Probiotische Studies in neonatale muizen met behulp van de maagsonde

Probiotische studies, in neonatale muizen met behulp van gavage. Inleiding, deze video protocol zal detail de setup en procedure voor het navagen probiotica om een neonatale muis, op zijn dag van het leven twee. De steriele verzameling darmen, voor darmmicrobioom analyse, is ook gedetailleerd in dit protocol.

Sommige representatieve resultaten, zijn ook opgenomen in dit protocol, om een aantal van de soorten gegevens, die kunnen worden afgeleid van het volgen van deze procedure te introduceren. Intra-oesofageale gavage van neonatale muis, dag van het leven twee. Plaats de kooi van de dam in dezelfde kap waar de experimentele kooien op het verwarmingskussen worden geplaatst, het verwarmingskussen is ingesteld op middelhoog niveau, wat ongeveer 38 graden Celsius is.

Verwijder wat grond nestelen uit de kooi thuis, wrijf het nestelen met gehandschoende handen om de geuren, van het nestmateriaal op de handschoen. Dit vermindert de overdracht van vreemde geuren, op de pup wanneer behandeld. Dit vermindert op zijn beurt het risico, van verlating of kannibalisatie, door de dam als gevolg van vreemde geuren.

Wanneer de pups na de ingreep naar de kooi van het huis worden teruggebracht. Maak een kegelvormig houdnest en plaats het in de nieuwe en steriele experimentele kooi, die voorverwarmd is. Breng alle pups uit de kooi naar huis, in de experimentele kooi.

Verplaats de pups in de kegelvormige nesting, in de experimentele kooi. Verwijder de kooi van de dam en plaats deze, weg van het gavaging gebied. Dit vermindert de stressvolle omstandigheden voor de dam, door te voorkomen dat de dam van het horen van de pup, het doen van de procedure.

Open de spuitverpakking voor gemakkelijke toegang. Verwijder de automatische clave gavage voernaald, op een steriele manier, en bevestig deze aan het hoofd van de spuit. De naald wordt gewassen met 70% ethanol en water, voordat autoclaving.

Verschillende sets van voernaalden, worden gebruikt tussen de behandelings- en controlegroepen, om kruisbesmetting te voorkomen. Opstellen van de probiotische kleurstof oplossing in de spuit, omkeren en flick met de vinger om bubbels te verwijderen, en lege ruimte in het volume in de spuit. Trek terug op de zuiger om vloeistof te zuiveren, uit de dode ruimte van de naalden, en druk vervolgens de zuiger in, om lucht- en luchtbellen te verdrijven, dit is belangrijk om ervoor te zorgen, dat er geen luchtbellen worden geschroefd, in het dier.

Pas het gewenste volume in de spuit aan, voor een dag van het leven twee muis, niet meer dan 30 microliter mag worden gavaged. De zwarte markering die u op de naald ziet, geeft de maximale lengte aan, zodat de naald in de muis kan worden ingebracht. Deze lengte wordt verkregen door extern te meten, de lengte tussen de snuit en het xiphoidproces.

Plaats de spuit op een steriel oppervlak, verwijder de pup te worden gavaged uit de experimentele kooi, en observeren voor gezondheidsverschijnselen. Deze gezondheidsverschijnselen omvatten, regelmatige ademhaling en roze kleuring van de huid. Leg de pup op het steriele oplettende blad, op het verwarmingskussen.

Smeer het buitenoppervlak van de voernaald, met behulp van het oplosmiddel gebruikt om de probiotische oplossen. Hier is het dextrosewater, dit facilitairen de vlotte ingang van de naald, in de slokdarm van het dier. Scruffeer de pup bij de huid op de nek, met behulp van uw duim en uw wijsvinger.

Pak de spuit in je dominante hand, in een positie die u toelaat om de naald in te voegen, en druk de zuiger zonder het aanpassen van uw vingers. Plaats de bol van de voernaald onder een hoek van 45 graden, totdat deze de achterkant van de mond bereikt. Draai je hand met de naald uit de buurt van je, terwijl de lamp van de naald op zijn plaats, zodra de naald is duidelijk met de romp, zal het beginnen te glijden.

Zorg ervoor dat er geen extra druk wordt uitgeoefend op de spuit, om beweging te stimuleren. Het proces van slikken zal traag zijn, en geduld is de sleutel. Naarmate de pup ouder wordt, wordt het slikken van de naald sneller en gemakkelijker.

De voernaald is voorgetekend, om te voorkomen dat de lamp in de maag komt. Zodra de markering nadert de snuit, arrestatie van de beweging van de naald, en langzaam leveren de probiotische oplossing. Zodra de levering is voltooid, verwijder de naald langzaam.

Plaats de muis op het verwarmingskussen en let op herstel. Een hijgende reflex verdwijnt en de hartslag stijgt, een gezonde roze kleur verschijnt, en onopgeloste hijgende reflex na 45 seconden, geeft een mislukte gavage en de muis moet worden geëuthanaseerd. De gavage kleurstof moet zichtbaar zijn door de bleke huid, de kleurstof moet alleen zichtbaar zijn in het gebied, waar de melkvlek meestal wordt gevonden.

De opsluiting van de kleurstof in de maag, duidt op een succesvolle gavage. Als de kleurstof wordt gevonden in de borstholte, of een andere holte dan de maag, moet de muis worden geëuthanaseerd, omdat het wijst op een mislukte gavage. Minimale druk is nodig, om een dag van het leven twee muis scruff.

Tekenen van scruffing te hard kan omvatten, onvermogen om te ademen, aanzienlijke hijgen, en steken de tong uit voor een lange duur. Een paar suggesties voor de gavaging procedure, rust de achterkant van je scruffing handen vinger, op de palm van de hand met de spuit, dit zorgt ervoor dat de pups positie stabiel is, tijdens de procedure en de naald, wordt niet verplaatst in het dier. Tijdens de gavage zal het gewicht van de naald het glijden vergemakkelijken, de naald door de pup laten inslikken, zonder externe druk uit te oefenen.

Breng de pups terug naar de kooi van de moeder en volg de controle op volgens uw schema. Verzameling van darmmonsters voor kolonisatieanalyse. Het dier werd humaan geëuthanaseerd, door methoden die zijn goedgekeurd in het Animal Care and Use Protocol.

De chirurgische tafel is bekleed met een steriele absorberende mat. De gereedschappen zijn gesteriliseerd met behulp van 70 procent ethanol, en een hot beat sterilisatie op 250 graden Celsius. De externe dienst van het dier wordt ontsmet met 70 procent ethanol.

Snijd de externe huid met tangen en scharen, in vier kwadranten, terwijl extra voorzichtig, om niet scheurt het buikvlies. Plooi de huid aan de zijkant zodanig dat het buikvlies goed wordt blootgesteld. Gebruik verschillende, nieuwe steriele gereedschappen, om het buikvlies open te snijden, en neem extra voorzichtigheid niet te snijden, de interne organen in dit proces.

Zoek de maag van de pup en klem bij de twaalfvingerige darm. Met behulp van twee steriele tangen, lokaliseren van de maag, en lokaliseren van de duodenale einde van de maag. Klem recht op de kruising, van de maag en de twaalfvingerige darm.

Gebruik twee nieuwe steriele tangen om de darmen te laten lopen, gebruik een forcep om de twaalfvingerige darm vast te houden, terwijl je de andere gebruikt om bindweefsel weg te scheuren, waarbij de darmen intact blijven. Terwijl je ontrafelt, plaats je de darmen, op het steriele absorberende pad dat het dier bedekt. Als je toevallig de darmen scheurt, tijdens de ontrafelprocedure, markeer dan het gebied waar het scheurde, zodat de oriëntatie van de darm intact is.

Klem aan het rectale uiteinde en snij aan beide klemmen. Plaats de intacte darm, op een steriele gemarkeerde aluminiumfolie in de juiste oriëntatie. Markeer alle delen van de darm, die nodig zijn voor uw verdere analyse.

DNA wordt gewonnen uit deze darmen, met behulp van een geoptimaliseerde extractieprocedure, en QPCR-analyse wordt gedaan om de probiotische te kwantificeren. Het DNA wordt gewonnen uit verse darmen, of de darmen kunnen worden opgeslagen, bij negatieve 80 graden Celsius met behulp van een vriesdoos. Representatieve resultaten, lactobacillus plantarium, kolonisatie met gavage elke dag en om de andere dag.

Een hoger LP-signaal werd waargenomen in darmen van muizen, gavaged om de andere dag, in vergelijking met muizen gavaged elke dag. Zo zijn latere experimenten werden gebouwd, met behulp van gavages om de andere dag. Lactobacillus plantarum gavaged muizen, mede-gehuisvest met niet-geborgen muizen.

Variabele signalen van LP werden waargenomen bij onbehandelde muizen, die werden mede-gehuisvest met LP gavaged muizen. De kolonisatie verspreiding van LP, is mogelijk met de nestleden, en dus de behandeling voorwaarden, werden gescheiden door kooien voor onze latere experimenten. Conclusie, deze procedure kan worden gebruikt om te leveren, precieze hoeveelheden van alle vloeistof aan pasgeboren muizen.

De bemonstering van darmen kan worden geëxtrapoleerd, om de veranderingen in microbioom te verkennen, door middel van andere analysemethoden. Het toepassingsgebied van deze video is om een platform te bieden, voor onderzoekers om neonatale muis gavage modellen te gebruiken, om de mechanismen achter de waargenomen effecten te begrijpen, met vroege toediening van probiotica. Een speciale dank aan het Kollmann Lab Team, The Animal Care Services van de University of British Colombia, voor het mogelijk maken van deze studie.