Name: Opname van nieuwe lipide-gecoate nanodeeltjes met Falcarindiol door menselijke mesenchymale stamcellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: Leer hoe je lipide-gecoate nanodeeltjes met falcarindiol fabriceert voor kankertherapie met behulp van menselijke mesenchymale stamcellen. Deze methode biedt een stabiel en schaalbaar systeem voor het afgeven van hydrofobe geneesmiddelen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs bedanken Dr. Moustapha Kassem (Odense University Hospital, Denemarken) voor de menselijke mesenchymale stamcellen. De auteurs bedanken de Deense medisch Bioimaging centrum voor toegang tot hun microscopen. De auteurs bedanken de Carlsberg en Villum grondslagen voor financiële steun (E.A.C.). De auteurs erkennen de financiële steun van de Niels Bohr hoogleraarschap award van de Deense nationale Research Foundation.

1. Nanoparticle synthese door snelle oplosmiddel verschuiving van techniek
<ol><li>De volgende nanoparticles voorbereiding instellen: een blok kachel/monster concentrator, een exsiccator, een digitale doseersysteem met een spuit van 1 mL glas, een 12 mL glazen ampul, een magnetische roerder, een magnetische vlo (15 mm x 4,5 mm, in een cilindrische vorm met polytetrafluorethyleen [PTFE] coating) binnen de glazen ampul en een hiervoor verdamper.</li>
	<li>Afzien van 2,4 mL 250 µM falcarindiol voorraad opgelost in 70% EtOH water mengsel in een flesje van scintillatie.</li>
	<li>Het verdampen van de vloeibare fractie, met behulp van de concentrator monster gedurende ongeveer 4 uur, droge falcarindiol verkrijgen.<ol>
<li>De flacon Scintillatie invoegen in het blok verwarmingssysteem; de monster-concentrator levert gas over het gebruik van roestvast stalen naalden, monster concentreren van het monster. Verdampen bij kamertemperatuur; Gebruik geen warmte.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Eenmaal gedroogd, voeg de volgende onderdelen van de lipide-coating in de bovengenoemde Scintillatie flacon: 16.3 µL van 31.64 mM DSPC chloroform stockoplossing, 3.4 µL van 17.82 mM DSPE PEG 2000 chloroform stockoplossing, 24 µL van 25 mM cholesterol chloroform voorraad oplossing en 6 µL van 4 mM DiI chloroform stamoplossing. Reinig de spuit met chloroform na het toevoegen van elke component Voorkom kruisbesmetting. Let op: Sluit onmiddellijk de flesjes waarin de lipiden, zodat het oplosmiddel niet verdampen en, daardoor, het wijzigen van de concentratie. Werken in een zuurkast. Opmerking: De concentraties van chloroform stamoplossingen kunnen variëren, afhankelijk van de chemische leverancier of verdunningen gemaakt in het lab.</li>
	<li>Wikkel de flacon met aluminiumfolie om DiI beschermen tegen licht. Laat het monster 's nachts in de exsiccator tot verdampen van de chloroform.</li>
	<li>Los van het gedroogde monster in absolute ethanol tot een eindvolume van 1,2 mL, waardoor de eindconcentraties van DSPC, DSPE PEG 2000, cholesterol en DiI van 0,43 mM, 0.05 mM en 0,5 mM 0,02 mM, respectievelijk. Deze oplossing vertegenwoordigt de organische fase.</li>
	<li>Nemen van de 12 mL glazen ampul, vullen met 9 mL van gezuiverd water en voeg de magnetische vlo in de flacon met 9 mL water. Houd de ampul op de magneetroerder, roeren bij 500 omwentelingen per minuut (Figuur 1).</li>
	<li>De spuit van 1 mL glas hechten aan de doseersysteem en schoon met chloroform om elke besmetting te voorkomen. Dit door langzaam trekken de chloroform in de glas-spuit en verstrekking handmatig in een ophaler minstens 10 tiems. Let op: Dit moet gebeuren onder een zuurkast.</li>
	<li>Prime de spuit met ethanol. Priming vervangt het oude oplosmiddel, evenals verwijdert alle luchtbellen. Let op: Dit moet gebeuren onder een zuurkast.</li>
	<li>1 mL van de organische fase met behulp van de spuit, gecombineerd.</li>
	<li>De spuit in de glazen ampul, tot het midden van de 9 mL watermerk, invoegen en onderhouden gestage in het midden van de flacon (zoals weergegeven in Figuur 1).</li>
	<li>Injecteer de oplossing op de geselecteerde snelheid van injectie (833 µL/s) door het indrukken van de doseer-knop op de doseersysteem (Figuur 2). Dit genereert 10 mL 50 µM lipide-gecoate nanodeeltjes van falcarindiol in 10% ethanol bevattende water. Opmerking: Deze injectie snelheid is gebleken om de fijnste deeltjes, het verkrijgen van een smalle korrelgrootteverdeling. Het is van cruciaal belang om ervoor te zorgen dat de spuit in het center, stabiele en rechte is wanneer verstrekking van de oplossing.</li>
	<li>Onmiddellijk na de injectie, verwijderen de flacon van de roerder en het monster overbrengen in een 50 mL Rondbodemkolf (RBF).</li>
	<li>De RBF hechten aan de rotatievacuümverdamper en damp 1 mL van de organische oplosmiddelen, met behulp van de rotatievacuümverdamper bij kamertemperatuur. Vermijd overmatige luchtbel vorming. Opmerking: Deze stap duurt ~ 5 min.</li>
	<li>Breng de nanoparticle van de RBF een andere 12 mL glazen ampul. Zorg ervoor dat het volume 9 mL. Het splitsen van het monster in twee 12 mL glazen flesjes (put 4.5 mL in elk).</li>
	<li>Voeg 0,5 mL ultrazuiver water aan één van de flesjes en 0,5 mL 10 x-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) naar de andere flacon. Neem 1 mL van elk monster voor het deeltje grootte meten.</li>
</ol>2. korrelgrootte met de DLS-techniek
Opmerking: Grootte metingen werden uitgevoerd met behulp van een DLS-analyzer die deeltje grootte distributies bepaalt. Het is uitgerust met een 100 mW laser die werkt bij een golflengte van 662.2 nm en met een lawine fotodiode detector geplaatst in een hoek van 90° tot de hoek van het incident. De bundel is verspreid door de nanodeeltjes en gedetecteerd door de foto-elektrische cel.
<ol><li>Zet het instrument DLS en selecteer de gewenste temperatuur bij 20 ° C, totdat het stabiliseert.</li>
	<li>De instrument-parameters als volgt instellen: gegevens Acquisitietijd = 4 s, aantal overnames = 30, auto-demping functie = aan, en de termijnen van de auto-demping = 0.</li>
	<li>Vul de plastic Cuvet met 1 mL nanoparticle schorsing en start de meting.</li>
	<li>Verslag van de gemeten grootte afhankelijk van het oplosmiddel gebruikt (water of PBS). Opmerking: De meting in PBS is gemaakt om een benaderende idee van de grootte van de cellen in het medium bij de behandeling van de cellen. De behandeling van de cel zal gebeuren met de nanodeeltjes opgelost in water.</li>
	<li>Herhaal de metingen 24u na de synthese, om te controleren voor het samenvoegen van de particle.</li>
</ol>3. cel behandeling
<ol><li>HMSCs groeien in minimale essentiële medium (MEM) aangevuld met 10% foetale runderserum (FBS) en 1% penicilline/streptomycine, in een humified kamer bij 37° C met 5% CO2. Let op: Werken in de steriele laminaire Flow Hood voor stap 3.1, 3.2 en 3.3.</li>
	<li>Zaad ongeveer 50.000 cellen te verkrijgen van een celdichtheid van ongeveer 30% op eerder absolute-EtOH-gesteriliseerd #1.5 coverslips geplaatst in 6-Wells-platen. MEM toevoegen om een eindvolume van 3 mL in elk putje. Incubeer gedurende 24 uur onder dezelfde voorwaarden zoals in stap 3.1. Zaad de cellen 24 h vóór de kuur. Opmerking: Het is essentieel dat de cellen worden overgeënt ten minste 24 uur vóór de behandeling van de nanoparticle, om ervoor te zorgen dat de cellen in een passende samenvloeiing worden.</li>
	<li>Zonder het verwijderen van het medium, voeg 3 µL van de nanoparticle oplossing, voor een definitieve falcarindiol concentratie van 5 µM. Incubate gedurende 24 uur onder dezelfde omstandigheden als in stap 3.1. Opmerking: De nanodeeltjes voorbereiding werd uitgevoerd op de dag van de behandeling van de cel, om te voorkomen dat deeltjes aggregatie.</li>
	<li>Vervolgens na 24 h behandeling, wassen de cellen 2 x met PBS, corrigeren in 4% formaldehyde gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur, en ze opslaan in PBS bij 4° C voor tot enkele maanden totdat beeld. Let op: Dit moet gebeuren onder een zuurkast.<ol>
<li>Als alternatief, na fixatie, een 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) nucleaire kleuring kan worden uitgevoerd. Voor dit, na de vaststelling van de cellen, permeabilize hen met 0,1% Triton X-100 voor 30 min, wassen ze 2 x met PBS, en vlekken hen met 250 µL van 300 nM DAPI voor 5 minuten, dat is beschermd tegen licht.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. microscopie
<ol><li>
Fluorescentie microscopie
	<ol>
<li>Gebruik een widefield fluorescentie Microscoop uitgerust met een CCD-camera met elektron-vermenigvuldigd te verwerven van de beelden. Gebruik de 150 x nb 1.45 olie doelstelling en het GFP LP-kanaal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Confocale microscopie
	<ol>
<li>Verwerven van beelden in confocale microscopie, met behulp van de 63 x nb 1.4 olie doelstelling, een laser Argon (514 nm) voor DiI, en een twee-foton laser (780 nm) voor DAPI, om te controleren of de opname van de nanodeeltjes in de cellen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Firestone, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-Density+Lipoprotein+as+a+Vehicle+for+Targeting+Antitumor+Compounds+to+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Low-Density Lipoprotein as a Vehicle for Targeting Antitumor Compounds to Cancer Cells.</a> Bioconjugate Chemistry. 5 (2), 105-113 (1994).</li>
<li>Beloribi-Djefaflia, S., Vasseur, S., Guillaumond, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolic+reprogramming+in+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogenesis%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolic reprogramming in cancer cells.</a> Oncogenesis. 5 (1), 189(2016).</li>
<li>Xin, Y., Yin, M., Zhao, L., Meng, F., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+progress+on+nanoparticle-based+drug+delivery+systems+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">Recent progress on nanoparticle-based drug delivery systems for cancer therapy.</a> Cancer Biology & Medicine. 14 (3), 228(2017).</li>
<li>Merriel, S. W. D., Carroll, R., Hamilton, F., Hamilton, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+unexplained+hypoalbuminaemia+and+new+cancer+diagnoses+in+UK+primary+care+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Family+Practice%22%5BJournal%5D)">Association between unexplained hypoalbuminaemia and new cancer diagnoses in UK primary care patients.</a> Family Practice. 33 (5), 449-452 (2016).</li>
<li>Yue, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesteryl+ester+accumulation+induced+by+PTEN+loss+and+PI3K%2FAKT+activation+underlies+human+prostate+cancer+aggressiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Cholesteryl ester accumulation induced by PTEN loss and PI3K/AKT activation underlies human prostate cancer aggressiveness.</a> Cell Metabolism. 19 (3), 393-406 (2014).</li>
<li>dos Santos, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDL-cholesterol+signaling+induces+breast+cancer+proliferation+and+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids+in+Health+and+Disease%22%5BJournal%5D)">LDL-cholesterol signaling induces breast cancer proliferation and invasion.</a> Lipids in Health and Disease. 13 (16), (2014).</li>
<li>Gallagher, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+tumor+LDLR+expression+accelerates+LDL+cholesterol-mediated+breast+cancer+growth+in+mouse+models+of+hyperlipidemia+HHS+Public+Access%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Elevated tumor LDLR expression accelerates LDL cholesterol-mediated breast cancer growth in mouse models of hyperlipidemia HHS Public Access.</a> Oncogene. 36 (46), 6462-6471 (2017).</li>
<li>Needham, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bottom+up+design+of+nanoparticles+for+anti-cancer+diapeutics%3A+%22put+the+drug+in+the+cancer%27s+food%22%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Drug+Targeting%22%5BJournal%5D)">Bottom up design of nanoparticles for anti-cancer diapeutics: "put the drug in the cancer's food".</a> Journal of Drug Targeting. 24 (9), 836-856 (2016).</li>
<li>Lacko, A. G., Mconnathy, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+cancer+chemotherapy+using+synthetic+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22United+States+Patent+Application+Publication%22%5BJournal%5D)">Targeted cancer chemotherapy using synthetic nanoparticles.</a> United States Patent Application Publication. , Pub. No.: US 2009/0110739 A1 (2009).</li>
<li>Nikanjam, M., Gibbs, A. R., Hunt, C. A., Budinger, T. F., Forte, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+nano-LDL+with+paclitaxel+oleate+as+a+targeted+drug+delivery+vehicle+for+glioblastoma+multiforme%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Synthetic nano-LDL with paclitaxel oleate as a targeted drug delivery vehicle for glioblastoma multiforme.</a> Journal of Controlled Release. 124 (3), 163-171 (2007).</li>
<li>Teerlink, T., Scheffer, P. G., Bakker, S. J. L., Heine, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+data+from+LDL+composition+and+size+measurement+are+compatible+with+a+discoid+particle+shape%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Combined data from LDL composition and size measurement are compatible with a discoid particle shape.</a> Journal of Lipid Research. 45 (5), 954-966 (2004).</li>
<li>Schweizer, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+I+study+of+niclosamide+in+combination+with+enzalutamide+in+men+with+castration-resistant+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A phase I study of niclosamide in combination with enzalutamide in men with castration-resistant prostate cancer.</a> PLoS ONE. 13 (8), 0202709(2018).</li>
<li>Allen, T. M., Hansen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+of+stealth+versus+conventional+liposomes%3A+effect+of+dose%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29+-+Biomembranes%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics of stealth versus conventional liposomes: effect of dose.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 1068 (2), 133-141 (1991).</li>
<li>Maeda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Enhanced+Permeability+and+Retention+%28EPR%29+Effect+in+Tumor+Vasculature%3A+The+Key+Role+of+Tumor-Selective+Macromolecular+Drug+Targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Enzyme+Regulation%22%5BJournal%5D)">The Enhanced Permeability and Retention (EPR) Effect in Tumor Vasculature: The Key Role of Tumor-Selective Macromolecular Drug Targeting.</a> Advances in Enzyme Regulation. 41 (1), 189-207 (2001).</li>
<li>Wong, A. D., Ye, M., Ulmschneider, M. B., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Analysis+of+the+Enhanced+Permeation+and+Retention+%28EPR%29+Effect%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Quantitative Analysis of the Enhanced Permeation and Retention (EPR) Effect.</a> PLoS ONE. 10 (5), 0123461(2015).</li>
<li>Khodabandehloo, H., Zahednasab, H., Hafez, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanocarriers+Usage+for+Drug+Delivery+in+Cancer+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Iranian+Journal+of+Psychiatry+and+Behavioral+Sciences%22%5BJournal%5D)">Nanocarriers Usage for Drug Delivery in Cancer Therapy.</a> Iranian Journal of Psychiatry and Behavioral Sciences. 9 (2), (2016).</li>
<li>Kobaek-Larsen, M., El-Houri, R. B., Christensen, L. P., Al-Najami, I., Fretté, X., Baatrup, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+polyacetylenes%2C+falcarinol+and+falcarindiol%2C+isolated+from+carrots+prevents+the+formation+of+neoplastic+lesions+in+the+colon+of+azoxymethane-induced+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Food+%26+Function%22%5BJournal%5D)">Dietary polyacetylenes, falcarinol and falcarindiol, isolated from carrots prevents the formation of neoplastic lesions in the colon of azoxymethane-induced rats.</a> Food & Function. 8, 964-974 (2017).</li>
<li>Hervella, P., Parra, E., Needham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulation+and+retention+of+chelated-copper+inside+hydrophobic+nanoparticles%3A+Liquid+cored+nanoparticles+show+better+retention+than+a+solid+core+formulation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Encapsulation and retention of chelated-copper inside hydrophobic nanoparticles: Liquid cored nanoparticles show better retention than a solid core formulation.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 102, 64-76 (2016).</li>
<li>Hervella, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chelation%2C+formulation%2C+encapsulation%2C+retention%2C+and+in+vivo+biodistribution+of+hydrophobic+nanoparticles+labelled+with+57Co-porphyrin%3A+Octyl+Amine+ensures+stable+chelation+of+cobalt+in+Liquid+Nanoparticles+that+accumulate+in+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Chelation, formulation, encapsulation, retention, and in vivo biodistribution of hydrophobic nanoparticles labelled with 57Co-porphyrin: Octyl Amine ensures stable chelation of cobalt in Liquid Nanoparticles that accumulate in tumors.</a> Journal of Controlled Release. , (2018).</li>
<li>Zhigaltsev, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bottom-up+design+and+synthesis+of+limit+size+lipid+nanoparticle+systems+with+aqueous+and+triglyceride+cores+using+millisecond+microfluidic+mixing%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Bottom-up design and synthesis of limit size lipid nanoparticle systems with aqueous and triglyceride cores using millisecond microfluidic mixing.</a> Langmuir. 28 (7), 3633-3640 (2012).</li>
<li>Aubry, J., Ganachaud, F., Cohen Addad, J. -P., Cabane, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoprecipitation+of+Polymethylmethacrylate+by+Solvent+Shifting%3A1+Boundaries%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Nanoprecipitation of Polymethylmethacrylate by Solvent Shifting:1 Boundaries.</a> Langmuir. 25 (4), 1970-1979 (2009).</li>
<li>Karnik, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+Platform+for+Controlled+Synthesis+of+Polymeric+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Microfluidic Platform for Controlled Synthesis of Polymeric Nanoparticles.</a> Nano Letters. 8 (9), 2906-2912 (2008).</li>
<li>Gaumet, M., Vargas, A., Gurny, R., Delie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticles+for+drug+delivery%3A+The+need+for+precision+in+reporting+particle+size+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Nanoparticles for drug delivery: The need for precision in reporting particle size parameters.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 69 (1), 1-9 (2018).</li>
<li>Christensen, L. P., Brandt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioactive+polyacetylenes+in+food+plants+of+the+Apiaceae+family%3A+Occurrence%2C+bioactivity+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Bioactive polyacetylenes in food plants of the Apiaceae family: Occurrence, bioactivity and analysis.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 41 (3), 683-693 (2016).</li>
<li>Kobaek-Larsen, M., Christensen, L. P., Vach, W., Ritskes-Hoitinga, J., Brandt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+Effects+of+Feeding+with+Carrots+or+%28-%29+-Falcarinol+on+Development+of+Azoxymethane-Induced+Preneoplastic+Lesions+in+the+Rat+Colon%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Inhibitory Effects of Feeding with Carrots or (-) -Falcarinol on Development of Azoxymethane-Induced Preneoplastic Lesions in the Rat Colon.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53, 1823-1827 (2005).</li>
<li>Jin, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antitumor+natural+compound+falcarindiol+promotes+cancer+cell+death+by+inducing+endoplasmic+reticulum+stress%5BTitle%5D)+AND+%22CellDeath+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">The antitumor natural compound falcarindiol promotes cancer cell death by inducing endoplasmic reticulum stress.</a> CellDeath & Disease. 3, 1-9 (2012).</li>
<li>Walke, P. Physico-Chemical Parameters of Nanoparticles that Govern Prodrug Design and Application in Anticancer Nanomedicine in Physics, Chemistry, Pharmacy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWalke%2C+P+%22University+of+Southern+Denmark+%28SDU%29%22">University of Southern Denmark (SDU)</a>. , (2018).</li>
<li>Walke, P. B., Hervella, P., Needham, D. Lipid-Coated Stealth Nanoparticles of Novel Hydrophobic Prodrug, Niclosamide Stearate, as Cancer Therapeutic: Formulation and Physico-Chemical Characterization of Nanoparticles. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWalke%2C+PB+%226th+International+Pharmaceutical+Federation+Pharmaceutical+Sciences+World+Congress%22">6th International Pharmaceutical Federation Pharmaceutical Sciences World Congress</a>. , Stockholm, Sweden. (2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Een gedetailleerd protocol voor het fabriceren van lipide-gecoate nanodeeltjes voor drug delivery met de eenvoudige, snelle, reproduceerbare en schaalbare snelle injectie methode van het oplosmiddel verschuiven was gevolgd27,28 en wordt gepresenteerd in dit document, als toegepast op falcarindiol. Door het beheersen van de snelheid van de injectie van de organische fase in de waterfase en met behulp van coating lipiden bij adequate concentraties jas de falcarindi...

Lipide-gecoate nanodeeltjes zien een verhoogde belangstelling voor met betrekking tot hun functie als medicijn afgiftesystemen voor kanker therapie1. Kankers hebben een gewijzigde lipide-metabole herprogrammering2 en een toegenomen behoefte aan cholesterol3vermenigvuldigen. Ze overexpress LDLs1 en neem in meer LDLs dan normale cellen, in de mate dat een kankerpatiënt LDL graaf zelfs4 dalen kan. LDL opname bevordert agressief fenotypen5 resulterend in proliferatie en invasie in borst kanker6. Een overvloed aan LDL-receptoren (LDLRs) is een voorspellende indicator voor gemetastaseerde potentieel7. Geïnspireerd door de LDL en haar ICT door kankercellen, een nieuwe strategie heeft geroepen: maken van de drug van de kanker voedsel eruit8. Dus, deze nieuwe nanoparticle drug levering ontwerpen als een mechanisme voor het leveren van geneesmiddelen zijn geïnspireerd door het kern - en lipide-gestabiliseerde ontwerp van de natuurlijke LDLs11 8,9,10 tot kankercellen. Deze passieve targeting levering systeem ondersteunt het inkapselen van, met name, de hydrofobe drugs, die worden meestal gegeven in mondelinge doseringsvorm maar bieden slechts een kleine hoeveelheid van de drugs naar de bloedbaan, dus het beperken van hun verwachte werkzaamheid12. Zoals met de stealth liposomen13, een coating van polyethyleenglycol (PEG) draagt bij aan vermindering van een immunologische reactie en het verkeer in de bloedbaan voor optimale tumor opname door de vermeende breidt versterkte permeatie en retentie (EPR) effect 14 , 15. in aanvulling op, in sommige gevallen, de instabiliteit in de omloop en ongewenste distributie in het systeem16, sommige obstakels blijven echter onopgelost, zoals hoe en in welke mate dergelijke nanodeeltjes worden genomen in door cellen en wat is hun intracellulaire lot. Het is hier dat dit document de opname van de nanoparticle van een bepaald hydrofobe anticancer geneesmiddel falcarindiol behandelt, met behulp van de confocal en epifluorescence beeldvormende technieken.
Het doel van de studie is te fabriceren van lipide-gecoate nanodeeltjes van falcarindiol en te bestuderen van hun intracellulaire penetratie in hMSCs. Aldus, potentieel te stabiliseren zijn administratie, het overwinnen van de uitdagingen in verband met de levering, en verbetering van de biologische beschikbaarheid. Dus de beoordeling van een nieuw systeem van de levering voor deze antikanker drug. Eerder, falcarindiol heeft al bestuurd mondeling via een hoge concentratie gezuiverd falcarindiol als een food supplement17. Er is echter behoefte aan een meer gestructureerde benadering leveren deze veelbelovende drug. Daarom, falcarindiol nanodeeltjes, met een fosfolipide en cholesterol encapsulating enkelgelaagde met de gezuiverde drug vormen de kern van het deeltje, werden ontworpen. De methode van de snelle injectie van oplosmiddel verschuiven, zoals onlangs ontwikkeld door Needham et al. 8, wordt in deze studie gebruikt om in te kapselen de polyacetyleen falcarindiol.
De methode is eerder gebruikt voor de fabrikatie van lipide nanodeeltjes kapselen diagnostische beeldvorming agenten18,19, evenals het testen van moleculen (triolein)27 en drugs (orlistat, niclosamide stearate)8 2827, ,. Het is een relatief eenvoudige techniek wanneer uitgevoerd met de juiste moleculen. Nanosized deeltjes, op de grens van hun kritische nucleatie (~ 20 nm diameter), vormt van zeer slecht oplosbaar hydrofobe opgeloste stoffen opgelost in een polair oplosmiddel. De oplosmiddelen uitwisseling wordt bereikt door een snelle injectie van de organische oplossing in een overmaat aan antisolvent (meestal een waterige fase in een 1:9-organische: waterige volumeverhouding)20,21.
De compositorische ontwerp van de nanodeeltjes meerdere voordelen meebrengen. De DSPC:Chol componenten bieden een zeer strakke, bijna ondoordringbare, biocompatibel en biologisch afbreekbaar enkelgelaagde. De PEG biedt een sterically stabiliserende interface die fungeert als een schild van opsonization door het immuunsysteem, vertragen van elke opname door de reticuloendotheliaal systeem (lever en milt) en bescherming tegen de mononucleaire fagocytensysteem systeem, voorkomen van hun retentie en aantasting van het immuunsysteem, en vandaar, het verhogen van hun verkeer halftijds in bloed22. Hierdoor kunnen de deeltjes te laten circuleren totdat ze op zieke sites extravasate, zoals tumoren, waar het vaatstelsel lekkende is, waardoor EPR-effect aanleiding geeft tot passieve accumulatie van de deeltjes. Bovendien, de lipide vacht maakt het mogelijk een betere controle hebben over de nanodeeltjes grootte door kinetisch overvulling de kern op haar kritieke nucleus dimensie27,28. Lipiden veroorzaken verschillende oppervlakte-eigenschappen (met inbegrip van peptide richt, die nog niet beschikbaar voor dit project was) een zuivere drug kern en een lage polydispersiteit22,27,28. De methode die wordt gebruikt voor de korrelgrootte is DLS, een techniek waarmee onderzoekers voor het meten van de grootte van een groot aantal deeltjes op hetzelfde moment. Deze methode kan echter de metingen aan grotere maten, bias, als de nanodeeltjes niet monodispersed23. Dit probleem wordt beoordeeld met het lipide vacht zo goed. Meer details van deze fundamentele ontwerpen en de kwantificering van alle kenmerken die worden gegeven in andere publicaties27,28.
De drug ingekapseld in de nanodeeltjes is falcarindiol, een dieet polyacetyleen gevonden in planten uit de familie van de Apiaceae. Het is een secundaire metaboliet van de alifatische C17polyacetylenen type dat is gevonden om de gezondheidsbevorderende effecten, met inbegrip van cytotoxiciteit tegen een breed scala van kanker cellijnen, anti-inflammatoire activiteit en antibacteriële effecten weer te geven. De hoge reactiviteit is gerelateerd aan haar vermogen om te communiceren met verschillende biomoleculen, als een zeer reactieve alkylerend gemachtigde tegen mercapto en amino groepen24. Falcarindiol heeft eerder is aangetoond dat het verminderen van het aantal neoplastische laesies in de dikke darm17,25, hoewel de biologische mechanismen nog onbekend zijn. Het is echter de gedachte dat het samenwerkt met biomoleculen zoals NF-recombination, COX1, COX-2 en cytokines, remming van hun tumor progressie en cel proliferatie processen, leidt tot de arrestatie van de celcyclus, endoplasmatisch reticulum (ER) benadrukken, en apoptose 17,,26 in kankercellen. Falcarindiol wordt gebruikt in deze studie een voorbeeld anticancer geneesmiddel vanwege de antikanker potentieel en het mechanisme worden momenteel bestudeerd, en omdat blijkt veelbelovend antikanker effecten. De mobiele opname van de nanodeeltjes is getest in hMSCs en beeld met behulp van epifluorescence en confocale microscopie. Dit celtype werd gekozen vanwege zijn grote omvang, waardoor ze ideaal zijn voor microscopie.

<table><tbody><tr><td>12 mL Screw Neck Vial (Clear glass, 15-425 thread, 66 X 18.5 mm)</td><td>Microlab Aarhus A/S</td><td>ML 33154LP</td><td></td></tr><tr><td>6 well plates</td><td>Greiner Bio One International GmbH</td><td>657160</td><td></td></tr><tr><td>Absolute Ethanol</td><td>EMD Millipore (VWR)</td><td>EM8.18760.1000</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Rathburn Chemicals Ltd.</td><td>RH1009</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td><td>700000P</td><td></td></tr><tr><td>Confocal Microscope</td><td>Zeiss LSM510</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cover Slips thickness #1.5</td><td>Paul Marienfeld GmbH &amp; Co</td><td>117650</td><td></td></tr><tr><td>Desiccator</td><td>Self-build</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DiI</td><td>Invitrogen</td><td>D282</td><td></td></tr><tr><td>DLS</td><td>Beckman Coulter</td><td>DelsaMAXpro 3167-DMP</td><td></td></tr><tr><td>DSPC (Chloroform stock)</td><td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td><td>850365C&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DSPE PEG 2000 (Chloroform stock)</td><td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td><td>880120C</td><td></td></tr><tr><td>eVol XR</td><td>SGE analytical science, Trajan Scientific Australia Pty Ltd.</td><td>2910200</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine serum</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescence Miccroscope</td><td>Olymous IX81</td><td></td><td>Met handmatige TIRF en Andor iXon EMCCD</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Panasonic&nbsp;</td><td>MCO-18AC</td><td></td></tr><tr><td>Magnetic flea</td><td>VWR Chemicals</td><td>15 x 4.5 mm</td><td>Cilindrische vorm met PTFE-coating</td></tr><tr><td>Magnetic stirrer</td><td>IKA</td><td>RT-10</td><td></td></tr><tr><td>Minimum Essential Media</td><td>Gibco</td><td>32561-029</td><td></td></tr><tr><td>PBS tablets for cell culture</td><td>VWR Chemicals</td><td>97062-732</td><td></td></tr><tr><td>Pen/strep</td><td>VWR Chemicals</td><td>97063-708</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffer Saline (PBS, pH 7.4)</td><td>Thermo Fisher</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>Rotary Evaporator</td><td>Rotavapor, Büchi Labortechnik AG</td><td>R-210</td><td></td></tr><tr><td>Sample concentrator&nbsp;</td><td>Stuart, Cole-Parmer Instrument Company, LLC</td><td>SBHCONC/1</td><td></td></tr></tbody></table>

opname van nieuwe lipide-gecoate nanodeeltjes met falcarindiol door menselijke mesenchymale stamcellen

Uptake of New Lipid-coated Nanoparticles Containing Falcarindiol by Human Mesenchymal Stem Cells

Nanodeeltjes zijn de focus van een toegenomen belangstelling voor drug delivery systemen voor kankertherapie. Lipide-gecoate nanodeeltjes zijn geïnspireerd van grootte en structuur van low-density lipoproteins (LDLs) omdat kankercellen een verhoogde behoefte aan cholesterol hebben te verspreiden, en dit heeft benut als een mechanisme voor het leveren van geneesmiddelen aan kanker cellen. Bovendien, afhankelijk van de drug chemie, inkapselen van de drug kan nuttig zijn om te voorkomen dat de afbraak van de drug tijdens het verkeer in vivo. Daarom in dit onderzoek dit ontwerp wordt gebruikt om fabriceren van lipide-gecoate nanodeeltjes van de antikanker drug falcarindiol, biedt een potentiële nieuwe levering systeem van falcarindiol om te stabiliseren van de chemische structuur tegen afbraak en verbeteren de opname door tumoren. Falcarindiol nanodeeltjes, werden met een fosfolipide en cholesterol enkelgelaagde encapsulating het gezuiverde drug-kern van het deeltje, ontworpen. Het lipide enkelgelaagde kleefmiddel bestaat uit 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), cholesterol (Chol) en 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000] (DSPE PEG 2000) samen met de TL Label DiI (molaire ratio's van 43:50:5:2). De nanodeeltjes worden vervaardigd gebruikend de snelle injectie-methode, die een snelle en eenvoudige techniek is te precipiteren nanodeeltjes door goed-solvent voor anti-oplosmiddel uitwisseling. Het bestaat uit een snelle injectie van een ethanol-oplossing met de nanoparticle-onderdelen in een waterige fase. De grootte van de fluorescerende nanodeeltjes is gemeten met behulp van Dynamische lichtverstrooiing (DLS) op 74.1 ± 6.7 nm. De verbreiding van de nanodeeltjes is getest in menselijke mesenchymale stamcellen (hMSCs) en beeld met behulp van fluorescentie en confocale microscopie. De opname van de nanodeeltjes wordt waargenomen in hMSCs, suggereert het potentieel voor een dergelijk stabiel drug delivery systeem voor falcarindiol.

Twee verschillende types van nanodeeltjes waren vervaardigd, namelijk puur falcarindiol nanodeeltjes en falcarindiol lipide-gecoate nanodeeltjes. Verschillende concentraties van lipiden en cholesterol werden getest. Zoals blijkt uit tabel 1, had ongecoat nanodeeltjes gevormd in water en gemeten in PBS een diameter van 71 ± 20,3 nm met een polydispersiteit index (PDI) van 0.571. Deze parameters zijn gemeten over een DLS-analyzer. Het lipide-gecoate nanodeeltjes van falcari...

Dit artikel beschrijft de inkapseling van falcarindiol in lipide-gecoate 74 nm nanodeeltjes. De mobiele opname van de nanodeeltjes door menselijke stamcellen in lipide druppels wordt gecontroleerd door fluorescerende en confocal beeldvorming. Nanodeeltjes worden vervaardigd door de snelle injectie methode van oplosmiddel verschuiven, en hun grootte wordt gemeten met de Dynamische lichtverstrooiing techniek.

Opname van nieuwe lipide-gecoate nanodeeltjes met Falcarindiol door menselijke mesenchymale stamcellen

Nanoparticles are the focus of an increased interest in drug delivery systems for cancer therapy. Lipid-coated nanoparticles are inspired in structure and ...

De fabricage van lipide-gecoate nanodeeltjes met de snelle injectiemethode biedt een stabiel systeem voor de levering van geneesmiddelen voor kankertherapie. Deze techniek is een eenvoudige, snelle, schaalbare en reproduceerbare techniek voor nanodeeltjesfabricage die hydrofobe geneesmiddelen inkapselt. Deze techniek is toepasbaar voor het fabriceren van diagnostische en therapeutische nanodeeltjes uit hydrofobe materialen die effectief kunnen worden gebruikt in verschillende aandoeningen.Deze fabricagetechniek kan, samen met DLS, worden gebruikt om de nucleatie en groei van hydrofobe materialen, zoals lipiden, eiwitten en polymeren, te bestuderen. Het kennen van de fysische chemische eigenschappen van uw geneesmiddel is van cruciaal belang voor het fabriceren van de nanodeeltjes. Zorg er ook voor dat u de juiste concentraties coating lipiden te gebruiken.Visuele demonstratie van deze methode is van cruciaal belang om de eenvoud van de fabricagetechniek te tonen en om de succesvolle levering van het medicijn als nanodeeltjes aan de cellen te tonen. Voorzorgsmaatregelen moeten worden genomen bij het werken met chloroform en formaldehyde, en werken onder een rookkap is vereist. Om te beginnen, afzien van 2,4 milliliter van 250 micromolar falcarindiol voorraad oplossing opgelost in 70%ethanol in een scintillatie flacon.Verdampen met behulp van een monsterconcentraator de vloeibare fractie ongeveer vier uur om droge falcarindiol te verkrijgen. Met behulp van de monsterconcentraator, leveren gas over het monster op kamertemperatuur om het monster te concentreren. Eenmaal gedroogd, voeg de componenten hier aan de scintillatie flacon in een rookkap, zorg ervoor dat de spuit schoon met chloroform na het toevoegen van elk onderdeel om kruisbesmetting te voorkomen.Sluit vervolgens onmiddellijk de flesjes met de lipiden, zodat het oplosmiddel niet verdampt en daardoor de concentratie wijzigt. Wikkel de flacon met aluminiumfolie om DiI tegen licht te beschermen en laat het monster 's nachts in de desiccator om de chloroform te verdampen. De volgende dag los u het uitgedroogde monster op in absolute ethanol om een eindvolume van 1,2 milliliter te maken.Deze oplossing vertegenwoordigt de organische fase. Neem een 12 milliliter glazen flacon en vul het met negen milliliter gezuiverd water. Voeg vervolgens een magnetische vlo toe aan het flesje met negen milliliter water.Plaats de flacon op een magnetische roerder en roer bij 500 rpm. Bevestig vervolgens een glazen spuit van één milliliter aan het doseersysteem en trek langzaam chloroform in en uit de glazen spuit ten minste 10 keer. Doe de chloroform telkens in zijn afvalinzamelaar.Het reinigen van de spuit met chloroform helpt besmetting te voorkomen. Nu prime de spuit met ethanol. Priming vervangt het oude oplosmiddel en verwijdert eventuele luchtbellen.Met behulp van de spuit, aspirate een milliliter van de organische fase, en steek de spuit in de glazen flacon tot het midden van de negen milliliter water merk. Houd het stabiel in het midden van de flacon en injecteer de oplossing met 833 microliter per seconde door op de doseerknop op het doseersysteem te drukken. Dit genereert 10 microliter van 50 micromolar lipide gecoate nanodeeltjes van falcarindiol in 10%ethanol.Deze injectiesnelheid is gevonden om fijnste nanodeeltjes met smalle deeltjesgrootteverdeling te bereiken. Tijdens het injecteren is het belangrijk om ervoor te zorgen dat de naald in het midden wordt ingebracht, stabiel en recht. Onmiddellijk na de injectie, verwijder de flacon uit de roerder en breng het monster naar een 50 milliliter ronde bodemkolf.Val de kolf aan op de roterende verdamper en verdam een milliliter van het organische oplosmiddel bij kamertemperatuur. Wees voorzichtig om overmatige belvorming te voorkomen. Breng de nanodeeltjessuspensie van de kolf over naar nog eens 12 milliliter glazen flacon.Zorg ervoor dat het volume negen milliliter is en splits het monster vervolgens in twee glazen flacons van 12 milliliter. Voeg vervolgens 0,5 milliliter ultrazuiver water toe in een van de flacons en 0,5 milliliter fosfaatbuffers in de andere flacon. Zet het digitale lichtverstrooiingsinstrument aan en stel de gewenste temperatuur in op 20 graden Celsius totdat het stabiliseert.Stel vervolgens de instrumentparameters in zoals hier wordt weergegeven. Vul de plastic cuvette met een milliliter nanodeeltjessuspensie en start de meting. Rapporteer de gemeten grootte, afhankelijk van het oplosmiddel dat is gebruikt.Zaad ongeveer 50.000 cellen op steriele 1,5 cover slips geplaatst in zes-put plaat om een celdichtheid van ongeveer 30% Voeg dan cultuur medium om een uiteindelijk volume van drie milliliter in elke put. De cellen 24 uur onder standaardcultuuromstandigheden uitbroeden. Voeg de volgende dag drie microliters van de nanodeeltjesoplossing toe voor een laatste falcarindiolconcentratie van vijf micromolar.Breng de cellen vervolgens 24 uur terug naar de couveuse. Na 24 uur behandeling, was de cellen twee keer met PBS, en bevestig ze vervolgens in 4% formaldehyde gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Na fixatie, permeabiliseren van de cellen met 0,1%Triton X-100 gedurende 30 minuten.Was ze vervolgens twee keer met PBS en bevlek ze met 250 microliter van 300 nanomolar DAPI gedurende vijf minuten, beschermd tegen licht. Plaats de afslag slip op een dia met behulp van een druppel PBS. Draai naar een 150x subjectief, en breng de dia naar het stadium van een breedveld fluorescentie microscoop uitgerust met een elektron vermenigvuldigd CCD camera.Afbeeldingscellen met behulp van het GFP-LP-kanaal. Controleer bovendien de opname van de nanodeeltjes in de cellen door confocale microscopiebeelden te maken met behulp van een 63x-oliedoelstelling met een numeriek diafragma van 1,4. Beeld DiI met behulp van een argon laser op 514 nanometer en DAPI met behulp van een twee-foton laser op 780 nanometer.Ongecoate nanodeeltjes van falcarindiol gevormd in water en gemeten in PBS toonde een hoge polydispersiteit, met PD-index van 0,571. Deze waarde geeft een brede en niet-uniforme verdeling van de deeltjesgroottes aan. In tegenstelling, lipide gecoate nanodeeltjes van falcarindiol vervaardigd in deze video waren van 74,1 nanometer met een polydispersiteit index van 0,182, wees op een relatief monodisperse en uniforme verdeling van de deeltjesgroottes.Als eerste observatie van de nanodeeltjes in de cellen werden epifluorescentiemicroscopiebeelden verworven na 24 uur behandeling. De nanodeeltjes werden gevisualiseerd als witte, heldere stippen, en het zou kunnen worden verondersteld dat nanodeeltjes zich in de cellen rond de kern bevonden. Om te controleren of falcarindiol nanodeeltjes in de cellen waren gekomen, werd confocale microscopie ook op de cellen uitgevoerd.Een groot aantal nanodeeltjes worden hier getoond, verspreid in het cytoplasma in elke cel. Deze resultaten tonen aan dat nanodeeltjes fungeren als een stabiel systeem voor de levering van geneesmiddelen voor falcarindiol. Tijdens een poging tot deze procedure is het belangrijk om de oplossing te injecteren met de juiste injectiesnelheid, waarbij het zaaien stabiel blijft, in het midden, om een goede menging te garanderen.Deze procedure kan worden gebruikt voor elk hydrofoob medicijn om therapeutische nanodeeltjes te formuleren of voor beeldvormingsmiddelen om diagnostische nanodeeltjes te formuleren die kunnen worden gebruikt in verschillende aandoeningen, zoals kanker. Deze techniek maakte het mogelijk om meer onderzoek te doen naar het mechanisme waarmee de nanodeeltjes door cellen worden opgenomen, evenals de live celbeeldvorming en het bestuderen van het antikankereffect van het medicijn.

uptake-new-lipid-coated-nanoparticles-containing-falcarindiol-human

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Doel van de presentatie is om aan te tonen een zeer reproduceerbare methode om matrix geassocieerd stamcelimplantaten genereren in kraakbeen defecten, die kunnen worden gevisualiseerd met MRI. Stamcellen zijn gelabeld met de FDA-goedgekeurde Ferumoxides, vermengd met agarose, geïmplanteerd in letsels aan het kraakbeen en afgebeeld met een 7T MR-scanner.

Implantatie van Ferumoxides Gelabelde humane mesenchymale stamcellen in kraakbeenletsels

We beschrijven een techniek voor etikettering en het bijhouden van stamcellen met FDA-goedgekeurde, superparamagnetische ijzeroxide (SPIO), ferumoxytol (Feraheme). Deze cellulaire beeldvorming techniek die magnetische resonantie (MR) beeldvorming maakt gebruik van voor visualisatie, is gemakkelijk toegankelijk voor de lange termijn monitoring en diagnose van succesvolle of mislukte stamcellen engraftments bij patiënten.

Labeling stamcellen met Ferumoxytol, een FDA-goedgekeurd ijzeroxide Nanodeeltje

De immuunmodulerende eigenschappen van menselijke mesenchymale stamcellen (MSC) lijken steeds belangrijker voor klinische toepassing. Het gebruik van een co-kweeksysteem van MSCs en perifeer bloed leukocyten vooraf gekleurd met de fluorescerende kleurstof carboxyfluoresceïne succinimidylester (CFSE), beschrijven we de in vitro beoordeling van MSC immunomodulatie bij effector leukocyt proliferatie en specifieke subpopulaties.

Beoordeling van de immuno-modulerende eigenschappen van humane mesenchymale stamcellen (MSC)

Dit protocol beschrijft een efficiënte manier om te controleren de cel persistentie en ook menselijke adipeus afkomstige mesenchymale stamcellen (haMSCs) door far-red fluorescentie labeling in een rat knie artrose (KOA) model via intra-articulaire (IA) injectie.

In Vivo Bijhouden van menselijke adipeus afkomstige mesenchymale stamcellen in een Rat knie artrose Model met fluorescerende lipofiele membraan kleurstof

Dit protocol beschrijft de voorbijgaande genetische manipulatie van tandheelkundige stamcellen gewonnen uit de menselijke tandheelkundige follikel. De toegepaste niet-virale wijziging strategie kan een basis voor de verbetering van de cel van de stam van de therapeutische producten geworden.

Isolatie, karakterisering en MicroRNA gebaseerde genetische modificatie van stamcellen van menselijke tandheelkundige follikel

Dit protocol laat zien hoe de kleine extracellulaire blaasjes (hUC-MSC-sEV's) van menselijke navelstreng-afgeleide mesenchymale stamcellen kunnen worden geïsoleerd met een eenvoudige benchtop-instelling op laboratoriumschaal. De grootteverdeling, eiwitconcentratie, sEV-markers en morfologie van geïsoleerde hUC-MSC-sEV's worden gekenmerkt door respectievelijk nanodeeltjestrackinganalyse, BCA-eiwittest, western blot en transmissie-elektronenmicroscoop.

Een eenvoudige benchtop-filtratiemethode om kleine extracellulaire blaasjes te isoleren van menselijke mesenchymale stamcellen

Dit protocol beschrijft het gebruik van fluorescentie-geactiveerde celsortering van menselijke mesenchymale stamcellen met behulp van de single-cell sorteermethode. In het bijzonder kan het gebruik van eencellige sortering een zuiverheid van 99% van de immunofenogetypeerde cellen uit een heterogene populatie bereiken in combinatie met een op multiparametrische flowcytometrie gebaseerde benadering.

Eencellige sortering van immunofenogetypeerde mesenchymale stamcellen van menselijke geëxfolieerde bladverliezende tanden

Dit protocol beschrijft alle procedures, van het kweken van humane, van vet afgeleide mesenchymale stamcellen (ADSC's) en het verzamelen van supernatans tot het extra-extracellulaire blaasjes (EV's) met behulp van ultracentrifugatie.

Zuivering en karakterisering van extracellulaire blaasjes uit humane van vet afgeleide mesenchymale stamcellen

De isolatie van BAMBIhogeMFGE8hoge MSC's, een van de drie belangrijkste subgroepen die heterogene menselijke UC-MSC's vormen, is nuttig voor een volledig begrip van de kenmerken en functies van dit subtype voor de toekomstige toepassing ervan om de klinische werkzaamheid bij specifieke ziekten te verbeteren. Hier presenteren we een methode voor het sorteren van BAMBIhogeMFGE8hoge UC-MSC's.

Isolatie van menselijke BAMBIhogeMFGE8hoge navelstreng-afgeleide mesenchymale stromale cellen

Dit protocol heeft als doel een methode te introduceren om mesenchymale stamcel (MSC)-afgeleide extracellulaire vesikelbiomimetica te produceren en te zuiveren voor gentherapie. De nanovesikel is ingesloten met MSC-afgeleide lipide-dubbellagen en kapselt recombinante AAV's die het gen van belang dragen in het lumen. Deze nanovesikel biedt een verbeterde vector voor in vivo genlevering.

Ontwikkeling van mesenchymale stamcelmembraan-omhulde nanovesikels voor verbeterde genlevering

Leer hoe je lipide-gecoate nanodeeltjes met falcarindiol fabriceert voor kankertherapie met behulp van menselijke mesenchymale stamcellen. Deze methode biedt een stabiel en schaalbaar systeem voor het afgeven van hydrofobe geneesmiddelen.

Opname van nieuwe lipide-gecoate nanodeeltjes met Falcarindiol door menselijke mesenchymale stamcellen

Meer video's verkennen