Name: De linker Pneumectomie in combinatie met Monocrotaline of Sugen als een Model van pulmonale hypertensie bij ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-08T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Leer de linker pneumectomie bij ratten als model voor pulmonale hypertensie. Deze methode induceert plexiforme laesies vergelijkbaar met menselijke PAH-patiënten en ondersteunt therapeutisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit manuscript werd gesteund door de NIH verlenen 7R01 HL083078-10 verleent van de American Heart Association AHA-17SDG33370112 en uit de nationale instituten van gezondheid NIH K01 HL135474 tot aan en van de nationale instituten van gezondheid R01 HL133554 aan L.H.

De hieronder beschreven procedures zijn goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) van de School of Medicine van Icahn op de berg Sinaï. Alle ratten ontvangen humane zorg met inachtneming van de berg Sinaï "Gids voor de verzorging en het gebruik van proefdieren".
1. voorbereiding op de operatie
<ol><li>Autoclaaf Cooley-Mayo gebogen schaar (grote schaar) met rechte Iris schaar (kleine schaar), McPherson-Vannas Iris schaar (terug schaar), Wangensteen weefsel pincet (atraumatische verlostang), Gerald weefsel pincet, gewone draad speculum (zelf behouden oprolmechanisme), klein schip cauterizer, gaas, tweepuntige sonde, dunne vasculaire naald houder en Micro-Jacobson mug hemostatische pincet (mug).</li>
</ol>2. voorbereiding en intubatie van ratten
<ol><li>Het beheren van een subcutane injectie van buprenorfine analgesie (0,1 mg/kg) in 6-8 weekse oude mannelijke, Sprague-Dawley ratten, 30 min. vóór de ingreep.</li>
	<li>De rat individueel plaatsen in een ruimte die is blootgesteld aan Isofluraan 4% en zuurstof (1 L/min) voor 3-4 minuten totdat de rat is goed verdoofd (d.w.z., onbewuste, langzaam, ademhaling en niet reageert op de aanraking of geluid).</li>
	<li>
Intubatie van ratten
	<ol>
<li>Verwijder de rat uit de zaal en tape van de rat op een bord, zodat de rat plat op zijn rug, met de mond op de rand van het bord legt. Gebruik string te houden van de rat door de twee voorste tanden zodat de nek flat/hetero blijft.</li>
		<li>Plaatst u een fiber optic gans-lichtbron boven de hals op het strottenhoofd, heffen en houdt de tong met vingers en het strotklepje omhoog naar het visualiseren van de stembanden. De luchtpijp moet fel verlicht worden achter de stembanden; de positie van het licht aanpassen totdat de luchtpijp helder is.</li>
		<li>Intubate van de ratten door het invoegen van een 16 G katheter in het strottenhoofd binnen 60 s van het verwijderen van de rat uit de zaal zoals ze wakker snel. Als de rat voor succesvolle intubatie ontwaakt, zet de rat terug en herhaal.</li>
		<li>Onmiddellijk de rat verbinding te maken met de ventilator te hervatten Isofluraan en zuurstof levering. Bevestig de intubatie met behulp van een koude spiegel te observeren condensatie van de luchtvochtigheid in de uitgeademde adem van de katheter. Zorg ervoor dat het dier is nog steeds ademhalen door de uitbreiding van de borst.</li>
	</ol>
</li>
	<li>De rat verbinden met de ventilator. Stel de zuurstof te stromen op 1 L/min. het ventilatie-tarief ingesteld op 70 adem/min met een ademhalingsvolume van 0.35 – 0,45 mL. Positief einde expiratoire druk (GLUREN) ingesteld op 2-4 cm H2O. verminderen Isofluraan tot 2 – 3%.</li>
	<li>Plaats de rat onder de Microscoop in de juiste decubitus positie op een verwarming pad bij 37 ° C. Tape de voorpoten naar beneden. Het scheren van de linker borstkas achter het voorste been tot het einde van de ribbenkast met clippers. Schoonmaken van het chirurgische gebied met gaas en 10% oplossing van Povidon-Jood, gevolgd door 70% ethanol (drie keer).</li>
	<li>Plaats van de Pulsoximeter voet van de rat en bewaken de hartslag en zuurstof saturatie gedurende de operatie. Hartslag moet tussen 200-500 bpm en zuurstof saturatie moet > 95%.</li>
</ol>3. voorbereiding van de steriele omgeving
<ol><li>Visualiseer het chirurgische gebied onder de Microscoop. Dit moet eerst worden gedaan omdat de microscoop kan niet worden aangepast zodra het milieu steriel is.</li>
	<li>Steriele chirurgische handschoenen zetten. Raak niet aan om het even wat naast de gesteriliseerde instrumenten, de afdeklakens en het chirurgische gebied van de rat's lichaam.</li>
	<li>Plaats een steriele draperen over de rat's lichaam en op de lade instrument een steriele omgeving te creëren.</li>
	<li>Met steriele handschoenen, steriele instrumenten op de steriele instrument lade te plaatsen.</li>
</ol>4. linker Pneumectomie chirurgische ingreep
<ol><li>Cooley-Mayo schaar en Gerald weefsel pincet gebruiken om een klein gat in de chirurgische draperen. Het gat moet ongeveer 2-3 cm in diameter volledig visualiseren de incisie maar niet te groot zodat alleen gesteriliseerd huid wordt blootgesteld.</li>
	<li>Maak een lang laterale incisie van 2 cm in de linker borstkas met een chirurgisch mes. Gaas en de elektrocauterisatie-pen gebruiken om te bloeden/handhaven hemostase beheren. Gebruik de schaar Cooley-Mayo te snijden van elke laag van weefsel, totdat de ribben en intercostale spieren worden blootgesteld.</li>
	<li>
Invoeren van intercostale ruimte
	<ol>
<li>Gebruik de mug om een gat in de spier van de derde intercostaalruimte.</li>
		<li>Gebruik de tweepuntige sonde te verplaatsen van de longen uit de weg te visualiseren van de longslagader. De onderzoeker kan een ander intercostale ruimte Voer als de longslagader niet toegankelijk is.</li>
		<li>Gebruik iris schaar en McPherson-Vannas iris schaar (terug schaar) om te openen de intercostale spieren tot ongeveer 1-2 cm. met de pen elektrocauterisatie gebruiken elke bloeden te stoppen.</li>
		<li>Plaats een kleine, zelfstandige behoud oprolmechanisme te houden van de ribben en spieren openen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Open alleen de linker pleura en de linker long omlaag lager in de buik toegang te verlenen tot de longslagader en de bronchiën. Laad een middellange hemoclip in de ligating clip-applicator.</li>
	<li>
Afbinding van de linker belangrijkste bronchiën en linker belangrijkste longslagader
	<ol>
<li>Til het bovenste gedeelte van de linker long zorgvuldig met de verlostang atraumatische Wangensteen bloot van de longslagader.</li>
		<li>Het bijknippen van de longslagader door het sluiten van de clip en de applicator rond de slagader. Wees voorzichtig niet te sluiten of scheuren van de ader van de linker azygos. Doe er niet te krachtig klem anders, het schip kan scheuren.</li>
		<li>Open de incisie verder met behulp van de tonsillen te scheiden van de spiervezels.</li>
		<li>Laad een andere middellange hemoclip in de ligating clip-applicator, zodat het klaar is.</li>
		<li>Gebruik van de atraumatische verlostang om te heffen van het onderste gedeelte van de longen uit de incisie tot de linker belangrijkste bronchiën en linker longader worden gevisualiseerd. Atraumatische verlostang moet trekken gebruikt voor het verplaatsen van de Long en buiten de incisie. Aangezien de Long te groot is om in één beweging zonder scheuren van het weefsel worden teruggetrokken, zijn de kwestie verlostang nodig om de Long op zijn plaats houden terwijl de atraumatische verlostang gewend bent zorgvuldig meer Long uitlichten.</li>
		<li>Afbinden de linker belangrijkste bronchiën en linker belangrijkste longader samen door het sluiten van de applicator om hen heen. Doen niet klem de ader en de bronchiën te krachtig anders, het schip kan scheuren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>De longen verwijderen met een schaar. Wees voorzichtig niet te knippen of te scheuren uit de clip. Gebruik een kleine stuk steriel gaas te absorberen alle bloed en zorg ervoor dat er geen bloeding.</li>
	<li>
Sluiting van de ribben en intercostale spieren
	<ol>
<li>Alvorens te sluiten de intercostale spieren, plaatst u een 16 G katheter in de borstholte uit de buurt van de chirurgische incisie in de zevende intercostale ruimte. Zorg ervoor dat de onderzoeker de naald om niet doorprikken van vitale organen of vaartuigen kunt visualiseren.</li>
		<li>Onmiddellijk verwijderen van de naald, verlaten van de katheter op zijn plaats. Dit zal worden gebruikt als een buis van de borst.</li>
		<li>Sluit de ribben en intercostale spieren met een 4-0 prolene hechtdraad.</li>
		<li>Sluit de huid en de subcutane ruimte met een lopende 5-0 hechtdraad (Tabel van materialen).</li>
		<li>Plaats een 5-0 hechtdraad (Tabel van materialen) in de huid en rond de borst tube zodat wanneer de buis van de borst is verwijderd, het gat zal worden gekoppeld sluiten.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Het evacueren van de lucht uit de pleurale holte met een spuit met 3 mL via de katheter te herwinnen van de normale onderdruk in de thorax. Klem onmiddellijk de katheter met een naald houder om te voorkomen dat lucht terug te gaan in de borstholte. Snel verwijderen van de katheter en binden van de hechtdraad om te sluiten van het gat.</li>
</ol>5. post-operatieve herstel
<ol><li>Plaats het dier in de sternale positie. De Isofluraan uitschakelen, maar blijven geven de rat zuurstof via endotracheale buis. Laat niet het dier zonder toezicht op elk gewenst moment totdat het voldoende bewustzijn om te ambulate heeft herwonnen en het dier veilig in zijn kooi is.</li>
	<li>2 tot 3 mL steriele lactated Ringer's oplossing subcutaan beheren.</li>
	<li>Bewaken de hartslag (HSM ≈200-500), zuurstof saturatie (≥95%) en dierlijke kleur te bevestigen van het dier goed ademt.</li>
	<li>Wanneer het dier begint met het maken van spontane ademhaling bewegingen en bewegingen van de nek en reageert op fysieke stimuli (zoals ogen verbreding verplaatsen neus en oren reageren op geluid), extubate het dier door te trekken uit de katheter en verbreken van de ventilator.</li>
	<li>Het dier terug naar een lege kooi, uit de buurt van het gezelschap van andere dieren. Het dier moet alleen gedurende ten minste 3 dagen.</li>
	<li>Voor pijnbestrijding, 0,1 mg/kg van buprenorfine subcutaan elke 12 h voor 3 dagen te beheren.</li>
</ol>6. beheer van de "Tweede Hit" MCT of Sugen
<ol><li>1 mL van MCT (60 mg/kg) of 1 mL Sugen (25 mg/kg) beheren via subcutane injectie, 1 week na de operatie.</li>
</ol>7. de terminal oogst
<ol><li>Zeven weken na toediening van MCT of Sugen, plaats het dier in een kamer met vloeiende zuurstof (1 L/min) en 4% Isofluraan.</li>
	<li>Sluit het dier aan de ventilator via de neus. Houden zuurstof stroomt en de Isofluraan tot 2,5-3% lager. Leg het dier op zijn rug en tape beneden alle ledematen.</li>
	<li>Het dier langs de hele buik scheren.</li>
	<li>
Opening van de borst
	<ol>
<li>Maken van een incisie beneden de borst met een scalpel vanaf de subclavian inkeping aan de xyphoid.</li>
		<li>Gebruik de verlostang weefsel te houden de xyphoid. Doorsnijden het borstbeen met de schaar Cooley-Mayo tot het hart en de longslagader volledig toegankelijk zijn. Gebruik de elektrocauterisatie om te stoppen met het bloeden. Houd dat de ribben openen met een oprolmechanisme.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Het identificeren van de longslagader. De richting van het hart, indien nodig, aanpassen door het toevoegen van gaas onder. Gebruik een 20 G IV-katheter om het doorprikken van de longslagader tussen de pulmonale klep en de bifurcatie voor de belangrijkste longslagader. Verder alleen de 20 G katheter in de slagader en verwijder de naald. Voorschot de 1.2 Fr transsonische druk katheter in IV-katheter die is in de longslagader. Zodra de kromme PA stabiel is, opnemen de druk voor ten minste 10 s. Herhaal deze stappen om te nemen van de druk in het rechterventrikel.</li>
	<li>Verwijder het hart en de longen. Leg stukjes van de longen in formaline te worden vastgesteld in paraffine en gekleurd met haematoxyline en eosine.</li>
</ol>

<ol><li>Leopold, J., Maron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanisms+of+Pulmonary+Vascular+Remodeling+in+Pulmonary+Arterial+Hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanisms of Pulmonary Vascular Remodeling in Pulmonary Arterial Hypertension.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (5), 761(2016).</li>
<li>Gomez-Arroyo, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocrotaline+model+of+pulmonary+hypertension+in+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 302 (4), L363-L369 (2012).</li>
<li>van Albada, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+increased+pulmonary+blood+flow+in+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">The role of increased pulmonary blood flow in pulmonary arterial hypertension.</a> European Respiratory Journal. 26 (3), 487-493 (2005).</li>
<li>Dickinson, M. G., Bartelds, B., Borgdorff, M. A. J., Berger, R. M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+disturbed+blood+flow+in+the+development+of+pulmonary+arterial+hypertension%3A+lessons+from+preclinical+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">The role of disturbed blood flow in the development of pulmonary arterial hypertension: lessons from preclinical animal models.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 305 (1), L1-L14 (2013).</li>
<li>Stenmark, K. R., Meyrick, B., Galie, N., Mooi, W. J., McMurtry, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+pulmonary+arterial+hypertension%3A+the+hope+for+etiological+discovery+and+pharmacological+cure%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of pulmonary arterial hypertension: the hope for etiological discovery and pharmacological cure.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 297 (6), L1013-L1032 (2009).</li>
<li>Cahill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiological+basis+of+chronic+hypoxic+pulmonary+hypertension+in+the+mouse%3A+vasoconstrictor+and+structural+mechanisms+contribute+equally%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Physiology%22%5BJournal%5D)">The pathophysiological basis of chronic hypoxic pulmonary hypertension in the mouse: vasoconstrictor and structural mechanisms contribute equally.</a> Experimental Physiology. 97 (6), 796-806 (2012).</li>
<li>Okada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hemodynamics+modify+the+rat+pulmonary+artery+response+to+injury.+A+neointimal+model+of+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hemodynamics modify the rat pulmonary artery response to injury. A neointimal model of pulmonary hypertension.</a> American Journal of Pathology. 151 (4), 1019-1025 (1997).</li>
<li>Happé, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumonectomy+combined+with+SU5416+induces+severe+pulmonary+hypertension+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Pneumonectomy combined with SU5416 induces severe pulmonary hypertension in rats.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 310 (11), L1088-L1097 (2016).</li>
<li>Tanaka, Y., Schuster, D. P., Davis, E. C., Patterson, G. A., Botney, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+vascular+injury+and+hemodynamics+in+rat+pulmonary+artery+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The role of vascular injury and hemodynamics in rat pulmonary artery remodeling.</a> Journal of Clinical Investigation. 98 (2), 434-442 (1996).</li>
<li>Nishimura, T., Faul, J. L., Berry, G. J., Kao, P. N., Pearl, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+surgical+aortocaval+fistula+on+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of a surgical aortocaval fistula on monocrotaline-induced pulmonary hypertension.</a> Critical Care Medicine. 31 (4), 1213-1218 (2003).</li>
<li>Linardi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventricular+and+pulmonary+vascular+remodeling+induced+by+pulmonary+overflow+in+a+chronic+model+of+pretricuspid+shunt%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ventricular and pulmonary vascular remodeling induced by pulmonary overflow in a chronic model of pretricuspid shunt.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 148 (6), 2609-2617 (2014).</li>
<li>White, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plexiform-like+lesions+and+increased+tissue+factor+expression+in+a+rat+model+of+severe+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Plexiform-like lesions and increased tissue factor expression in a rat model of severe pulmonary arterial hypertension.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 293 (3), L583-L590 (2007).</li>
<li>Samson, N., Paulin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetics%2C+inflammation+and+metabolism+in+right+heart+failure+associated+with+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Pulmonary+Circulation%22%5BJournal%5D)">Epigenetics, inflammation and metabolism in right heart failure associated with pulmonary hypertension.</a> Pulmonary Circulation. 7 (3), 572-587 (2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen potentiële conflicten van belang.

In pak geteisterde longen, vasculaire proliferatie met neointimal formatie en de vernietiging van de pulmonary slagaders leiden tot ernstige hemodynamische veranderingen, rechts-ventriculaire storingen en vroegtijdige sterfte7,8. De wijzigingen in de wanden vergroten resistentie tegen doorbloeding, toenemende druk van arteriële en rechts ventriculaire In de vroege stadia van PAH ontwikkelde meestal 3 weken na het beheren van MCT of Sugen, ratten niet-specifieke h...

Pulmonale arteriële hypertensie (PAH) is een progressieve en dodelijke ziekte die wordt gekenmerkt door een toename van de pulmonaire bloedstroom, toegenomen vasculaire weerstand, ontsteking en verbouwing van kleine pulmonaire bloedvaten1. Deze remodelleren meestal resulteert in vasculaire laesies die te belemmeren en vernietigen van kleine pulmonary slagaders, waardoor de vasoconstrictie en toenemende rechterventrikel afterload2. Enkele succesvolle farmacologische behandelingen van PAH bestaan; Als gevolg, PAH-gerelateerde sterfte blijft hoog. Onlangs, de focus van het onderzoek naar de pathobiology van pulmonale hypertensie is verhuisd naar een mechanisme van angio-proliferatie waarin de rol van pulmonaire verhoogde bloedtoevoer wordt beschouwd als een belangrijke trigger in de ontwikkeling van de pulmonaire vasculaire het remodelleren van3,4.
Dierlijke modellen van pulmonale hypertensie hebben verstrekt kritische inzichten die helpen verklaren de pathofysiologie van de ziekte te hebben gediend als een platform voor drug-, cel-, gen- en eiwit levering. De chronische hypoxie-geïnduceerde pulmonale hypertensie en de MCT long letsel model hebben van oudsher de belangrijkste modellen gebruikt bij het bestuderen van PAH pathofysiologie5. Nochtans, zijn zij niet volstaat om verhoogde pulmonaire bloed stroom en neointimal patroon aan het remodelleren van in vergelijking tot wijzigingen beschreven in menselijke patiënten. Het model van chronische hypoxie in knaagdieren resulteert in verdikking van wanden met hypoxische vasoconstrictie zonder angio-vernietiging van kleine pulmonaire vaartuigen6. Bovendien is de toestand van hypoxie omkeerbaar. Het model van hypoxie is dus ook niet volstaat om ernstige PAH. De MCT long letsel model sommige endotheel disfunctie uitlokken maar de complexe vasculaire obliterative laesies gevonden bij mensen met ernstige primaire PAH niet ontwikkelen in de ratten2. Bovendien hebben MCT-behandelde ratten de neiging om te sterven uit Long MCT-geïnduceerde toxiciteit, veno-occlusieve leverziekte en myocarditis, in plaats van PAH2. Tenslotte is de Pneumectomie alleen niet voldoende voor de productie van neointimal laesies in de kleine pulmonaire bakken in een korte periode van tijd. Na de Pneumectomie is er minimale hoogte in pulmonaire arteriële druk7. Bij de mens, is de Pneumectomie wanneer de contralaterale Long gezonde7 isgoed verdragen.
De procedure van de linker Pneumectomie gecombineerd met MCT of Sugen is echter gunstig omdat het pulmonaire verhoogde bloedtoevoer nabootst en in de pulmonaire vasculaire remodeling vergelijkbaar met ernstige klinische PAH resulteert. De Pneumectomie wordt uitgevoerd op de linker long, die heeft slechts 1 kwab, in plaats van aan de rechterkant, die heeft vier kwabben. Als de juiste Long werd verwijderd, is het dier zou niet in staat om te compenseren voor de respiratoire insufficiëntie. In het Pneumectomie-MCT-model ontwikkelt neointimal patroon van het remodelleren in meer dan 90% van geëxploiteerd-behandelde dieren7. Ook de combinatie van Sugen en Pneumectomie resulteert in ernstige PAH, gekenmerkt door angio-obliterative vasculaire laesies, proliferatie, apoptosis en RV dysfunctie8. De linker Pneumectomie-procedure is ook voordelig in vergelijking met andere chirurgische procedures voor het opwekken van PAH. Eerder omvatten beschreven modellen bij ratten te verhogen van pulmonaire bloedtoevoer naar de longen de aorto-caval shunt of subclavian-pulmonaire slagader anastomose. Deze modellen zijn zeer ingewikkeld7,9,10,11. Voor het uitvoeren van een aorto-caval shunt, moet de buik van het dier worden geopend. De shunt wordt geplaatst in de abdominale aorta, waardoor de bloedtoevoer naar alle buikorganen in plaats van alleen de longen, dus pak duurt veel langer om te ontwikkelen. Bovendien is het moeilijk om te bepalen van de bloedstroom door de shunt, overwegende dat met de Pneumectomie het bloed stroom naar het resterende Long dubbelspel. De subclavian-pulmonaire slagader wapendrager heeft ook veel complicaties. De stroom van arteriële bloed in de ader kan leiden tot trombose van anastomose en bloeden. Zoals de aorto-caval shunt is het moeilijk om te bepalen van de bloedstroom door de anastomose. Bovendien, het is een dure en moeilijk techniek waarvoor vasculaire chirurgische vaardigheden. De unilaterale linker Pneumectomie verdubbelt bloedstroom en shear stress in de contralaterale Long en, in combinatie met MCT of Sugen, veroorzaakt de typische hemodynamische en histopathologische bevindingen van PAH oftewel endothelial cel schade8, 12.
De nieuwheid van dit manuscript wordt gepresenteerd in het zeer gedetailleerde en uitgebreide chirurgische protocol van de linker Pneumectomie bij ratten en bij de bespreking van de technische en fysiologische uitdagingen van deze modellen. Omdat dit protocol momenteel niet beschikbaar is, veel onderzoekers geloven dat het model is te moeilijk gebruik. Onderzoekers die tot het verrichten van de linker Pneumectomie geconfronteerd met hoge sterfte en morbiditeit tarieven die zijn gekoppeld aan het geen onnodige verlies van dieren, afbreuk te doen aan de wetenschappelijke beoordeling. In plaats daarvan zal veel klassieke modellen zoals MCT injectie, chronische hypoxie, of gewoon de Pneumectomie gebruiken om te maken van PAH. Deze modellen zijn echter veel minder effectief dan de combinatie van MCT of Sugen met de linker Pneumectomie. Het primaire doel van dit artikel is het eerste gedetailleerde en reproduceerbare chirurgische protocol voorzien de linker eenzijdige Pneumectomie bij ratten en bieden de beste chirurgische model van PAH. Dit protocol voor linker eenzijdige Pneumectomie te combineren met MCT of SU5416 kunnen onderzoekers om een veel effectiever en klinisch relevante model van ernstige pak te bestuderen van de pathogenese van deze fatale ziekte te maken.

```html
<table><tbody><tr><td>Surgical Blade</td><td>Bard-Parker</td><td>371215</td><td>Incision</td></tr><tr><td>Forane (Isoflurane, USP)</td><td>Baxter</td><td>NDC 10019-360-40</td><td>anesthesie</td></tr><tr><td>BD Angiocath 16 G</td><td>BD</td><td>381157</td><td>intubatiebuis, borstbuis</td></tr><tr><td>BD 1 mL Insulin Syringe</td><td>BD</td><td>329652</td><td>toediening van buprinex post-operatief</td></tr><tr><td>Biogel Surgeons Surgical Gloves</td><td>Biogel</td><td>30460-01</td><td>steriele chirurgische handschoenen</td></tr><tr><td>Wahl BravMini+ Trimmer</td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-41590 P</td><td>scheren van chirurgische locatie</td></tr><tr><td>SU5416</td><td>Cayman Chemical</td><td>13342</td><td>Sugen&nbsp;</td></tr><tr><td>Fiber Optic Illuminator</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-41723-02</td><td>licht voor intubatie</td></tr><tr><td>Surgipro II 4-0 Suture</td><td>Covidien</td><td>VP831X</td><td>sluiten van intercostale spieren</td></tr><tr><td>Polysorb 5-0 Suture</td><td>Covidien</td><td>GL-885</td><td>sluiten van huid</td></tr><tr><td>Medium Slide Top Induction Chamber</td><td>DRE Veterinary</td><td>12570</td><td>zuurstof & isofluraangaslevering</td></tr><tr><td>DRE Compact 150 Rodent Anesthesia Machine</td><td>DRE Veterinary</td><td>373</td><td>zuurstof & isofluraangaslevering</td></tr><tr><td>Small Vessel Cauterizer Kit</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-00</td><td>cauterisator om bloedingen te minimaliseren</td></tr><tr><td>VentElite Small Animal Ventilator</td><td>Harvard Apparatus</td><td>55-7040</td><td>ventilator</td></tr><tr><td>MouseSTAT Jr</td><td>Kent Scientific</td><td>MSTAT-JR</td><td>pulsoximeter & hartslagmonitor</td></tr><tr><td>Mouse Paw Pulse Oximeter Sensor</td><td>Kent Scientific</td><td>SPO2-MSE</td><td>pulsoximeter & hartslagsensor voor poten</td></tr><tr><td>PhysioSuite RightTemp</td><td>Kent Scientific</td><td>PS-02</td><td>temperatuurpad</td></tr><tr><td>PVP Prep Solution</td><td>Medline</td><td>MDS093944</td><td>reiniging van chirurgische locatie</td></tr><tr><td>Poly-lined Drape</td><td>Medline</td><td>NON21002Z</td><td>deksel voor dier</td></tr><tr><td>3 mL syringe</td><td>Medline</td><td>SYR103010</td><td>toediening van vloeistoffen post-operatief</td></tr><tr><td>Microsurgical Kits, Integra&nbsp;</td><td>Miltex</td><td>95042-540</td><td>chirurgische gereedschappen: plat draad spreider, dubbelzijdige sonde, McPherson-Vannas Iris schaar recht, rechte iris schaar</td></tr><tr><td>Hemostatic forceps - Micro-Jacobson-Mosquito</td><td>Miltex</td><td>17-2602</td><td>mosquito</td></tr><tr><td>Buprenorphrine HCl 0.3 mg/mL</td><td>Par Pharmaceutical</td><td>NDC 42023-179-01</td><td>pijnverlichting</td></tr><tr><td>Cooley-Mayo curved scissors</td><td>Pilling</td><td>352090</td><td>Grote schaar</td></tr><tr><td>Gerald Tissue forceps</td><td>Pilling</td><td>351900</td><td>forceps</td></tr><tr><td>Wangesnsteen Tissue Forceps</td><td>Pilling</td><td>342929</td><td>atraumatische forceps</td></tr><tr><td>Pilling Thin Vascular Needle Holder</td><td>Pilling</td><td>354962DG</td><td>naaldhouder</td></tr><tr><td>Crotaline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2401-1G</td><td>MCT</td></tr><tr><td>Surflash 20 G IV Catheter</td><td>Terumo</td><td>SR*FF2051</td><td>Voor drukmeting tijdens orgaanoogst</td></tr><tr><td>ADVantage PV System with 1.2 Fr Catheter</td><td>Transonic Inc</td><td>ADV500</td><td>Record pulmonale arteriële en rechter ventrikeldruk</td></tr><tr><td>Medium Hemoclip</td><td>Weck</td><td>523700</td><td>vatjes voor het lijmen</td></tr><tr><td>Open Ligating Clip Applicator; Medium, curved</td><td>Weck Horizon</td><td>237081</td><td>hemoclip applicator</td></tr><tr><td>Surgical Microscope</td><td>Zeiss OPMI MD</td><td>1808</td><td>vergroting</td></tr></tbody></table>
```

de linker pneumectomie in combinatie met monocrotaline of sugen als een model van pulmonale hypertensie bij ratten

The Left Pneumonectomy Combined with Monocrotaline or Sugen as a Model of Pulmonary Hypertension in Rats

In dit protocol, detailleren wij de juiste procedurele stappen en de nodige voorzorgsmaatregelen nemen om met succes uitvoeren van een linker Pneumectomie en PAH induceren bij ratten met de extra toediening van monocrotaline (MCT) of SU5416 (Sugen). Ook vergelijken we deze twee modellen tot andere PAH-modellen vaak in onderzoek worden gebruikt. In de afgelopen jaren, is de focus van PAH diermodellen verhuisd naar het bestuderen van het mechanisme van de angioproliferation van Meervormige laesies, waarin de rol van pulmonaire verhoogde bloedtoevoer wordt beschouwd als een belangrijke trigger in de ontwikkeling van ernstige pulmonale vasculaire remodeling. Een van de meest veelbelovende knaagdier modellen van verhoogde pulmonaire flow is de eenzijdige linker Pneumectomie gecombineerd met een 'tweede hit' van MCT of Sugen. De verwijdering van de linker long leidt tot verhoogde en turbulente pulmonaire doorbloeding en vasculaire remodeling. Op dit moment is er geen gedetailleerde procedure voor de chirurgie van de Pneumectomie bij ratten. Dit artikel geeft een stapsgewijze protocol van de Pneumectomie chirurgische ingreep en post-operatieve zorg bij mannelijke Sprague-Dawley ratten. Kortom, het dier wordt verdoofd en de borst wordt geopend. Zodra de linker longslagader longader en de bronchiën worden gevisualiseerd, ze als ligatuur zijn verbonden en de linker long wordt verwijderd. De borst is dan gesloten en het dier teruggevorderd. Bloed is gedwongen om te circuleren alleen op de juiste Long. Deze toegenomen vasculaire druk leidt tot een progressieve remodelleren en occlusie van kleine pulmonary slagaders. De tweede honkslag van MCT of Sugen is gebruikte een week na operatie voor het opwekken van endotheel disfunctie. De combinatie van verhoogde bloedstroom in de longen en endotheel disfunctie produceert ernstige PAH. De belangrijkste beperking van deze procedure is dat het algemene chirurgische vaardigheden vereist.

Volgens de geaccepteerde classificatiesysteem, wordt pulmonale hypertensie gekenmerkt door een gemiddelde longslagader druk (mPAP) meer dan de bovengrenzen van normale longslagader druk (dat wil zeggen, 25 mm Hg). In de Pneumectomie + MCT groep, ernstige PAH ontwikkeld door dag 21 met een verhoogde mPAP (Figuur 1). De mPAP wordt berekend door de formule:
<img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/59...

De knaagdieren links Pneumectomie is een waardevolle techniek in pulmonale hypertensie onderzoek. Hier presenteren we een protocol om te beschrijven de rat Pneumectomie procedure en postoperatieve zorg aan minimale morbiditeit en mortaliteit.

De linker Pneumectomie in combinatie met Monocrotaline of Sugen als een Model van pulmonale hypertensie bij ratten

In this protocol, we detail the correct procedural steps and necessary precautions to successfully perform a left pneumonectomy and induce PAH in rats ...

Dit protocol is belangrijk omdat het het best mogelijke model voor longslagaderlijke hypertensie produceert. Geen enkel ander model produceert de plexiforme laesies gevonden bij menselijke PAK-patiënten. Het belangrijkste voordeel is dat we de bloedstroom in de rechterlong en longslagader verdubbelen, endotheelschade veroorzaken en de longen dwingen om twee keer zo hard te werken.Onze groep heeft een zeer efficiënt model van pulmonale arteriële hypertensie ontwikkeld om therapieën te ontwikkelen. Naast pulmonale slagader hypertensie, kan deze methode nuttig zijn in regeneratieve geneeskunde en kan inzicht geven aan andere ziekten met een verhoogde longstroom zoals aangeboren hartafwijkingen of post-pneumonectomie patiënten. Voor iemand die nog nooit heeft uitgevoerd deze techniek, mijn advies is om het protocol precies te volgen en om ervoor te zorgen dat de chirurg precies kan zien wat ze doen.Na het verdoven van de rat met 4%isoflurane, wordt het dier geïntubeerd met behulp van een glasvezelganslicht om de luchtpijp te verlichten. Steek een 16-gauge katheter in het strottenhoofd en gebruik een koude spiegel om de condensatie van de vochtigheid in de uitgeademde adem van de kathet

the-left-pneumonectomy-combined-with-monocrotaline-or-sugen-as-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Pulmonaire arteriële hypertensie (PAH) is een ziekte van pulmonaire arteriolen die leidt tot hun obliteratie en de ontwikkeling van rechterventrikelfalen. Rodentmodellen van PAH zijn cruciaal voor het begrijpen van de pathofysiologie van PAH. Hier demonstreren we hemodynamische karakterisering, met rechter hartkatheterisatie en echografie, bij de muis en de rat.

Hemodynamische karakterisatie van diermodellen van pulmonale arteriële hypertensie

Dit protocol beschrijft een chirurgische procedure om een model te creëren voor stromingsgeïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie (PAH) bij ratten en de procedures om de belangrijkste hemodynamische en histologische eindpunten in dit model te analyseren.

Shunt Chirurgie, Right hartkatheterisatie, en Vasculaire Morphometry in een diermodel voor Flow-geïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie

We presenteren een chirurgische methode om te induceren Rechter ventrikelhypertrofie en falen bij ratten.

Een pulmonaire Trunk "banding" Model van druk overbelasting veroorzaakte Rechter ventrikelhypertrofie en falen

Hier presenteren we een protocol voor een ex vivo long kanker model dat bootst de stappen van de progressie van de tumor en helpt bij het isoleren van een primaire tumor, circulerende tumorcellen, en metastatische laesies.

Acellulair en cellulaire Lung Model studie Tumor uitzaaiingen

Linker atriale stenose (LAS) is een nieuwe chirurgische techniek gebruikt voor het bestuderen van groep 2 pulmonale hypertensie (PH) en mechanismen ten grondslag liggen aan pulmonale veneuze arterialization. Hier presenteren we een protocol om het samentrekken van de linkerboezem met behulp van een titanium clip te veroorzaken pulmonale veneuze arterialization en matige PH in een rat.

Linker atriale stenose geïnduceerde pulmonale veneuze Arterialization en groep 2 pulmonale hypertensie in Rat

Dit protocol beschrijft de inductie van pulmonale hypertensie (PH) bij muizen op basis van de blootstelling aan hypoxie en de injectie van een VEGF receptor antagonist. De dieren ontwikkelen PH en rechts ventriculaire (RV) hypertrofie 3 weken na de inleiding van het protocol. De functionele en morfometrische karakterisering van het model wordt ook gepresenteerd.

Inductie en karakterisering van pulmonale hypertensie bij muizen met behulp van het Hypoxia/SU5416-model

Hier presenteren we optimalisaties voor een longtransplantatiemodel bij ratten die dienen om de resultaten te verbeteren. We bieden een maattabel voor manchetten op basis van lichaamsgewicht, een meetstrategie om de 4eintercostale ruimte te bepalen en methoden voor wondsluiting en BAL (bronchoalveolaire lavage) vloeistof- en weefselverzameling.

Een rattenlongtransplantatiemodel van warme ischemie / reperfusieletsel: optimalisaties om de resultaten te verbeteren

Rechterhartfalen (RHF) wordt gekenmerkt door rechtszijdige hartdilatatie en hypertrofie, wat leidt tot ventriculaire en atriale stoornissen. Cardiopulmonale aandoeningen geassocieerd met RHF gaan gepaard met een verhoogd risico op hartritmestoornissen. Dit artikel beschrijft een gestandaardiseerd model van door longslagaderband geïnduceerde RHF geassocieerd met verbeterde ventriculaire en atriale aritmogenese.

Rattenmodel van rechtszijdige cardiale remodellering en aritmie met behulp van longslagaderbanden

Hier wordt de methode geïntroduceerd voor het induceren van pulmonale arteriële hypertensie geassocieerd met longfibrose (PF-PH) rattenmodel door bleomycine in de luchtwegen te injecteren. We bieden ook een stapsgewijze aanpak om dit diermodel te valideren.

Opstelling en validatie van een rattenmodel van pulmonale arteriële hypertensie geassocieerd met longfibrose

Dit protocol beschrijft een verbeterde techniek voor orthotope linkerlongtransplantatie bij ratten, gericht op het verminderen van operationele problemen en het verbeteren van overlevingskansen.

Orthotope linkerlongtransplantatie bij ratten

Leer de linker pneumectomie bij ratten als model voor pulmonale hypertensie. Deze methode induceert plexiforme laesies vergelijkbaar met menselijke PAH-patiënten en ondersteunt therapeutisch onderzoek.

De linker Pneumectomie in combinatie met Monocrotaline of Sugen als een Model van pulmonale hypertensie bij ratten

Meer video's verkennen