Zeer gevoelige meting van de glomerulaire permeabiliteit bij muizen met Fluorescein isothiocyanaat-poly sucrose 70

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het nefrologieveld over de rol van glomerulaire doorlaatbaarheid bij nierziekten. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat kleine en voorbijgaande toename van de glomerulaire doorlaatbaarheid worden gedetecteerd met behulp van een fluorescerende lood gelabelde tracer. Na anesthesie plaatst u een urinekatheter in de vrouwelijke muis.

Plaats de muis in rugvermogen. Draai de onderbuik aan en vind het urethrale ostium. Verkrijg het plastic deel van de katheter van een 22 G angiocatheter en smeer het in met xylocaine gel.

Gebruik de linker wijsvinger om voorzichtige spanning op de onderbuik te plaatsen en de katheter drie millimeter in het urethrale ostium te introduceren terwijl de distale urethrale as wordt parallel getrokken. Draai de bovenkant van de angiocatheter 180 graden door de punt binnen het urethrale ostium te houden en de as van de plasbuis te behouden. Introduceer vervolgens de katheter zeven millimeter verder in de muis, zodat deze in de blaas wordt geplaatst.

Plaats een 1,5 milliliter bruine buis over de bovenkant van de angiocatheter om de urine te verzamelen. Breng een milliliter van 0,9% natriumchloride onderhuids aan om de urineproductie te verbeteren. Scheer de hals van de muis en plaats deze in recumbency met het hoofd naar de chirurg.

Hyper uit te breiden het hoofd van de muis met een tape. Desinfecteer de hals met 70% isopropanol. Met behulp van een pincet en een schaar maak een vijf millimeter huid incisie onder de kaaklijn.

Snijd de huid ongeveer een centimeter in de richting van het borstbeen tot het midden van het borstbeen is bereikt. Gebruik een schaar. Ontleed de huid voorzichtig aan de rechterkant van de nek.

Maak een rechthoekige incisie van de huid naar rechts om het zachte weefsel van de nek bloot te leggen. Wees voorzichtig om de halsader niet te beschadigen. Gebruik een schaar en een pincet om de huidkleppen met twee klemmen te bevestigen.

Met behulp van de punt van de fijne pincet, voorzichtig bloot de halsader door botte voorbereiding. Verwijder indien nodig weefsel met een fijne schaar. Vermijd letsel aan adertakken.

Plaats en sluit een ligatuur met een zijden draad op het distale deel van de zichtbare halsader die zich naar het hoofd van de muis bevindt. Bevestig de zijden draad met een tape om spanning op de ligatuur te zetten. Dit zorgt voor lichte spanning op de halsader.

Bereid een ligatuur rond het proximale deel van de halsader. Vul daarna de katheter met de equilibratie- en fusieoplossing. Bevestig de katheter met een tape, zodat de katheter is het uitlijnen van de halsader.

Controle voor bellen om luchtembolie te voorkomen. Til de halsader op met een fijne pincet op de plaats van inbrengen. Lijn de slang parallel aan de halsader en prik de halsader gericht op het lumen.

Invoegen voor ongeveer twee tot vier millimeter parallel aan de as van de halsader. Vermijd stevige bewegingen. Sluit de ligatuur om de katheter te repareren.

Controle voor dichtheid van de ligatuur door zorgvuldig te bekijken door de microscoop. Leg een vochtig uitstrijkje over de plaats van de operatie. Plaats de staart manchet aan de onderkant van de muisstaart, terwijl de muis legt in rug recumbency.

Start de metingen en herhaal ze tien keer per keer punt. Als bloeddrukmetingen niet correct lijken en er valse gegevens worden geproduceerd, pas dan de positie van de staartmanchet aan. Vóór de evenwichtsfase, verander de urineinzamelingsbuis en plaats het op ijs.

Vouw een wattenstaafje en zet het rond de kleine vaatkatheter die wordt geïntroduceerd in de halsader. Plaats een klem over het wattenstaafje om de bloedstroom of luchtembolie retrograde af te schaffen. Sluit een 27 G naald aan met een spuit van één milliliter gevuld met de FITC bolus aan het einde van de kleine vaatkatheter.

Open de klem en breng de 100 microliter FITC bolus aan. Sluit de klem opnieuw en sluit de grotere katheter aan op de kleinere katheter. Open de klem en start de spuitpomp met een stroomsnelheid van 0,008 milliliter per minuut.

Zet de infusie 60 minuten voort. In deze fase wordt de effectieve geneesmiddelen op glomerulaire perm selectiviteit onderzocht. Verander de urinebuis vorm tijd punt nul minuut naar een andere 1,5 milliliter bruine buis.

Doe een uitstrijkje rond de kleine vaatkatheter en koppel de grote katheter los van de kleine vaatkatheter. Vul de spuit met de experimentele faseoplossing. Plaats het in de spuitpomp en laat de infuuspomp draaien zodat de grote katheter wordt gevuld met de experimentele faseoplossing.

Sluit de katheters opnieuw aan terwijl u luchtembolie vermijdt en de klem heropent. Start de spuitpomp met een stroomsnelheid van 0,008 milliliter per minuut. Blijf de spuitpomp 60 minuten draaien en verzamel daarna de urine in de urinebuis.

Zet de urinebuis op ijs. In deze studie, fluorescentie scan van inheemse muis urine toont een piek op 395 nanometer. FITC polysucrose 70 bij een concentratie van 40 microgram per milliliter in muisurine geeft een fluorescentie maximum op 525 nanometer.

Muisurine verstoort de fluorescentiemeting van FITC polysucrose 70 niet. Bij de toelating van 525 nanometer tonen de stijgende concentraties van FITC polysucrose 70 een verhoogde fluorescentieintensiteit. Deze methode is ook in staat om verschillen in glomerulaire doorlaatbaarheid op te sporen.

De witte kolommen vertegenwoordigen FITC polysucrose 70 niveaus vóór het begin van angiotensin II stimulatie in de experimentele fase. Na doseringen gedurende 60 minuten nam de glomerulaire doorlaatbaarheid toe in vergelijking met de controlegroep. angiotensine II was verminderde glomerulaire doorlaatbaarheid.

De FITC polysucrose 70 niveaus daalde na een extra 60 minuten angiotensin II stimulatie of 60 minuten angiotensin II washout. De toename van de glomerulaire doorlaatbaarheid als gevolg van angiotensin II kan worden geblokkeerd door een angiotensin II receptor blocker. Bloeddruk gecontroleerd door de staart manchet methode bleek geen significante verschillen tussen de controle en angiotensin II behandelde groepen.

Tijdens het proberen van deze procedure is het belangrijk om luchtembolie te vermijden bij het veranderen van infusieoplossingen.