Name: Primaire cultuur van Rat Adrenocortical cellen en testen van Steroidogenic functies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 33 s
Description: Leer primaire cultuur van rattenbijniercellen voor onderzoek naar steroidogenese en stressgerelateerde ziekten. Deze methode helpt bij het bestuderen van hormoonproductie en lipidenbiosynthese in vitro.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gesteund door een subsidie van de National Science Raad Taiwan (NSC102-2320-B-037-008-MY3) en een nationale Cheng-Kung Universiteit ziekenhuis onderzoeksbeurs (NCKUH-10102045).

Alle procedures met inbegrip van dierlijke onderwerpen zijn goedgekeurd door institutionele Animal Care en gebruik Comité van Kaohsiung medische universiteit.
1. experimentele Procedure
<ol><li>De volwassene (8 tot 12 weken oude) mannelijke en vrouwelijke SD rats offeren door CO2 euthanasie.</li>
	<li>Toepassen van 70% ethanol en laat het worden geabsorbeerd in de huid, en vervolgens veeg de huid met een papieren zakdoekje.</li>
	<li>Zet de rat op een schone kunststof plaat in de liggende positie.</li>
	<li>Til de huid met een 'externe' gebogen Tang op de middellijn en een botte dissectie uitvoeren door het creëren van een "Y" vorm (van het niveau van de dij de subcostal hoek).<ol>
<li>Spoel schaar met 70% ethanol en knip de spier, ook het creëren van een "Y" vorm.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Vind de linker bijnier achter de maag. Opmerking: de juiste bijnier diep achter de lever kan worden gevonden.<ol>
<li>Een paar van de verlostang om te heffen van de maag of de lever en de bijnieren te isoleren met een andere gebogen pincet gebruiken</li>
	</ol>
</li>
	<li>Na de invoering van de bijnieren in een steriele schotel, verwijder zorgvuldig de bijnier capsule met fijne pincet.</li>
	<li>Met een delicate schaar, snijd de bijnieren in kleine stukjes met een beetje beetje Dulbecco serumvrij Eagle's medium (DMEM) gewijzigde / F-12 medium.</li>
	<li>
Bereiden van drie verschillende porie-grootte Pasteur pipets en gebruik de eerste pipet van Pasteur om gecombineerd alle stukken van de bijnier in een kegelvormig tube van 50 mL, met medium met collagenase II (~0.5–0.8 mg/mL).
	<ol>
<li>Triturate het weefsel stukken zachtjes ongeveer 10 x. De rest van de pipets gebruiken en herhaal de bovenstaande stappen totdat alle stukjes kleiner geworden. Opmerking: De verschillende porie-grootte van het Pasteur-pipets kunnen worden gemaakt door het verhitten van hen met vuur. De eerste Pipetteer is de oorspronkelijke grootte (ongeveer 1 mm), de poriegrootte van de tweede is ongeveer 0,8 mm en het derde pipet van Pasteur is ongeveer 0,5 mm. Tijdens de spijsvertering, zal de stukken van de bijnier afnemen. Dus via de mechanische procedure, kunnen de bijnieren worden verteerd meer voltooid. Incubeer de buis in een waterbad (bij 37 ° C) en schud het elke 5 min, 4 x in totaal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Voeg vers en koel medium (zesvoudig volume; bijvoorbeeld 5 mL weefsel + 25 mL van cool DMEM/F-12 medium) met 2,5% foetale runderserum (FBS) en 5% paard serum om te stoppen met het enzym effect na de incubatie 20 min.</li>
	<li>Het verzamelen van de cel pellets door centrifugeren bij 800 x g gedurende 10 minuten.</li>
	<li>Het toevoegen van een passende omvang van medium tot schorsing van de cellen. Opmerking: Elke klier kan maken ongeveer 3 ~ x 105 ~ 4 x 105 cellen.</li>
	<li>Plaat van de cellen in de gewenste platen of schotels met groeimedium (1:1 [v/v] mengsel van DMEM en Ham van F-12 medium, aangevuld met 25 mM HEPES en 1% penicilline en streptomycine) overnachting (dag 0) bij 37 ° C, in een bevochtigde omgeving van 95% lucht en 5% CO2. Let op: Meestal, we plaat cellen in 24-Wells-platen (vier klieren/plaat) voor de corticosterone assay en in 35 mm gerechten (één klier/ongeveer één tot twee gerechten) voor de westelijke analyse van de vlek.</li>
	<li>Grondig wassen de cellen 2 x met warme serumvrij DMEM/F-12 medium (dag 1). Vervang de nieuwe groeimedium.</li>
	<li>Handhaving van de cellen bij 37 ° C in een bevochtigde omgeving van 95% lucht en 5% CO2 tot en met dag 3.</li>
</ol>

<ol><li>Frith, C. H. Histology, Adrenal Gland, Mouse. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFrith%2C+CH+%22+Endocrine+System.+Monographs+on+Pathology+of+Laboratory+Animals%22"> Endocrine System. Monographs on Pathology of Laboratory Animals</a>. Jones, T. C., Mohr, U., Hunt, R. D., Capen, C. C. , Springer. Berlin, Heidelberg. 8-12 (1983).</li>
<li>Keegan, C. E., Hammer, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+insights+into+organogenesis+of+the+adrenal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Recent insights into organogenesis of the adrenal cortex.</a> Trends in Endocrinology Metabolism. 13 (5), 200-208 (2002).</li>
<li>Marieb, E., Wilhelm, P. B., Mallatt, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarieb%2C+E+%22Chapter+17%3A+The+Endocrine+System%22">Chapter 17: The Endocrine System</a>. , 558-581 (2017).</li>
<li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypothalamic-pituitary-adrenal+axis+and+immune-mediated+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+Medicine%22%5BJournal%5D)">The hypothalamic-pituitary-adrenal axis and immune-mediated inflammation.</a> New England Journal Medicine. 332 (20), 1351-1362 (1995).</li>
<li>Bornstein, S. R., Rutkowski, H., Vrezas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+steroidogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Cytokines and steroidogenesis.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. (1-2), 135-141 (2004).</li>
<li>Bielohuby, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+analysis+of+the+mouse+adrenal+gland+from+weaning+to+adulthood%3A+time-+and+gender-dependent+alterations+of+cell+size+and+number+in+the+cortical+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Endocrinology+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Growth analysis of the mouse adrenal gland from weaning to adulthood: time- and gender-dependent alterations of cell size and number in the cortical compartment.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology Metabolism. 293 (1), E139-E146 (2007).</li>
<li>van Weerden, W. M., Bierings, H. G., van Steenbrugge, G. J., de Jong, F. H., Schroder, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenal+glands+of+mouse+and+rat+do+not+synthesize+androgens%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Adrenal glands of mouse and rat do not synthesize androgens.</a> Life Sciences. 50 (12), 857-861 (1992).</li>
<li>Wang, T., Rainey, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adrenocortical+carcinoma+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Human adrenocortical carcinoma cell lines.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 351 (1), 58-65 (2012).</li>
<li>Payne, A. H., Hales, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+steroidogenic+enzymes+in+the+pathway+from+cholesterol+to+active+steroid+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Review%22%5BJournal%5D)">Overview of steroidogenic enzymes in the pathway from cholesterol to active steroid hormones.</a> Endocrine Review. 25 (6), 947-970 (2004).</li>
<li>Ruggiero, C., Lalli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+ACTH+Signaling+on+Transcriptional+Regulation+of+Steroidogenic+Genes%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Impact of ACTH Signaling on Transcriptional Regulation of Steroidogenic Genes.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 24(2016).</li>
<li>Chen, Y. C., Liang, Y. L., Huang, Y. L., Huang, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+Toona+sinensis-stimulated+adrenal+steroidogenesis+in+primary+rat+adrenal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Functional+Foods%22%5BJournal%5D)">Mechanism of Toona sinensis-stimulated adrenal steroidogenesis in primary rat adrenal cells.</a> Journal of Functional Foods. 14 (2015), 318-323 (2015).</li>
<li>Rybak, S. M., Ramachandran, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+normal+rat+adrenocortical+cells.+I.+Culture+conditions+for+optimal+growth+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Primary culture of normal rat adrenocortical cells. I. Culture conditions for optimal growth and function.</a> In Vitro. 17 (7), 599-604 (1981).</li>
<li>Rybak, S. M., Ramachandran, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+normal+rat+adrenocortical+cells.+II.+Quantitation+of+steroid+dehydrogenase+stain%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Primary culture of normal rat adrenocortical cells. II. Quantitation of steroid dehydrogenase stain.</a> In Vitro. 17 (7), 605-611 (1981).</li>
<li>O'Hare, M. J., Neville, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+metabolism+by+adult+rat+adrenocortical+cells+in+monolayer+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Steroid metabolism by adult rat adrenocortical cells in monolayer culture.</a> Journal of Endocrinology. 58 (3), 447-462 (1973).</li>
<li>Di Blasio, A. M., Fujii, D. K., Yamamoto, M., Martin, M. C., Jaffe, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+cell+proliferation+and+steroidogenesis+in+cultured+human+fetal+adrenal+cells+chronically+exposed+to+adrenocorticotropic+hormone%3A+rationalization+of+in+vitro+and+in+vivo+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Maintenance of cell proliferation and steroidogenesis in cultured human fetal adrenal cells chronically exposed to adrenocorticotropic hormone: rationalization of in vitro and in vivo findings.</a> Biology of Reproduction. 42 (4), 683-691 (1990).</li>
<li>Brasaemle, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thematic+review+series%3A+adipocyte+biology.+The+perilipin+family+of+structural+lipid+droplet+proteins%3A+stabilization+of+lipid+droplets+and+control+of+lipolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Thematic review series: adipocyte biology. The perilipin family of structural lipid droplet proteins: stabilization of lipid droplets and control of lipolysis.</a> Journal of Lipid Research. 48 (12), 2547-2559 (2007).</li>
<li>Hoeflich, A., Bielohuby, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+adrenal+gland+growth%3A+signal+integration+by+extracellular+signal+regulated+kinases1%2F2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of adrenal gland growth: signal integration by extracellular signal regulated kinases1/2.</a> Journal of Molecular Endocrinology. 42 (3), 191-203 (2009).</li>
<li>O'Hare, M. J., Neville, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+responses+to+corticotrophin+and+cyclic+AMP+by+adult+rat+adrenocortical+cells+in+monolayer+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Morphological responses to corticotrophin and cyclic AMP by adult rat adrenocortical cells in monolayer culture.</a> Journal of Endocrinology. 56 (3), 529-536 (1973).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Bijnieren spelen een sleutelrol in milieu aanpassing3. Het hormoon dat door die de bijnierschors scheidt kunt reguleren en fysiologische functies en homeostase3aanpassen. De in vivo model weerspiegelt de echte fysiologische effecten in het lichaam. Het is echter nog steeds beïnvloed door vele complexe factoren, unstable effecten veroorzaken in experimenten. Daarentegen heeft de in vitro cell model voordelen waardoor het onvergelijkbaar met de diermodel. Ten eerste is de mil...

Het endocriene systeem is verantwoordelijk voor de regulering van de fysiologische activiteiten en homeostase1. Bijnieren, gelegen aan de craniale pool van de nieren zijn een van de belangrijkste endocriene organen die mineralocorticoids, glucocorticoïden en androgeen2,3 afscheiden. Er zijn twee verschillende delen van de bijnier: de cortex en de medulla. De bijnierschors bestaat uit drie lagen: de buitenste glomerulosa, de tussenliggende fasciculata en de innerlijke reticularis3. De zona glomerulosa is de oorspronkelijke dat site van aldosteron, een Mineralocorticoïden, die helpt bij het ion van natrium en water in de nieren3geabsorbeerd. De fasciculata van de zona produceert voornamelijk een basale niveau van glucocorticoïden in normale fysiologische omstandigheden3. Corticosteroïden bij knaagdieren en cortisol in mensen handelen binnen het lichaam helpen in het omgaan met stress door het reguleren van bloed glucose3. Tot op zekere hoogte kunnen remmen inflammatoire reacties en reguleren het immuunsysteem4,5. In tegenstelling tot andere zoogdieren, muizen en ratten geen hebben een functionele zona reticularis vanwege het ontbreken van een 17α-hydroxylase expressie in de bijnier6,7. Bijnieren van muizen en ratten zijn dus verstoken van de secretie van bijnier C-19 steroïden (cortisol en bijnier-androgenen).
Primaire gekweekte adrenocortical cellen is aangetoond dat het nuttig is voor het onderzoeken van de mechanismen waarmee de bijnier fysiologie8worden bestuurd. Net als andere steroidogenic weefsels synthetiseert elke bijnier zone zijn steroïden van gratis cholesterol9. Op adrenocorticotropic hormoon (ACTH) stimulatie, de gratis cholesterol wordt vrijgelaten uit de uitsplitsing lipide druppels en, dus, verbetert steroïde productie in de fasciculata en reticularis10.
Vele groepen hebben geprobeerd om stabiele cellijnen van adrenocortical carcinomen. Verschillende zorgen hebben echter slechts beperkt het gebruik van adrenocortical cellijnen in vitro modellen8. De steroïde reacties van cellijnen kunnen verschillen tussen passages, het lotnummer van het serum en de kwaliteit van de serum, enz. Bovendien doen de commerciële bijnier cellijnen (Y1 en SW13) niet corticosterone, waardoor het moeilijker om te studeren bijnier steroidogenesis8afscheiden. Met behulp van runderen en paarden bijnieren zoals ex vivo modellen een goede keuze wellicht, hoewel weefsels van deze markten sommige onbekende risico's verdoezelen kunnen. Vergeleken met hen, beheer van rat bijnieren is makkelijker en de bron is relatief meer stabiel en pathogenen vrije. Tezamen, kan de huidige hier beschreven methode worden gebruikt om te onderzoeken het verwante mechanisme van corticosterone synthese in rat bijnier fasciculata cellen.

<table><tbody><tr><td>Female/male, SD/Wistar rats (8-12 weken)</td><td>BioLASCO</td><td></td><td>mannelijke of vrouwelijke ratten zijn geschikt voor experimenten. De bijnieren van vrouwtjes zijn groter dan die van mannetjes, vrouwelijke ratten hebben echter oestruscycli die de experimenten kunnen beïnvloeden</td></tr><tr><td>Collagenase, type II</td><td>Sigma</td><td>C-6885</td><td>isolatie van bijniercellen</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>ThermoFisher</td><td>12800-017</td><td>poeder media voor bijniercellen</td></tr><tr><td>Ham's F12</td><td>ThermoFisher</td><td>21700-075</td><td>poeder media voor bijniercellen</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>JT.baker</td><td>4018</td><td>buffer (poeder)</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>JT.baker</td><td>3506-1</td><td></td></tr><tr><td>Paarden serum</td><td>Hyclone</td><td>16050014</td><td></td></tr><tr><td>Fetaal bovien serum</td><td>SAFC</td><td>12103C</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline (10.000 E) - streptomycine (10.000 ug/mL)</td><td>Corning</td><td>30-002-Cl</td><td>antibiotica</td></tr><tr><td>Gebogen pincet</td><td>BRAUN</td><td>BD343R</td><td></td></tr><tr><td>Pincet</td><td>BRAUN</td><td>BD331R</td><td></td></tr><tr><td>Schaar</td><td>BRAUN</td><td>BC224R</td><td>knip rattenhuid en -spier</td></tr><tr><td>Fijne schaar</td><td>BRAUN</td><td>BC101R</td><td>knip bijnieren</td></tr><tr><td>Adipose-differentiatiegerelateerd eiwit</td><td>Abcam</td><td>ab108323</td><td>antilichaam voor vetdruppel geassocieerd eiwit</td></tr><tr><td>Corticosterone ELISA-kit</td><td>cayman</td><td>500655</td><td>assay voor corticosteron synthese</td></tr><tr><td>Omgekeerd lichtmicroscoop</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluorescentiemicroscoop</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>JT.baker</td><td>X198-07</td><td>voor immunofluorescentie kleuring</td></tr><tr><td>Geit anti-konijn IgG Alexa 488 Fluor secundair antilichaam</td><td>ThermoFisher</td><td>A-11034</td><td>voor immunofluorescentie kleuring</td></tr><tr><td>Anti-ADFP</td><td>Abcam</td><td>108323</td><td>voor immunofluorescentie kleuring</td></tr><tr><td>ProLong Gold antifade middel</td><td>ThermoFisher</td><td>P36935</td><td>voor immunofluorescentie kleuring</td></tr></tbody></table>

primaire cultuur van rat adrenocortical cellen en testen van steroidogenic functies

Primary Culture of Rat Adrenocortical Cells and Assays of Steroidogenic Functions

Het hormoon die de bijnierschors scheidt is van vitaal belang voor dieren tegen stress en ziekten. De hier beschreven methode is de procedure van primaire gekweekte rat bijnier cellen en verwante Functionele assays (immunofluorescentie kleuring van lipide druppel oppervlakte-proteïne, evenals corticosterone analyse). In tegenstelling tot een in vivo model, de variatie van de interexperiments in de bijnier enkelgelaagde culturen is minder en de experimentele conditie is makkelijk te controleren. Bovendien, is de bron van ratten ook stabieler dan andere dieren zoals runderen ones. Er zijn ook verschillende menselijke bijnier cellijnen (NCI-H295 NCI-H295R, SW13, etc.) die kunnen worden gebruikt in de bijnier studies. De steroïde productie van deze regels zal echter nog steeds worden beïnvloed door talrijke factoren, waaronder serum lotnummer, passage nummer, mutant/verlies van verschillende genen, enz. Met uitzondering van 17α-hydroxylase ontbreekt, is de primaire cultuur van rat adrenocortical cellen een beter en handiger techniek voor het bestuderen van de bijnier fysiologie. Kortom zou de primaire rat bijnier culturen een goede in-vitro platform voor onderzoekers te onderzoeken van de mechanismen van het reagens van belang in de bijnier-systeem.

Gebruik de procedure hier, zich primaire gekweekte bijnier cellen kunnen onderscheiden onder een microscoop met fase contrast (figuur 1A). Om te bevestigen dat de blaasjes in het cytoplasma lipide druppels zijn, kan de immunofluorescentie kleuring van obesitas differentiatie-gerelateerde eiwitten (ADRP) plaatsvinden op de dag-3 culturen (figuur 1B). Cellen werden geteeld op de glazen coverslips. De cellen waren drie keer gewassen...

Het hormoon afgescheiden door de bijnierschors is van vitaal belang voor dieren tegen stress en ziekten. Hier presenteren we een protocol bij de cultuur de primaire rat bijnier cellen. Het zou een goede in-vitro platform voor onderzoek naar de mechanismen van het reagens van belang in de bijnier steroidogenesis en lipide biosynthese.

Primaire cultuur van Rat Adrenocortical cellen en testen van Steroidogenic functies

The hormone which the adrenal cortex secretes is vital for animals against stress and diseases. The method described here is the procedure of primary ...

Het gepresenteerde protocol is zeer eenvoudig en het zal onderzoekers helpen bij te bereiden primaire bijnierculturen. Het biedt een gemakkelijke procedure voor het starten van bijniersteroïde. Deze techniek kan worden toegepast bij het screenen van de stress-gerelateerde ziekten, alle mogelijkheden van de agent-geremde ontstekingsreacties.Het aantonen van de procedure zal Wei-Chang Lee zijn, een Masters student uit mijn laboratorium. Begin met het steriliseren van euthanasized SD rat met behulp van 70% ethanol en laat het worden geabsorbeerd in de huid. Na het afvegen van de huid met het tissuepapier, plaats de rat op een schone plastic plaat in de supine positie.Gebruik vervolgens externe gebogen tangen om de huid op te tillen aan de middellijn. Gebruik een schaar om een stompe dissectie van de huid uit te voeren door het creëren van een Y-vorm van het niveau van de dij naar de subcostal hoek. Na het spoelen van de schaar met 70%-ethanol, snijd de spier, ook het creëren van een Y-vorm.Zoek de linker bijnier achter de maag in het recht achter de lever. Met een paar standaard tangen en een paar gebogen tangen, til de maag en lever en vervolgens isoleren de bijnieren met een andere

primary-culture-rat-adrenocortical-cells-assays-steroidogenic

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Bijniermerg chromaffin celkweek systemen zijn uiterst nuttig voor de studie van de excitatie-secretie koppeling in een in vitro setting. Dit protocol geeft de methode die wordt gebruikt om de bijnieren ontleden en vervolgens de medullaire regio te isoleren door het strippen van weg de bijnierschors. De vertering van de medulla in enkele chroomaffiene cellen wordt dan aangetoond.

Muis bijnier Chromaffinecellen Cell Isolatie

In dit artikel beschrijven we een typische manier om te isoleren en cultuur volwassen ratten hart myocyten. Collagenase en protease worden gebruikt voor het verteren en te isoleren single myocyten. Myocyten gekweekte volgen van dit protocol voldoen aan de meeste eisen experiment.

Primaire Cultuur van volwassen ratten Heart myocyten

Primaire hepatocyten een waardevol hulpmiddel om biochemische, moleculaire en metabolische functies in een fysiologisch relevante experimentele systeem te evalueren. We beschrijven een betrouwbaar protocol voor rat in situ leverperfusie, die consequent levensvatbare hepatocyten genereert tot to1.0 ×...

Isolatie en Primaire Cultuur van Rat levercellen

Arginine-vasopressine (AVP) regelt fine-tuning van het lichaam van het water homeostase door het vergemakkelijken waterherabsorptie door renale opdrachtgever cellen. Hier presenteren wij een protocol voor de teelt van primaire rat binnenste medullaire verzamelen duct cellen die geschikt zijn voor de opheldering van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen AVP-gemedieerde water reabsorptie.

Kweken Primaire Rat Inner Medullary Verzamelen Duct Cells

Primaire Sertoli cellen nodig zijn voor het bestuderen van testis-immune privilege, signaaltransductie tijdens ontsteking of infectie, en het gebruik van hun immunobeschermende eigenschappen. Hier beschrijven we een enzym-gebaseerd protocol voor de isolatie van zeer zuivere primaire Sertoli cellen en peritubulaire cellen van ratten testes.

Isolatie van Sertoli cellen en peritubulaire Cellen van Rat Testikels

Oligodendrocyten zijn de myeliniserende cellen van het centrale zenuwstelsel. Dit protocol beschrijft een methode voor het isoleren en kweken van hun precursoren, oligodendrocyten-voorlopercellen, uit rattencortex, evenals een snelle en betrouwbare kwantitatieve methode om oligodendrogenese in vitro te evalueren als reactie op experimentele factoren.

Voorbereiding van de Rat Oligodendrocyte Progenitor culturen en kwantificering van Oligodendrogenesis gebruik van Dual-infrarood fluorescentie Scanning

Hier presenteren we een methode om te isoleren van de bijnieren van muizen, repareren de weefsels, sectie hen en uitvoeren immunofluorescentie kleuring.

Afzondering, fixatie en immunofluorescentie beeldvorming van muis bijnieren

Dit protocol is bedoeld om celtypespecifiek te isoleren, ribosomale mRNA's te vertalen met behulp van het NuTRAP-muismodel.

Isoleer celtypespecifieke RNA's uit snap-frozen heterogene weefselmonsters zonder celsortering

Hier presenteren we een protocol om endometriumepitheliale stamcellen (reESC's) van ratten te isoleren en te kweken, waardoor endometriumorganoïden van ratten worden gegenereerd. Deze methode vergemakkelijkt in vitro studies van endometriumaandoeningen, waardoor genbewerking en andere cellulaire manipulaties mogelijk worden.

Generatie en karakterisering van baarmoederorganoïden van ratten uit endometrium-epitheliale stamcellen van ratten

Een robuuste en reproduceerbare methode om 2D-primaire culturen van met zona glomerulosa- en zona-fasciculata-verrijkte cellen te vestigen werd ontwikkeld voor de bijnierschors van de muis. Dit systeem behoudt belangrijke moleculaire en functionele kenmerken van elke zone, waardoor gericht onderzoek mogelijk is naar signaalroutes, hormoonproductie en bijniercorticale celgedrag ex vivo.

Vestiging van zone-verrijkte primaire culturen uit de bijnierschors van de muis

Leer primaire cultuur van rattenbijniercellen voor onderzoek naar steroidogenese en stressgerelateerde ziekten. Deze methode helpt bij het bestuderen van hormoonproductie en lipidenbiosynthese in vitro.

Primaire cultuur van Rat Adrenocortical cellen en testen van Steroidogenic functies

Meer video's verkennen