Name: Magnetische resonantie beeldvorming beoordeling van carcinogeen-geïnduceerde lymfkliertest blaas tumoren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: Leer een betrouwbaar MRI-protocol voor de beoordeling van blaastumoren bij muizen geïnduceerd door het BBN-carcinogeen. Deze methode maakt hoogdoorvoerbeeldvorming mogelijk met minimale belasting van de dieren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

J. J. M. wordt gefinancierd door de Veterans Health Administration verdienste verlenen van BX0033692-01. J. J. M. wordt ook ondersteund door de John P. Hanson Foundation for Cancer Research aan de Robert H. Lurie uitgebreide kanker centrum van Noordwestelijke Universiteit. Wij danken het centrum voor translationeel Imaging voor de verlening van de MRI-acquisitie en verwerking. Financieringsbronnen had geen rol in het schrijven van het manuscript of de beslissing tot het indienen voor publicatie.

Alle methoden die hier worden beschreven zijn goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) van de Northwestern University.
1. de inductie van tumoren met BBN
<ol><li>Verkrijgen van mannelijke C57/BL6 muizen, elk ten minste 6 weken oud. Opmerking: Mannelijke muizen ontwikkelen blaaskanker meer snel en consistent dan vrouwelijke muizen14,15.</li>
	<li>Toevoegen N-nitrosobutyl(4-hydroxybutyl) amine (BBN) in een dosis van 0,05% aan het drinkwater. Opslaan in een ondoorzichtige container en het ad libitum als drinkwater te muizen16verstrekken. Opmerking: De BBN-oplossing op te slaan in een duidelijke container zal degraderen de kankerverwekkende stof17.</li>
	<li>De 0,05% BBN water tweemaal per week veranderen.</li>
	<li>De dieren controleren door te inspecteren op tekenen van nood tumoren van de blaas met inbegrip van hematurie, stevige blaas en massa's zijn gekoppeld. Inspecteer de muizen tweemaal per week of in overeenstemming met lokale IACUC richtsnoeren.</li>
	<li>Verwachten dat de tumoren te ontwikkelen tussen de 16 en 24 weken van blootstelling18.</li>
</ol>2. MRI setup
<ol><li>Uitvoeren van een subcutane injectie van steriele zoutoplossing (0,1-0,2 mL met behulp van een naald en 1 mL spuit van 25-27 G) 10 minuten voordat de MRI om de vulling van de blaas.</li>
	<li>Anesthetize elke muis met een gasmengsel van 100% O2 en Isofluraan (2 – 4% als nodig). Controleer of u een voldoende vlak van verdoving door het testen van de terugtrekking reflex (Teen snuifje) voordat u verdergaat. Steriele oog zalf toepassen op het dier.</li>
	<li>Overdracht van de muis aan de beeldvorming houder uitgerust met een neuskegel voor levering van geïnhaleerde Isofluraan (0,5%-3%).</li>
	<li>Monitor lichaamstemperatuur en ademhaling met behulp van een rectale temperatuurvoeler aangesloten op de computer van de fysiologische opname. Opmerking: Normale lichaamstemperatuur (36 – 37 ° C) wordt bijgehouden met behulp van de recirculatie warm watercircuit ingebouwd in de dierlijke heer houder. Temperatuur is gemeten door een sensor in rectale en opgenomen op de fysiologische controle computer met behulp van speciale fysiologische monitoring software. Hetzelfde systeem wordt gebruikt voor het opnemen van de ademhaling en elektrocardiogram signalen gemeten door middel van een pneumatische kussen onder de ribbenkast en via 3-voorsprong elektrocardiogram elektroden geplaatst. Het ademhalingssignaal wordt ook gebruikt voor triggering MRI acquisitie en het verminderen van artefacten die is gekoppeld aan de beweging van de ademhaling.</li>
</ol>3. MRI Beeldacquisitie
<ol><li>Gebruik een quadrature lichaam spoel voor excitatie.</li>
	<li>Een 4-kanaals ontvanger spoel plaats op de onderbuik van de muis wordt gescand zodat geoptimaliseerde detectie van signalen uit de regio van belang.</li>
	<li>Het starten van automatische aanpassingen via de geïntegreerde imaging software aan te schaffen een tri-axiale set van beelden van het hele muis lichaam. Identificeren van deze verwijzing set van beelden, de regio van belang (in dit geval, de regio van de blaas).</li>
	<li>Drie sets van orthogonale-gesneden beelden langs de axiale, coronale en Sagittaal vliegtuigen met behulp van radiologische referentiekaders verwerven.</li>
	<li>Gebruik maken van de ware FISP imaging sequentie (opgenomen als één van de functies van de geïntegreerde imaging software) met de volgende parameters van de heer: TR = 900 msec, TE = 2 ms, FA = 70, 14 gemiddelden. Opmerking: Deze set van parameters zorgt voor snelle weergave met hoge diagnostische kwaliteit, met inbegrip van T1/T2 weging in < 10 min per muis.</li>
	<li>Ruimtelijke resolutie en segment dikte worden bepaald door geometrische parameters geselecteerd door de gebruiker via de grafische interface van het geïntegreerde imaging platform. Dit resulteert in een aantal segmenten over de hele blaas van 0.5 mm dikte met een in-plane resolutie van 0.148 mm.</li>
</ol>4. de heer beeldanalyse
<ol><li>Het identificeren van de verzameling van segmenten van 0.5 mm dikte en in-plane resolutie van 0.148 mm die betrekking hebben op de hele blaas.</li>
	<li>Exporteren naar de software van de analyse van de medische beeldvorming door het selecteren van de map met bijbehorende afbeeldingen in de indeling analyseren.</li>
	<li>Selecteer "representatieve axiale weergave" in het midden van de blaas voor kwantitatieve analyse door scrollen door de gegenereerde beelden en het identificeren van een segment in het middelpunt van de blaas, die het mogelijk voor visualisatie van de muur van de blaas en de lumen maakt. Opmerking: Het midden-segment moet de uitverkorene met de grootste diameter.</li>
	<li>De regio van belang (ROI) zorgvuldig af te bakenen door het handmatig traceren de grenzen rond de buitenste rand van de blaas (BLAuit) en rond de binnenste lumen (BLAin) van de blaas (Zie schematische en representatieve cijfers in Figuur 2) in de geselecteerde representatieve axiale weergave.</li>
	<li>Aftrekken van de innerlijke lumen van de buitenste rand voor het berekenen van de oppervlakte van de wand van de blaas. BLAmuur = BLAuit - BLAin Opmerking: De oppervlakte van de blaas van een besturingselement met geen tumor moet kleiner zijn dan die met een blaas tumor.</li>
</ol>5. euthanasie en dissectie van de blaas
<ol><li>Na 20 weken van BBN blootstelling, euthanaseren de muizen met behulp van operationele standaardprocedures volgens lokale IACUC richtsnoeren.</li>
	<li>Reinig het gebied van de incisie met 70% ethanol, dan begrijpen en til de huid van de buikwand met een tang.</li>
	<li>Maak een incisie van de middellijn van de symphysis pubica aan het proces van de xiphoid.</li>
	<li>Scherp incise de peritoneale holte door grijpen met een tang en gebeuren met een schaar.</li>
	<li>Het identificeren van de blaas, die zich in de schouderstreek onderbuik bevindt.</li>
	<li>Identificeren en snijd het mediane navelstreng ligament aansluiten van de koepel van de blaas naar de navel en de buikwand.</li>
	<li>Pak de koepel van de blaas met een tang om countertraction en ontleden de blaas weg van omringende structuren, met inbegrip van de zaadblaasjes, endeldarm en vet.</li>
	<li>Identificeren van de urineleiders, de blaas invoeren en knippen met een schaar dicht bij de blaas.</li>
	<li>De blaas craniale tillen, snijd de urethra met een schaar en verwijderen van de blaas.</li>
	<li>Weeg onmiddellijk de blaas na het spoelen met PBS.</li>
</ol>6. histologische onderzoek van weefsel van de blaas
<ol><li>Corrigeer de blaas weefsel in 10% neutraal gebufferde formaline 36 – 48 uur bij kamertemperatuur (RT).</li>
	<li>Het weefsel inbedden in paraffineblokken, knippen van de dia's voor onderzoek achteraf plaatsvindt en vlekken van de dia's met haematoxyline en eosine voor microscopisch onderzoek zoals eerder beschreven19,20.</li>
	<li>Uitvoeren van een microscopisch onderzoek van de blaas van de muis bij lage (2,5 x en 10 x) en hoog (20 x en 40 x) vergrotingen, onderzoeken voor macroscopische letsels, hyperplasie, carcinoma in situ, papillomas, papillaire tumoren en invasieve gezwellen19 , 21.</li>
</ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Statistics%2C+2017%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Cancer Statistics, 2017.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (1), 7-30 (2017).</li>
<li>Abdollah, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence%2C+survival+and+mortality+rates+of+stage-specific+bladder+cancer+in+United+States%3A+a+trend+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiology%22%5BJournal%5D)">Incidence, survival and mortality rates of stage-specific bladder cancer in United States: a trend analysis.</a> Cancer Epidemiology. 37 (3), 219-225 (2013).</li>
<li>Rosenberg, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atezolizumab+in+patients+with+locally+advanced+and+metastatic+urothelial+carcinoma+who+have+progressed+following+treatment+with+platinum-based+chemotherapy%3A+a+single-arm%2C+multicentre%2C+phase+2+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Atezolizumab in patients with locally advanced and metastatic urothelial carcinoma who have progressed following treatment with platinum-based chemotherapy: a single-arm, multicentre, phase 2 trial.</a> The Lancet. 387 (10031), 1909-1920 (2016).</li>
<li>Sharma, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nivolumab+monotherapy+in+recurrent+metastatic+urothelial+carcinoma+%28CheckMate+032%29%3A+a+multicentre%2C+open-label%2C+two-stage%2C+multi-arm%2C+phase+1%2F2+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Nivolumab monotherapy in recurrent metastatic urothelial carcinoma (CheckMate 032): a multicentre, open-label, two-stage, multi-arm, phase 1/2 trial.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1590-1598 (2016).</li>
<li>Bellmunt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pembrolizumab+as+Second-Line+Therapy+for+Advanced+Urothelial+Carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pembrolizumab as Second-Line Therapy for Advanced Urothelial Carcinoma.</a> New England Journal of Medicine. 376 (11), 1015-1026 (2017).</li>
<li>Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+orthotopic+models+for+bladder+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Mouse orthotopic models for bladder cancer research.</a> BJU International. 104 (9), 1286-1291 (2009).</li>
<li>Zhang, N., Li, D., Shao, J., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+bladder+cancer%3A+The+model+establishment+and+evaluation+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Letters%22%5BJournal%5D)">Animal models for bladder cancer: The model establishment and evaluation (Review).</a> Oncology Letters. 9 (4), 1515-1519 (2015).</li>
<li>Patel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transabdominal+micro-ultrasound+imaging+of+bladder+cancer+in+a+mouse+model%3A+a+validation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study.</a> Urology. 75 (4), 799-804 (2010).</li>
<li>Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+for+detecting+and+treatment+monitoring+of+orthotopic+murine+bladder+tumor+implants%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants.</a> The Journal of Urology. 145 (6), 1297-1301 (1991).</li>
<li>Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+to+monitor+bladder+cancer+cell+adhesion+in+vivo%3A+a+new+approach+to+optimize+a+syngeneic%2C+orthotopic%2C+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model.</a> BJU International. 101 (1), 120-124 (2008).</li>
<li>Vandeveer, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Immunotherapy+of+Non-Muscle+Invasive+Mouse+Bladder+Cancer+with+Avelumab%2C+an+Anti-PD-L1+Immune+Checkpoint+Inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+Research%22%5BJournal%5D)">Systemic Immunotherapy of Non-Muscle Invasive Mouse Bladder Cancer with Avelumab, an Anti-PD-L1 Immune Checkpoint Inhibitor.</a> Cancer Immunology Research. 4 (5), 452-462 (2016).</li>
<li>Kikuchi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantitative+analysis+of+early+stage+orthotopic+murine+bladder+tumor+using+in+vivo+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging.</a> Journal of Urology. 170, 1375-1378 (2003).</li>
<li>Chung, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T2-weighted+fast+MR+imaging+with+true+FISP+versus+HASTE%3A+comparative+efficacy+in+the+evaluation+of+normal+fetal+brain+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Roentgenology%22%5BJournal%5D)">T2-weighted fast MR imaging with true FISP versus HASTE: comparative efficacy in the evaluation of normal fetal brain maturation.</a> American Journal of Roentgenology. 175 (5), 1375-1380 (2000).</li>
<li>Miyamoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promotion+of+bladder+cancer+development+and+progression+by+androgen+receptor+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Promotion of bladder cancer development and progression by androgen receptor signals.</a> Journal of the National Cancer Institute. 99 (7), 558-568 (2007).</li>
<li>Bertram, J. S., Craig, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+induction+of+bladder+cancer+in+mice+by+butyl-%284-hydroxybutyl%29-nitrosamine+and+the+effects+of+hormonal+modifications+on+the+sex+difference+in+response%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Specific induction of bladder cancer in mice by butyl-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine and the effects of hormonal modifications on the sex difference in response.</a> European Journal of Cancer. 8 (6), 587-594 (1972).</li>
<li>Nagao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutagenicity+of+N-butyl-N-%284-hydroxybutyl%29nitrosamine%2C+a+bladder+carcinogen%2C+and+related+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Mutagenicity of N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine, a bladder carcinogen, and related compounds.</a> Cancer Research. 37, 399-407 (1977).</li>
<li>Hirose, M., Fukushima, S., Hananouchi, M., Shirai, T., Ogiso, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+susceptibilities+of+the+urinary+bladder+epithelium+of+animal+species+to+three+nitroso+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Gan.+Gann%3B+The+Japanese+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Different susceptibilities of the urinary bladder epithelium of animal species to three nitroso compounds.</a> Gan. Gann; The Japanese Journal of Cancer Research. 67 (2), 175-189 (1976).</li>
<li>Shin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+origin+of+bladder+neoplasia+and+tissue+dynamics+of+its+progression+to+invasive+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Cellular origin of bladder neoplasia and tissue dynamics of its progression to invasive carcinoma.</a> Nature Cell Biology. 16 (5), 469-478 (2014).</li>
<li>Epstein, J. I. Chapter 17: Immunohistology of the Bladder, Kidney, and Testis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEpstein%2C+JI+%22Diagnostic+Immunohistochemistry%22">Diagnostic Immunohistochemistry</a>. , Fifth Edition, 624-661 (2019).</li>
<li>Cohen, S. M., Ohnishi, T., Clark, N. M., He, J., Arnold, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigations+of+rodent+urinary+bladder+carcinogens%3A+collection%2C+processing%2C+and+evaluation+of+urine+and+bladders%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Investigations of rodent urinary bladder carcinogens: collection, processing, and evaluation of urine and bladders.</a> Toxicologic Pathology. 35 (3), 337-347 (2007).</li>
<li>Wood, D. P. Jr Tumors of the bladder. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWood%2C+DP+%22Campbell-Walsh+Urology%22">Campbell-Walsh Urology</a>. 11 (92), 2184-2204 (2016).</li>
<li>Zitvogel, L., Pitt, J. M., Daillere, R., Smyth, M. J., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+in+oncoimmunology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models in oncoimmunology.</a> Nature Reviews Cancer. , (2016).</li>
<li>Kaneko, S., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X+chromosome+protects+against+bladder+cancer+in+females+via+a+KDM6A-dependent+epigenetic+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">X chromosome protects against bladder cancer in females via a KDM6A-dependent epigenetic mechanism.</a> Science Advances. 4 (6), eaar5598(2018).</li>
<li>Smilowitz, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+gold+nanoparticles+in+BBN-induced+muscle-invasive+bladder+cancer+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of gold nanoparticles in BBN-induced muscle-invasive bladder cancer in mice.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 7937-7946 (2017).</li>
<li>Dai, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interaction+of+arsenic+and+N-butyl-N-%284-hydroxybutyl%29nitrosamine+on+urothelial+carcinogenesis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The interaction of arsenic and N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine on urothelial carcinogenesis in mice.</a> PLoS One. 12 (10), e0186214(2017).</li>
<li>Williams, P. D., Lee, J. K., Theodorescu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Credentialing+of+Rodent+Bladder+Carcinogenesis+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Molecular Credentialing of Rodent Bladder Carcinogenesis Models.</a> Neoplasia. 10 (8), (2008).</li>
<li>Fantini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Carcinogen-induced+mouse+model+recapitulates+the+molecular+alterations+of+human+muscle+invasive+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">A Carcinogen-induced mouse model recapitulates the molecular alterations of human muscle invasive bladder cancer.</a> Oncogene. 37 (14), 1911-1925 (2018).</li>
<li>Network, N. C. C. NCCN Guidelines in Clinical Oncology - Bladder Cancer 5.2018. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/bladder.pdf">https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/bladder.pdf</a> (2018).</li>
<li>Costa, M. J., Delingette, H., Novellas, S., Ayache, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+segmentation+of+bladder+and+prostate+using+coupled+3-D+deformable+models%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Image+Computing+and+Computer-Assisted+Intervention%22%5BJournal%5D)">Automatic segmentation of bladder and prostate using coupled 3-D deformable models.</a> Medical Image Computing and Computer-Assisted Intervention. 10 (Pt 1), 252-260 (2007).</li>
<li>Rosenkrantz, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+quantitative+MRI+metrics+for+assessment+of+stage+and+grade+of+urothelial+carcinoma+of+the+bladder%3A+preliminary+results%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Roentgenology%22%5BJournal%5D)">Utility of quantitative MRI metrics for assessment of stage and grade of urothelial carcinoma of the bladder: preliminary results.</a> American Journal of Roentgenology. 201 (6), 1254-1259 (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Nauwkeurige beeldvorming van tumor modellen is noodzakelijk voor de juiste pre euthanasie fasering en dierlijke randomisatie voorafgaand aan de inleiding van experimentele behandeling. Met behulp van de procedure die hier gepresenteerd, tonen wij methodologie om (1) het genereren van tumoren van de blaas met behulp van de BBN carcinogeen en (2) stratificeren blaas tumor last door middel van een heer MR. afkomstige gebied meting (BLAmuur) correlaten aanzienlijk met ex vivo blaas gewicht en wordt geasso...

Blaaskanker is de vijfde meest voorkomende kanker algemene, verantwoordelijk voor ongeveer 80.000 nieuwe gevallen en 16.000 sterfgevallen in de Verenigde Staten in 20171. Na ongeveer 30 jaar zonder aanzienlijke vooruitgang in de systemische behandeling van blaas kanker2, recente anti-PD-1 en anti-PD-L1 checkpoint remmer proeven hebben aangetoond dat spannend en soms duurzaam reacties bij patiënten met geavanceerde urothelial carcinoom3,4,5. Echter, slechts ongeveer 20% van de patiënten tonen een objectief antwoord op deze behandelingen, en verdere studies zijn nodig om uit te breiden van het effectieve gebruik van immunotherapie bij patiënten met blaaskanker.
Lymfkliertest blaas kanker modellen zijn essentiële instrumenten in preklinische evaluatie van nieuwe behandelingen6,7. Om te controleren voor de grootte van de tumor als randomizing muizen op verschillende behandelingen, moet tumor lasten worden beoordeeld en gecontroleerd tussen behandelgroepen. Eerdere studies hebben echografie of bioluminescentie gebruikt om te evalueren van de orthotopic cel regel-gebaseerd blaas kanker modellen8,9,10,11. Echter, beide technieken presenteren verschillende nadelen. Echografie metingen kunnen worden beïnvloed door de vaardigheden van de operator en gebrek aan driedimensionale functies en hoge ruimtelijke resolutie. Bioluminescentie methoden kunnen alleen voorzien in semi-kwantitatieve evaluatie van de tumorcellen en sta niet voor visualisatie van blaas anatomie en morfologie. Bioluminescentie kan bovendien alleen worden gebruikt met cel regel-gebaseerde modellen, die bioluminescente genen in haarloze muizen of muizen met witte jassen uitdrukken.
Magnetische resonantie beeldvorming (MRI), aan de andere kant, biedt unieke flexibiliteit in de verwerving van anatomische resolutieafbeeldingen, exposeert een breed scala van weefsel contrast waarmee nauwkeurige visualisatie en kwantitatieve beoordeling van tumor last zonder de noodzaak om het uiten van bioluminescente eigenschappen. MIJNHEER beelden zijn gemakkelijker kunnen worden gereproduceerd met de passende analyse pijpleidingen en gegarandeerd van 3D-visualisatie van de blaas. De grootste beperkingen van MRI zijn de lengte van de tijd die nodig is voor een onderzoek en bijbehorende hoge kosten die hoge throughput assays beperken. Verschillende studies hebben echter aangetoond dat MIJNHEER sequenties kunnen bieden kwalitatief hoogwaardige diagnostische afbeeldingen die gebruikt kunnen worden om effectief te detecteren en volgen van cel regel-gebaseerd blaas tumoren; Dus, ze mogen worden gebruikt voor hoge-doorvoer analyse9,12.
Hier beschrijven we een niet-invasieve heer gebaseerde methode betrouwbaar en efficiënt karakteriseren carcinogeen-geïnduceerde blaas tumoren in muizen. Om dit te bereiken, gebruiken we een snelle beeldbewerking met steady-state precessie heer techniek (ware FISP), dat korte scannen sessies garandeert terwijl nog het verstrekken van hoge kwaliteit en hoge ruimtelijke resolutie (~ 100 micron) voor de detectie en meting van de blaas tumoren13. Bovendien, om te bevestigen de juistheid van deze niet-invasieve test van de MRI, beschrijven we de correlatie tussen MRI-afgeleide parameters, evenals ex vivo blaas gewicht en pathologisch bevestigd tumor stadium.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 muizen</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td>Muizen</td></tr><tr><td>N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine carcinogeen (BBN)</td><td>TCI American</td><td>B0938</td><td>Carcinogeen</td></tr><tr><td>0,9% normale zoutoplossing</td><td>Hospira, Inc</td><td>NDC 0409-488-02</td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>Piramal HealthCare</td><td>60307-120-25</td><td>Anesthetisch middel</td></tr><tr><td>7Tesla ClinScan MRI</td><td>Bruker</td><td>NA</td><td>Gespecialiseerde beeldvorming MRI voor kleine dieren</td></tr><tr><td>Syngo</td><td>Siemens</td><td>NA</td><td>MR Integrated Imaging Software</td></tr><tr><td>Model 1030 Monitoring &amp; Gating System</td><td>Small Animal Instruments, Inc. (SAII)</td><td>NA</td><td>Fysiologisch monitoring van kleine dieren</td></tr><tr><td>Formaline, neutraal gebufferd, 10%</td><td>Sigma</td><td>HT501128</td><td>Fixeermiddel</td></tr><tr><td>Eosine Y</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1093844</td><td>Histologisch kleurmiddel</td></tr><tr><td>Hematoxylinen</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-245651</td><td>Histologisch kleurmiddel</td></tr><tr><td>Jim7</td><td>Xinapse Systems</td><td>NA</td><td>Medische beeldanalysesoftware</td></tr><tr><td>GraphPad Prism v7.04</td><td>Graphpad</td><td>NA</td><td>Grafische software</td></tr><tr><td>R v3.4.2</td><td>The R Project for Statistical Computing</td><td>NA</td><td>Statistische software</td></tr><tr><td>R-pakket pROC v1.10.0.</td><td>The R Project for Statistical Computing</td><td>NA</td><td>ROC-analyse</td></tr></tbody></table>

magnetische resonantie beeldvorming beoordeling van carcinogeen-geïnduceerde lymfkliertest blaas tumoren

Magnetic Resonance Imaging Assessment of Carcinogen-induced Murine Bladder Tumors

Lymfkliertest blaas tumor modellen zijn van cruciaal belang voor de beoordeling van nieuwe therapeutische opties. Tumoren van de blaas geïnduceerde met de N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine (BBN) kankerverwekkend zijn voordelige over cel regel-gebaseerde modellen omdat ze nauw de genomic profielen van menselijke tumoren repliceren, en, in tegenstelling tot cel modellen en xenografts, ze bieden een goede gelegenheid voor de studie van immuuntherapie. Echter de blaas tumor generatie is heterogeen; Daarom is een nauwkeurige beoordeling van tumor last nodig voordat randomisatie aan experimentele behandeling. Hier beschreven is een muismodel van BBN en protocol blaas kanker tumor last om te evalueren in vivo met behulp van een snelle en betrouwbare magnetische resonantie (MR) volgorde (ware FISP). Deze methode is eenvoudig en betrouwbaar omdat, in tegenstelling tot ultrasound, MIJNHEER is exploitant-onafhankelijk en het mogelijk maakt eenvoudig na overname van de beeldverwerking en beoordeling. Met behulp van axiale beelden van de blaas, analyse van regio's van belang langs de wand van de blaas en de tumor toestaan voor de berekening van de blaas muur en tumor gebied. Deze meting correleert met ex vivo blaas gewicht (rs= 0.37, p = 0.009) en tumor stadium (p = 0.0003). Kortom, BBN genereert heterogeen tumoren die ideaal voor de evaluatie van immuuntherapie zijn en MRI kan snel en betrouwbaar beoordelen last van de tumor voorafgaand aan de randomisatie experimentele behandeling wapens op te pakken.

Met behulp van het protocol beschreven (Figuur 1), zijn blaas tumoren geïnduceerd in C57/B6 mannelijke muizen. MRI werd uitgevoerd op 16 weken, en muizen werden euthanized bij 20 weken. Ex vivo blaas gewichten (BW) voor elke muis werden geregistreerd. Dia's werden gekleurd met haematoxyline en eosine en alle dia's van de histologie werden herzien voor tumor stadium.
Voor het analyseren van ...

Lymfkliertest blaas tumoren zijn geïnduceerd met de kankerverwekkende stof van N-butyl-N-(4-hydroxybutyl), nitrosamine (BBN). Blaas tumor generatie is heterogeen; Daarom is een nauwkeurige beoordeling van tumor last nodig voordat randomisatie aan experimentele behandeling. Hier presenteren we een snelle, betrouwbare MRI-protocol om de grootte van de tumor en stadium te beoordelen.

Magnetische resonantie beeldvorming beoordeling van carcinogeen-geïnduceerde lymfkliertest blaas tumoren

Murine bladder tumor models are critical for the evaluation of new therapeutic options. Bladder tumors induced with the N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) ...

Deze methode kan worden gebruikt om blaastumoren reproduceerbaar te genereren met behulp van de BBN-kankerverwekkende stof en om de grootte en uitbreiding van de blaastumorlast door MRI in beeld te brengen. Deze techniek maakt gebruik van een operator onafhankelijke snelle beeldvorming aanpak met korte acquisitie tijden op een hoge diagnostische kwaliteit om high-throughput testen van muizen uit te voeren in tussenliggende stadia van tumorontwikkeling. Om blaaskanker tumor vorming induceren, voeg 0,05%BBN aan een ondoorzichtige drinkwater container en het water te leveren aan 6 weken oude C57 zwarte zes muizen ad libitum.Controleer vervolgens de dieren twee keer per week op tekenen van nood in verband met blaastumoren in overeenstemming met de lokale IACUC-richtlijnen. 16 tot 24 weken na blootstelling, laad een spuit van één milliliter uitgerust met een naald van 25 tot 27 meter met 100 tot 200 microliter steriele zoutoplossing en injecteer de zoutoplossing onderhuids in een bbn-behandeld dier. Breng de muis na 10 minuten over in de beeldhouder van een magnetische resonantiebeeldhouder en plaats een rectale temperatuursonde die is aangesloten op de fysiologische opnamecomputer om de lichaamstemperatuur van het dier te controleren.Plaats vervolgens een 4-kanaals quadrature-ontvangerspoel over de onderbuik van de muis en start automatische aanpassingen in de geïntegreerde beeldverwerkingssoftware om een drieaxiale set beelden van het hele muislichaam te verkrijgen. Van deze referentieset van beelden, identificeren van de regio van belang en verwerven drie sets van orthogonale gesneden beelden langs de axiale, coronale, en sagittale vlakken. Met behulp van de echte snelle beeldvorming met steady-state progressie beeldvorming sequentie, stel de TR in op 900 milliseconden, de TE op twee milliseconden en de FA op 70, 14 gemiddelden.Selecteer vervolgens de juiste geometrische parameters binnen de imaging platform software om een reeks plakjes te verkrijgen over de hele blaas van 0,5 milliliter dikte en een in-plane resolutie van 0,148 millimeter. Wanneer alle beelden zijn verkregen, exporteer de set van plakjes die de hele blaas om een geschikte medische beeldanalyse software programma en scroll door de gegenereerde beelden om een segment te lokaliseren op het middelpunt van de blaas die visualisatie van de blaaswand en lumen mogelijk maakt om de representatieve axiale weergave in het midden van de blaas voor kwantitatieve analyse te selecteren. Traceer vervolgens de grenzen rond de buitenste rand en het binnenste lumen van de blaas om het interessegebied zorgvuldig af te bakenen binnen de geselecteerde representatieve axiale weergave en trek het binnenste lumen af van de buitenste rand om het oppervlak van de blaaswand te berekenen.20 weken na bbn blootstelling, reinig het gebied van incisie met 70%ethanol en gebruik tangen om de buikwand huid op te heffen. Maak een middellijnincisie van de schaamsymfyse tot het xiphoidproces en pak het buikvlies om een scherpe incisie van de buikholte mogelijk te maken. Identificeer de blaas in de middellijn onderbuik, met behulp van tangen om de koepel van de blaas te grijpen.Ontleden de blaas uit de buurt van de omliggende structuren, waaronder de zaadblaasjes, rectum, en vet. Snijd de mediane navelstrengment dat de koepel van de blaas verbindt met de umbilicus en de buikwand. Snijd de urineleiders dicht bij de blaas en het opheffen van de blaas cephalad, snijd de plasbuis om de blaas te verwijderen.Spoel vervolgens de uitgesneden blaas met PBS en weeg het weefsel onmiddellijk op een balans. Hier worden representatieve echte snelle beeldvorming met steady-state progressie magnetische resonantiebeelden van blaaswand 3D reconstructies en pathologische beelden van een muis met een grote tumor en van een controlemuis zonder tumor getoond. De blaaswanddikte zoals afgeleid van de magnetische resonantiebeeldvorming correleert wekelijks met de ex-vivo verkregen blaasgewichtmetingen.Onderzoek van de MRI-afgeleide blaaswanddikte en ex-vivo verkregen blaasgewichtgegevens tonen ook een associatie aan met het tumorstadium en een associatie bij het stratificeren van de pathologie door niet-spierin invasieve blaaskanker en spierin invasieve blaaskanker. Houd in gedachten dat het het beste is om de beelden te verwerven in muizen als ze een volle blaas. Na MR-beeldvorming van de blaastumoren kunnen muizen naar gelang van het geval worden opgesplitst in cohorten met vergelijkbare tumorkenmerken.Deze techniek stelt onderzoekers in staat om nieuwe immunotherapieën en andere behandelingen te verkennen om de resultaten voor onze patiënten te verbeteren. Het is belangrijk om te onthouden dat BBN een kankerverwekkende stof is en dat de juiste voorzorgsmaatregel altijd moet worden genomen bij het hanteren van deze verbinding.

magnetic-resonance-imaging-assessment-carcinogen-induced-murine

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Muis blaaswand injectie is een nuttige benadering voor orthotopically studie blaas stamcellen en kanker biologie. Deze delicate microchirurgische methode kan worden beheerst met een zorgvuldige techniek en praktijk.

Muis blaaswand Injection

Blaastumoren zijn gevestigd in vrouwelijke muizen in een minimaal invasieve wijze via catheterisatie, lokale cauterisatie, en de daaropvolgende aanhechting van carcinoom cellen om de branden sites.

Een orthotope Model van Murine Blaaskanker

De oprichting van een orthotope blaas tumor model om anti-tumor effecten van intravesicaal geleverd Sarna en monitoring groei van de tumor door middel van ultrageluid en bioluminescente beeldvorming te evalueren.

Een orthotope Blaas Tumor Model en de evaluatie van Intravesicale Sarna behandeling

Implantatie van kankercellen in het orgaan van oorsprong kan dienen als een nuttige preklinisch model om nieuwe therapieën te evalueren. MB49 blaascarcinoom cellen kunnen worden gekweekt in de blaas na intravesicale instillatie. Dit protocol toont katheterisatie van de blaas muis behoeve van tumor implantatie en adenovirale levering.

Een orthotope Blaaskanker Model voor Gene Delivery Studies

MR kanker moleculaire beeldvorming aantonen met een kleine peptide gerichte MRI-contrastmiddel specifiek voor clotted plasma-eiwitten in tumor stroma in een muizen prostaatkanker model.

MR Molecular imaging van prostaatkanker met een kleine moleculaire CLT1 Peptide Gerichte contrastmiddel

Een N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine-geïnduceerde blaaskanker model werd ontwikkeld in humane mucine 1 (MUC1) transgene muizen voor de beproeving van de MUC1-gerichte immunotherapie. Na toediening van een MUC1-gericht peptide vaccin was een cytotoxische T-lymfocyt respons tegen MUC1 bevestigd door metingen van serum cytokinen en T-cel-specifieke activiteit.

Inductie van Invasieve Transitional Cell blaascarcinoom in Immune Intact Human MUC1 transgene muizen: Een model voor Immunotherapie Ontwikkeling

De gevestigde techniek om primaire invasieve orthotoop blaaskanker xenotransplantaten te enten vereist laparotomie en mobilisatie van de blaas. Deze procedure toebrengt significante morbiditeit op de muizen, technisch uitdagend en tijdrovend. Daarom hebben wij een hoge precisie, percutane benadering gebruik te maken van echografie begeleiding.

Minimaal Invasieve Oprichting van Muriene Orthotope Blaas Xenografts

Hier wordt de methode beschreven om een syngene muismodel van orthotope blaastumor op te zetten om de antitumoreffectiviteit van het bacteriële eiwit HP-NAP te evalueren.

Evaluatie van de werkzaamheid van de<em&gt; H. pylori</em&gt; Protein HP-NAP als een therapeutisch hulpmiddel voor de behandeling van blaaskanker in een orthotope Murine Model

Dit protocol beschrijft de generatie van muizen orthotope blaastumoren bij vrouwelijke C57BL / 6J muizen en de monitoring van tumorgroei.

Een muizen orthotope Blaas Tumor Model en Tumor Detection System

Dit protocol gebruikt een meerkamerbed voor parallelle magnetische resonantiebeeldvorming (MRI) van maximaal vier dieren om pancreasadenocarcinoomtumoren te detecteren in genetisch gemodificeerde muismodellen. Dit multianimal MRI-protocol is snel en kosteneffectief voor het opsporen en meten van tumoren, wat de dierselectie voor preklinische studies en longitudinale monitoring van tumorgroei vergemakkelijkt.

Multianimal Magnetic Resonance Imaging voor tumormetingen in alvleesklierkanker muismodellen

Leer een betrouwbaar MRI-protocol voor de beoordeling van blaastumoren bij muizen geïnduceerd door het BBN-carcinogeen. Deze methode maakt hoogdoorvoerbeeldvorming mogelijk met minimale belasting van de dieren.

Magnetische resonantie beeldvorming beoordeling van carcinogeen-geïnduceerde lymfkliertest blaas tumoren

Meer video's verkennen