Name: Gedrags benaderingen voor het bestuderen van aangeboren stress in zebravis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 29 s
Description: Leer de novel tank assay om stressgedrag te meten in volwassen zebrafish met behulp van farmacologische benaderingen. Deze methode helpt onderzoekers neurale circuits en stressmodulatie te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de financiering van de Jupiter Life Science Initiative aan de Florida Atlantic University naar ERD en ACK. Dit werk werd ook ondersteund door subsidies R21NS105071 (toegekend aan ACK en ERD) en R15MH118625 (toegekend aan ERD) van de nationale instituten van de gezondheid.

Het protocol is goedgekeurd door de institutionele Dierenzorg en het gebruik Committeeat Florida Atlantic University.
1. voorbereiding
<ol><li>Wijs een geïsoleerde ruimte voor het uitvoeren van gedrags-studies, of sluit een gedeelte van een kamer, zodat het geïsoleerd is. Opmerking: de kamer moet worden ongestoord en hebben weinig verkeer om te voorkomen dat het normale gedrag van de vis te verstoren.</li>
	<li>Verplaats de volgende materialen en apparatuur in de gedrags kamer: (i) een camera en lens, (II) een infrarood filter die kan worden aangesloten op de lens, (III) een camerastand, (IV) een computer met camera acquisitie software, (v) een stevige en stabiele tafel om de test uit te voeren on, (VI) infraroodverlichting (IR verlichting; 850 nm of 940 nm), (VII) een witte acryl diffuser, die langer is dan de lengte van de opname tank (VIII) 1,8 L trapeziumvormige plastic assay tank (aangeduid als de ' nieuwe tank '; de een hier gebruikt is 12 x 18 inches) , en (IX) een emmer vis systeem water. Opmerking: voor de nieuwe tank, ons Lab maakt gebruik van commercieel verkrijgbare plastic vaten, die zijn trapeziumvormig in vorm. De afmetingen van de tank zijn ongeveer 6 in x 9 in (gedetailleerde afmetingen zijn voorzien in Figuur 1a). De diffuser boord die we gebruiken is iets groter dan de nieuwe tank (12 in x 18 in). Nieuwe tank experimenten zijn uitgevoerd met tanks met verschillende vormen, zoals die welke zijn rechthoekig of die met andere trapeziumvormige afmetingen20,21. Typisch, vis gedrag is vergelijkbaar in alle tanks, ongeacht hun afmetingen: voor alle containers, vis in eerste instantie de voorkeur aan de onderste helft, maar na verloop van tijd beginnen met het verkennen van de bovenste helft met een grotere frequentie.</li>
	<li>Bevestig het infrarood filter op de camera lens. De golflengten van de infrarode lichte stroken variëren typisch van 850 nm aan 940 nm. Het filter is een lange pass filter dat het licht van golflengten beperkt minder dan 720 nm van de overdracht door naar de camera.</li>
	<li>Selecteer geschikte parameters voor de camera acquisitie software. Voor de meeste opnames, zet de camera acquisitie tot een snelheid van 30 frames per seconde, en de opnameduur tot 10-min. Opmerking: deze parameters kunnen verschillen, afhankelijk van het experiment. Bijvoorbeeld, om te studeren gewenning in een nieuwe tank22,23, langere opnames kunnen worden verlangd.</li>
</ol>2. Setup
Opmerking: de stappen in deze sectie beschrijven het opzetten van de nieuwe tank assay. Een diagram van het eindproduct wordt gegeven in Figuur 1B.
<ol><li>Plaats de nieuwe tank in het midden van de tafel.</li>
	<li>Positie van de infraroodverlichting achter de tank en plaats de witte acryl blad of diffuser scherm in tussen de tank en LED lichtbron.<ol>
<li>Plaats de diffuser, zodat het maximaal verspreidt het licht afkomstig van de Led's, en de intensiteit van het licht is genoeg om de nieuwe tank te verlichten. Hoe dichter het bord is om de lichtbron, hoe helderder de lichten zal worden, maar hoe minder het zal diffuse. Daarentegen, het plaatsen van de diffuser bord uit de buurt van de lichtbron zal verminderen lichtintensiteit, maar verspreid het licht beter.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Vul ongeveer drie kwart van de nieuwe tank met het water van het vissen systeem. Opmerking: systeem water wordt gegenereerd met omgekeerde osmose van leidingwater, gevolgd door dosering zodanig dat geleidbaarheid gelijk is aan 900 ± 100 µS, dat de pH neutraal is (7,2), en dat de temperatuur is 27 ± 1 °C.</li>
	<li>Bevestig de camera op de camerastand en sluit de camera aan op de computer. Open de video acquisitie software en pas de camera aan de voorkant van de tank gezicht en zorgen voor de hele nieuwe tank kan worden gezien en dat er geen obscure gebieden in de video. Pas de tank en de infraroodverlichting zodanig dat er voldoende en zelfs verlichting in de gehele tank wanneer waargenomen door de camera. Nota: alvorens aan experimenten over te gaan, kan het vaak nuttig zijn om een proeflooppas uit te voeren, waarin de video van een vissen wordt gevangen en het volgen wordt uitgevoerd. Dit zal ervoor zorgen dat de Setup voldoende is voor het experimenteren van gedrag.</li>
</ol>3. nieuwe tank test Setup
<ol><li>Bereid een 250 mL bekerglas vooraf gevuld met vis systeem water, en ten minste twee Holding tanks.</li>
	<li>Op de ochtend van de test, breng minstens 10 test volwassen zebravis voor elke experimentele voorwaarde (controles en experimentele volwassenen) van vissen faciliteit in een holdingstank over, breng hen naar de gedrags ruimte over, en laat hen aan acclimatiseren voor minstens één Uur. Opmerking: een Power analyse moet worden uitgevoerd voordat experimenten, maar in onze handen, een n = 10 is meestal voldoende om statistische significantie te detecteren. Bovendien mag de vuilwatertank niet meer dan vijf personen per liter water bevatten. Een acclimatisatie van een uur is voldoende als zebravis volwassenen zijn aangetoond dat wennen binnen 30 minuten van een nieuwe tank22. Ook, gedrags ritmes worden beïnvloed door de dag van de processen, en dus experimentele replicaties gedaan op verschillende dagen moet worden uitgevoerd binnen dezelfde uren. We voeren meestal alle experimenten tussen de uren van 11:00 am en 6:00 pm.</li>
	<li>Label de tanks zodanig dat de toestand of het genotype van de dieren is blind voor de experimenter. Nota: de experimenten kunnen gemakkelijk aan de Experimenteer worden verblind door tanks te etiketteren gebruikend een brief of een systeem van het aantal (d.w.z., één tank is geëtiketteerde "A", een andere "B", enz.). Een partij die niet betrokken is bij de experimenten labels van de tanks met een dergelijk systeem, en maskers de identiteiten van de experimenter tot na de post-analyse is voltooid.</li>
	<li>Met behulp van een net, plaats een alleenstaande volwassene in de voorgevulde Beker van stap 3,1. Laat de volwassen vis acclimatiseren in het bekerglas gedurende 10 minuten. Nota: Neem het geslacht van de volwassene op, aangezien het belangrijke post-analyse zou kunnen zijn om geslacht-specifieke verschillen te zoeken.</li>
	<li>Na acclimatisatie in het bekerglas, Introduceer de vis in de nieuwe tank (opgericht in sectie 1) door het water en de volwassene voorzichtig uit het bekerglas te gieten.</li>
	<li>Na de invoering van de volwassene in de nieuwe tank, start de camera-opname, en ga weg van de Setup om extra nood te voorkomen dat de vis.</li>
	<li>Na de opname is voltooid, verwijder het individu uit de nieuwe tank en plaats in een nieuwe holding tank. Opmerking: een andere holding tank van de een in stap 3,2 moet worden gebruikt om herhaalde testen te voorkomen op dezelfde personen.</li>
	<li>Herhaal stap 3,4 tot 3,7 voor elke volwassene totdat alle dieren zijn getest. Opmerking: in aanvulling op verblindende voorwaarden of genotypes, randomize Trials. Gebruik een random number generator of een tool die het mogelijk maakt een willekeurig tussen de proeven. Dit moet worden gedaan voordat experimenten, zodat elke proef wordt bepaald voordat de experimenten beginnen.</li>
	<li>Aan het einde van alle tests, terug de vis terug naar de vis faciliteit.</li>
</ol>4. voor behandeling met drug
Opmerking: het doel van de volgende stappen is om het gedrag van een individu te vergelijken voor en na het gebruik van drugs. Deze vergelijking wordt bereikt door eerst het uitvoeren van een nieuwe tank test als in stap 3,4 tot 3,6, gevolgd door medicamenteuze behandeling, en vervolgens een tweede roman tank test (Figuur 3a).
<ol><li>Bereid een voorraad oplossing van het geneesmiddel, met inbegrip van positieve en negatieve controles. Nota: als het medicijn eerder in de literatuur is gebruikt, vind een aangewezen het werk dosis en gebruik dit. Bijvoorbeeld, voor buspirone in de representatieve resultaten, maken we een 100x voorraad oplossing en het gebruik 0,05 mg/ml als de uiteindelijke concentratie, zoals beschreven in de literatuur13,20. Als de voorgestelde dosis onbekend is, moet een dosis Response curve worden uitgevoerd door het onderzoeken van verschillende concentraties. Stel meer bekers met seriële verdunningen van drugs. Als het medicijn niet oplosbaar is in water, gebruik dan dimethyl sulfoxide (DMSO) als oplosmiddel.</li>
	<li>Verdunnen van geneesmiddelen tot werkende concentratie in 250 mL bekers met systeem water. Bijvoorbeeld, als een 100x oplossing werd gemaakt, Verdun 1:100 in systeem water. Stel een bekerglas met alleen het systeem water als een controle. Opmerking: als DMSO werd gebruikt als oplosmiddel in stap 3,1, gebruik dan een gelijk volume van DMSO in de controle beker.</li>
	<li>Met de hulp van een andere onderzoeker, masker de identiteit van het medicijn en de controle bekers om ervoor te zorgen dat de tester is blind voor de behandeling voorwaarden tot na de analyse. Opmerking: er kan een nummer-of letter systeem worden gebruikt.</li>
	<li>Voer een nieuwe tank test uit door de stappen 3,1 tot en met 3,6 te volgen om een basislijn gedragsmatige stress respons te verkrijgen.</li>
	<li>Na de baseline-opname, gebruik dan een netto om onmiddellijk verwijderen van de volwassen vis uit de nieuwe tank en plaats deze in het bekerglas gedoseerd met drugs of voertuig, zoals beschreven in stap 4,2. Laat de volwassene in het bekerglas blijven gedurende 10 minuten. Opmerking: Zorg ervoor dat het net het water in de bekers niet raakt om kruisbesmetting van drugs te voorkomen. Zorgen voor een goede dosering en administratietijd, afhankelijk van het gebruikte medicijn. Een 10 min behandeling tijd kan niet werken voor alle drugs.</li>
	<li>Na de behandeling, gebruik dan een net om de volwassene te verwijderen uit het bekerglas in stap 4,5 en plaats deze in een andere beker gevuld met vers systeem water alleen. Dit is de Wash periode om verdere dosering te minimaliseren tijdens de tweede nieuwe tank test. Laat de volwassene in de afwas beker blijven voor een extra 10 min. Nota: de afzonderlijke netten zouden voor elke drug voorwaarde moeten worden gebruikt om om het even welke ongewenste dwars behandeling met drug te verhinderen. De Wash periode kan worden overgeslagen als de experimenter wenst.</li>
	<li>Voer de nieuwe tank Diving test een tweede keer door het verwijderen van die volwassene uit het bekerglas in de vorige stap, plaats deze in een nieuwe roman tank, en volg de stappen 3,5 tot 3,6.</li>
	<li>Na de tweede nieuwe tank test, verwijder het individu in een aparte holding tank. Giet het systeem water in de tweede nieuwe tank en vul het met vers systeem water voor de volgende test. Deze stap voorkomt kruisbesmetting van een geneesmiddel. Opmerking: afhankelijk van de halfwaardetijd van de drugs, verse bekers die drugs bevatten moet worden gemaakt om de 3 uur. Voor buspirone, maak verse oplossingen om de 3 uur. Bovendien, na de nota in stap 3,8, moeten de proeven worden gerandomiseerd tussen de controles en medicamenteuze behandelingen.</li>
	<li>Aan het einde van alle proeven, terug te keren individuen terug in de vis faciliteit. Opmerking: afhankelijk van het type geneesmiddel dat wordt gebruikt, kunnen de effecten van deze behandelingen op individuen langdurig zijn. Gebruik deze personen daarom niet in andere experimenten.</li>
</ol>5. video analyse
<ol><li>Na alle proeven, laad video bestanden in tracking software van keuze. Nota: wij gebruiken typisch commercieel beschikbare het volgen software, nog kunnen verscheidene vrij beschikbare softwarepakketten worden gebruikt. De stappen om tracking te bereiken kunnen verschillen naargelang het gebruikte software pakket.</li>
	<li>Met behulp van een stilstaand beeld van de video, definieer denkbeeldige grenzen rond (i) de hele nieuwe tank Arena die is gevuld met water, en de grenzen rond (II) de bovenste derde, (III) middelste derde, en (IV) onderste derde van de tank. Gebruik deze om de tijd vast te stellen dat de vis doorgebracht in elk gedeelte van de nieuwe tank.</li>
	<li>Bereken x-y verplaatsing per frame voor elke Arena gedefinieerd in stap 5,2.</li>
	<li>Definieer de bovenste, middelste en onderste gebieden van de tank. Elke regio moet gelijk zijn in grootte. Een korte methode voor het bepalen van deze regio's is het berekenen van de lengte van de tank in de y-richting, en verdeel dit met 3. Opmerking: er bestaan variaties in het algemene protocol. Sommige Labs gebruiken bijvoorbeeld de helften in plaats van de derde14.</li>
	<li>Bepaal de tijd doorgebracht in elke Arena, de afstand, en de snelheid. Nota: de meeste het volgen pakketten zullen automatisch deze voor de gebruiker berekenen. Echter, als de tracking software niet, kunnen deze gemakkelijk worden berekend van de x-y verplaatsing waarden. De afstand kan bijvoorbeeld worden bepaald met behulp van de formule: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/59092/59092eq1.jpg"> en snelheid kan worden bepaald volgens de formule: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/59092/59092eq2.jpg">
</li>
	<li>Herhaal stap 5,2 tot en met 5,4 om tracks en metingen voor alle tests te verkrijgen. Opmerking: variaties op dit algemene protocol</li>
</ol>6. testen op normaliteit
<ol><li>Statistieken uitvoeren voordat u statistische verschillen berekent. Controleer of de gegevens normaalgesproken worden gedistribueerd met een Shapiro-Wilk-test.</li>
	<li>Als de null-hypothese dat de gegevens normaliter worden gedistribueerd wordt afgewezen (d.w.z. dat de gegevens geen Gauss-verdeling volgen), voert u alle tests uit met niet-parametrische tests. Omgekeerd, als de gegevens worden gevonden om een normale verdeling te volgen, ga verder met parametrische tests te gebruiken. Nota: wij gebruiken commercieel beschikbare software om statistieken uit te voeren; de programmeertaal R kan echter ook worden gebruikt. Een Shapiro-Wilk analyse kan uitgevoerd worden met behulp van de Shapiro. test functie van R.</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende of financiële belangen hebben.

Zebravis vertonen een robuuste stress respons in een nieuwe tank Hier, beschrijven wij een eenvoudige gedrags benadering voor het onderzoeken van spanningsreacties in volwassen zebravis, en valideren de benadering als eenvoudige maatregel van spanning gebruikend farmacologie.
De roman tank test is een wijd gebruikte test voor het onderzoeken van ingeboren spanning in zebravis en andere soorten vissen12,14,<sup cl...

Stress reacties zijn veranderd gedrags-en fysiologische staten als gevolg van potentieel schadelijke of aversieve prikkels. De reacties van de spanning worden behouden door het dierlijke Koninkrijk, en zijn kritiek voor het voortbestaan van een organisme1. Decennia van onderzoek hebben sterk uitgebreid onze kennis van een aantal van de genetische en neuronale mechanismen ten grondslag liggen aan stress Staten. Vandaag, gebieden van de hersenen, zoals de amygdala en de striatum2, en genetische factoren zoals Corticotropin releasing hormoon (CRH), en de glucocorticoïd (gr) en Mineralocorticoid receptoren ( de heer) zijn uitgebreid bestudeerd3,4,5,6. Ondanks deze kritische bevindingen, veel blijft onbekend over genetische en neuronale regulering van stress. Als zodanig, veel stress gerelateerde aandoeningen lijden aan een gebrek aan therapeutische.
Genetisch te wijzigen modelorganismen bieden een nuttig instrument in de studie van genetische en neuronale controle van gedrag. Vis modellen, in het bijzonder, zijn zeer krachtig: ze zijn kleine organismen met korte generatie tijden, het gebruik ervan in een laboratoriumomgeving is gemakkelijk, hun genomen zijn eenvoudig te wijzigen, en, als een gewervelde, ze delen niet alleen genetische, maar ook neuroanatomische homologie met hun tegenhangers van zoogdieren7,8. Standaard assays voor het meten van stress kan worden gekoppeld aan zebravis lijnen harboring genetische mutaties, of die waarin manipulatie van nauwkeurige neuronale deelverzamelingen mogelijk is, en de effecten van enkelvoudige genen of gedefinieerde neuronen kunnen snel en efficiënt worden beoordeeld.
Gedragsmatige, stressreacties kunnen worden gekenmerkt in vis als periodes van Hyper-activiteit of langdurige periodes van inactiviteit (verwant aan ' bevriezen ')9, verminderde exploratie10, snelle ademhaling, verminderde voedselinname11, en een plaats-voorkeur voor de bodem van een tank12. Bijvoorbeeld, wanneer geplaatst in een onbekende tank, volwassen zebravis en andere kleine vissen modellen tonen een eerste voorkeur voor de onderste helft van de tank, maar toch, na verloop van tijd, de vis beginnen met het verkennen boven-en onderkant helften met bijna-gelijke frequentie12. Behandeling van volwassenen met geneesmiddelen bekend om angst te verminderen veroorzaken vissen om onmiddellijk te verkennen de bovenste helft van10,13. Omgekeerd, drugs die angst te verhogen veroorzaken vis om sterke voorkeur voor de onderste helft van de tank12,14,15te tonen. Zo, verminderde exploratie en voorkeur voor de onderste helft van de tank zijn eenvoudige en betrouwbare indicatoren van stress.
Net als de meeste gewervelde dieren, stressreacties in vissen worden gedreven door activering van hypothalamic-hypofyse-Inter-renale as (HPI; analoog aan de hypothalamic-hypofyse-bijnier [hpa] as bij zoogdieren)14,16. Hypothalamic neuronen het uitdrukken van het hormoon Corticotropin-releasing hormoon (CRH) signaal aan de hypofyse, die op zijn beurt releases adrenocorticotroop releasing hormoon (ACTH). Acth vervolgens signalen naar de Inter-renale klier te produceren en afscheiden cortisol, die een aantal van de downstream-doelstellingen heeft16, een van hen negatief feedback van de CRH-producerende hypothalamic neuronen3,17, 18,19.
Hier beschrijven we een methode om gedrags maatregelen van aangeboren stress te beoordelen. Voor het gedrag, we detail protocollen met behulp van de nieuwe tank duiken test12,14. We tonen dan, als voorbeeld, dat een bekende anxiolytische drug, buspirone, vermindert gedragsmatige maatregelen van stress.

<table><tbody><tr><td>Camera</td><td></td><td></td><td>We gebruiken Point Grey Grasshopper3 USB camera met lens van Edmund Optics.</td></tr><tr><td>Infrarood filter</td><td>Edmund Optics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Video-acquisitieprogramma</td><td></td><td></td><td>Gebruik programma's zoals Virtualdub of FlyCapture omdat de acquisitie-framerate kan worden ingesteld.</td></tr><tr><td>Infrarood LED-verlichting</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Testtank</td><td>Aquaneering</td><td>Artikelnummer ZT180</td><td>Grootte: M3 1,8 liter</td></tr><tr><td>Standaard en klem, of standaard statief voor camera</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>250mL beker</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Volgsoftware</td><td></td><td></td><td>We gebruiken Ethovision XT 13 van Noldus Information Technology</td></tr><tr><td>Buspironchloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7148</td><td></td></tr><tr><td>Gerandomiseerde proefgenerator</td><td></td><td></td><td>We gebruiken de RANDBETWEEN-functie in Microsoft Excel</td></tr></tbody></table>

gedrags benaderingen voor het bestuderen van aangeboren stress in zebravis

Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish

Adequaat reageren op stress prikkels is essentieel voor het voortbestaan van een organisme. Uitgebreid onderzoek is gedaan op een breed spectrum van stress-gerelateerde ziekten en psychiatrische stoornissen, maar verder onderzoek naar de genetische en neuronale regulering van stress zijn nog steeds nodig om betere therapeutische ontwikkeling. De zebravis biedt een krachtig genetisch model om de neurale fundamenten van stress te onderzoeken, want er bestaat een grote collectie van mutant en transgene lijnen. Bovendien kan de farmacologie gemakkelijk worden toegepast op zebravis, aangezien de meeste drugs direct aan water kunnen worden toegevoegd. We beschrijven hier het gebruik van de ' novel tank test ' als een methode om aangeboren stress responsen in zebravis te bestuderen en te demonstreren hoe potentiële anxiolytische medicijnen kunnen worden gevalideerd met behulp van de assay. De methode kan gemakkelijk worden gekoppeld aan zebravis lijnen harboring genetische mutaties, of die waarin transgene benaderingen voor het manipuleren van nauwkeurige neurale circuits worden gebruikt. De assay kan ook gebruikt worden in andere vissen modellen. Samen, zou het beschreven protocol de goedkeuring van deze eenvoudige analyse aan andere laboratoria moeten vergemakkelijken.

Het onderzoeken van spanning in zebravis Om stress gedrag na verloop van tijd te onderzoeken in wild-type zebravis, testten we volwassen vis uit de AB strain24 in de novel tank test. AB volwassenen werden onderworpen aan het protocol zoals hierboven beschreven. Kort, vis kregen een 1-h acclimatisatie periode in een tank in het gedrag kamer. Een individu werd geplaatst in een bekerglas voor 10-min, en vervolgens voorzichtig geplaatst in een onbekende tan...

Dit manuscript beschrijft een eenvoudige methode om stress gedrag in volwassen zebravis te meten. De aanpak maakt gebruik van de aangeboren tendens dat zebravis de voorkeur aan de onderste helft van een tank, wanneer in een stressvolle toestand. Wij beschrijven ook methodes om de analyse met farmacologie te koppelen.

Gedrags benaderingen voor het bestuderen van aangeboren stress in zebravis

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of ...

De nieuwe tanktest zal combineren met krachtige genetische hulpmiddelen in Zebrafish biedt een methode voor het ontleden hoe de hersenen moduleert stress en hoe neurale circuits kunnen worden gedesreguleerd. Genetische en neuronale signaleringstrajecten zijn zeer bewaard gebleven tussen Zebrafish en zoogdieren en deze techniek kan ons begrip van de mechanismen die aan de stressrespons ten grondslag liggen, verder helpen. De methode is niet specifiek voor Zebrafish en is gebruikt met de Mexicaanse blinde grot vis en kan daarom mogelijk worden uitgebreid tot andere vissoorten.Een proef run kan nuttig zijn voor het bepalen van de juiste verlichting en contrast van het dier tegen een achtergrond om succesvolle tracking te bereiken. De test wordt zelden gebruikt, maar kan een betrokken proces zijn. Het visualiseren van de stappen zal helpen andere onderzoekers met succes uitvoeren van de procedure.Jacqueline Chin, een post-doc in het lab, en Lydia Albert, een studente, zal deze procedure demonstreren. Begin met het vullen van een bekerglas van 250 milliliter en ten minste twee holdingtanks met vissysteemwater. Breng op de ochtend van de test ten minste 10 volwassen Zebrafish voor elke experimentele toestand over in individuele holdingtanks voordat u alle vissen naar de Gedragskamer overdraagt voor acclimatisatie gedurende ten minste één uur.Label de tanks zodanig dat de conditie of genotype van de dieren blind is voor de onderzoeker en gebruik een net om een enkele volwassene voorzichtig in het voorgevulde bekerglas te plaatsen. Laat de volwassen vissen 10 minuten in het bekerglas acclimatiseren voordat u het water en de vissen uit het bekerglas voorzichtig in de experimentele nieuwe tank giet. Zodra de vis in de tank, beginnen met de camera-opname en ga weg van de setup om extra nood voor de vis te voorkomen.Wanneer de opname is voltooid, verwijder het individu uit de nieuwe tank en plaats de vis in een nieuwe holding tank. Om de effecten van specifieke geneesmiddelen van belang te beoordelen, verdun het medicijn tot een werkconcentratie in 250 milliliter bekers systeemwater. Met behulp van een beker met systeemwater alleen als een controle.Mask maskeren de identiteiten van de drug en controle bekers om ervoor te zorgen dat de tester blind is voor de behandeling voorwaarden tot post-analyse en het uitvoeren van een nieuwe tank test zoals aangetoond dat een baseline gedragsstress reactie te verkrijgen. Gebruik aan het einde van de basisregistratie een net om de vis gedurende 10 minuten onmiddellijk in een van de testbekers over te brengen voordat u de vis overzet naar een uitwasbeker met alleen vers systeemwater. Het is belangrijk om afzonderlijke netten te gebruiken die voor elke behandelingsbeker zijn aangewezen om toevallige dosering van de controlevissen te voorkomen, vooral wanneer er verschillende medicamenteuze behandelingen zijn.Na 10 minuten, plaats de vis in een nieuwe nieuwe tank voor een tweede nieuwe tank test. Aan het einde van de test breng de volwassen Zebrafish in een nieuwe holding tank en vervang het systeem water in de tweede nieuwe tank met vers systeem water voor de volgende stap om kruisbesmetting van het experimentele medicijn te voorkomen. Aan het einde van alle proeven, terug de individuen naar de visfaciliteit.Hier wordt de motorische activiteit van een enkele Zebrafish getoond tijdens de eerste en laatste minuut van een 10 minuten durende nieuwe tanktest. Wanneer voor het eerst geïntroduceerd in de tank, de vis meestal het grootste deel van de tijd doorbrengen in de bodem van de nieuwe tank. Na verloop van tijd echter, de volwassen vissen tonen een geleidelijke toename van de hoeveelheid tijd doorgebracht in de top van de tank.Inderdaad, de totale tijd doorgebracht in de top van de tank tijdens de eerste minuut is aanzienlijk korter in vergelijking met de laatste minuut van de nieuwe tank test. De totale afgelegde afstand tussen de eerste en laatste minuten laat daarentegen geen significante verschillen zien. In dit representatieve experiment, analyse van de volwassen Zebrafish motorische paden bleek weinig verschil tussen de Zebrafish zwemmen activiteit voor en na de behandeling voor groepen volwassenen blootgesteld aan het voertuig alleen.Daarentegen brachten volwassenen die zijn blootgesteld aan een anxiolytisch medicijn een grote hoeveelheid tijd in de bovenkant van de tank door in vergelijking met de motorische paden van dezelfde vis vóór de blootstelling aan geneesmiddelen. Deze verschillen waren niet te wijten aan minder bewegingsvrijheid in het algemeen, omdat er voor geen van de groepen significante verschillen in afgelegde afstand werden gemeten. Als gedragsritmes worden beïnvloed door circadiane processen, moet u experimentele replica's uitvoeren uitgevoerd op verschillende dagen op hetzelfde tijdstip van de dag voor elk experiment.Aanvullende gedragstesten, zoals de open veldtest of andere fysiologische metingen van stress, kunnen worden uitgevoerd om de resultaten van de nieuwe tankduiktest verder te valideren. Deze methode kan worden gebruikt een hoge doorvoer test voor het aanpakken van vragen met betrekking tot stress, angst, en angst.

behavioral-approaches-to-studying-innate-stress-in-zebrafish

Research

JoVE Journal

Behavior

Gedrag

De video beschrijft de licht-donker voorkeurstest om het angstgerelateerde gedrag bij zebravissen na de blootstelling aan ethanol te bestuderen.

Licht-donker voorkeurstest: een methode om angstgerelateerd gedrag bij zebravissen te bestuderen

Het artikel beschrijft een gedragsmethode om stress bij zebravissen te beoordelen. Als reactie op stress hebben zebravissen de neiging om op de bodem van een tank te zwemmen totdat stress is verwijderd. Het voorbeeldprotocol beschrijft stapsgewijze methode voor het uitvoeren van de test.

Nieuwe tankduiktest: een methode om aangeboren stressreacties bij zebravissen te bestuderen

Ons laboratorium ontwikkelde een nieuwe high-throughput geautomatiseerde imaging systeem dat nuttig is voor de detectie van verschillende gedragingen in 7 dagen oude zebravis larven. Het systeem kan worden gebruikt voor het detecteren van subtiele veranderingen in het gedrag na de larven zijn blootgesteld aan milieu-toxische stoffen of geneesmiddelen.

Geautomatiseerde High-throughput Behavioral Analyses in zebravis Larven

Een nieuwe methode voor het verminderen van variabiliteit bij het blootstellen van vissen aan geneesmiddelen wordt uitgelegd. Vissen die werden blootgesteld aan verschillende patronen van ethanolblootstelling bleken veranderde angstniveaus te hebben tijdens ontwenning in een licht/donker scototaxisch onderzoek.

Een nieuwe methode van de Drug aan Multiple zebravis ( Danio rerio) En de kwantificering van Terugtrekking

Dit manuscript beschrijft de opstelling, implementatie en analyse van boldheid, agressie en scholen in zebravissen en test op de aanwezigheid van een gedragssyndroom. Een gestandaardiseerde aanpak voor gedragskwantificering zal een gemakkelijkere vergelijking tussen studies mogelijk maken. Aanpassingen aan dit protocol zijn mogelijk, aangezien elke test afzonderlijk kan worden uitgevoerd.

Onverschrokkenheid, Agressie en ondieper Tests voor zebravis Behavioral syndromen

We beschrijven een gedrags protocol ontworpen om te beoordelen hoe de zebravis persoonlijkheden beïnvloeden hun reactie op het water stromen en zwakke magnetische velden. Vissen met de zelfde persoonlijkheden worden gescheiden op basis van hun exploratief gedrag. Vervolgens wordt hun gedrag rheotactic oriëntatie in een tunnel zwemmen met een lage stroomsnelheid en onder verschillende magnetische voorwaarden waargenomen.

Beoordeling van de invloed van de persoonlijkheid op gevoeligheid voor magnetische velden in de zebravis

Een gedetailleerd experimenteel protocol wordt gepresenteerd in dit document voor de evaluatie van neurobehavioral toxiciteit van milieuverontreinigende stoffen met behulp van een zebravis larven model, met inbegrip van het blootstellingsproces en tests voor neurobehavioral indicatoren.

Neurobehavioral Effecten van milieuverontreinigende stoffen op zebravissenlarven bestuderen

Het doel van het huidige protocol is om de stappen te schetsen die nodig zijn om een sociale voorkeurstest voor volwassen zebravissen op te zetten en te gebruiken en aan te tonen dat deze kan worden gebruikt om door ethanol geïnduceerde sociale defecten te karakteriseren.

Modellering van foetale alcoholspectrumstoornissen bij zebravissen om de impact van een ongunstige embryonale omgeving op het sociale gedrag van volwassenen te karakteriseren

Hier presenteren we een uitgebreide gedragstestbatterij, inclusief de nieuwe tank-, Shoaling- en sociale voorkeurstests, om de potentiële neurotoxische effecten van chemicaliën (bijv. methamfetamine en glyfosaat) op volwassen zebravissen effectief te bepalen met behulp van een enkele tank. Deze methode is relevant voor neurotoxiciteit en milieuonderzoek.

Beoordeling van neurotoxiciteit bij volwassen Danio rerio met behulp van een reeks gedragstests in een enkele tank

We beschrijven de workflow en data-analyse van een screeningssysteem voor het evalueren van de toxiciteit van chemische verbindingen op basis van de schrikreactie van zebravisembryo's. Het systeem registreert de bewegingen van zebravisembryo's bij blootstelling aan een trillingsstimulus en maakt een geïntegreerde evaluatie van algemene toxiciteit/letaliteit en neuromusculaire toxiciteit mogelijk.

Evaluatie van de toxiciteit van chemicaliën met behulp van een Zebrafish Vibration Startle Response Screening System

Leer de novel tank assay om stressgedrag te meten in volwassen zebrafish met behulp van farmacologische benaderingen. Deze methode helpt onderzoekers neurale circuits en stressmodulatie te bestuderen.

Gedrags benaderingen voor het bestuderen van aangeboren stress in zebravis

Meer video's verkennen