeker om representatieve cel migratiegegevens te verzamelen. Migratie testen hebben succesvol gebleken dat bepaalde verbindingen kunnen versnellen of vertragen van het tempo van de cellulaire migratie6. Bovendien zorgen deze test resultaten translationeel fysiologische informatie die kan worden gebruikt voor het formuleren van de doelstelling behandelingen, doseren van concentraties en genen van belang vóór in vivo experimenten. De bepaling vereist fundamentele cel cultuur technieken en leveringen, een cellijn van keuze en imaging technologie te vangen verkeer over tijd of beweging in reactie op de behandelingen.
De bepaling kan gemakkelijk worden gemanipuleerd of afgestemd op de behoeften van de onderzoeker. Echter, er zijn vier fundamentele vragen om te overwegen vóór experimenten. Welke algemene of specifieke vragen/die is/zijn de onderzoekers proberen te beantwoorden? Dit geldt voor de meeste hypothesen gedreven onderzoek; het is echter cruciaal voor deze test, omdat het bepalend zijn voor veel van de parameters die nodig zijn om nauwkeurig en volledig antwoord op de vragen. Wat cell lijn of cellijnen (als er meerdere) moeten worden gebruikt voor het vertegenwoordigen van het fysiologische systeem bestudeerd? Bijvoorbeeld, in een cutane wond genezing studie dermale fibroblast5,6,7, stamcel8of epidermale Keratinocyt9 overwogen kan worden te vertegenwoordigen de bevolking van de cel die normaal worden gevonden in overvloed in de huid weefsel10. Anderzijds kon neutrofiele granulocyten, macrofagen of andere ontstekingscellen in dit systeem te vertegenwoordigen cel migratie van andere componenten van de wondgenezing binnen de huid weefsel10worden geëvalueerd. Bovendien zal identificeren van de specifieke cellenvariëteit wordt geëvalueerd helpen om te identificeren welke reagentia zijn optimaal te gebruiken om de metabole activiteit van de cel. Hoe zal de cel migratie worden bijgehouden/beeld? Er zijn een aantal technieken voor het observeren van cel migratie in een maatkolf of plaat. Verven of fluorescently tagging van cellen en cellen herkennen met behulp van fluorescentie- of confocal imaging biedt bijvoorbeeld een sterk contrast, waarmee de onderzoeker om duidelijk te definiëren cellulaire vs. niet-cellulair locaties en cellulaire verkeer11 . Een andere gemeenschappelijke techniek, zoals beschreven in deze studie is het gebruik van de lichte microscopie van de omgekeerde met fase contrast6,7. Dit alternatief voor cel kleurstoffen en fluorescentie kan de gebruiker levende spoor cellen zonder terminaal cellen vóór imaging vast te stellen en ook zorgt voor het vastleggen van beelden van hetzelfde individuele wells bevattende gewonden monolayers van cellen over tijdstippen. Welke resultaten maatregelen zal worden gebruikt voor analyse? Met behulp van de afbeeldingen verzameld tijdens de studie, gegevens kunnen worden gegenereerd waarin wijzigingen in cellulaire migratie tarieven kunnen worden begrepen. In ons lab, microscopische opnamen die zijn gemaakt op de omgekeerde lichte Microscoop zijn geüpload naar de software van de analyse van de afbeelding en het percentage wond sluiting en opgeteld gebied onder de curve (AUC) worden berekend.
We zullen het specifieke gebruik van deze test ophelderen van wijzigingen in dermale fibroblast migratie in de aanwezigheid van een bekende milieu verontreiniging, arseen benadrukken. Arseen is een natuurlijk voorkomende metalloïde gevonden binnen de aardkorst. Verschillende locaties heb gevonden met verhoogde niveaus van arseen, die een risico vormen voor personen die in de buurt van deze locaties wonen. Dientengevolge, is voedsel en water bronnen gebleken hebben verhoogde niveaus van arseen besmetting, die vergroot u de kans voor particulieren om te worden blootgesteld aan arseen. Milieu arseen blootstelling is aangetoond dat langdurige gevolgen voor de gezondheid in menselijke populaties boven of zelfs onder de huidige Verenigde Staten Environmental Protection Agency (USEPA) Max verontreinigingen niveau (MCL) van 10 ppb (10 µg/L)12, 13. Hoewel de USEPA heeft ingesteld deze MCL en achtte het veilig om te drinken van grenzen, arseen concentraties die deze limiet overschrijden zijn niet ongewoon in waterbronnen wereldwijd. In de Verenigde Staten, zijn talrijke grondwater, goed water en bronnen gedocumenteerd te bevatten met betrekking tot de niveaus van arseen14. Montezuma goed bevat bijvoorbeeld in Verde Valley, AZ, 210 µg/L van arseen15. Grondwater rond de Verde River, AZ bevat 16 µg/L van arseen gemiddeld met piekwaarden 1,3 mg/L15,16te bereiken. Met name, arseen concentraties in vele putten in de rivier Verde water schuur hoger zijn dan 50 µg/L15,16. Met deze kennis, milieu relevante arseen concentraties waren geselecteerd dat bereik onder de MCL op 0.1 µM (7,5 ppb), boven het MCL op 10 µM (750 ppb) in de huidige studie14,15,16 , 17 , 18 , 19 , 20 .
De verzamelde informatie uit deze experimenten zal worden gebruikt als een vroege indicator van potentiële wijzigingen in cellulaire migratie tarieven in een in vivo wond verontreinigd met arseen. Daarna, signalering moleculen kunnen worden geselecteerd op basis van hun rol bij het vergemakkelijken van de wondgenezing en cellulaire migratie, en toekomstige kwantitatieve polymerase kettingreactie (qPCR) gebaseerd gen expressie experimenten kunnen worden ingesteld na afloop van de huidige studies. Als migratie tarieven in deze bepaling in aanwezigheid van arseen wijzigt, kunnen specifiek gen doelen die betrokken zijn bij cellulaire migratie het doel voor de schadelijke effecten van arseen, en dus mag het mechanisme van verstoring.

<table><tbody><tr><td>Class II A/B3 Biologische Veiligheidskasten</td><td>Forma Scientific</td><td>15201-816</td><td></td></tr><tr><td>Nitril Handschoenen</td><td>Kimberly-Clark</td><td>55082</td><td></td></tr><tr><td>Waterbad</td><td>Precision</td><td>Model 182</td><td></td></tr><tr><td>Omgekeerd Microscoop</td><td>Leica</td><td>Q080318</td><td></td></tr><tr><td>CPR Centrifuge</td><td>Beckman</td><td>349702</td><td></td></tr><tr><td>Analytische Weegschaal</td><td>Ohaus</td><td>I093 1125062111P</td><td></td></tr><tr><td>Weegpapier</td><td>VWR</td><td>H351125781212A</td><td></td></tr><tr><td>Biohazard zakken</td><td>Fisherbran</td><td>01-830A</td><td></td></tr><tr><td>Water Jacketed CO2 Incubator</td><td>Thermo Scientific</td><td>309739-31053</td><td></td></tr><tr><td>Hanks Balanced Salt Solution</td><td>Gibco</td><td>14175-095</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium</td><td>Gibco</td><td>10566-016</td><td></td></tr><tr><td>Fetaal Runderserum</td><td>Gibco</td><td>26140-079</td><td></td></tr><tr><td>Automatische Pipettor</td><td>Drummond</td><td>140685</td><td></td></tr><tr><td>p200 Pipet</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>p20 Pipet</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Denominator</td><td>Fisher Scientific</td><td>D59707</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blauw Stain</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>T75 weefselfles</td><td>Corning</td><td>430725U</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Conische Buizen</td><td>Fisherbrand</td><td>05-539-5</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Conische Buizen</td><td>VWR</td><td>21008-178</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Pipet</td><td>Fisherbrand</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>10 mL Pipet</td><td>Fisherbrand</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>Weefsel Marker</td><td>Securline</td><td>92167</td><td></td></tr><tr><td>Doekjes</td><td>Kintech</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Fisher</td><td>63-67-0</td><td></td></tr><tr><td>Niet-Filter Pipet Tips</td><td>Fisherbrand</td><td>16160210</td><td></td></tr><tr><td>Bleekmiddel</td><td>Great Value</td><td>220-04</td><td></td></tr><tr><td>96-well</td><td>Falcon</td><td>353915</td><td></td></tr><tr><td>Cryovial Rack</td><td>Nalgene</td><td>5030-0505</td><td></td></tr><tr><td>Hemacytometer</td><td>Gizmo Supply</td><td>B00SCOGY56</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Gibco</td><td>12605-028</td><td></td></tr><tr><td>Conische Buizen Rack</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>12-well plate</td><td>Corning</td><td>3598</td><td></td></tr><tr><td>Afval Beker</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>1 mL Pipet</td><td>Fisherbrand</td><td>13-678-11B</td><td></td></tr><tr><td>Lijnrechte Ruler</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Human neonatal dermal fibroblasten (hDFn)</td><td>lot: 1734, 2902</td><td>106-05n</td><td></td></tr><tr><td>Rstudio Statistisch Software</td><td></td><td>ver: 3.5.1</td><td></td></tr><tr><td>Image J</td><td>NIH</td><td>ver: 1.8.0_112</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro kras assay om aan te tonen van de gevolgen van arsenicum huid cel migratie

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

Inzicht in de fysiologische mechanismen van wondgenezing heeft jarenlang de focus van het lopende onderzoek. Dit onderzoek is rechtstreeks vertaalt van veranderingen in de klinische normen gebruikt voor de behandeling van wonden en dalende morbiditeit en mortaliteit voor patiënten. Wondgenezing is een complex proces dat vraagt om strategische cel- en weefseltransplantaties interactie en functie. Een van de vele kritisch belangrijke functies van de wondgenezing is de individuele en collectieve cellulaire migratie. Op schade migreren verschillende cellen uit het bloed, omringende bindweefsel en epitheliale weefsels snel naar de site van de wond door middel van chemische en/of fysieke stimuli. Deze reactie van de migratie kunt grotendeels dicteren de resultaten en het succes van een genezende wond. Inzicht in deze specifieke cellulaire functie is belangrijk voor translationeel geneeskunde die kan leiden tot verbeterde wond genezing van resultaten. Hier beschrijven we een protocol dat wordt gebruikt om cellulaire migratie beter te begrijpen als het gaat om de wondgenezing, en hoe de veranderingen in de cellulaire omgeving dit proces kunnen aanzienlijk veranderen. In dit voorbeeld studie, waren dermale fibroblasten gegroeid in media aangevuld met foetale runderserum (FBS) als enkelgelaagde culturen in weefselkweek kolven. Cellen werden aseptisch overgebracht in Weefselkweek behandeld 12-Wells-platen en uitgegroeid tot 100% samenvloeiing. Bij het bereiken van samenvloeiing, waren de cellen in de enkelgelaagde verticaal krabde met behulp van een p200 Pipetteer tip. Arseen verdund in kweekmedia aangevuld met FBS werd toegevoegd aan individuele putjes op ecologisch relevante doses variërend van 0.1-10 M. beelden werden gevangen elke 4 uren (h) over een periode van 24 uur met behulp van een omgekeerde lichte Microscoop te observeren van cellulaire migratie (wond sluiting). Beelden werden afzonderlijk geanalyseerd met behulp van de software van de analyse van de afbeelding en procent wond sluiting werd berekend. Resultaten tonen aan dat arseen wondgenezing vertraagt. Deze techniek biedt een snelle en goedkope eerste scherm voor evaluatie van de effecten van verontreinigingen op de wondgenezing.

Omvang van de steekproeven (n) voor alle groepen van de behandeling was n = 28. Cellen werden met succes gekweekte volgende aseptische technieken en lab protocollen (Figuur 1). Uniforme krassen werden waargenomen van alle fracties van de behandeling met de gemiddelde kras breedte meten van 0,8 mm 0.4 mm (Figuur 2). Controlegroepen had een gemiddelde opgeteld oppervlakte onder de curve-waarde van 1,355.83; 0,01 µM als behandelgroepen had een gemiddelde vatte gebied onder de curve-waarde van 1,366.21; 0.1 µM als behandelgroepen had een gemiddelde opgeteld gebied onder de curve-waarde van 1,326.24, 1.0 µM als de behandelde groep hadden gemiddeld vatte gebied onder de curve-waarde van 1,295.10; en ten slotte de 10 µM zoals behandelde groep had een gemiddelde opgeteld oppervlakte onder de curve-waarde van 535.12, die statistisch lager was in vergelijking met alle andere groepen (p < 0,05) (Figuur 3). R-programma voor statistische analyse werd gebruikt voor het uitvoeren van een one-way ANOVA met een Tukey post hoc aanpassing om statistische verschillen tussen groepen van de behandeling (p < 0,05) te bepalen.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58838/58838fig2.jpg"> Figuur 2: vertegenwoordiger kras assay beelden over een periode van 20u. Beelden A-D vertegenwoordigen cellulaire migratie van de cellen; afbeeldingen E-H vertegenwoordigen cellulaire migratie van cellen besmet met 1.0 µM als; beelden L vertegenwoordigen cellulaire migratie van cellen besmet met 10 µM als. Van deze beelden is het duidelijk dat de cellulaire migratie in aanwezigheid van arseen is vertraagd. De controle-afbeeldingen tonen een volledig "genezen" kras na 20u, terwijl de andere twee als-behandelgroepen niet "genezen werden". De 10 µM als behandeling geremd volledige sluiting helemaal na 24 h. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58838/58838fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58838/58838fig3.jpg"> Figuur 3: arseen vertraagt cellulaire migratie in de scratch assay. Beelden werden gemaakt over een periode van 24 uur te observeren wijzigingen in cellulaire migratie tarieven in aanwezigheid van uiteenlopendeconcentratiesverkrijgbaar van arseen. RAW-beelden zijn geanalyseerd met behulp van een geautomatiseerde software (bijvoorbeeldin MATLAB), welke in eerste instantie gemeten wond breedte, dan berekend percentage sluiting en tenslotte gebied onder de curve (AUC). Foutbalken vertegenwoordigen de standaardfout van het gemiddelde. De 10 µM als de behandelde groep statistisch vertraagd cellulaire migratie van menselijke dermale fibroblasten neonatale (hDFn), blijkt uit een statistisch lagere waarde van de AUC, in vergelijking met alle andere behandelgroepen een one-way ANOVA met een Tukey post hoc aanpassing (p < 0,05). Statistische verschillen worden vertegenwoordigd door de letters "A" en "B", die zijn verkregen door het gebruik van de methode compacte brief Display beschikbaar in R-programma. Behandelingen die het niet eens met een gemeenschappelijke brief zijn statistisch significant van elkaar (p < 0,05). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58838/58838fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>

Deze studie richt zich op een in vitro model voor wond genezing (kras assay) als een mechanisme om te bepalen hoe milieu aanwezige contaminanten zoals arsenicum invloed cellulaire migratie. De resultaten tonen aan dat deze in vitro -assay snelle en vroege aanwijzingen van wijzigingen in cellulaire migratie vóór in vivo experimenten biedt.

In Vitro Kras Assay om aan te tonen van de gevolgen van arsenicum huid cel migratie

Understanding the physiologic mechanisms of wound healing has been the focus of ongoing research for many years. This research directly translates into ...

Cellulaire migratie is een kritisch wondgenezingsproces dat de uitkomst van een genezende wond drastisch kan veranderen. Dit protocol stelt onderzoekers in staat om het effect van verschillende verbindingen op cellulaire migratie tijdens wondgenezing beter te begrijpen. Wat vaak kan leiden tot gerichte behandeling strategieën voor klinische geneeskunde.De scratch test is een kosteneffectieve en high-throughput aanpak voor het genereren van zinvolle wondgenezingsgegevens voorafgaand aan dure en tijdrovende in vivo testen. De scratch test als methode is vooral relevant in wondgenezing toepassingen. Het meest specifiek, de huid.Echter, de test is echt een migratie test, en kan worden toegepast op elk celtype waar migratie van cellen is van belang om te meten of vast te leggen. Vergelijkbaar met de klassieke cel-en weefselcultuur, standaard operationele procedures, opleiding, techniek, en de praktijk, praktijk, praktijk. Die zijn de sleutel tot succes met de scratch test.Het aantonen van de procedure zal Nathan Cruz, een master student, en Oscar Lujan, een undergraduate onderzoeker. Om deze procedure te beginnen, bereid de biosafety II kast met behulp van een 70%isopropyl waterige oplossing om een sanitaire veeg uit te voeren, te beginnen aan de achter- en zijwanden en werken tot aan de baseplate. Veeg ook alle materialen die zullen worden gebruikt in de test voor het plaatsen van hen in de kast.Vervolgens verkrijgen flacons met de gewenste cryopreserved cellijn, en plaats een in een een centimeter diep water bad op 37 graden Celsius te ontdooien. Voeg 10 milliliter medium aangevuld met 10%FBS toe in een T75 weefselkweekkolf. Open de flacon met de celvoorraad en haal de oplossing zorgvuldig.Breng vervolgens de cellen over in de T75-kolf. Verwijder een milliliter media uit de kolf en breng het terug in de flacon en breng het vervolgens terug in de kolf om de celopbrengst van de flacon te maximaliseren. Draai de dop van de kolf aan en wieg deze voorzichtig om de cellen gelijkmatig over het hele oppervlak te verspreiden.Label hierna de kolf met de hier getoonde informatie en plaats deze 72 uur in een bevochtigde couveuse bij 37 graden Celsius en 5%koolstofdioxide. Haal eerst de fles weefselkweek uit de couveuse en observeer de aangehangen cellen zoals beschreven in het tekstprotocol. Het volledige volume media uit de kolf aanzuigen en in een afvalcontainer overbrengen.Voeg vijf milliliter uitgebalanceerde zoutoplossing toe aan de kolf en laat het zachtjes schommelen om overtollige media, dode cellen of afvalproducten uit te spoelen. Verwijder vervolgens het volledige volume zout uit de kolf en gooi deze in een afvalcontainer. Voeg vervolgens twee milliliter trypsine toe aan de kolf en wieg het voorzichtig om het enzym over de aangehangen cellen te verspreiden.Zorg ervoor dat het aanhangende oppervlak volledig verzadigd is en plaats de weefselfles twee tot drie minuten in de couveuse. Tik hierna drie tot vijf keer zachtjes op de zijkant van de kolf om celloslating te vergemakkelijken. Veeg de kolf af met 70% alcohol en plaats deze in de bioveiligheidskast.Voeg vijf milliliter voorraadmedia toe aan de weefselfles om de enzymsubstraatreactie te stoppen. Aspirate het gehele volume van de vloeistof uit de kolf, en breng het in een steriele 15-milliliter conische buis. Centrifuge op 200 keer g en bij 25 graden Celsius gedurende vijf minuten.Gebruik vervolgens 70% alcohol om de buis met de gepelde cellen af te vegen en in de bioveiligheidskast te plaatsen. Pipette uit de media, waardoor ongeveer 250 microliter vloeistof met de cel pellet. Voer de onderkant van de conische buis over de flaconsleuven van een microcentrifugebuisrek om een snelle trilling te creëren en de celpellet te verstoren en opnieuw op te stellen.Wanneer correct voltooid, zal de nieuwe celoplossing verschijnen als een troebel mengsel zonder resterende pellet. Voeg twee milliliter media toe aan de celhersuspensie. Pipette de cellen zachtjes op en neer de zijkant van de buis 20 keer te breken eventuele klonten.En neem het totale celophangvolume op. Gebruik vervolgens een steriele pipet om 20 microliters van trypan blauwe bouillon toe te voegen aan een lege put van een 96-put plaat. Met behulp van een steriele pipettip breng je 20 microliter celvoorraad van de buis van 15 milliliter naar de put met de trypanblauwe oplossing.Pipette voorzichtig om de inhoud te mengen en 10 microliter van het mengsel tussen de deklip en de telkamer op een hemocytometer over te brengen. Tel alleen de cellen in het midden en vier hoekvierkanten, afzonderlijk tallying zowel het totale aantal cellen en de niet-levensvatbare cel tellen voor de vijf geïdentificeerde vierkanten. Na het berekenen van het levensvatbare celtellingsgetal markeert u een horizontale lijn over de onderkant van een plaat met 12 put om als referentiemerk te dienen tijdens de beeldvorming.Verdun de celvoorraad met media tot een dichtheid van 19.000 cellen per milliliter. Dan zaad elke put van de 12-put plaat met een milliliter van de verdunde cel voorraad, het mengen van de cel voorraad periodiek om ervoor te zorgen zelfs cel zaaien over alle 12 putten. Label elke plaat met de hier getoonde informatie.En plaats het in een couveuse op 37 graden Celsius en 5% kooldioxide totdat de cellen groeien tot 100% samenvloeiing. Haal een 12-put plaat met cellen uit de couveuse. Met behulp van een microscoop met een 10x doelstelling, observeer de cellen en bepaal de samenvloeiing binnen elke put.Vervolgens, aspirate en ontdoen van de groei media van elke put. Monteer een P200 pipetter met een 1-200 microliter steriele punt. In elke put, glijden de pipet tip over het celoppervlak van de 12:00 locatie naar de 6:00 locatie om een kras mock wond te produceren.Spoel elk goed met een milliliter uitgebalanceerde zoutoplossing om overtollig puin en celklontjes weg te ruimen. Rock de plaat van links naar rechts om het wassen te vergemakkelijken. Verwijder en verwijder vervolgens de uitgebalanceerde zoutoplossing uit elke put.Met behulp van een P1000 pipetter met een 1.000-microliter tip, voeg 1,000 microliter uit de voorbereide arseen voorraden in putten die willekeurig zijn toegewezen met een behandeling groep. Gebruik een nieuwe pipettip voor elke put en leg de tijd vast waarop de behandelingen worden toegevoegd. Incubeer de platen op 37 graden Celsius met 5%kooldioxide.Om de platen in beeld te brengen, leg je beelden van elke put vast bij 10x objectieve vergroting om de vier uur over een periode van 24 uur. Verwijs naar de lijn die eerder op de onderkant van de plaat is getekend om dezelfde locatie langs de kras binnen elke put op elk tijdstip weer te geven. In deze studie wordt een in vivo krastesttest gebruikt om de effecten van arseen op celmigratie waar te nemen.Uniforme krassen worden waargenomen in alle behandelingsgroepen, met een gemiddelde krasbreedte van ongeveer 0,8 millimeter. De controlecellen tonen een volledig genezen kras na 20 uur. De twee arseengroepen tonen dit niveau van genezing niet.Met de 10-micromolar behandeling remmen sluiting helemaal voor 24 uur. Deze resultaten tonen aan dat de aanwezigheid van arseen de cellulaire migratie vertraagt. De ruwe beelden die tijdens de test worden vastgelegd, worden geanalyseerd met behulp van geautomatiseerde software om de wondbreedte te meten, vervolgens de procentsluiting te berekenen en uiteindelijk het gebied onder de curve te berekenen.De 10-micromolar behandelingsgroep toont statistisch vertraagde cellulaire migratie van menselijke neonatale dermale fibroblasten in vergelijking met alle andere behandelingsgroepen. Het is belangrijk om deze techniek grondig te oefenen om de consistentie te verhogen bij het krabben van de cellen. Onbedoelde variabiliteit tussen tests kan mogelijk gegevens scheeftrekken en conclusies wijzigen.Verdere moleculaire technieken zoals kwantitatieve polymerase kettingreactie en enzym-gekoppelde immunosorbent testen kunnen worden gebruikt post-scratch test om messenger signalen en eiwitten die het doelwit kunnen zijn voor veranderingen in celmigratie waargenomen in de test te identificeren. Deze test heeft bijgedragen aan het begrip van onderzoekers van kankermetastase, nieuwe opkomende kankertherapieën, stamcellen en regeneratieve geneeskunde, en vele andere wetenschappelijke mijlpalen.

in-vitro-scratch-assay-to-demonstrate-effects-arsenic-on-skin-cell

Research

JoVE Journal

Environment

Milieu

Het vermogen om te migreren is een belangrijke functie van veel verschillende celtypen, inclusief mesenchymale stromale cellen (MSC's). Het kwantificeren van veranderingen in migratievermogen na schade is echter een uitdaging. Dit protocol beschrijft een eenvoudig aanpasbare migratietest die rigoureuze statistiek gebruikt om veranderingen in het migratievermogen van MSC's na schade te kwantificeren.

Optimalisatie van de wond Scratch Assay om veranderingen in muizen mesenchymale Stromal Cell Migratie Detect Na Schade door Oplosbare sigarettenrook Extract

Deze studie meldt twee verschillende methoden voor de analyse van de invasie van de cel en migratie: de bepaling van Boyden kamer en de in vitro video Microscoop gebaseerde wondgenezing bepaling. De protocollen voor deze twee experimenten worden beschreven, en hun voor- en nadelen worden vergeleken.

Evaluatie van de invasie van de cel en het migratieproces: een vergelijking van de Video Microscoop gebaseerde kras wond Assay en de bepaling van Boyden kamer

Cel migratie is essentieel voor de ontwikkeling, weefsel onderhoud en reparatie en tumorvorming en wordt gereguleerd door groeifactoren, chemokines en cytokinen. Dit protocol beschrijft de stip assay, een twee-dimensionale, onbeperkte migratie test om te beoordelen van de trekkende fenotype van geschakelde, samenhangende cel bladen in reactie op microenvironmental signalen.

Met behulp van de Dot-Assay voor het analyseren van de migratie van cel bladen

Dit manuscript beschrijft hoe incisie-achtige letsels gemaakt op gekweekte epitheliale cel monolayers gunstig model wond genezing in vitro, waardoor voor beeldvorming door confocal of laser scanning microscopie, en die kan voorzien van kwalitatief hoogwaardige kwantitatieve en kwalitatieve gegevens voor het bestuderen van zowel cel gedrag en de mechanismen die betrokken zijn bij migratie.

Methoden voor de beoordeling van epitheliale cel migratie tijdens het In Vitro wondgenezing op basis van microscopie

Hier presenteren we een protocol om te evalueren van het effect van peptiden op de migratie van bronchiale epitheliale cellen. Deze methode zorgt voor de snelle en zeer reproduceerbaar accumulatie van kwantitatieve gegevens over de snelheid van cel migratie en wond sluiting.

Een roman In Vitro wond genezing Assay om te evalueren van de cel migratie

Hier beschrijven we een procedure om te testen de cel migratie in vitro met een geautomatiseerde optische camera Microscoop. De kras assay is wijd verbeid gebruikt wanneer de sluiting van de kras gedurende een ingestelde periode wordt gevolgd. De optische Microscoop kunt betrouwbare en goedkope detectie van cel migratie.

Kras Assay voor In Vitro testen van cel migratie met een geautomatiseerde optische Camera geoptimaliseerd

Het huidige protocol beschrijft een geïntegreerde methode onderzoek naar kanker cel migratie en invasie op één platform in real-time, het verstrekken van een gemakkelijk reproduceerbaar zijn en tijd-efficiënte optie te bestuderen van de cel mobiliteit en morfologie.

Een eenvoudige migratie/invasie Workflow met behulp van een geautomatiseerde Live-cel Imager

Hier presenteren we een protocol voor een in vitro Scratch assay met primaire fibroblasten en voor een in vivo huid wond genezings test bij muizen. Beide assays zijn eenvoudige methoden om te beoordelen in vitro en in vivo wondgenezing.

Scratch Migration assay en dorsale skinfold Chamber voor in vitro en in vivo analyse van wondgenezing

We presenteren een kosteneffectieve methode om de scratch migratie test die een nieuwe aanpak voor het bepalen van celmigratie biedt zonder het gebruik van apparatuur-intensieve methoden. Terwijl fibroblasten werden gebruikt in dit protocol, kan het worden aangepast en gebruikt om extra celtypen en invloeden op celmigratie te bestuderen.

Een kosteneffectieve en aanpasbare scratchmigratietest

Door de integratie van interactie-ervaringsontwerp en analyse van gebruikersvereisten, introduceren we een innovatieve celschraper die cellulaire wondgenezingstesten verbetert in termen van reproduceerbaarheid, betrouwbaarheid, bruikbaarheid, cellulaire integriteit en gebruikerservaring.

Een hulpmiddel om automatisch stabiele en reproduceerbare celvrije openingen te creëren voor het verbeteren van de betrouwbaarheid van de celwondgenezingstest

Deze studie presenteert de tweedimensionale (2D) kraswondmigratietest en de driedimensionale (3D) sferoïde kiemtest, samen met hun respectievelijke stroomafwaartse analysemethoden, waaronder RNA-extractie en immunocytochemie, als geschikte tests om angiogenese in vitro te bestuderen.

Onderzoek naar angiogenese op functioneel en moleculair niveau door gebruik te maken van de Scratch Wound Migration Assay en de Spheroid Sprouting Assay

Leer de scratch assay voor wondgenezingsonderzoek met menselijke fibroblasten. Deze methode toont aan hoe arseen celmigratie beïnvloedt en biedt waardevolle inzichten voor klinische toepassingen.

In Vitro Kras Assay om aan te tonen van de gevolgen van arsenicum huid cel migratie

Meer video's verkennen