Low-cost Protocol van voetafdruk analyse en opknoping vak Test voor muizen toegepast de terughoudendheid van de chronische Stress

Ons protocol met behulp van ganganalyse is zeer nuttig bij het bepalen of muismotoren van bewegingsstoornissen het symptoom van de patiënt met loopstoornissen nabootsen. Dus, ganganalyse in de stress belastingtest kan gemakkelijk worden uitgevoerd, en zonder dure apparatuur, om bepaalde motorfenotypes bij muizen te detecteren, zonder spontane effecten. Voordat u de gedragstest start, registreert u het gewicht van elke muis en gebruikt u een markeringspen om elke staart te labelen.

Wanneer alle dieren zijn gewogen en gemarkeerd, plaats de muizen in de experimentele ruimte voor ten minste 30 minuten, en zet een duidelijke, 25 bij 25 bij 40 centimeter opknoping doos, met een draaibare mesh deksel, op het lab bank. Wanneer de muizen zijn geacclimateerd, plaats een muis in het midden van het gaasdeksel, en voorzichtig draai het deksel ondersteboven. Meet vervolgens de vallatentie van de muis van het mesh-deksel, voordat u de muis terugstuiteert naar zijn thuiskooi.

Wanneer alle muizen zijn getest, plaats een 9,9 bij 42 centimeter stuk wit papier op de labbank, en plaats een donkere doeldoos aan het distale uiteinde van het papier. Plaats andere dozen, ongeveer dezelfde lengte als het papier, aan beide zijden van de startbaan om ontsnapping te voorkomen. En voeg zwarte en rode inkt toe om 35 milliliter petrischaaltjes te scheiden.

Om de muizen te trainen voor de analyse, plaats een muis aan het proximale uiteinde van het papier, tegenover het doel vak, en laat de muis lopen van het proximale uiteinde van het papier naar het doel vak. Wanneer de muis de doos bereikt, zachtjes scrufferen het dier, tucking de rug en staart tussen de bal van de duim en de andere vingers, om de beweging van de achterste ledematen te beperken. En dompel de bodems van de voorpoten onder in rode inkt, en de onderkant van de achterste ledematen in zwarte inkt.

Plaats vervolgens onmiddellijk de muis terug op het proximale uiteinde van het papier, naar het doelvak gericht en laat de muis lopen van het proximale uiteinde naar het doelvak. Na het drogen van de voet gedrukt papier, gebruik maken van een liniaal om drie metingen van de pas lengte te verkrijgen, door het meten van de afstanden tussen dezelfde delen van de poot prints. Van de voorste basisbreedte, door een lijn te trekken tussen opeenvolgende, zelfde-kant, voorste voetafdrukken, en het meten van de lengte van de verticale lijn van het pad van de voorste voetafdruk, aan de lijn die tussen de voetafdrukken wordt getrokken.

En van de achterste basisbreedte, door een lijn te trekken tussen opeenvolgende achtervoeten en de lengte van de verticale lijn te meten vanaf het pad van de linker achtervoet, naar de lijn die tussen de andere rechtervoetafdafdafs wordt getrokken. Voor overlap meet u de afstand tussen de pads van de voorste en achterste voetafdrukken. Om een bevestigingsbuis voor te bereiden, gebruikt u een vierkante boor om 16 twee millimeter gaten te maken in een buis van 50 milliliter langs de weegschaalmarkeringen en de achterkant van elke schaalmarkering.

Snijd de punt van de buis om een gat van vijf millimeter te maken, voor de ademhaling, en maak een gat van vier millimeter in de dospen, voor de staart. Voor de stress-loading test, scruff een muis, en plaats het dier in de beperkende buis hoofd eerst, met de voorpoten zachtjes beperkt. Passeer de staart door het gat in de dop voordat u de buis aftopping.

En plaats de muis op de bank top voor twee uur op kamertemperatuur. Aan het einde van de stress-loading periode, verwijder de muis uit de buis, en breng het dier terug naar zijn kooi thuis. Zoals waargenomen in deze representatieve cijfers, heterozygoot snel beginnende dystonie Parkinsonisme model muizen, vertonen aanzienlijk kortere voor- en achterpoot passenlengten, dan hun wild-type nestgenoten op vier weken oud.

Stress heterozygoot snel beginnende dystonie Parkinsonisme model muizen, vertonen ook aanzienlijk kortere paslengtes van beide ledematen dan die van gestreste wild-type nestgenoten op acht weken oud. Asymmetrieën van de paslengtes van beide ledematen zijn niet significant verschillend, in elke groep muizen, op elke leeftijd. De voorste basis en overlappingen van beide ledematen zijn ook vergelijkbaar, in alle groepen, op alle leeftijden.

De achterste basis is aanzienlijk breder in deze gestresste heterozygoot snel beginnende dystonie Parkinsonisme model muizen, dan die waargenomen in de stress wilde-type dieren op 10 weken oud, wat aangeeft dat stress veroorzaakt motorische tekorten in heterozygoot snelle aanvang dystonie Parkinsonisme model muizen. Er worden geen significante verschillen in hangende tijd, tussen wilde en mutanten, waargenomen bij vier tot 10 weken oude dieren. Op 12 weken oud, echter, de opknoping tijd van stress wild-type muizen is aanzienlijk langer dan die van de andere dieren, wat suggereert dat het motorische tekort in heterozygoot snel beginnende dystonie Parkinsonisme model muizen, is te onderscheiden van wild-type muizen door middel van terughoudendheid test bij oudere dieren.

Plaats de muis onmiddellijk op het papier nadat de muis de bodems van ledematen in de inkt hangt om te voorkomen dat de inkt voor de looptest droogt. Aanvullende tests voor emotionele kenmerken, zoals open veld, verhoogde plus-doolhof, en hele zwemtest, kan worden uitgevoerd om te beantwoorden of de gang afwijking het gevolg is van alleen motorische tekort. Ons protocol kan worden gebruikt om de gevoeligheid voor stress te onderzoeken, door het aantal en de duur van de stressbelasting te veranderen en door motorfenotypen tussen verschillende belastingsomstandigheden te vergelijken.

Ons protocol kan worden gebruikt om de gevoeligheid voor stress te onderzoeken door het aantal en de duur van de stressbelastingen te veranderen en door motorfenotypen tussen verschillende laadomstandigheden te vergelijken.